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荧光分光光度法测定多维葡萄糖粉中维生素B2的含量一．实验目的1.学习荧光分光光度法测定多维葡萄糖粉中维生素B2的分析原理。
2.掌握荧光分光光度计的操作技术和测定多维葡萄糖粉中维生素B2的方法。
二．实验原理1.荧光光度法原理（1）常温下，处于基态的分子吸收一定的紫外可见光的辐射能成为激发态 分子，激发态分子通过无辐射跃迁至第一激发态的最低振动能级，再以辐射跃迁的形式回到基态，发出比吸收光波长长的光而产生荧光。
在稀溶液中，荧光强度IF 与物质的浓度c 有以下的关系： bcI I F εφ0303.2=当实验条件一定时，荧光强度与荧光物质的浓度成线性关系： Kc I F =这是荧光光谱法定量分析的理论依据。
（2）荧光分析法的特点：a. 与紫外-可见分光度法比较，荧光分析法具有更高的灵敏度。
b. 选择性好。
荧光法既能依据发射光谱，又能依据吸收光谱来鉴定物质。
c. 所需试样量少、操作方法简便。
（3）荧光光谱激发光谱：固定测量波长(选最大发射波长)，化合物发射的荧光强度与照射光波长的关系曲线。
激发光谱曲线的最高处，处于激发态的分子最多，荧光强度最大。
发射光谱：固定激发光波长(选最大激发波长), 化合物发射的荧光强度与发射光波长关系曲线。
固定发射光波长进行激发光波长扫描，找出最大激发光波长，然后固定激发光波长进行荧光发射波长扫描，找出最大荧光发射波长。
激发光波长和发射荧光波长的选择是本实验的关键。
（4）荧光分析仪器常用的荧光分析仪器由激发光源、单色器、液槽、检测器和显示记录器五部分构成，如下图所示：荧光分析仪器与分光光度计比较主要差别有两点： a.荧光分析仪器采用垂直测量方式，以消除透射光的影响；b.荧光分析仪器有两个单色器，能够获得单色性较好的激发光并消除其它杂 散光干扰。
2. 荧光光度法测定多维葡萄糖粉中维生素B2的含量维生素B 2（又叫核黄素，VB 2）是橘黄色无臭的针状结晶，其结构式为：H HO HO HO HNH H HOHNC NHNOOH 3CH 3C维生素B 2易溶于水而不溶于乙醚等有机溶剂，在中性或酸性溶液中稳定，光照易分解，对热稳定。
分子荧光法测定蒽一、 实验目的1. 掌握荧光光度分析法的基本原理和方法以及荧光激发光谱和发射光谱的关系；2. 掌握荧光光谱仪的基本组成及使用方法；3. 掌握荧光光谱定量分析的基本方法。
二、 实验原理处于基态的荧光物质分子吸收与其对应的特征电子能级相一致的光能后，将跃迁到能量较高的电子激发态。
处于较高电子激发态的分子，经振动弛豫、内转换等非辐射方式跃迁到单重激发态的最低振动能级，然后在10-9~10-7s 的短时间内发射光子返回基态，产生分子的荧光发射光谱。
每种荧光物质都具有特征的荧光激发光谱和荧光发射光谱，通常荧光发射光谱和它的激发光谱呈镜像对称关系。
对同一物质的稀溶液而言，荧光强度I f 与该物质的浓度c 有如下关系：lc I I f εϕ0f 303.2=当入射光强度I 0和吸光光程l 一定时，上式可简写为：Kc I =f 。
式中K 为常数。
因此，在低浓度下，荧光物质的荧光强度与浓度成线性关系，可利用标准曲线法对低浓度荧光物质进行定量分析。
三、 仪器与试剂仪器：荧光分光光度计（光谱仪）。
容量瓶若干。
试剂：10 mg·L -1蒽标准储备液。
四、 实验步骤1. 测量溶液的配制准确移取10 mg·L -1蒽标准储备液0.5、1、1.5、2和2.5mL 于5个50mL 容量瓶中，分别加入无水乙醇稀释至刻度，所得溶液浓度分别为0.1、0.2、0.3、0.4和0.5 mg·L -1。
2. 激发光谱和发射光谱的绘制开启仪器，预热10分钟，预扫描确定最佳激发波长和发射波长，在最佳发射波长下绘制激发光谱；在最佳激发波长下绘制发射光谱。
改变不同的激发光波长，观察激发光波长对荧光发射光谱的影响。
3. 不同浓度下荧光光谱的绘制分别对浓度为1.00、2.00、3.00、4.00和5.00 mg·L -1的蒽的无水乙醇溶液扫描荧光光谱，并进行比较，观察浓度对荧光光谱的影响。
4. 蒽样品的定量分析（1）标准系列溶液荧光强度的测定分别由稀到浓测定浓度为0.1、0.2、0.3、0.4和0.5 mg·L -1的蒽的无水乙醇溶液的荧光强度。
