4、电流:一般不大于5V/cm,在适当的电压下,迁移率与电流大小成正比 5、碱基组成:有一定影响,但不大 6、温度:4~30℃都可
琼脂糖凝胶电泳常用于分析DNA。由于琼脂糖制品中往往带有核糖核 酸酶杂质,所以用于分析RNA时,必须加入蛋白质变性剂,如甲醛。 电泳完毕后,将胶在荧光染料啡啶溴红的水溶液中染色。DNA与啡啶溴红 结合后,经紫外光照射,可发出红-橙色可见光。0.1μg的DNA即可用此法 检出,十分灵敏。
用Tm表示。DNA的Tm值一般在70-85℃之间。 ◇变性的过程通常是一个跃变的过程,发生在一 个很窄的温度范围内, 一般为6-8℃。
5
1.4
A260相对值
1.3
1.2
1.1
Tm
1
10 20 30 40 50 60 70 80 90 10 11
温度
00
6
◇影响Tm大小的因素: ▽ DNA的均一性。均一性越高, DNA熔解温度范围
越窄 。
▽ 不同来源的DNA的Tm值是不同的,DNA分子中的 (G+C)含量与Tm值有关,GC%越高,则Tm值越大。这是由 于 在 DNA 分 子 中 , G≡C 碱 基 对 特 别 稳 定 的 原 因 。 G-C%=(Tm - 69.3)* 2.44,
Tm = 69.3 + 0.41*GC%
▽ 介质的离子强度越低, DNA的Tm越低, 熔解温度 的范围越窄. 故DNA制品应保存在较高浓度溶液中.常 常在1mol/L NaCl溶液。
◇热变性的DNA在缓慢冷却时可发生复性, 速冷却时则难以完全复性。
◇ DNA片段越大,复性越慢,
◇ DNA浓度越大,复性越快。
但迅Βιβλιοθήκη 10◆ 复性的条件:◇ 盐溶液浓度: