菌种保藏方法

菌种保藏方法
菌种保藏方法，如下：
1、传代保藏，传代保藏菌种是微生物保存中最常用的方法之一。

很多微生物在低温或者干燥处理时，会很快死亡，为了保存菌种的活性，就要定期不断的进行菌种转接、培养后再保存。

2、斜面低温保藏，将待保藏的菌种接种在合适的斜面培养基上，在相应的条件下培养至得到充足的菌体或者孢子，随后密封试管置于4℃左右保存，具体保存温度按照保存菌种设定。

保藏时间依微生物的种类从1个月到4个月不等。

3、冷冻干燥保藏，冷冻干燥保藏法为菌种保藏方法中最有效的方法之一，对一般生活力强的微生物及其孢子以及无芽胞菌都适用，这种方法适用于菌种长期保存，一般可保存数年至十余年。

我国大多数生物制品菌种都是采用该法保藏。

4、半固体穿刺保藏，配制半固体培养基，高压湿热灭菌后倒于无菌试管中至约1/3，待培养基凝固，用接种环从平面培养基上挑取单菌落，穿入培养基若干次。

在合适的条件下进行培养至菌体旺盛生长，之后密封试管，根据菌种特点在4 ℃左右或者凉爽干燥处保存。

保存时间至少可以达到
1 年，对于有些菌种甚至能达到20 年之久。

5、液氮超低温保藏，液氮超低温保藏法是菌种长期保藏的最有效最可靠的方法。

液超低温保藏法是把菌种装在含有冷冻保护剂的安瓶瓶内，将该安瓶瓶放人液氮（-196℃）中保藏。

常用的菌种保藏方法及其优缺点
菌种保藏是微生物学研究中非常重要的一环，它能够确保菌种的长期保存和传承。

常见的菌种保藏方法包括以下几种：
1. 冷冻保存法：将菌株在-80℃的低温下保存。

这种方法操作简单，保存时间长，但是对于某些菌株来说，冷冻保存可能会对其生长和代谢产生不利影响。

2. 干燥保存法：将菌株培养在固体培养基上，然后将其晾干并保存在干燥的环境中。

这种方法保存时间长，保存成本低，但是对于某些菌株来说，干燥保存可能会导致其失活。

3. 液氮保存法：将菌株在液氮中保存。

这种方法保存时间长，保存效果好，但是液氮保存设备和运输成本较高。

4. 低温保存法：将菌株保存在4℃的低温环境中。

这种方法操作简单，保存成本低，但是保存时间相对较短。

5. 防冻蛋白保存法：将菌株培养在含有防冻蛋白的培养基中，然后在-20℃的低温下保存。

这种方法对于某些菌株来说效果很好，但是防冻蛋白的成本较高。

以上是常见的菌种保藏方法及其优缺点。

在选择菌种保藏方法时，需要根据菌株
的特性和实验需求进行选择。

同时，为了确保菌株的质量，保存前需要对菌株进行鉴定和纯化，并且在保存过程中需要注意保存条件，避免保存过程中出现污染和失活等问题。

菌种保藏方法(来源:微生物保藏管理中心)定期移植法亦称传代培养保藏法，包括斜面培养、穿刺培养、液体培养等。

是指将菌种接种于适宜的培养基中，最适条件下培养，待生长充分后，于4～6℃进行保存并间隔一定时间进行移植培养的菌种保藏方法。

操作步骤如下：1 培养基制备1.1 器皿准备培养基制备过程中所用的一些玻璃器皿，如三角瓶、试管、培养皿、烧杯、吸管等，经洗涤、干燥、包装、灭菌后使用。

1.2 溶解培养基配料先在烧杯中放适量水，按培养基配方称取各项材料，依次将缓冲化合物、主要元素、微量元素、维生素等材料加入水中溶解，最后加足水量，搅拌均匀。

1.3 调pH值配料溶解后将培养基冷却至室温，根据要求加稀酸（0.1mol/L盐酸）或稀碱(10%氢氧化钠)调pH值。

加酸或碱液时要缓慢、少量、多次搅拌，防止局部过碱或过酸而导致测量不准确和营养成分被破坏。

1.4 加凝固剂配制固体培养基时需加凝固剂，如琼脂、明胶等。

将凝固剂加入液体培养基中，加热并不断搅拌至融解，再补足所蒸发水分。

1.5 过滤分装在二层纱布中间夹入脱脂棉，将配好的培养基趁热过滤并分装。

斜面培养基分装量约为试管高度的四分之一(4～5mL)，穿刺培养基分装量以试管高度的二分之一为宜。

分装过程中勿使培养基沾污管口，以免弄湿棉塞造成污染。

1.6 包扎标记将试管加棉塞，外面包扎一层牛皮纸或铝箔并注明培养基名称及配制日期。

1.7 灭菌根据要求将培养基灭菌，通常蒸汽灭菌为121℃，15～20min。

1.8 斜面摆放灭菌后及时摆放斜面，斜面长度不超过试管管长的二分之一为宜。

1.9 无菌检查将灭菌的培养基放入培养箱中作无菌检验，通常30℃培养1～3天。

无菌检查合格后将其保存于4℃下备用。

2 接种2.1 斜面接种2.1.1 点接把菌种点接在斜面中部偏下方处。

适用于扩散型生长及绒毛状气生菌丝类霉菌（如毛霉、根霉等）。

2.1.2 中央划线从斜面中央自下而上划一直线。

适用于细菌和酵母菌等。

常用的菌种保藏方法及其优缺点菌种保藏是微生物学研究中的重要环节，其目的是长期保存各类菌种以便于日后的使用和研究。

常用的菌种保藏方法有冷冻保存、制备淡防冻溶液、干燥保存、液氮冷冻保存、冷冻干燥保存等。

下面是这些方法的优缺点。

1.冷冻保存：冷冻保存是通过将菌种保存在低温下，在液氮冷冻罐中或冷冻干燥保存，常见的保存温度为-80°C或液氮温度。

其优点是保存方便，菌种保存时间相对较长；缺点是保存设备和条件要求较高，保存过程中会有一定的细胞破坏。

2.制备淡防冻溶液：制备淡防冻溶液是指制备一种富含保护物质的冻存液，然后将菌种悬浮于其中，并在-20°C或-80°C保存。

其优点是相对简单，易于操作以及相对较长的保存时间；缺点是需要特定的冻存液配方和保存温度。

3.干燥保存：干燥保存是将菌种培养物在低温和低气压下干燥，然后保存于干燥剂中。

其优点是较为简单，设备要求低，保存时间较长；缺点是保存后重新复苏的成功率较低，保存过程中可能会有一定的细胞破坏。

4.液氮冷冻保存：液氮冷冻保存是将菌种保存在极低温的液氮中，常见的保存方法是将菌种培养物按一定比例混合液氮与甘油，然后使用液氮保存。

其优点是保存时间极长，细胞破坏较小；缺点是保存设备和条件要求较高。

5.冷冻干燥保存：冷冻干燥保存是将菌种首先冷冻，然后通过真空干燥的方法去除水分，最后保存在干燥剂中。

其优点是保存效果稳定，保存时间长；缺点是设备要求较高，操控难度大。

总的来说，不同的菌种保藏方法有各自的优点和缺点。

选择合适的方法应根据菌种的特性、实验室的设备和条件、保藏期限以及实验目的等因素综合考虑。

同时，在进行菌种保藏时，应严格控制一系列的操作步骤，包括消毒、菌种的培养与保存温度的选择、保存条件的监测等，以确保菌种的质量和纯度，以及保存结果的可靠性。

菌种保藏方法菌种保藏方法菌种保藏是指将某一种菌株或菌种保存在一定的条件下，以便长期保存并用于研究或应用。

菌种保藏的目的是为了防止菌株的变异和降低其性状的丧失，以便在需要的时候能够重新培养出相同或相似的菌株。

下面将介绍几种常见的菌种保藏方法。

一、冷冻保藏法冷冻保藏法是将菌种保存在低温条件下，一般为-80℃或液氮温度。

这种方法比较简单，操作方便，且保存效果较好。

首先，将菌株从培养基上接种到含有10%-15%甘油的液体培养基中，然后用无菌冻存管将菌液分装好，经过冷冻机或液氮罐进行冷冻保存。

在需要使用菌株时，只需将冻存管快速解冻并转移到新的培养基上即可。

二、真菌分生孢子的枯燥保存法真菌的分生孢子经过枯燥保存后，能够在相对湿度较低的条件下长期保存。

这种保存方法主要适用于真菌，特别是产生分生孢子的真菌。

首先，从培养基上接种分生孢子，培养出菌丝后进行枯燥处理。

一般采用短暂的枯燥处理，依靠菌丝中的水分进行干燥。

然后将枯燥的菌丝放置在无菌瓶中密封保存，放在相对湿度低于30%、温度介于10℃和25℃之间的干燥环境中。

三、气干法气干法是将菌株保存在干燥剂中，以保持菌株的活力。

这种方法适用于较短时间的菌种保存。

首先，将菌株从培养基上接种到含有干燥剂的培养基中，待培养基中的水分被干燥剂吸收后，将菌株封存在密封袋或密封瓶中。

干燥剂一般选择无水硅胶或干燥剂片，确保环境的干燥程度。

四、冷藏法冷藏法是将菌株保存在低温条件下，一般为4℃至10℃之间。

这种方法适用于细菌、酵母和一些真菌的保存。

菌株保存在含有15%-30%甘油的稀释培养基中，然后在低温条件下保存。

需要使用时，只需从低温保存中取出，接种到新的培养基中即可。

总结起来，菌种保藏是一项重要的科研工作，不同的菌种可以采用不同的保藏方法。

冷冻保藏法适用于大部分微生物的保存，真菌的分生孢子的枯燥保存法适用于真菌的保存，气干法适用于较短时间的保存，冷藏法适用于细菌、酵母和一些真菌的保存。

实验室菌种保藏的方法菌种是主要的生物资源，也是食用菌生产首要的生产资料。

一个优良的菌种被选育出来以后，必须保持其优良性状不变或尽可能地少变慢变，才不至于降低生产性能，能长期在生产中使用。

因此，菌种保藏在食用菌生产上具有重要的意义。

各种微生物由于遗传特性不同，因此适合采用的保藏方法也不一样。

一种良好的有效保藏方法，首先应能保持原菌种的优良性状长期不变，同时还须考虑方法的通用性、操作的简便性和设备的普及性。

下面介绍几种常用的菌种保藏方法：1斜面低温保藏法将菌种接种在适宜的斜面培养基上，待菌种生长完全后，置于4。

C左右的冰箱中保藏，每隔一定时间（保藏期）再转接至新的斜面培养基上，生长后继续保藏，如此连续不断。

此法广泛适用于细菌、放线菌、酵母菌和霉菌等大多数微生物菌种的短期保藏及不宜用冷冻干燥保藏的菌种。

放线菌、霉菌和有芽匏的细菌一般可保存6个月左右，无芽抱的细菌可保存1个月左右，酵母菌可保存3个月左右。

如以橡皮塞代替棉塞，再用石蜡封口，置于4。

C冰箱中保藏，不仅能防止水分挥发、能隔氧，而且能防止棉塞受潮而污染。

这一改进可使菌种的保藏期延长。

此法由于采用低温保藏，大大减缓了微生物的代谢繁殖速度，降低突变频率；同时也减少了培养基的水分蒸发，使其不至于干裂。

该法的优点是简便易行，容易推广，存活率高，故科研和生产上对经常使用的菌种大多采用这种保藏方法。

其缺点是菌株仍有一定程度的代谢活动能力，保藏期短，传代次数多，菌种较容易发生变异和被污染。

2石蜡油封藏法此法是在无菌条件下，将灭过菌并已蒸发掉水分的液体石蜡倒入培养成熟的菌种斜面（或半固体穿刺培养物）上，石蜡油层高出斜面顶端IC明使培养物与空气隔绝，加胶塞并用固体石蜡封口后，垂直放在室温或4。

C冰箱内保藏。

使用的液体石蜡要求优质无毒，化学纯规格，其灭菌条件是：150〜170。

C烘箱内灭菌Ih;或121。

C高压蒸汽灭菌60〜80min,再置于80℃的烘箱内烘干除去水分。

菌种的保藏方法菌种保藏是微生物学研究中必不可少的一环。

菌种保藏的目的是保存菌种的遗传信息、保持菌种的稳定性和纯度，为后续的研究提供保障。

本文将介绍几种常见的菌种保藏方法。

1. 冻干法冻干法是一种常用的菌种保藏方法。

将菌株培养在适宜的培养基上，生长到适当的密度后，用无菌的冻干管吸取菌液。

将冻干管放入液氮中，冷冻至-80℃，待冻干后，将管子密封，保存在-80℃的冰箱中。

冻干菌株可以保存多年，但是需要注意菌株的密封性和保存温度。

2. 静态液氮法静态液氮法是一种高效、长期保存菌株的方法。

将菌株培养在适宜的培养基上，生长到适当的密度后，用无菌的冻存管吸取菌液。

将菌液加入等量的甘油（最终甘油浓度为20%），混合均匀后分装到冻存管中。

将冻存管放入液氮中，冷冻至-196℃，保存在液氮罐中。

静态液氮保存的菌株可以保存数十年，但是需要注意菌株的密封性和保存温度。

3. 冷藏法冷藏法是一种简单、易行的菌株保存方法。

将菌株培养在适宜的培养基上，生长到适当的密度后，用无菌的冻存管吸取菌液。

将冻存管放入4℃的冰箱中保存。

冷藏法保存的菌株可以保存数个月，但是需要注意菌株的密封性和保存温度。

4. 活体保存法活体保存法是一种将菌株保存在活体状态下的方法。

将菌株培养在适宜的培养基上，生长到适当的密度后，用无菌的冻存管吸取菌液。

将菌液加入等量的甘油（最终甘油浓度为20%），混合均匀后分装到冻存管中。

将冻存管放入冰箱中，温度为4℃-8℃。

活体保存法可以保存数个月，但是需要注意菌株的密封性和保存温度。

5. 长期培养法长期培养法是一种将菌株保存在活体状态下的方法。

将菌株培养在适宜的培养基上，生长到适当的密度后，用无菌的冻存管吸取菌液。

将菌液加入等量的甘油（最终甘油浓度为20%），混合均匀后分装到冻存管中。

将冻存管放入冰箱中，温度为4℃-8℃。

每隔一段时间，将菌株转移到新的培养基上进行培养，以保持菌株的纯度和稳定性。

总之，菌种保藏是微生物学研究中必不可少的一环。

简述菌种保藏的几种方法及条件。

菌种保藏是重要的生物资源的保护和利用过程，其主要方法有：
一、冷冻法。

冰冻法是最常用的保藏菌株的方法，也是目前最理想的保藏方法之一，其主要原理是将活菌体放入冰冻室，温度由常温降至-80℃，使得菌种活动受到抑制，在-80℃的状态下可以长期保存。

二、液氮法。

液氮法是一种依靠低温和高压技术保存菌种的方法，主要是将活菌体置入液氮容器中，使其处于-195℃的极低温状态。

三、干燥法。

干燥法是将活菌体及高浓度营养培养基同时干燥，使其中的水份完全蒸发而获得半干燥的状态，这种状态下可以防止菌种的增殖。

四、水银法。

水银法是一种利用活菌体对水银的耐受性，将活的菌体悬浮在7%的水银中的保存方法。

保藏菌种的条件：
1、环境温度应该控制在0~4℃，并保持温度稳定。

2、控制保藏过程中的湿度，干燥法中的湿度应在10%～15%之间，而冷冻、液氮保藏则要求保证容器中有足够多的液氮，避免菌种因温度过高而复苏。

3、控制光照，避免菌株遭受接触紫外线的伤害、褪色、衰退和增强其致病性等。

4、控制空气中的致病因子；
5、定期检测样品的质量，确保其始终处于较好的保藏状态。

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在现代生物学研究和生物技术应用中，菌种保藏是至关重要的环节。

恰当的菌种保藏方法能够确保菌种的活性、遗传稳定性和可用性，为科学研究的持续开展以及相关产业的发展提供坚实的基础。

本文将重点介绍实验室中最常用的五种菌种保藏方法，深入探讨它们各自的特点、适用范围以及操作要点。

一、低温冷冻保藏法低温冷冻保藏法是目前最为广泛应用且效果较为可靠的菌种保藏方法之一。

其基本原理是将菌种置于超低温环境（通常为液氮温度，即-196℃）下，使菌种细胞处于极度冷冻的状态，从而抑制其代谢活动，达到长期保存的目的。

该方法具有诸多显著优点。

低温能够极大地减缓细胞的生理活动，几乎使其处于完全停滞状态，从而有效地延长菌种的存活时间。

低温冷冻保藏对菌种的遗传稳定性影响较小，经过长期保存后，菌种的特性通常能够较好地保持。

操作相对简单，只需将菌种制备成适宜的冷冻保存液，然后置于液氮罐中即可。

在具体操作时，首先要选择合适的冷冻保存液。

常用的冷冻保存液一般含有一定比例的保护剂，如甘油、二甲基亚砜等，它们能够降低细胞内冰晶的形成对细胞的损伤。

制备好冷冻保存液后，将菌种接种到冷冻保存液中，制成菌悬液。

将菌悬液分装到合适的冷冻管中，迅速放入液氮罐中进行保存。

在液氮罐中，要定期检查液氮的液位，确保菌种始终处于适宜的低温环境中。

低温冷冻保藏法适用于大多数微生物菌种的长期保存，尤其对于那些对温度敏感、容易变异的菌种，如细菌中的一些致病菌、真菌中的丝状真菌等，具有良好的保藏效果。

然而，该方法也存在一些不足之处，例如液氮的成本较高，液氮罐的储存空间有限，以及在取出菌种进行复苏时可能存在一定的风险等。

二、干燥保藏法干燥保藏法是利用菌种在干燥环境下代谢活动受到抑制的原理来实现保藏的方法。

常见的干燥保藏法包括沙土管保藏法、滤纸保藏法等。

沙土管保藏法是将菌种接种到无菌的沙土中，然后将沙土管置于干燥器中进行干燥保存。

该方法具有操作简便、成本低廉的特点。

在干燥过程中，菌种细胞内的水分逐渐散失，代谢活动减缓，从而达到保藏的目的。

菌种保藏储存方法大全菌种保藏储存方法大全食用菌由于营养价值高，生产成本低，经济效益高，近几年在农村兴起了生产热潮，但是，生产中食用菌菌丝繁殖快，容易老化。

本文根据实际情况介绍了7种简单易行的菌种贮藏方法供广大农户参考。

1.麦粒贮藏法取优质小麦淘洗后浸入20℃水中泡5小时，稍晾干后装管。

装入量以管长的l/4~1/3为宜。

将装有麦粒的试管灭菌后趁热摇散，冷却后接入菌丝体，在适温下培养至大多数麦粒上出现稀疏菌丝时，终止培养。

菌种可置于20℃以下干燥处保藏1～2年。

2.冰箱贮藏法将已经长好的试管菌种放于冰箱内储存，置于保鲜层保藏，能保证7个月菌种不退化。

3.生理盐水贮藏法将菌种接入马铃薯培养液中，每250ml三角瓶装60ml培养液，振动培养液或每天摇动5～10次，培养5～7天，然后将形成的菌丝球吸入装有5ml无菌生理盐水的试管中，每管约移入4～5个菌丝球，塞上棉塞，用蜡封好管口。

低温可保藏1年。

4.尿素暂存法在避光、干燥、通风良好的地方放置袋装尿素，将试管菌种主体埋在尿素颗粒中，试管口露在外面，可贮藏菌种活力30天之多。

此法在恒定低温环境下即可进行。

5.液体石蜡贮藏法选用化学液体石蜡，高压灭菌后放入40℃恒温箱中数小时或干燥器中数日，用无菌吸管或注射器吸取液体石蜡注入菌种试管。

注入量应高出斜面尖端1cm，管口塞上棉塞并用石蜡封好。

直立贮藏在清洁、干燥、凉爽的低温处，可以贮藏5年。

6.蒸馏水法 //农村致富经网 //适用于平菇、金针菇、香菇的菌种。

在自然温度下也可以贮藏其他菌种。

6.1贮藏平菇、金针菇菌种先将8成熟待贮藏试管菌种移入接种箱内后，用注射器从试管栓内注入蒸馏水，将培养基面全部淹没至管口2cm为止。

管口用矿蜡封闭，常温下置于阴凉处立放，可以贮藏1～1.5年。

6.2贮藏香菇、木耳菌种用15015mm的指型管将培养至7成熟的固体或半固体试管种在接种箱内无菌操作下，放人25200mm的大试管内，向大试管内注入蒸馏水至管口1cm处，封口用橡皮栓包好，并用矿蜡加固密封，置于阴凉处。

一、石蜡油低温保藏法本方法的原理是在长好的斜面菌上覆盖灭菌的液体石蜡，达到菌体与空气隔绝，使菌处于生长和代谢停止状态，同时石蜡油还防止水分蒸发，在低温下达到较长期的保藏菌种的目的。

保藏温度要求在-4～4℃下。

液体石蜡法适用于不产孢子的菌种。

具体操作是：菌种为斜面培养菌种，斜面不宜过长；选择纯净优质石蜡油，置三角烧瓶中经过121℃高压蒸汽灭菌1～2h，将其放烘箱中(160℃左右)干热处理，去除灭菌时渗入的水分，待石蜡油变得清澈透明后冷却即可加入斜面，斜面上不能出现气泡，液蜡添加量以高出斜面顶部约1cm为宜。

二、甘油管冷冻保藏法1．试验方法介绍本法也是利用微生物在甘油中生长和代谢受到抑制的原理达到保藏目的。

其方法是，将80%的甘油高压蒸汽灭菌待用。

将培养好的斜面菌种用无菌水制成高浓度的菌悬液(108～1010/ml)。

取1ml灭菌甘油放入与甘油充分混匀，使甘油浓度约为10%-30%，于-70℃下冻存。

-20℃保存时间较短。

或采用体积比为8：2的甘油－生理盐水，加入新鲜培养的菌体肉汤，混合均匀后至-20℃冰箱保存。

2．效果该法适用于一般细菌的保存，同时也适用于链球菌、弧菌、真菌等需特殊方法保存的菌种，适用范围广，操作简便，效果好，无变异现象发生。

甘油－生理盐水保存液保存菌种优于甘油原液，其原因可能是加入生理盐水适当降低了甘油的高渗作用，且有肉汤培养物适量增加保存液的营养成分，从而更好地保护了待保存的菌株。

三、真空冷冻干燥法1．试验原理真空冷冻干燥保藏法是兼具低温、干燥、除氧三方面菌种保藏的主要因素，除不宜于丝状真菌的菌丝体外，对病毒、细菌、放线菌、酵母及丝状菌孢子等各类微生物都适用，不宜用冻干法保存的微生物不到2%。

冷冻干燥法是在低温下快速将细胞冻结，然后在真空条件下干燥，使微生物的生长和酶活动停止。

为了防止在冷冻和水分升华过程中对细胞的损害，要采用保护剂来制备细胞悬液，使菌在冻结和脱水过程中起到保护作用的溶质，通过氢键和离子键对水和细胞所产生的亲和力来稳定细胞成分的构型。

菌种保藏法：基本原理微生物具有容易变异的特性，因此，在保藏过程中，必须使微生物的代谢处于最不活跃或相对静止的状态，才能在一定的时间内使其不发生变异而又保持生活能力。

低温、干燥和隔绝空气是使微生物代谢能力降低的重要因素，所以，菌种保藏方法虽多，但都是根据这三个因素而设计的。

保藏方法大致可分为以下几种：1．传代培养保藏法又有斜面培养、穿刺培养、疱肉培养基培养等（后者作保藏厌氧细菌用），培养后于4—6℃冰箱内保存。

2．液体石蜡覆盖保藏法是传代培养的变相方法，能够适当延长保藏时间，它是在斜面培养物和穿刺培养物上面覆盖灭菌的液体石蜡，一方面可防止因培养基水分蒸发而引起菌种死亡，另一方面可阻止氧气进入，以减弱代谢作用。

3．载体保藏法是将微生物吸附在适当的载体，如土壤、沙子、硅胶、滤纸上，而后进行干燥的保藏法，例如沙土保藏法和滤纸保藏法应用相当广泛。

4．寄主保藏法用于目前尚不能在人工培养基上生长的微生物，如病毒、立克次氏体、螺旋体等，它们必须在生活的动物、昆虫、鸡胚内感染并传代，此法相当于一般微生物的传代培养保藏法。

病毒等微生物亦可用其他方法如液氮保藏法与冷冻干燥保藏法进行保藏。

5．冷冻保藏法可分低温冰箱（-20—-30℃，-50—-80℃）、干冰酒精快速冻结（约-70℃）和液氮（-196℃）等保藏法。

6．冷冻干燥保藏法先使微生物在极低温度（-70℃左右）下快速冷冻，然后在减压下利用升华现象除去水分（真空干燥）。

有些方法如滤纸保藏法、液氮保藏法和冷冻干燥保藏法等均需使用保护剂来制备细胞悬液，以防止因冷冻或水分不断升华对细胞的损害。

保护性溶质可通过氢和离子键对水和细胞所产生的亲和力来稳定细胞成分的构型。

保护剂有牛乳、血清、糖类、甘油、二甲亚砜等。

三、器材细菌、酵母菌，放线菌和霉菌；肉膏蛋白胨斜面培养基，灭菌脱脂牛乳，灭菌水，化学纯的液体石蜡，甘油，五氧化二磷，河沙，瘦黄土或红土，冰块、食盐，干冰，95％酒精，10％盐酸，无水氯化钙；灭菌吸管，灭菌滴管，灭菌培养皿，管形安瓿管，泪滴形安瓿管（长颈球形底），40目与100目筛子，油纸，滤纸条（0．5×1．2cm），干燥器，真空泵，真空压力表，喷灯，L形五通管，冰箱，低温冰箱（-30℃），液氮冷冻保藏器。

菌种保存方法a.常用有以下方法：1 半固体保存法：将菌落穿刺接种在半固体中，4度存放，一般可以管3－6月2 低温冻存法：接种菌落的肉汤加20％灭菌甘油，置－20或－70度，可存放一年以上。

3 真空冻干法：试最理想的保存方法，但需要特殊仪器b.基因工程菌：1：30%的灭菌甘油与培养好的菌悬液按照1：1的比例混合，分装到1.5ML的离心管中，每关1ML，存于--20度，但仅保存半年就不太好了，最好保存到——70度的低温冰箱中。

也可用10%的灭菌甘油从斜面上洗下保存。

2：菌悬液中加甘露醇和人血白蛋白c.目前菌种的保存方法主要有以下几种:1.传代培养保存法:一般来说,这是最基本的保存法,用斜面,穿刺或其他方法培养的传代菌种,一般要保存在5度,但因类而异,如霍乱,淋球,脑膜炎,厌氧菌,钩体等要保存于37度为宜.2.液体石蜡覆盖保存法:这是传代培养的变相方法,可以适当地延长保存时间,主要适用于霉菌,酵母菌,放线菌,需氧性细菌等的保存.3.载体保存法1)土壤保存法:主要用于形成孢子回孢囊的微生物的保存,特别适用于真菌和放线菌不改变性状的长期保存.(2)砂土保存法:常用于梭状芽孢杆菌和一部分霉菌的保存,可保存数年.(3)硅胶保存法:本法对保存链孢霉菌较有效,对酵母菌的保存也较有效(4)磁珠保存法:用本法保存根瘤菌在室温下至少可保存2年半(5)滤纸保存法:适用于对干燥抵抗力较强的微生物,如油芽孢细菌和葡萄球菌.另外噬菌体,放线菌和丝状菌也可用本法.4.悬液保存法1)蒸溜水保存法:霉菌,酵母菌和放线菌的大部分,使其悬浮于蒸馏水中,可在室温下保存数年,青枯病假单孢杆菌也可用本法.(2)糖液保存法:过去用于保存酵母菌,但现在已不常用.(3)其他悬液保存法:如乳链球菌可用PBS保存,放线菌可用0.125%稀琼脂液保存.5.寄主保存法:一些微生物如一部分病毒,立克次氏体,螺旋体.原虫和少量丝状菌目前只能使活着的动物,昆虫,植物体和寄生微生物等感染并传代,否则不能保存.6.冷冻保存法1)低温冰箱保存法:多说微生物在-20度保存效果良好,(2)干冰保存法:-70度保存,(3)液氮保存法:保存温度克达到-196度,本法可说是使用范围最广的微生物保存法.7.冷冻干燥保存法:使微生物在冷冻状态下,在减压下利用升华现象除去水份,使细胞的生理活动事实上停止,从而长期维持生活状态,本法适用于大多数细菌和放线菌,另外病毒,噬菌体,立克次氏体,霉菌和酵母菌再多数情况下用本法保存.8.冷冻干燥以外的干燥保存法1)常压干燥保存法,(2)菌片封袋干燥保存法,(3)Stamp干燥保存法,(4)Sordelli干燥保存法,(5):L-干燥保存法(真空干燥保存法)d.我们实验室保存菌种的方法是:1 将菌落穿刺接种在半固体中，如加有琼脂的肉汤培养基，4度存放，保存时间较短一般3－4月2 接种菌落的肉汤0.9ml加100％灭菌甘油0.1ml，置－20度冰箱中可以保存一年左右,－70度冰箱或液氮中可放置N年，细胞的保存我们放了近十年，仍然复苏的很好3 基因工程菌的保存：1：为防止基因工程菌质粒丢失或不稳定，保存菌种加入甘油的量应该不大于10%，一般0.9ml的菌液加0.1ml80％高压灭菌甘油－70度冰箱保存e.菌种的保藏:菌种是一个国家所拥有的重要生物资源，菌种保藏（preservation）是一项重要的微生物学基础工作。

菌种保藏的方法菌种保藏是指将某一特定的菌种保存在适当的条件下，以确保其生活和活力，并能够长时间保存下去的过程。

菌种保藏的方法主要有冷冻法、干燥法、液氮法、乳酸法和多核隔离法等。

下面将逐一介绍这些方法及其适用范围。

冷冻法是一种常见的保藏菌种的方法之一。

它是将菌种培养物以低温冷冻保存的方法，常见的保存温度为-80°C或更低。

冷冻法适用于大多数细菌和许多真菌，但对于某些特殊的真菌菌种可能效果不佳。

干燥法是将菌种培养物完全或部分脱水后保存的方法，常见的干燥方法有冻干和真空干燥。

干燥法适用于许多细菌、真菌和酵母菌，而且保存时间较长，但对于一些需较高水分条件的菌种可能不适用。

液氮法是将菌种保存在液氮中的方法，常见的保存温度为-196°C。

液氮法适用于大多数菌种，包括细菌、真菌和病毒。

液氮法的优点是保存时间长，可以达到数十年甚至更长的时间，并且菌种的生活力相对较好。

乳酸法是一种利用乳酸细菌的代谢产物来保藏菌种的方法。

这种方法适用于一些较难保存的菌种，如肠道菌和一些微嗜酸性菌。

乳酸法的原理是将菌种和乳酸细菌一起培养，乳酸细菌产生的乳酸可以降低培养物的pH值，从而模拟菌种在肠道内的环境，达到保藏菌种的效果。

多核隔离法是将菌种分离成不同的细胞核并分别保存的方法。

这种方法适用于一些证明难以保存的菌种，如高度依赖特定环境条件或具有复杂生命周期的菌种。

多核隔离法可以通过分离不同的菌落或以体细胞核和生殖细胞核分离的方式来保存菌种。

以上是几种常见的菌种保藏方法。

不同的方法适用于不同的菌种，选择适合的保藏方法可以确保菌种的长期保存和维持生活力。

在进行菌种保藏时，需要严格控制培养物的纯度和保存条件，以确保保存的菌种的准确性和可用性。

实验室最常用的五种菌种保藏方法一、冷冻保存在实验室中，冷冻保存是最常用的菌种保藏方法之一。

这种方法利用低温的环境，将菌种置于-70°C以下的冰柜或液氮罐中进行保存，以减缓菌种的新陈代谢过程，从而延长其保存时间。

冷冻保存不仅适用于常见的细菌菌种，对真菌、酵母菌等微生物也同样适用。

在冷冻保存的过程中，需要注意样品容器的密封性和防潮性，以避免保存过程中的交叉污染和冻结损伤。

二、干燥保存干燥保存是另一种常见的菌种保藏方法。

这种方法通过将菌种置于低温低湿环境中，使其水分蒸发，使菌种变得干燥并进入休眠状态，从而延长其保存时间。

常见的干燥保存方式包括真空冷冻干燥、干燥剂吸附法等。

干燥保存尤其适用于灵敏对湿度敏感的菌种，以及一些难以存活在液体培养基中的微生物。

三、低温保存除了冷冻保存外，低温保存也是常见的菌种保藏方式之一。

在这种方法中，菌种通常被保存在4°C左右的冰箱中，通过控制温度和湿度，延缓菌种的新陈代谢，并保持其生长状态。

这种保存方式不仅适用于微生物的短期保存，也可以用于长期保存对保存温度敏感的微生物。

四、液氮保存液氮保存是一种极低温的保存方式，通过将微生物样品浸没在液氮中进行保存。

这种方法不仅可以有效地防止菌种的新陈代谢和变异，还能够保持菌种的生物特性和遗传信息。

液氮保存适用于需要长期保存的珍贵菌株和难培养的微生物，如土壤中的特殊嗜冷菌和特殊嗜热菌等。

五、冻干保存冻干保存是将微生物样品在冷冻的条件下先冻结，然后通过真空干燥的方式将水分蒸发，最终将样品转变成固态的干燥状态。

这种方法既能保留微生物的生物特性，又能有效地延长样品的保存时间，适用于需要长时间运输和保存的微生物。

总结回顾通过冷冻保存、干燥保存、低温保存、液氮保存和冻干保存等五种菌种保藏方法，可以满足实验室对于微生物样品保存的不同需求。

不同的菌种和实验目的，需要选择合适的保存方式，以确保微生物的品质和可用性。

在进行菌种保存的过程中，需要注意样品的密封性、温度和湿度的控制，以及保存设备的维护和管理。

菌种保藏⽅法菌种保存⽅法a.常⽤有以下⽅法：1 半固体保存法：将菌落穿刺接种在半固体中，4度存放，⼀般可以管3－6⽉2 低温冻存法：接种菌落的⾁汤加20％灭菌⽢油，置－20或－70度，可存放⼀年以上。

3 真空冻⼲法：试最理想的保存⽅法，但需要特殊仪器b.基因⼯程菌：1：30%的灭菌⽢油与培养好的菌悬液按照1：1的⽐例混合，分装到1.5ML的离⼼管中，每关1ML，存于--20度，但仅保存半年就不太好了，最好保存到——70度的低温冰箱中。

也可⽤10%的灭菌⽢油从斜⾯上洗下保存。

2：菌悬液中加⽢露醇和⼈⾎⽩蛋⽩c.⽬前菌种的保存⽅法主要有以下⼏种:1.传代培养保存法:⼀般来说,这是最基本的保存法,⽤斜⾯,穿刺或其他⽅法培养的传代菌种,⼀般要保存在5度,但因类⽽异,如霍乱,淋球,脑膜炎,厌氧菌,钩体等要保存于37度为宜.2.液体⽯蜡覆盖保存法:这是传代培养的变相⽅法,可以适当地延长保存时间,主要适⽤于霉菌,酵母菌,放线菌,需氧性细菌等的保存.3.载体保存法1)⼟壤保存法:主要⽤于形成孢⼦回孢囊的微⽣物的保存,特别适⽤于真菌和放线菌不改变性状的长期保存.(2)砂⼟保存法:常⽤于梭状芽孢杆菌和⼀部分霉菌的保存,可保存数年.(3)硅胶保存法:本法对保存链孢霉菌较有效,对酵母菌的保存也较有效(4)磁珠保存法:⽤本法保存根瘤菌在室温下⾄少可保存2年半(5)滤纸保存法:适⽤于对⼲燥抵抗⼒较强的微⽣物,如油芽孢细菌和葡萄球菌.另外噬菌体,放线菌和丝状菌也可⽤本法.4.悬液保存法1)蒸溜⽔保存法:霉菌,酵母菌和放线菌的⼤部分,使其悬浮于蒸馏⽔中,可在室温下保存数年,青枯病假单孢杆菌也可⽤本法.(2)糖液保存法:过去⽤于保存酵母菌,但现在已不常⽤.(3)其他悬液保存法:如乳链球菌可⽤PBS保存,放线菌可⽤0.125%稀琼脂液保存.5.寄主保存法:⼀些微⽣物如⼀部分病毒,⽴克次⽒体,螺旋体.原⾍和少量丝状菌⽬前只能使活着的动物,昆⾍,植物体和寄⽣微⽣物等感染并传代,否则不能保存.6.冷冻保存法1)低温冰箱保存法:多说微⽣物在-20度保存效果良好,(2)⼲冰保存法:-70度保存,(3)液氮保存法:保存温度克达到-196度,本法可说是使⽤范围最⼴的微⽣物保存法.7.冷冻⼲燥保存法:使微⽣物在冷冻状态下,在减压下利⽤升华现象除去⽔份,使细胞的⽣理活动事实上停⽌,从⽽长期维持⽣活状态,本法适⽤于⼤多数细菌和放线菌,另外病毒,噬菌体,⽴克次⽒体,霉菌和酵母菌再多数情况下⽤本法保存.8.冷冻⼲燥以外的⼲燥保存法1)常压⼲燥保存法,(2)菌⽚封袋⼲燥保存法,(3)Stamp⼲燥保存法,(4)Sordelli⼲燥保存法,(5):L-⼲燥保存法(真空⼲燥保存法)d.我们实验室保存菌种的⽅法是:1 将菌落穿刺接种在半固体中，如加有琼脂的⾁汤培养基，4度存放，保存时间较短⼀般3－4⽉2 接种菌落的⾁汤0.9ml加100％灭菌⽢油0.1ml，置－20度冰箱中可以保存⼀年左右,－70度冰箱或液氮中可放置N年，细胞的保存我们放了近⼗年，仍然复苏的很好3 基因⼯程菌的保存：1：为防⽌基因⼯程菌质粒丢失或不稳定，保存菌种加⼊⽢油的量应该不⼤于10%，⼀般0.9ml的菌液加0.1ml80％⾼压灭菌⽢油－70度冰箱保存e.菌种的保藏:菌种是⼀个国家所拥有的重要⽣物资源，菌种保藏（preservation）是⼀项重要的微⽣物学基础⼯作。