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利用吸附法测定壳聚糖无纺布抑菌性能试验方案一、实验原理：本实验参考了国标GB/T20944方法，根据我们的材料特性进行了微调。
即：选取革兰氏阴性菌（大肠杆菌（25922））和革兰氏阳性菌（金黄色葡萄球菌（25923））两类代表性指示微生物。
将测试材料浸泡在活化好的菌悬液（浓度控制为107CFU/ml）中，设置不同处理时间，稀释涂布，平板单菌落计数，计算无纺布材料的抑菌性能。
二、实验方法：2.1试验菌种的活化1）冻干粉接种至大豆蛋白肉汤(TSB)培养基，37℃培养24h。
一部分用于抑菌试验，另一部分用于划线接种至斜面或平皿冷藏保藏（可保藏1个月）。
2）培养液稀释。
活化好的菌悬液用稀释液稀释20倍，取1ml培养液添加到19ml稀释液（应提前灭菌）中。
3）式样预处理。
大小合适的试样饱和吸水，灭菌处理。
（周教授负责）4）菌悬液洗涤。
将稀释好的菌悬液转移到试样中，分别震荡15min 和30min，为防止微生物传代，影响试验结果，立即放入冰箱冷藏。
5）洗涤液梯度稀释。
处理后的洗涤液立即梯度稀释到10-1, 10-2,10-3,10-4和10-5。
具体方法：取1ml洗涤原液加入9ml稀释液此时为10-1梯度；取1ml稀释后的10-1菌液加入到9ml稀释液，此时为10-2梯度；······。
6）涂布。
分别取10-3,10-4和10-5的稀释液200ul涂布到平板（计数培养基，简称EA），每个处理做2个平行，37℃，培养24-48h，计数。
7）抑菌效果评价。
参照GB/T20944。
三、试验简易流程注：如果活化后的菌液浓度较高，可取10-4、10-5和10-6梯度稀释液涂布。
四：所需准备耗材：1、大豆蛋白液体培养基（7.1，TSB）250ml培养瓶装100ml 3瓶，2瓶分别接种，1瓶备用；2、大豆蛋白固体培养基,（7.2，TSA）250ml培养瓶装100ml 1瓶，到平板后用于菌种保藏；3、稀释液（7.5）15或18ml试管装9ml 50支，42支稀释，8支备用；4、计数固体培养基（7.6，EA）250ml培养瓶装160ml 6瓶，准备50皿。
体外抑菌实验方案一、实验目的1.探究不同抑菌剂对特定细菌的抑制效果。
2.优化抑菌剂的配方，提高抑菌效率。
3.为临床应用提供理论依据。
二、实验材料1.实验菌株：金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、白色念珠菌等。
2.抑菌剂：酒精、碘伏、过氧化氢等。
3.实验器材：培养皿、移液器、酒精灯、生物安全柜等。
三、实验方法1.菌株活化：将实验菌株从冻存管中取出，接种至斜面培养基，37℃培养24小时。
2.制备菌液：将活化后的菌株用无菌生理盐水洗涤，调整菌液浓度为10^6CFU/mL。
3.抑菌剂配制：按照实验设计，配制不同浓度和配比的抑菌剂。
4.抑菌实验：在生物安全柜中，将菌液均匀涂布于培养皿，加入不同抑菌剂，置于37℃培养箱培养24小时。
5.观察结果：观察各培养皿中细菌生长情况，记录抑菌效果。
6.数据处理：统计分析各抑菌剂的抑菌效果，计算抑菌率。
四、实验步骤1.活化菌株：从冰箱取出金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、白色念珠菌等菌株，接种至斜面培养基，放入37℃培养箱培养24小时。
2.制备菌液：将活化后的菌株用无菌生理盐水洗涤，调整菌液浓度为10^6CFU/mL。
3.配制抑菌剂：按照实验设计，配制酒精、碘伏、过氧化氢等抑菌剂的不同浓度和配比。
4.抑菌实验：在生物安全柜中，将菌液均匀涂布于培养皿，加入不同抑菌剂，放入37℃培养箱培养24小时。
5.观察结果：观察各培养皿中细菌生长情况，记录抑菌效果。
6.数据处理：统计分析各抑菌剂的抑菌效果，计算抑菌率。
五、实验结果1.不同抑菌剂对金黄色葡萄球菌的抑制效果：酒精浓度为75%时，抑菌效果最佳，抑菌率为99.99%；碘伏浓度为5%时，抑菌率为99.95%。
2.不同抑菌剂对大肠杆菌的抑制效果：过氧化氢浓度为3%时，抑菌效果最佳，抑菌率为99.99%；酒精浓度为75%时，抑菌率为99.90%。
3.不同抑菌剂对白色念珠菌的抑制效果：碘伏浓度为5%时，抑菌效果最佳，抑菌率为99.99%；过氧化氢浓度为3%时，抑菌率为99.95%。
抑菌试验1 定义抑菌试验，用于测定抗菌药物体外抑制细菌生长效力的试验称为抑菌试验抑菌活性的研究实验方案。
实验方法1. 纸片法（抑菌圈法）将测定菌株接种到培养基中，置37度条件下培养6-24小时，取出备用。
再用无菌吸管吸取上述培养液0.1ml，再用三角刮刀将菌液涂匀。
待培养基表面稍干后，用无菌小镊子分别取出所需的药敏纸片均匀地贴在培养基的表面，轻轻压平，各纸片间应有一定距离，并分别做上标记。
将培养皿置37度恒温箱内培养18-24小时后，测量各种药敏纸片抑菌圈直径的大小。
2. 挖孔法（1）在平板上打孔，然后将药液滴入孔内，用经酒精灯灭菌的接种环挑取适量细菌培养物，以划线方式将细菌涂布到平皿培养基上。
具体方式：用灭菌接种环取适量细菌分别在平皿边缘相对四点涂菌，以每点开始划线涂菌至平皿的1/2，依次划线，自至细菌均匀密布于平皿（将测定菌株接种到培养皿中，置37度条件下培养18-24小时，用灭菌的棉拭子将带将细菌混悬液涂布于平皿培养基表面。
要求涂布均匀）。
（2）以无菌操作将灭菌的不锈钢小管，（外径4mm，孔径与孔距均为3mm，管的两端要光滑，也可用玻璃管和瓷管），放置在培养基上打孔，将孔中的培养基用针头挑出，并以火焰封底，使培养基能充分的与平皿融合（3）加样时，按不同药液加样，用无菌滴管将样品加至满而不溢为止。
3. 牛津杯法（1）双碟的制备方法：将灭菌培养基溶化后取15ml倒入灭菌平皿内。
吸取待测菌株的菌液1-5ml与100ml冷至45度的培养基混匀，然后分别每一平皿加入5ml。
并均匀摊布在具有底层培养基的平皿内。
（2）待培养基凝固后，在每碟中均匀立放小钢管（及牛津杯）4个，用陶瓦盖覆盖。
（3）将下列实验药液分别加入小钢管中，置37度培养18-24小时，量取抑菌圈大小，判定抗菌药物抑菌作用的强弱。
乳酸菌的抑菌实验1产抑菌活性物质乳酸菌的初筛采用纸片法。
将培养好的大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、蜡样芽孢杆菌培养液 OD 600分别调整到 0.17、0.19、0.10，各取 100μL 接种于 LB 固体培养基，涂布均匀，固定1h。
复方皂矾功能洗发香波对马拉色菌体外抑菌活性的实验研究高坤平;杨文信【摘要】目的用琼脂平板扩散法(打孔法)和微量稀释法,观察复方皂矾功能洗发香波药物原液对马拉色菌的体外抑菌活性.方法稀释成不同浓度的采乐洗剂设为对照组,稀释成不同浓度的复方皂矾功能洗发香波药物原液设为实验组,用琼脂平板扩散法(打孔法)和用微量液基稀释法测试体外对马拉色菌的抑制作用,并测定复方皂矾功能洗发香波药物原液MIC(最小抑菌浓度)值.结论复方皂矾功能洗发香波药物原液在体外有抑制马拉色菌的作用.复方皂矾功能洗发香波药物原液的MIC(最小抑菌浓度)值为0.005 g/mL.【期刊名称】《中国中医药现代远程教育》【年(卷),期】2019(017)011【总页数】3页(P111-113)【关键词】复方皂矾功能洗发香波药物原液;脂溢性皮炎;马拉色菌;体外抑菌;抑菌圈直径;MIC;实验研究【作者】高坤平;杨文信【作者单位】西南医科大学附属中医院皮肤科,四川泸州646000;西南医科大学附属中医院皮肤科,四川泸州646000【正文语种】中文脂溢性皮炎又称为脂溢性湿疹，是发生在皮脂腺丰富部位如头皮、前胸、腋窝，的一种炎症性皮肤病。
以红斑、丘疹、鳞屑为主要皮损表现，同时伴有不同程度的瘙痒，中医称为“油面风”“白屑风”等。
病程日久，反复发作，形成恶性循环，甚至扩展至全身，严重影响患者生活质量［1］。
马拉色菌（malassezia）是皮肤表面的常驻菌，与脂溢性皮炎的发病密切相关，是导致头皮脂溢性皮炎的重要原因［2］。
治疗脂溢性皮炎的主流是抗真菌治疗，西药治疗复发率高，不良反应大。
因此，寻找作用安全、疗效满意的抗马拉色菌药物的任务巨大。
中医以整体观念与辨病辨证为理论基础，物美价廉，高效低毒，具有独特的优势。
复方皂矾功能洗发香波为纯中药制成，使用舒适，安全性好。
目前治疗脂溢性皮炎的中药或复方中药外洗剂缺乏深入系统科学的实验研究，多以个案或个别单位小样本量临床研究为主［3］。
八宝景天抑菌活性实验方案1 材料与仪器1.1 材料八宝景天（茎、叶、花），采摘于吉林农业大学校园，去离子水洗净，阴干，经粉碎机粉碎(过40～60 目筛)，所得植物粉用密封袋于遮光处保存备用。
1.2 微生物真菌：黄瓜枯萎病菌(Fusarium oxysporum)、黄瓜黑星病菌（Cladosporium cucumerinum）、辣椒炭疽病菌（Colletotrichum nigrum）由吉林省蔬菜花卉科学研究院提供。
番茄叶霉病菌( Fulvia fulva )、番茄早疫病菌(Alternaria solani)、甜瓜茎腐病菌(Fusarium gramimearum)、水稻立枯病菌（Rhizoctonia solani Kuhn）、番茄灰霉病菌（Botrytis cinerea）、黄瓜菌核病菌(Sclerotinia sclerrotium) 均由吉林农业大学农学院植物病理研究室提供。
1.3 试剂与仪器95%乙醇分析纯国药集团化学试剂有限公司葡萄糖分析纯国药集团化学试剂有限公司琼脂粉生化试剂天津科密欧化学试剂有限公司马铃薯JFSD-100粉碎机上海淀久中药机械制造有限公司JJ200型精密电子天平美国双杰兄弟有限公司常熟双杰测试仪器厂HH-S数显恒温水浴锅江苏省金坛市医疗仪器厂RE-2000旋转蒸发器上海亚荣生化仪器厂SHZ-III型循环水真空泵上海亚荣生化仪器厂TDL-5A低速大容量离心机上海悦丰仪器仪表有限公司生化培养箱SPX-250型上海跃进医疗器械厂ZKF035电热真空干燥箱上海实验仪器厂有限公司KQ5200B型超声波清洗器昆山市超声仪器有限公司不锈钢手提式灭菌器上海申安医疗器械厂超净工作台上海生物科技有限公司1.4 培养基的制备真菌都用马铃薯葡萄糖琼脂培养基(PDA培养基)马铃薯(去皮) 200g 葡萄糖20g琼脂20g水1000mL pH值自然培养基具体制作方法是：将200g马铃薯去皮，去芽眼，切成小条放入铝锅中，加入1000mL水，煮沸20～30分钟左右至马铃薯软而不烂时，用6～8层纱布过滤，取滤汁于锅中，补水至1000mL，加入琼脂熔化，再加入糖搅拌均匀，趁热分装于试管或锥形瓶中。
抑菌实验方案抑菌实验方案一、菌种大肠杆菌ATCC25922 金黄色葡萄球菌ATCC6538二、培养基LB培养基：胰蛋白胨10g/L、酵母膏5g/L、氯化钠10g/L、琼脂15~20g，用10mol/LNaOH调pH，范围7.0~7.4倒平板（平板培养基）1.将培养皿洗净、干燥，使各培养皿盖方向一致，用牛皮纸包好，或放入特制铁罐内，注明皿盖的方向。
高压灭菌或干燥灭菌后备用。
2.取刚灭菌后尚未凝固的培养基置于无菌箱或超净工作台内，先左手持三角瓶,右手反转手掌用中指和无名指拨出棉塞或硅胶赛(或不翻转手掌用小指和手掌拨出棉塞) ,同时将三角瓶转换至右手，而后左手拿平皿,以大拇指和中指将皿盖打开一缝，至瓶口刚好伸入。
三角瓶口经火焰烧灼后，倾入灭菌或溶化、冷却至55~60°C的培养基约15mL(勿使瓶口靠在平皿壁上，以免沾染皿壁)，迅速盖好皿盖，置于桌上轻轻旋转平皿,使培养基均匀分布于整个平皿底部,冷凝后即为平板培养基。
有时凝固后的培养基表面有冷凝水，可将平皿盖打开倒置于37℃温箱，除去冷凝水，否则将影响平板分离培养效果。
为防止冷凝水过多，也可将培养基冷却至45 ~ 50°C再倒平板。
培养基在30℃下放置一天，无污染的即可使用。
一般用牛皮纸包裹好存放于2-8℃冰箱中备用三、器械培养皿（90mm）、滤纸、三角耙、接种环、试管四、实验步骤（一）、抑菌圈的测定(滤纸片法)1、菌种接种将大肠杆菌、金黄色葡萄球菌反复转种2次，使菌种新鲜，置30℃恒温培养箱培养1d，备用。
2、菌悬液制备在超净台里将转接后生长良好的菌种试管斜面注入适量无菌水(约5mL)，接种环轻刮菌落，摇晃混匀。
3、涂布在超净台里用枪取0.1ml菌悬液注入平板，放置5min左右后用三角耙涂布均匀，每种菌设置两个重复平板4、贴片在超净台里将平板平均分为6个区，对角设置平行组，同时用无菌水做对照组,硫酸链霉素(10U)作阳性对照。
每两张滤纸片(直径1.1cm或0.6cm)为一贴，用镊子夹着滤纸片在样品中轻轻蘸一下后，取出贴在平板的指定位置，轻摁一下使滤纸片牢固，置(正放)4℃冰箱中放24h。
抑菌效果的检测方法：将抗生素菌株进行平板划线分离，长出单菌落后，在421房间的超净工作台上找到直径7mm的打孔器（只有一个，请大家不要拿到其它地方去！），用该打孔器在单菌落上打取菌落块，若菌落块卡在打孔器内，请用接种针挑出来，将菌落块以菌落面向上的方式放置在已经涂布有金黄色葡萄球菌或大肠杆菌的平板上，培养48小时后测量抑菌圈的直径。
发帖位置: Tuesday, March 25, 2014微生物学实验安排及自主实验要求第6周：1.口腔微生物的染色观察与显微镜油镜的使用；第7周：2.培养基的制备；3.高压蒸汽灭菌；第8周：4.土壤中微生物的分离；第9周：5.微生物菌落的观察；6. 微生物的分离纯化与菌种保存第10周：7.细菌的革兰氏染色；8.放线菌装片的制作及观察；第11周：9.酵母菌装片的制作及观察；10.霉菌装片的制作及观察；第12周：11.酸奶的制作第13周：12.水中大肠菌群的检测；第12-14周：自主实验——抗生素产生菌的分离纯化及抗菌活性测定；第15周：实验考核（无菌操作、制片、染色、油镜观察）；各组提交自主实验项目总结报告，要求按照正式发表的科研论文进行写作；自主实验总结汇报。
要求：1.以一个班为单位，3~4人一组（即每张桌子上的同学分成两个自主实验小组2.禁止选择以青霉为筛选目标的实验方案，各组自己查阅相关资料然后设计实验方案主要包括样品的采集、所用的培养基配方、分离方法、鉴定的方法、活性测定的方法等方面；各组长在第9周上实验课时将纸质实验方案提交给指导教师(实验方案请标明：2012级*班*组+组长姓名+联系电话+组员姓名）发帖位置: Tuesday, March 25, 2014抗生素产生菌的分离与抗菌活性检测1. 分离纯化获得1株以上具有明显抑制测试菌生长作用的产抗生素菌株，测试菌建议选用：金黄色葡萄球菌或大肠杆菌，只要对任何一种测试菌有比较明显的抑菌圈就可以了。
2. 对上述菌株进行初步鉴定，包括菌体形态、大小、菌落形态等、以及一些本实验室可以完成的生理生化反应，在此基础上对上述菌株鉴定到属名。
Advances in Microbiology 微生物前沿, 2014, 3, 29-35Published Online June 2014 in Hans. /journal/amb/10.12677/amb.2014.32004Establishment of Rapid DeterminingMethod for Antibacterial Activity byMicroplate ReaderZixiong Zhou1, Qinhua Huang2, Shuang Zhu2, Lin Zhou2*1School of Traditional Chinese Medicine, Guangdong Pharmaceutical University, Guangzhou2Guangdong Province Key Laboratory for Biotechnology Drug Candidates, School of Biosciences andBiopharmaceutics, Guangdong Pharmaceutical University, GuangzhouEmail: zzxyaoji@, *bio_zhoulin@Received: Apr. 23rd, 2014; revised: May 28th, 2014; accepted: Jun. 4th, 2014Copyright © 2014 by authors and Hans Publishers Inc.This work is licensed under the Creative Commons Attribution International License (CC BY)./licenses/by/4.0/AbstractTo investigate the main factors influencing the antimicrobial activity by microplate reader method for high throughput screen antimicrobial substances, the inhibitory rate of staphylococcus aureus was determinated against four typical antibiotics (kanamycin hydrochloride, terramycin, ampicillin, vancomycin) under different culture conditions. The result showed that the concentration of the drug, culture conditions and culture time will affect the inhibitory rate of Staphylococcus aureus.With bacterial concentrations of 5 × 105 cfu∙mL−1, static culturing, incubation time of 6 h, the inhi-bitory rate of kanamycin hydrochloride, terramycin, ampicillin, vancomycin was 57.4%, 52.8%,57.4%, 52.8% respectively with the concentration of 100 μg/mL antibiotic, while the inhibitoryrate was 55.6%, 36.1%, 56.5%, 36.1% respectively with the concentration of 10 μg/mL antibiotic, and the inhibitory rate was 46.3%, 10.0%, 52.8%, 50.0% respectively with the concentration of 1 μg/mL antibiotic. The precision and repeatability of the assay were good. There is no significant difference, in the inhibitory rate, between the microplate reader method and tube turbidimetry method from 2010 China Pharmacopoeia. The established microplate reader method could be ap-plied to high throughput screen of antibacterial substances.KeywordsMicroplate Reader, Antimicrobial Activity, High Throughput Screen酶标仪快速测定抗菌物质抑菌活性方法的建立*通讯作者。
究摘要苗药八爪金龙是一种传统的中药材，具有广泛的药用价值。
本文旨在通过研究提取工艺优选以及提取物抑菌活性的研究，为苗药八爪金龙的开发利用提供参考。
首先，采用正交试验法优化了八爪金龙半仿生提取工艺，筛选出最佳提取工艺条件，并对提取物进行了组分分析和抑菌活性测定。
研究表明，该提取工艺的最佳条件为:提取温度70℃、提取时间3h、料液比1:20、乙醇浓度50%、提取次数2次。
在该工艺条件下，八爪金龙提取物的产率为4.72%，其中酚酸类成分含量最高。
抑菌实验结果表明，该提取工艺所得的八爪金龙提取物对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌和白色念珠菌均有较强的抑制作用，对枯草芽孢杆菌、绿脓杆菌和肺炎克雷伯菌的抑制作用较弱。
本研究结果表明，半仿生提取工艺优选后的苗药八爪金龙提取物具有一定的抑菌活性，在未来的研究中可以作为候选化合物用于抗菌药物的开发。
#介绍苗药八爪金龙是我国传统的中药材之一，主要生长在我国南方的湿润地区，具有清热解毒、消肿止痛、散瘀止血、抗菌等多种作用。
现在已经被广泛应用于中药领域，但是对于提取工艺的研究还需要进一步深入探究。
提取工艺是影响苗药提取物质量和药效的重要因素之一。
为了根据八爪金龙的特性制定最优的提取工艺方案，本文采用正交试验法优选了半仿生提取工艺条件，并研究了其对多种细菌的抑菌活性。
材料与方法材料草药样品：苗药八爪金龙试剂：95%乙醇、氯化钠、琼脂、水解肉汤、菌斑专用培养基方法八爪金龙半仿生提取工艺的正交试验本实验采用正交试验对八爪金龙半仿生提取工艺进行了优选。
正交试验是一种系统严密的试验设计方法，在多个试验参数影响下，通过系统的实验设计选择出最优的某个因素的水平组合。
实验中，4个因素（提取温度、提取时间、料液比和乙醇浓度）各设置三个水平，提取次数设置为2。
共设计9组试验方案，每一组试验皆独立进行。
八爪金龙提取物组分分析八爪金龙提取物主要成分为酚酸和黄酮类化合物。
采用高效液相色谱法（HPLC）测定酚酸类成分含量。
抑菌活性实验方案
薄层层析(TLC)是一种广泛应用于氨基酸、多肽、核苷酸、脂肪类、糖脂和生物碱等多种物质的分离和鉴定的层析方法。
(1) 初始发酵培养基的筛选
在250 mL三角瓶装100 mL基础培养，将种子培养基以6%接种量接入各种基础培养基中，细菌37℃160r/min培养1d，放线菌28℃、170 r/min培养5d，测定不同培养基下发酵液对供试病原菌的抑制率，确定最佳基础培养基。
(2) 发酵时间的确定
将活化的种子培养基以6%接种量接入筛选出的基础培养基中，细菌37℃160r/min培养1d，放线菌28℃、170 r/min培养不同时间段，测定每个时间段发酵液上清液对供试病原菌的抑制率，确定最佳发酵时间。
(3) 发酵初始pH值的初步确定
将优化后碳氮源的基础培养基的pH分别调成3、5、7、9、11，然后再按6 %接种种子培养基，28 ℃、170 r/min培养一定时间后，测定不同pH培养基发酵液无菌滤液对供试病原菌的抑制率，确定初始pH范围。
(4) 发酵温度的初步确定
以优化后碳氮源的基础培养基为发酵培养基，按 6 %接种种子培养基，分别在20 ℃、24 ℃、28 ℃、32 ℃、36 ℃，170 r/min培养一定时间后，测定不同温度下发酵所得发酵液对供试病原菌的抑制率，确定发酵温度范围。
(5) 发酵接种量的初步确定
以优化后碳氮源的基础培养基为发酵培养基，分别按2 %、4 %、6 %、8 %、10 % 接种种子培养基，在28 ℃、170 r/min培养一定时间后，测定不同接种量对发酵液抑菌活性的影响，确定发酵接种量范围。
(6) 发酵转速的初步确定
以优化后碳氮源的基础培养基为发酵培养基，按6 %接种种子培养基，28 ℃、以100r/min、130 r/min、160 r/min、190 r/min、210 r/min培养一定时间后，测定不同发酵转速对发酵液抑菌活性的影响。
(7) 发酵装液量的初步确定
以优化后碳氮源的基础培养基为发酵培养基，在250 mL锥形瓶中装入50 mL、75mL、100 mL、125 mL、150 mL，按6 %接种种子培养基，28 ℃、170 r/min 培养一定时间后，测定不同发酵装液量对发酵液抑菌活性的影响。
(8) 碳、氮源的筛选
碳源优化：分别以葡萄糖、果糖、蔗糖、可溶性淀粉、小米、玉米粉、麦芽糖、燕麦粉和麸皮替换筛选出基础培养基中的碳源，并以缺少碳源的基础培养基
为对照；以初始发酵条件进行发酵，测定不同碳源发酵液上清液对供试病原菌的抑制率，确定最佳碳源。
氮源优化：分别以豆饼粉、棉籽粉、鱼粉、酵母浸粉、蛋白胨、胰蛋白胨、尿素、牛肉膏和黄豆粉替换筛选出基础培养基中的氮源，并以缺少氮源的基础培养基为对照；发酵条件同碳源优化，测定不同氮源发酵液对供试病原菌的抑制率，确定最佳氮源。
(9) 碳源浓度的初步确定
筛选出的氮源浓度不变，将碳源浓度设置5个浓度梯度，以初始发酵条件进行发酵，测定不同C源浓度发酵液对供试病原菌的抑制率，确定碳源浓度范围。
(10) 氮源浓度的初步确定
筛选出的碳源浓度不变，将氮源浓度设置5个浓度梯度，以初始发酵条件进行发酵，测定不同N源浓度发酵液对供试病原菌的抑制率，确定氮源浓度范围。
3.活性成分分析
薄层层析法
（1）挥发油的检查
首先观察滤纸上有无油迹样斑点，加热烘烤时若油迹消失，证明有挥发油，若未消失，需用试管法进一步确证。
为进一步检查，可用石油醚:乙酸乙酯(95:5)展开提取液，喷以新配制5%香荚兰醛的浓硫酸溶液，如在斑点上出黄色、棕色、红色或兰色反应，表明含有挥发油。
（2）生物碱检查
显色剂：改良碘化铋钾试剂：橙色、棕红色斑点为正反应。
（3）强心甙检查
显色剂：先喷以2 % 3,5-二甲基苯甲酸乙醇溶液，再喷以 4 %NaOH 乙醇溶液，紫红色斑点，反应后，荧光显著加强为正反应。
（4）黄酮及甙类检查
a、先在紫外灯下观察荧光，再喷以1 %AlCl3溶液观察荧光是否加强，如原显黄色、黄绿色斑点，反应后，荧光显著加强为正反应。
（5）蒽醌及其甙类检查
喷5 %KOH 溶剂，如经90 ℃烘烤 5 min 后显橙黄、橙红、紫红色斑点或色环为正反应。
（6）甾体类机萜类化合物检查
5 %磷钼酸乙醇溶液喷后120 ℃烘5 min，若显兰-兰紫色为正反应。
（7）酯类、内酯、香豆素及其甙的检查
a、使用异羟肟酸铁试剂(包括Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ)时先将Ⅰ:Ⅱ(1:2)混合过滤后，滤液作为显色剂，喷后烘干。
在喷以Ⅲ，最后在80 ℃烘 2 min，若显兰-紫色斑点为正反应。
（8）还原糖的检查
用邻苯二甲酸-苯胺试剂显色，104 ℃烘 5 min，显红-棕色斑点为正反应。
（9）有机酸的检查
a、pH 试纸检查：水提液和醇提液，若显酸性，可能含有游离有机酸或酚类成分。
b、0.05 %溴酚蓝乙醇试验：用0.05 %溴酚蓝乙醇液喷雾，在兰色背景上有黄色斑点即为正反应。
（10）氨基酸检查
0.2 %茚三酮溶液喷后，于80 ℃烘10 min 显红、兰、紫色斑点为正反应，亦有少数氨基酸呈黄色斑点。
化学反应检测
1、酚类成分的检试
三氯化铁试验：取酸性乙醇提取液 1 mL 于试管中加入1～2 滴1 % FeCl3
醇溶液，若显绿、兰绿或暗紫色为正反应。
2、鞣质检试
石灰水反应：水提液 2 mL 加入新制石灰水数滴，可水解鞣质呈青灰色沉淀，缩合鞣质产生棕色或红棕色沉淀。
3、生物碱的检试
取10 mL 酸性乙醇提取液，用 5 % NH4OH 调至中性，水浴上蒸干，加 3 mL 5 %硫酸溶液溶解残渣，过滤后滤液作如下检查：碘化铋钾试验：1 mL 滤液加碘化铋钾试液1～2 滴，如生成浅黄色—桔红色沉淀为正反应。
4、糖、多糖及甙类成分检试
α-萘酚试验：取1 mL 热水提取液，加入5 %α-萘酚试验溶液2～3 滴，摇匀，沿管壁缓缓加入0.5 mL 浓硫酸，交界面如很快出现紫红色环，即含有糖类、多糖或甙类，此反应很灵敏，在过滤时注意不可引入纤维或植物材料粉末。
5、皂甙的检试
氯仿-浓硫酸试验：取水提液 2 mL 在水浴上蒸干，用氯仿 1 mL 溶解，转入干燥小试管中，沿壁小心滴入 1 mL 浓硫酸。
若氯仿层显红或兰色，硫酸层又绿色荧光，示有甾体皂甙。
6、甾体、萜类成分检试
a、冰醋酸-浓硫酸试验：乙醇提取液1 mL，水浴上蒸干后用1 mL 冰醋酸溶解残渣，溶液转入干燥试管，加入 1 mL 醋酐，再滴入 1 滴浓硫酸，试液颜色逐渐由黄-红-紫-蓝(青)-墨绿色的一系列变化，表明有甾醇、甾体甙元或三萜成分。
其中甾体颜色变化较
7、黄酮及其甙类检试
醋酸铅沉淀反应：水提液或醇提液 2 mL，滴加饱和醋酸铅溶液，观察有无黄色沉淀。
若有沉淀，加至再无沉淀时离心取其上清液，再用碱式醋酸铅试验，观察有无沉淀生成。
8、蒽醌及其甙类检试
醋酸镁试验：取甲醇提取液 1 mL，加入 1 %醋酸镁甲醇溶液 3 滴，若有红色反应表示含有蒽醌及其甙类。
9、强心甙检试
碱性苦味酸试验：取甲醇提取液 1 mL，加入碱性苦味酸试液 1 滴，若有橙色或
橙红色反应，表明含有强心甙。
10、内酯、香豆素及其甙的检试
异羟肟酸铁试验：取甲醇提取液 1 mL，加10 滴7 %盐酸羟胺甲醇溶液，滴加10%KOH 甲醇液至pH 9，于水浴上加热，冷后再以稀盐酸调pH3～4，最后滴加1～2 滴1%FeCl3乙醇溶液，若有橙红色或紫色反应，表明含有内酯、香豆素甙类。
11、氨基酸、多肽和蛋白质检试
茚三酮试验：取冷水提取液 1 mL，加入0.2 %茚三酮溶液2～3 滴，摇匀后在沸水浴中加热5 min，冷却后，如有兰或兰紫色反应，表明有氨基酸、多肽和蛋白质。
12、挥发油、油脂类检试
挥发油试验：取乙醚提取液 1 mL，置玻璃皿上在室温挥发，如有油状物残渣并有香味或特异性气味，受热时，油状物消失或减少，表明有挥发油成分。
