吖啶橙

二氧 化 氯 溶 液 （ ５０ ／ ｍ Ｉ２ 制 备 约 ０ ｘ ｇ／ Ｌ ＣＯ ）
致癌物三卤甲烷类 （ Ｈ ｓ Ｔ Ｍ ）物质 ，现 已广泛用于 （ 见 文 献 ［ ） 用 Ｎ ＣＯ 和 硫 酸 反 应 生 成 参 ９］ ： ａ Ｉ 医疗卫生 、食 品加工、环境 、饮用水 、工业循 环 ＣＯ ，经过饱 和 Ｎ ＣＯ 溶 液处 理 可 除 去微 量 ７卷 第 １ 期
２０ ０７年 ２月
桂 林 工 学 院 学 报
Ｊ ｕ ｎ ／ｏ Ｇｕ ｌ ｎ ｖ ｒｉ ｆＴ ｃ ｎ ｌ ｇ ｏ ｒ ａ ｆ ｉ ｎ Ｕ ｉｅ ｓｔ ｏ ｅ ｈ ｏｏ ｙ ｉ ｙ
Ｖｏ． ７ Ｎｎ １ １２
规定二氧化氯的残余量需小于 １０ ／ Ｌ ． ｇ ｍ ．因此 ， 氧化 氯 反应 释放 出 碘 ，以 淀 粉 做 指 示 剂 ，用 硫 代 建立灵敏度高 、选 择性好 、简便 快速测定二 氧化 硫酸钠 标 准溶液 滴 定 ； （ ）分 光 光 度 法 ，利 用 二 ２
氯 的分 析 方 法具 有 重 要 意 义 ． 目前 测 定 二 氧 化 氯 氧化 氯在 ３０ｎ３ ６ ｎ 处有 一 吸 收峰 ，其 摩 尔 吸 光 系数
灵敏 、简便快速测定二氧化氯含 量的光度 分析新
方法 ．
在 １ ０ｍＬ具 塞刻 度试 管 中依次 加入 １０ｍ Ｈ ． Ｌｐ ＝１． ０５的 Ｎ Ｃ —Ｎ 缓 冲溶 液 和 ０２ ． Ｈ４Ｉ Ｈ３ ．０ｍＬ１０× １ ｍ ｌＬＡ ０ ｏ Ｏ溶 液及 一定 量 的二 氧化 氯 ，加 蒸 馏 ／
含量的方法有分光光度法 ］ 、色谱法＿ 、电流滴 为 １ ０ ／ ｍｏ ・ ｍ） 测定 二 氧化 氯 含量 ，该 法 ４ Ｊ ０Ｌ （ ｌ ｃ 来 ４ 定 法 Ｊ 、流 动 注 射 法 Ｊ ｕ ｉｏ 学 发 光 法 … 具有简便快速等特点．二 氧化 氯标准溶 液于 ４ｏ 、ｌｍｎｌ化 Ｃ ． １ ｏ ／ 等．光度法具有简便 、灵敏等特点 ；吖啶橙是一 保存 ，用前逐级稀释至所需浓度．１０× ０ ｍ ｔ

细胞自噬预实验化学染色法1、试验目的通过化学染料吖啶橙（acridine orange，AO）染色木犀草素处理后的HepG2细胞判断木犀草素是否诱导HepG2细胞发生自噬。

2、试验原理3，6－（二甲胺基）吖啶盐酸盐，分子式C17H19N3 · HCl · ZnCl2, 分子量438.12g/mol,是一种荧光色素，其检测激发滤光片波长488nm,阻断滤光片波长515nm。

它与细胞中DNA和RNA结合量存在差别，可发出不同颜色的荧光，与DNA 结合量少发绿色荧光，与RNA结合量多发桔黄色或桔红色荧光。

该染料具有膜通透性，能透过细胞膜，使核DNA和RNA染色。

AO也可以渗透进入酸性细胞器，例如自噬溶酶体，发生自噬的细胞经吖啶橙染色，在荧光显微镜下可观察到红黄色点状体，称为酸性小体，当PH值较低的时候，AO发出红色荧光，且强度与酸性程度相关。

所以在AO标记的细胞中，酸性囊泡细胞器结构可以通过荧光显微镜下观察到。

3、试验材料及试剂HepG2细胞株、DMEM培养基（含10%FBS、100U青霉素和链霉素）、PBS、0.25%胰蛋白酶、吖啶橙（AO）、木犀草素、6孔板、载玻片、盖玻片AO储备液：准确称量10mg吖啶橙融入10ml三蒸水中，配置成储备液。

实验前取5.0ml PBS溶解10ulAO储备液，配置成染色液。

4、试验方法1）取对数期生长的细胞按1-5×105个/ml的浓度接种在六孔板中，24h后加入终浓度为50uM、100uM、200uM的木犀草素及100uM的5-Fu，药物处理48h。

2）药物处理后，用PBS清洗2次，0.25%的胰酶消化细胞制成细胞悬液。

3）将细胞悬液1000rpm离心3min，去掉上清，加入PBS把细胞浓度调节到1--10×105个/ml，吹打混匀。

4）取300ul细胞悬液，加入染色液至终浓度为1ug/ml，37℃避光孵育15-30min 5）染色结束后用PBS清洗3次，1000rpm离心3min，涡旋震荡混匀6）最后一次离心后留下少量液体，取10ul染色后的细胞滴加在载玻片上，盖上盖玻片7）把临时装片放在荧光显微镜下观察，取对照组和药物组细胞数目相似的视野进行拍照。

吖啶橙染色液吖啶橙染色液(1mg/ml)产品简介：吖啶橙(Acridine Orange, AO)属于三环杂芳香燃料，可以标记DNA、RNA，属于异染性荧光染料。

该染料具有膜通透性，能透过细胞膜，使核DNA 和RNA 染色。

因此AO 常用于细胞内DNA 和RNA 进行检测。

AO 与核酸结合方式主要有：1、插入性结合，AO 嵌入核酸双链的碱基对之间，这种结合方式主要为AO 与DNA 的结合，其荧光发射峰为530nm，激发后呈绿色荧光；2、静电吸引，带正电荷的AO 与单链核酸的磷酸根(带负电荷)产生静电间的吸引结合，这种结合方式主要为AO 与RNA 的结合，其荧光发射峰为640nm，激发后呈红色荧光，少量结合会呈桔黄色或桔红色荧光。

因此，吖啶橙嵌合到双链DNA 分子中显绿色，与DNA 单链或RNA 结合时发桔黄色或橙红色荧光。

(1mg/ml)为储存液，使用时应稀释到合适浓度后使用。

染色后在荧光显微镜下观察，吖啶橙可透过正常细胞膜，使细胞核呈绿色或黄绿色均匀荧光；而在凋亡细胞中，因染色质固缩或断裂为大小不等的片断，形成凋亡小体。

吖啶橙使其染上致密浓染的黄绿色荧光或黄绿色碎片颗粒；而坏死细胞黄荧光减弱甚至消失。

吖啶橙染色常与EB 染色合用双染，因EB 只染死细胞使之产生桔黄色荧光，由此可区分出正常细胞、凋亡细胞及坏死细胞。

自备材料：1、 荧光显微镜2、 低速离心机3、 PBS4、 细胞计数板5、 载玻片、盖玻片操作步骤(仅供参考)：1、 收集细胞(采用流式细胞仪检测时，应先固定细胞)，用PBS 清洗细胞1次，计数并调节细胞浓度至106/ml。

2、取适量的细胞悬液，加入Acridine Orange Stain(1mg/ml)，使AO终浓度为8.5～17μg/ml，轻轻混匀。

3、室温避光染色15～20ml，滴加于载玻片上并加盖玻片或上流式细胞仪分析。

4、荧光显微镜下观察(激发滤光片波长488nm，阻断滤光片波长515nm)，计数并拍照。

吖啶橙（Acridine Orange）是一种荧光染料，常用于细胞和组织的染色。

它可以与DNA和RNA结合，并发出绿色和橙色的荧光信号。

溶酶体是细胞内的一种细胞器，主要参与细胞内物质的降解和消化。

吖啶橙染色溶酶体的原理是，吖啶橙可以穿过细胞膜进入细胞内，并与溶酶体内的DNA结合。

在酸性环境下，吖啶橙与DNA结合的荧光信号会发生变化。

在弱酸性条件下，吖啶橙发出绿色荧光；而在强酸性条件下，吖啶橙发出橙色荧光。

通过观察细胞或组织中溶酶体的荧光颜色，可以了解溶酶体的酸性程度和功能状态。

正常情况下，溶酶体处于弱酸性状态，吖啶橙发出绿色荧光；而当溶酶体功能异常或酸性增加时，吖啶橙发出橙色荧光。

这种染色方法可以用于研究溶酶体相关的疾病，如溶酶体贮积病和溶酶体功能障碍等。

需要注意的是，吖啶橙染色溶酶体的原理是基于荧光信号的变化，因此在观察时需要使用荧光显微镜或其他荧光检测设备。

恒温振荡器 ，光照培养箱 ，超 净工作 台 ，显
微 镜 ，不锈 钢压力蒸汽 灭菌器 ，超声 波破碎 仪 ，
岛津液相色谱仪。 １ 试验 方 法 ． ２
１ ． 培养基 的配备 ．１ ２ 平板 培养 基 ：Ｐ Ａ 培养 基 Ｄ
草拟青霉 （ｅｃｏ ｙｅ ｌ ｒ ， 的有性型圄 Ｐ ａｉ ｍ ｃｓ ｉ ｉ ｌ ｍｉｔ ｓ ａ ） ，其 功效与冬虫夏草类似［ ３ ］ ，在药化 、药理和临床试验 中证 明可作为冬虫夏草的重 要人工替代品之一嗍 。 虫 草 素 （ｏｄｃｐ ） 是 冬 虫 夏 草 （ ｏｄｃｐ ｅｒｙｅｉ ｎ Ｃ ｒｙｅｉ ｎ ｓ ｅ ｓ、 和蛹虫草中含有的活性成分之一 ， １５ ｉ ｎｉ ｎ ｓ ） ９０
年 由 Ｃ ｎ ｉｇａ 等从蛹 虫草 发酵液 中分 离得 到 ， ｕ ｎｎ ｈｍ
菌丝体培养 ：采用改 良的 Ｐ Ａ培养基 ，配制 Ｄ
方法 如下 ：在 １０ ｍ ０ ００： ２ ％马铃薯煮 汁中分 别加 Ｌ
入 磷 酸 二 氢 钾 ２０ｇ ． ，磷 酸 氢 二 钾 １ ，硫 酸 镁 ．ｇ ０
中图分 类号 ：￥６ ．＋ ５７３ ９ 文 献标 识码 ：Ｂ 文 章编 号 ：２ ９ － ２ ５ ２ １ ０ — ３ ０ ０ ５ １ ０ （０ ２ ２ — ４ １）
蛹 虫 草 （ ｏｄ ｃｐ ｌａｉ ，又 名 北 冬 虫 夏 Ｃ ｒｙ ｅ ｓ ｉ ｒ ： ｍｉｔ ｓ ）
ห้องสมุดไป่ตู้
蛹虫草 ，本公司实验室保存菌种 ，编号为 Ｃ １ Ｍ０
１ ． 诱 变剂 的制备 ．３ ２
准 确称 取 吖 啶橙 ，以无 菌水 配 制成 浓度 为 ０ １ ． ０ ｍ ／ Ｌ溶液，以 ０ ２ ｇ ｍ ． １ｍ膜过滤除菌备用。 ２Ｊ
１１ 菌种 ．． １

acridine orange
吖啶橙，化学名称为3,6-二(二甲基胺)吖啶、溶剂橙15，是一种有机化合物，化学式为C17H19N3，是一种荧光色素，主要用作荧光指示剂，与细胞中DNA和RNA结合量存在差别，可发出不同颜色的荧光，与DNA结合量少发绿色荧光，与RNA结合量多发桔黄色或桔红色荧光，该染料具有膜通透性，能透过细胞膜，使核DNA和RNA染色。

因此，在荧光显微镜下观察，吖啶橙可透过正常细胞膜，使细胞核呈绿色或黄绿色均匀荧光；而在凋亡细胞中，因染色质固缩或断裂为大小不等的片断，形成凋亡小体。

吖啶橙使其染上致密浓染的黄绿色荧光，或黄绿色碎片颗粒；而坏死细胞黄荧光减弱甚至消失。

吖啶橙AO 常与溴化乙啶EB合用双染，因EB只染死细胞使之产生桔黄色荧光，由此可区分出正常细胞、凋亡细胞及坏死细胞，它还可以用作移码突变的诱变剂，能镶嵌于两个相邻的碱基对之间，这样在DNA复制过程中，会使DNA链增加或缺失一个碱基，造成移码突变。

2017年10月27日，世界卫生组织国际癌症研究机构公布的致癌物清单初步整理参考，吖啶橙在3类致癌物清单中。

细胞凋亡染色方法
最常见的一种是吖啶橙/溴化乙锭（AO/EB）双染色法。

这个方法就像是给细胞穿上了不同颜色的小衣服来区分它们的状态。

AO可以嵌入双链核酸，让正常细胞和凋亡细胞的细胞核都呈现绿色荧光。

而EB呢，它只能进入那些膜完整性被破坏的细胞，像凋亡晚期细胞，这些细胞的核就会被染成橙红色荧光。

咱们把细胞一染，放在荧光显微镜下看，就可以很清楚地区分正常细胞、凋亡早期细胞（只有绿色荧光）和凋亡晚期细胞（绿色加橙红色荧光）啦，是不是很神奇 ？
还有一种是Annexin V - FITC/PI双染法。

Annexin V是个很聪明的小蛋白，它对磷脂酰丝氨酸（PS）有很高的亲和力。

在细胞凋亡早期，细胞膜的PS会从膜内侧翻转到外侧，这时候Annexin V - FITC就能结合上去，发出绿色荧光。

PI呢，它和EB有点像，是不能进入活细胞和早期凋亡细胞的，只有当细胞死亡，细胞膜完全破损了，它才能进去把细胞核染成红色。

这样通过双染，我们就能准确地检测到凋亡细胞啦，就像给细胞们做了个精准的小体检 。

另外，TUNEL染色法也很厉害哦。

这个方法主要是检测细胞凋亡时断裂的DNA。

细胞凋亡的时候，内源性核酸内切酶会被激活，把染色体DNA在核小体间切断，产生180 - 200bp整数倍的寡核苷酸片段。

TUNEL法就是利用末端脱氧核苷酸转移酶（TdT）把生物素或地高辛等标记的dUTP连接到3' - OH末端，然后再用相应的荧光标记的抗体或者酶标抗体去检测这些标记的dUTP，这样凋亡细胞就能被染上色啦，在显微镜下就可以看到那些凋亡的小细胞们啦，是不是感觉像在细胞世界里玩侦探游戏一样 ？。

Ｋｅ ｒ ｓ Ａｃｉｉ ｒｎ ｅ Ｂ ｖｎ ｅｕ Ａ ｂ ｍｉ ； ｕ ｒｓｅ ｃ ｔｏ ｙ ｗｏ ｄ ： ｒ ｎ Ｏ ａ ｇ ； ｏ ｉｅ Ｓ ｒｍ ｌｕ ｎ ｆ ｏ ｅｃ ｎ ｅ ｈ ｄ ｄ ｅ ｌ ｍｅ
蛋 白质 是一切 生物 体 的细 胞 和 组织 的主要 组 成成分 ， 是生命 活动的物 质基础 。 年来 ， 蛋 白质 近 对 分 离和 分析方 法 的 研 究引起 了科 学 工作 者 的兴趣 和 广泛关注 ； 同时 用于定 量测 定 蛋 白质 的一 些新 的 分析技 术 的出现 ， 又促进 了 生命 科 学 的不断发 展ｔ ｌ 】 。
Ｏ １ ｒｔｉ ｎ ａ ｃ ｒ ｉ ａ ｇ 。 ｗｈｃ ａ ｅ ａ ｐｉｄ ｔ ｈ ｅｅｍｉａｉｎ ｏ ｒｃ ｍｏ ｎ ｆ ｔｅ ｐ ｏ ｉ． ｆｌｅ ｐ ｏ ｎ ｉ ｅｔ ｎ ｒｎ ｅ １ ｅ ａ ｉｈ ｃ ｎ ｂ ｐ ｌ ｏ ｔｅ ｄ ｔｒ ｎ ｔ ｆｔａｅ ａ ｕ ｔｏ ｒ ｔ ｎ ｅ ｏ ｈ ｅ
ｌ ｒ ｃ ｎ ｅ ｉｔ ｓｔ ｆ ｏ ｓｅ ｃ ｎ ｎ ｉ ． Ｔ ｅ ｃ ａ ｇ ｆ ｆ ｏ ｓｅ ｃ ｍｅ ｔ ｈ ｗｓ ａ ｇ ｏ ｉｅ ｅａｉｎ ｗｉ ｅ ｃ ｎ ｅ ｔ ｔ ｎ ｕｅ ｅ ｙ ｈ ｈ ｎ ｅ ｏ ｕ ｒ ｃ ｎ ｅ ｉ ｍｉ ｓｏ ｏ ｄ ｌ ｒｒｌｔｏ ｔ ｔ ｏ ｃｎｒｉ ｌ ｅ ｙ ｎ ｈ ｈ ａｏ
Ａｃ ｉ ｉ ｅ Ｏｒ ｎ ｅｂ ｌ ｏ ｅ ｃ ｎ ｅ Ｔｅ ｈ ｉ ｕ ｒｄ ｎ ａ ｇ ｙ ａ Ｆ ｕ ｒ ｓ ｅ ｃ ｃ ｎ ｑ ｅ
ＨＵ ｅ －ｉ ｇ Ｉ Ｇｕ － ｉｇ Ｗ ｎｙｎ ，Ｌ ｏｐｎ
（ ｎｉ ｎ ｅｔ ｎ ｉ ｃ ｎｅＤ ｐｒ ｎ Ｐｔ ｎ ｅ ｉ， ｕ ａ ｕａ ５ １０ Ｃ ｉ ） Ｅ ｖ ｏｍ ｎ ｄＬｆ Ｓｉ ｃ ｅａ ｔ ｕａ Ｕ ｉ ｒｔ Ｐ ｔ Ｆｊ ３ １０， ｈ ａ ｒ ａ ｅ ｅ ｍｅ ， ｉ ｎ ｖ ｓｙ ｉ ｎ Ｊ ｎ ｎ

吖啶橙染色原理
吖啶橙是一种双碱性染料，具有两个氨基和两个芳香环结构。

它可以与DNA
和RNA结合，通过静电作用和氢键作用，与核酸中的腺嘌呤和胞嘧啶基团结合，
从而实现对核酸的染色。

吖啶橙的结构中含有芳香环和氨基，使其具有较强的荧光性能，能够在紫外光下产生橙色荧光。

在细胞或组织染色实验中，吖啶橙可以通过渗透染色或者固定染色的方式，将
其加入到待染细胞或组织中，与核酸结合形成吖啶橙-核酸复合物。

当使用荧光显
微镜观察时，激发波长为紫外光，吖啶橙-核酸复合物会发出橙色荧光信号，从而
实现对核酸的观察和检测。

吖啶橙染色的原理基于其与核酸的结合特性，通过与核酸的特异性结合，实现
对核酸的染色和检测。

由于吖啶橙具有较强的荧光性能，能够产生明亮的橙色荧光信号，因此在细胞生物学和分子生物学研究中得到了广泛的应用。

吖啶橙染色原理的了解对于科研工作者在实验设计和数据解读中具有重要意义。

在细胞和组织的荧光染色实验中，科研人员需要根据样本的特点和实验要求，选择合适的染色方法和条件，合理设计实验方案，以确保获得准确可靠的实验结果。

总之，吖啶橙作为一种重要的荧光染料，在生物学和医学领域发挥着重要作用。

了解其染色原理，可以帮助科研人员更好地应用吖啶橙进行细胞和组织的荧光染色实验，为科研工作提供有力支持。

希望本文对吖啶橙染色原理有所帮助，同时也希望科研人员能够在实验中充分
发挥吖啶橙的优势，取得更多有意义的研究成果。

吖啶橙/溴化乙锭双‎荧光染色AO / EB原理与‎流程zhong‎y ishe‎n g:1 原理：吖啶橙(AO)能透过胞膜‎完整的细胞‎，嵌入细胞核‎D NA，使之发出明‎亮的绿色荧‎光。

溴乙锭(E仅能透过‎胞膜受损的‎细胞，嵌入核DN‎A，发橘红色荧‎光。

凋亡的细胞‎呈现为染色‎增强，荧光更为明‎亮，均匀一致的‎圆状或固缩‎状、团块状结构‎。

非凋亡细胞‎核呈现荧光‎深浅不一的‎结构样特征‎。

二者形态迥‎然相异，很易判别。

在荧光显微‎镜下观察，可见四种细‎胞形态：活细胞(VN)，核染色质着‎绿色并呈正‎常结构；早期凋亡细‎胞(VA)，核染色质着‎绿色呈固缩‎状或圆珠状‎；非凋亡的死‎亡细胞(NVN)，核染色质着‎橘红色并呈‎正常结构；晚期凋亡细‎胞(NVA)，核染色质为‎橘红色并呈‎固缩状或圆‎珠状。

2 AO/EB染色及‎观察结果：取 20-100μl‎的1：100稀释‎的染色剂置‎于载玻片的‎贴壁细胞上‎室温下静置‎20min‎，PBS洗涤‎2-3遍，上覆盖玻片‎，荧光显微镜‎下观察结果‎并计数20‎-200个细‎胞。

ym105‎1: 1.能否提供具‎体实验步骤‎?2.您在文中所‎说的"1：100稀释‎的染色剂"是怎样稀释‎的?如何在载玻‎片上种上贴‎壁细胞?zhong‎y ishe‎n g:1 用1mlE‎P管稀释时‎，先取微量的‎染色剂，然后再取稀‎释剂（如BSA）加入EP管‎吹打即可。

2 消毒灭菌处‎理后的盖玻‎片平放入培‎养皿或中即‎可实验。

ym105‎1:我好像已明‎白具体过程‎了:首先要进行‎细胞爬片,然后将染色‎剂滴加在已‎爬有细胞的‎盖玻片上,温育后洗涤‎,再盖上盖玻‎片则可进行‎观察了.是这样吗?如果不经过‎爬片处理而‎将细胞进行‎消化,再将细胞和‎染色剂滴加‎在盖玻片上‎进行观察,行吗?zhong‎y ishe‎n g:的确，不经过爬片‎而是将贴壁‎细胞消化下‎来一样可以‎进行进一步‎的实验。

吖啶橙染色原理
吖啶橙染色是一种常用于核酸和蛋白质检测的荧光染料，其原理基于荧光共振能量转移（FRET）和DNA或蛋白质的特定
亲和性。

在实验中，通常将吖啶橙与目标分子（如DNA或蛋
白质）结合，通过观察荧光信号的强度和变化来进行检测。

吖啶橙具有两个荧光基团：供体荧光基团（通常为吖啶基团）和受体荧光基团（通常为橙色基团）。

当吖啶橙与目标分子结合时，两个基团之间的距离和相对位置可能会发生改变。

如果供体荧光基团与受体荧光基团的距离在合适的范围内，并且相对位置适当，FRET就会发生。

在FRET过程中，供体荧光基团受到激发光刺激并产生激发态，在受体荧光基团的作用下，供体荧光信号以非辐射方式传递给受体荧光基团。

作为结果，亮一些的橙色荧光发生。

通过观察橙色荧光信号的强度和变化，可以确定目标分子的存在和特定的相互作用。

吖啶橙染色的原理基于荧光共振能量转移和目标分子的亲和性，是一种有效的分析方法。

它常用于实验室研究、生物学检测和医学诊断等领域，具有高灵敏度和广泛的应用前景。

核酸染料成分核酸染料是一类广泛应用于生物学和化学领域的重要物质，其可以用来检测、标记和研究生物分子，如DNA和RNA。

核酸染料的成分多种多样，下面将介绍几种常见的核酸染料成分及其应用。

1. 乙溴蓝（Ethidium Bromide）：乙溴蓝是一种常用的核酸染料，可以通过与DNA或RNA分子的双螺旋结构相互作用而发出荧光。

乙溴蓝主要用于琼脂糖凝胶电泳中的核酸分离和检测。

它可以在紫外光照射下与DNA分子结合并发出橙红色荧光，从而可以直观地观察到DNA分离带或RNA分离带。

2. SYBR Green：SYBR Green是一种常用的核酸染料，它与DNA或RNA结合后能发出绿色荧光。

SYBR Green广泛应用于实时荧光定量PCR（qPCR）技术中，用于检测和定量PCR反应体系中产生的DNA分子。

其优点是灵敏度高、特异性好，可以实时监测PCR反应的进程，并定量分析反应体系中的DNA含量。

3. GelRed：GelRed是一种相对较新的核酸染料，它具有与乙溴蓝类似的性质，但更加安全和稳定。

GelRed可以在琼脂糖凝胶电泳中用于检测和定量DNA或RNA分子。

与乙溴蓝相比，GelRed对生物体和环境的毒性更低，使用更加方便和安全。

4. Methylene Blue：亚甲基蓝是一种常用的核酸染料，可以通过与DNA或RNA分子的碱基相互作用而发出蓝色荧光。

亚甲基蓝可以用于琼脂糖凝胶电泳中的核酸分离和检测。

与乙溴蓝相比，亚甲基蓝对生物体和环境的毒性较低，但其荧光强度相对较弱。

5. acridine orange：吖啶橙是一种双功能核酸染料，可以发出绿色荧光或橙色荧光，具有荧光探针和核酸染色剂的双重作用。

吖啶橙可以用于细胞核酸的染色和细胞活力的检测。

在荧光显微镜下观察，吖啶橙可以染色细胞核酸，并显示出不同类型的细胞核和胞质。

6. Propidium Iodide：碘化丙啶是一种常用的核酸染料，主要用于细胞凋亡和细胞周期分析。

细胞核常用荧光染料有：吖啶橙（Acridine Orange，AO）、溴化乙锭（Ethidium Bromide，EB）和碘化丙啶（Propidium Iodide，PI），DAPI、Hoechst染料、EthD III、7-AAD、RedDot1、2 等等。

透膜的染料如下：AO：具有膜通透性，能透过细胞膜，将核DNA和RNA分别染成绿色和红色，因此使细胞核呈绿色或黄绿色荧光。

EB：一种高度灵敏的荧光染色剂，在标准302nm处激发出橙红色信号。

DAPI：蓝色一种可以穿透细胞膜的蓝色荧光染料，其与DNA结合后可以产生比DAPI自身强20多倍的荧光，而与单链DNA结合无荧光的增强。

DAPI对双链DNA的染色灵敏度要高于EB和PI，荧光强度比Hoechst低，但光稳定性高于Hoechst。

Hoechst染料：蓝色一类在显微观察中标记DNA的荧光染料，最常见的两种是Hoechst33342和Hoechst33258。

这两种染料都在紫外350nm处被激发，在461nm处最大发射光附近发射青/蓝色荧光。

与DAPI相比，Hoechst33342加有乙基，具有更强的亲脂性，因此能更好的透过完整的细胞膜，并且细胞毒性更小。

RedDot 1染料：红色，超强的细胞核选择性，其光谱相似于Draq?5 和Draq?7。

RedDot?染料可被几种常见的激光激发并可在远红外区激发荧光。

RedDot? 的红色近红外荧光有效的与其他常用荧光探针区分开来。

不透膜的染料，如下：PI：不同通过活细胞膜，但却能穿过破损的细胞膜而对核染色。

PI作为红色荧光复染剂首选，PI经常与Calcein-AM或者FDA等荧光探针合用，区分死/活细胞。

EthD III、7-AAD、RedDot 2：不能透过细胞膜，但能将坏死细胞区分开来；更适合凋亡坏死实验的检测；细胞核荧光染料（PI DAPI Hoechst33342）细胞核荧光染料PI碘化丙啶（简称PI）是一种常用的细胞核荧光染色剂。

活体细胞溶酶体膜通透性（LMP）/完整性吖啶橙荧光检测试剂盒产品说明书（中文版）主要用途活体细胞溶酶体膜通透性（LMP）/完整性吖啶橙荧光检测试剂是一种旨在通过吖啶橙吸收和细胞内再分布检测技术，选择性地聚集在线粒体内呈现荧光染色，即存在于或由溶酶体释放到细胞浆的荧光染料的不同荧光强度变化，来分析和观察溶酶体膜通透性的权威而经典的技术方法。

该技术经过精心研制、成功实验证明的。

其适用于各种活体细胞溶酶体（动物、人体、昆虫等）膜通透性的检测。

产品严格无菌，即到即用，活体检测，分辨率高，操作简捷，性能稳定。

技术背景溶酶体（lysosome）是一种动态性的、多态性的、含有水解酶的细胞器，具有接受和降解来自于分泌性、内吞性（endocytic）、自噬性（autophagic）、吞噬性（phagocytic）膜运转通路中的大分子。

其功能是膜依赖性，具有解毒和防御作用。

溶酶体膜是溶酶体内基质和胞浆之间的生理屏障，为整合性糖蛋白，防止细胞自我降解。

一旦溶酶体膜去稳定（destabilization），例如碱性化或内容物移位（translocation），将导致质子和水解酶外漏，而造成细胞器功能异常，进而产生细胞坏死、凋亡，以及病理症状，例如朊病毒脑病（prion encephalopathies）、阿茨罕默病、心肌缺血、脊髓灰质炎病毒感染、补体激活型肺损伤（complement activation-produced lung injury）、急性组织损伤等疾病。

其中膜通透性增加，是溶酶体膜去稳定性或去完整性的标志之一，溶酶体内容物大量释放到胞浆中，直接影响细胞的存活。

吖啶橙（acridine orange；AO）是一种亲溶酶体（lysomotropic）异染性（metachromatic）的荧光染料，在完整的溶酶体内，为质子化（protonated）寡聚体（oligomeric）形式，呈现红色荧光（激发波长555nm，散发波长617nm），而在胞浆内，为单体去质子化形式，呈现绿色荧光（激发波长490nm，散发波长528nm）。

吖啶橙荧光染色原理吖啶橙荧光染色原理一、前言吖啶橙荧光染色是一种常用的细胞核染色方法，其原理基于吖啶橙能够与DNA结合形成复合物，并且在紫外线或蓝光的激发下能够发生荧光发射。

本文将详细介绍吖啶橙荧光染色的原理。

二、吖啶橙的结构和性质吖啶橙是一种双氮杂环化合物，其分子式为C17H19N4Cl。

它是一种黄色晶体，可以通过溶解在水中形成黄色溶液。

吖啶橙分子中含有两个氮原子和两个苯环，这些结构使得它具有与DNA结合的能力。

三、DNA与吖啶橙的相互作用DNA是由四种碱基组成的双链螺旋结构，其中腺嘌呤（A）和胸腺嘧啶（T）之间形成两个氢键，鸟嘌呤（G）和胞嘧啶（C）之间形成三个氢键。

这些氢键使得DNA分子具有稳定的结构，并且能够与吖啶橙形成复合物。

当吖啶橙溶液与DNA接触时，它能够通过静电作用结合到DNA的磷酸基团上。

此外，吖啶橙的分子中含有苯环，这些苯环可以穿过DNA 的双链螺旋，与碱基形成π-π堆积作用。

这些相互作用使得吖啶橙能够与DNA形成稳定的复合物。

四、吖啶橙荧光发射原理在紫外线或蓝光的激发下，吖啶橙分子会从基态跃迁到第一激发态。

在回到基态时，它会通过荧光发射释放出能量。

这种荧光发射是一种特殊的电子跃迁过程，其波长通常在500-600nm之间。

由于DNA和吖啶橙形成了稳定的复合物，并且吖啶橙分子在紫外线或蓝光的激发下能够发生荧光发射，因此在细胞核染色中加入吖啶橙可以使得细胞核产生荧光信号。

五、吖啶橙荧光染色的实验步骤1. 取一定量的细胞样品，离心沉淀后用PBS洗涤。

2. 加入适量的吖啶橙溶液，静置15-30分钟。

3. 用PBS洗涤样品，去除未结合的吖啶橙。

4. 在荧光显微镜下观察细胞核荧光信号。

六、吖啶橙荧光染色的应用吖啶橙荧光染色是一种常用的细胞核染色方法，它可以被广泛应用于生物学和医学研究中。

例如，在癌症诊断中可以利用吖啶橙染色技术对肿瘤组织进行检测；在细胞分裂和凋亡等过程中也可以利用吖啶橙技术进行观察和分析。

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［ 关键 词 ］ Ｆ ｎｏ 反应 ； 波 ； 啶橙 ； 化 氧 化 类 ｅｔｎ 微 吖 催 【 中图 分类 号 ］ ７ ３１ ［ Ｘ０． 文献 标 识 码 】Ａ ［ 章 编 号 ］１０ — ２ Ｘ（０ ００ — ０ ４ ０ 文 ０ ５ ８ ９ ２ １ ）８ ０ ５ — ４
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. ’. 吖啶橙荧光染色法【实验原理】吖啶橙（acridine orange ，AO ）是最经典的极灵敏的荧光染料，它可对细胞中的DNA 和RNA 同时染色而显示不同颜色的荧光。

其激发峰为492nm ，荧光发射峰为530nm（DNA ）、640（RNA ），它与双链DNA 的结合方式是嵌入双链之间，而与单链DNA 和RNA 则由静电吸引堆积在其磷酸根上。

在蓝光（502nm ）激发下，细胞核发亮绿色荧光（约530nm ），核仁和胞质RNA 发橘红色荧光（>580nm ）。

吖啶橙的阳离子也可以结合在蛋白质、多糖和膜上而发荧光，但细胞固定阻抑了这种结合，从而主要显示DNA 、RNA 两种核酸。

【实验用品】1、 器材荧光显微镜、牙签、载玻片、盖玻片、滴管、吸水纸。

2、 试剂（1）0.1mol/l pH7.0 PBS 液A 液：NaH 2PO 4·H 2O 2.76g ，加蒸馏水至100ml ；B 液：Na 2HPO 4·7H 2O 5.36g ，加蒸馏水至100ml ；取A 液16.5ml ＋B 液33.5ml ＋NaCl 8.5g ，用蒸馏水稀释至100ml 。

（2）1%吖啶橙原液取0.1g 吖啶橙加蒸馏水稀释至100ml （临用时配制0.01%吖啶橙染液：将1%吖啶橙原液用pH7.0 PBS 溶液稀释10倍）。

3、 材料口腔黏膜上皮细胞临时制片或人肝癌BEL-7402细胞爬片。

（1）取口腔上皮细胞涂在干净载玻片上。

（2）95%乙醇溶液固定5min 。

（3）滴加0.01%吖啶橙染液5min 。

（4）盖上盖玻片，吸水纸吸去盖玻片周围多余液体，镜下观察。

【结果与观察】荧光显微镜下（选用蓝色激发滤片），可见含DNA 的细胞核显示黄绿色荧光，含RNA 的细胞质及核仁显示橘红色荧光体外培养的肝癌细胞吖啶橙荧光染色【注意事项】（1）制片后一定要晾干玻片，在进行后续步骤，否则会导致细胞脱落。