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高州市长坡旧城2006~2010年土壤中土源性线虫卵污染情况分析【中图分类号】 r 383.1 【文献标识码】a【文章编号】1672－3783(2011)04－0364－02【摘要】目的：分析高州市长坡旧城土壤中土源性线虫污染情况，为从根本上防制人群土源性线虫病提供科学依据。
方法：每个监测点随机抽取10户，每户采集菜园、厕所周边、庭院、厨房四类地点的土样，镜检受精或未受精蛔虫卵，土壤培养法区别死活受精蛔虫卵。
结果：五年间共检查土壤样本200份次。
其中蛔虫卵阳性39份，阳性率为19.5%；钩虫卵阳性25份，阳性率12.5%；鞭虫卵阳性19份，阳性率9.5%；蛲虫卵阳性1份，阳性率0.5%。
结论：随着农村饮用水和居住条件的明显改善以及政府相关部门的重视与防治，我市的人群土源性线虫病感染率正稳步下降，但由于当地居民以种植业为主，养殖业为辅，农民仍以徒手操作为主，罹患土源性线虫病的风险仍然很大。
广东省高州市为粤西的一个农业大市，曾经是肠道寄生虫病及土源性线虫病高感染地区之一，寄生虫总感染率高于50%。
随着改革开放的深入和人民生活水平的提高，农村饮用水和居住条件的明显改善，以及政府相关部门的重视与防治，人群中的土源性线虫感染率已降至20%以下。
根据《全国土源性线虫病监测方案》，国家cdc、广东省cdc及茂名、高州市cdc于2006～2010年，在高州市长坡镇旧城村委会开展了为期五年的土源性线虫病监测工作。
现将5年来土壤中土源性线虫卵污染情况分析如下。
1 监测内容与方法1.1 土壤采样点：每个监测点采用单纯随机抽样方法抽取10户，每户采集菜园、厕所周边、庭院、厨房四类地点的土样。
1.2 采样量：每户每类地点1份，每份30克。
1.3 检查方法：镜检受精或未受精蛔虫卵，土壤培养法区别死活受精蛔虫卵。
1.4 指标：观察土壤中的蛔虫卵、受精蛔虫卵和培养后活受精蛔虫卵以及分辨各虫种并做好登记。
2 相关因素调查调查监测点的地理环境、气温、湿度、降雨、农作物、经济水平、卫生状况、防治措施等自然和社会因素。
粪便中犬弓首蛔虫卵饱和盐水卵漂浮法的改良研究繁萍;张瑞强;仁措卓玛;杨卫霞;白玲英;刘斌;倪小敏;康明【摘要】[目的]提高粪便中犬弓首蛔虫卵的漂浮效果.[方法]对常用的饱和盐水漂浮法进行改良,对2份含犬弓首蛔虫卵的粪便进行漂浮和沉淀等处理.[结果]采用改良漂浮法2个粪便样本中虫卵的回收率分别为52.66％和38.90％,其回收效果较常规漂浮法有明显提高.[结论]采用吸取表层漂浮液的方式回收漂浮液,对虫卵的回收效果良好.【期刊名称】《安徽农业科学》【年(卷),期】2015(000)021【总页数】3页(P145-147)【关键词】粪便;犬弓首蛔虫卵;饱和盐水漂浮法;改良【作者】繁萍;张瑞强;仁措卓玛;杨卫霞;白玲英;刘斌;倪小敏;康明【作者单位】清华大学生命科学学院,北京100083;青海大学农牧学院,青海西宁810016;青海大学农牧学院,青海西宁810016;青海大学农牧学院,青海西宁810016;青海大学农牧学院,青海西宁810016;青海大学农牧学院,青海西宁810016;青海大学农牧学院,青海西宁810016;青海大学农牧学院,青海西宁810016;青海大学农牧学院,青海西宁810016【正文语种】中文【中图分类】S852.7StudyontheImprovementofFloatingMethodwithSaturatedSalinefor Toxocara canisEggsinFecesFANPing,ZHANGRui-qiang*, Rencuo Zhuoma et al (1. SchoolLifeSciences,Tsinghua University,Beijing 100083; 2. CollegeofAgricultureandAnimalHusbandry,Qinghai University,Xining,Qinghai 810016)KeywordsFeces; T. caniseggs;Saturatedsalinefloatingmethod;Improvement当代生物学研究中，微量样本作为研究材料的情况已经十分常见，与之适应的微量研究技术已逐步建立起来，但在一些研究工作中还存在不足之处。
土源性线虫监测分析苍溪县土源性线虫病流行动态及影响因素，为制订防治对策和评价防治效果提供科学依据。
方法随机抽取1个行政村，整群抽取3周岁以上居民500人，不足500人的村全部检查，受检率不低于90%。
采用改良加藤厚涂片法（Kato–Katz法），1粪3检，检查土源性线虫卵，3～12周岁儿童加做透明胶纸法检测蛲虫卵，计算总感染率、分虫种感染率和感染度；另随机抽取该村10户居民，采集其菜园、厕所周边、厨房、庭园4类地点的土壤样各1份，采用改良饱和硝酸钠漂浮法进行人蛔虫卵污染情况监测。
结果调查点共检查508人，共发现4种土源性线虫，人群总感染率 5.71%(29/508)，其中：蛔虫3.15%(16/508)、钩虫2.56%(13/508)、鞭虫0.2%(1/508)、蛲虫5.56%(2/36)，各虫种之间感染率存在统计学差异（X2=9.82，P<0.05）；男、女性感染率分别为5.18%（13/251）和6.23%（16/257），其感染率差异无统计学意义（X2=0.26，P>0.05）;各年龄组和文化程度方面土源性线虫感染率无统计学意义（X2=2.13，P>0.05）和（X2=2.49，P>0.05）；以农民为职业的感染率最高达6.09%。
检测土壤样本40份，均未检出蛔虫卵。
结论苍溪县岳东镇土源性线虫的分布和虫种感染情况存在差异，感染率不存在性别、年龄等差异，为今后在诊断、治疗和制定防治方案提供了科学依据。
土源性线虫病是我国农村居民患病率较高的寄生虫病，其流行、分布与我国各地区的地形特征和经济发展，卫生状况和居民生活习惯有密切关系[1]。
为及时了解苍溪县土源性线虫病流行动态，掌握流行规律及其影响因素[2]，为制定防治策略和措施、考核防治效果和评价卫生城镇创建工作提供科学依据[3]以及更好地落实卫生部《2006-2015年全国重点寄生虫病防治规划》[4]，根据《四川省土源性线虫病监测实施方案（试行）》要求，于2011-11在苍溪县岳东镇守垭村进行了土源性线虫的监测，其结果报告如下。
肥料中蛔虫卵死亡率的测定GB/T19524.2—20041范围本标准规定了肥料中蛔虫卵死亡率的测定方法。
2测定方法原理将碱性溶液与肥料样品充分混合，分离蛔虫卵，然后用密度较蛔虫卵密度大的溶液为漂浮液，使蛔虫卵漂浮在溶液的表面，从而收集检验。
3试验方法3.1仪器设备（略）3.2试剂（略）3.3检验程序3.3.1蛔虫卵分离称取5.0～10.0 g样品（颗粒较大的样品应先进行研磨），放于容量为50 mL离心管中，注入NaOH溶液25～30 mL,另加玻璃珠约10粒，用橡皮塞塞紧管口，放置在振荡器上，静置30 min后，以200～300 r/ min频率振荡10～15 min。
振荡完毕，取下离心管上的橡皮塞，用玻璃棒将离心管中的样品充分搅匀，再次用橡皮塞塞紧管口，静置15～30 min后，振荡10～15 min。
3.3.2离心沉淀从振荡器上取下离心管，拔掉橡皮塞，用滴管吸取蒸馏水，将附着于橡皮塞上和管口内壁的样品冲入管中，以2000～2500 r/ min速度离心3～5 min后，弃去上清液。
然后加适量蒸馏水，并用玻璃棒将沉淀物搅起，按上述方法重复洗涤三次。
3.3.3离心漂浮往离心管中加入少量饱和NaNO3溶液，用玻璃棒将沉淀物搅成糊状后，再徐徐添加饱和NaNO3溶液，随加随搅，直加到离管口约1 cm为止，用饱和NaNO3溶液冲洗玻璃棒，洗液并入离心管中，以2000～2500 r/ min速度离心3～5 min。
用金属丝圈不断将离心管表层液膜移于盛有半杯蒸馏水的烧杯中，约30次后，适当增加一些饱和NaNO3溶液于离心管中，再次搅拌、离心及移置液膜，如此反复操作３～４次，直到液膜涂片观察不到蛔虫卵为止。
3.3.4抽滤镜检将烧杯中混合悬液，通过覆以微孔火棉胶滤膜的高尔特曼氏漏斗抽滤。
若混合悬液的浑浊度大，可更换滤膜。
抽滤完毕，用弯头镊子将滤膜从漏斗的滤台上小心取下，置于载玻片上，滴加二、三滴甘油溶液，于低倍显微镜下对整张滤膜进行观察和蛔虫卵计数。
土壤中蛔虫卵检测一、背景卫生部于2006 年在全国设立了22个土源性线虫病监测点开展监测工作 ,监测方案中要求对每个监测点进行人群土源性线虫病监测的同时, 还需监测土壤中人蛔虫卵的污染情况。
2006～2010年的监测数据显示，土源性线虫病监测点土壤中人蛔虫卵检出率分别为37.1%，29.5%，25.9%，31.3%和24.4%，统计分析表明，土壤人蛔虫卵检出率与人群蛔虫感染率呈正相关，因此土壤中蛔虫卵的污染情况是评价环境卫生状况的一项重要指标。
二、原理先用碱性溶液与土壤样品充分混合以分离蛔虫卵与土壤颗粒，再加入比重较大的液体使得比重较轻的蛔虫卵漂浮在溶液表面，收集后镜检计数。
三、采样要求1分别从表面及2～3厘米深处采取土样，因为虫卵存活时间与土层深度有关；2在用人粪施肥的农场和菜地可分别在陇上和犁沟中取土样，同时还应取20厘米深处的土样，以确定虫卵附着在根块植物上的可能；3为了测定不同局部气候条件下虫卵存活率，要从有日光照射和荫蔽区采取土样；4厕所、庭院、厨房取表层土；5每份土样约100g。
四、步骤1土样处理：剔除菜叶、树皮等大杂物，压碎土样中的大颗粒；然后用孔径3mm的铜筛和孔径为2mm的铜筛过筛，收集过筛后的土样。
2分离：取50ml大离心管，放入过筛后的土样10g，加5%氢氧化钠溶液至40或45ml刻度线。
用橡皮塞紧塞管口，在振荡器上振荡15分钟，可反复3～4次，待充分混合后，以2000rpm,离心4min。
3漂浮：弃去上部的氢氧化钠，加入饱和硝酸钠溶液充分搅拌混匀，2000rpm离心4min，再加饱和硝酸钠溶液满至管口，覆上18mm ×18mm盖玻片。
4 计数：静臵15min后，将盖玻片迅速翻转取下，臵于载玻片上镜检，同时再覆上第二张盖玻片，如此反复，共计数3～4张盖玻片。
五、影响土壤蛔虫检出率的因素1 漂浮液的比重：漂浮液的比重是影响蛔虫卵检出率的重要因素，用比重大的溶液作为漂浮液效果较为理想，与饱和硫酸锌、硫酸镁、氯化钠等盐溶液相比，饱和硝酸钠的比重最高，用作漂浮液蛔虫卵的检出率最高。
中华人民共和国国家环境保护标准HJ 775-2015水质蛔虫卵的测定沉淀集卵法Water quality Ascarid ova determination Nature sedimentation method（发布稿）本电子版为发布稿。
请以中国环境科学出版社出版的正式标准文本为准。
2015-12-04 发布 2016-01-01 实施 环境保护部发 布目次前言 (ⅱ)1 适用范围 (1)2 规范性引用文件 (1)3 方法原理 (1)4 试剂和材料 (1)5 仪器和设备 (1)6 样品 (2)7 分析步骤 (2)8 结果计算与表示 (3)9 精密度 (4)10 质量保证和质量控制 (4)11 废物处理 (4)12 注意事项 (4)附录A （资料性附录）硝酸钠水中溶解度、离心机离心力及转速计算公式 (5)附录B （资料性附录）蛔虫卵的鉴定 (6)附录C （资料性附录）蛔虫卵配制样品的制备 (8)前 言为贯彻《中华人民共和国环境保护法》和《中华人民共和国水污染防治法》，保护环境，保障人体健康，规范水中蛔虫卵的测定方法，制定本标准。
本标准规定了地表水和废水中蛔虫卵测定的沉淀集卵法。
本标准为首次发布。
本标准的附录A～附录C为资料性附录。
本标准由环境保护部科技标准司组织制订。
本标准主要起草单位：常州市环境监测中心。
本标准验证单位：上海市环境监测中心、江苏省环境监测中心、浙江省环境监测中心、苏州市环境监测中心、徐州市环境监测中心站和泰州市环境监测中心站。
本标准环境保护部2015年12月4日批准。
本标准自2016年1月1日起实施。
本标准由环境保护部解释。
水质蛔虫卵的测定沉淀集卵法1适用范围本标准规定了测定水中蛔虫卵的沉淀集卵法。
本标准适用于地表水和废水中蛔虫卵的测定。
当取样体积为10 L时，本方法的检出限为5 个/10 L。
2规范性引用文件本标准内容引用了下列文件或其中的条款。
凡是不注明日期的引用文件，其有效版本适用于本标准。
方法验证报告项目名称：水质蛔虫卵的测定沉淀集卵法方法名称：《水质蛔虫卵的测定沉淀集卵法》HJ775-2015报告编写人：参加人员：审核人员：报告日期：1实验室基本情况1.1人员情况实验室检测人员已通过标准《水质蛔虫卵的测定沉淀集卵法》HJ775-2015的培训，熟知标准内容、检测方法及样品数据采集和处理等，考核合格，得到公司技术负责人授权上岗。
表1参加验证人员情况登记表姓名性别年龄职务或职称所学专业从事相关分析工作年限1.2检测仪器/设备情况表2主要仪器基本情况设备编号设备名称规格型号计量/检定状态低速离心机百分之一天平相差显微镜旋转振荡器1.3检测用试剂情况表3主要试剂及溶剂基本情况试剂名称生产厂家级别规格备注吐温80乙酸乙酯硝酸钠冰乙酸结晶乙酸钠1.4环境设施和条件情况实验室具有检定合格的温湿度计，环境可以控制在标准要求范围内，满足检测环境条件。
另外实验室配备了洗眼器、喷淋设施、护目镜、灭火器等的安全防护措施，符合实验室安全内务的要求。
2实验室检测技术能力2.1方法原理用06目筛网过滤去除样品中较大的杂质，利用蛔虫卵比重大于水和易于沉淀的特性过夜沉淀浓缩水样，用虹吸的方法弃去上清液，用表面活性剂吐温80作为残液及沉淀转移时的清洗剂，进一步离心浓缩转移的剩余物，收集到的浓缩物用乙酸-乙酸钠缓冲液混匀，控制溶液pH值，获得最佳亲水-亲脂平衡，加入乙酸乙酯吸收水中的脂肪类杂质，使蛔虫卵更易下沉。
再次离心浓缩样品并弃去上部脂肪杂质层及缓冲液层，获得的含卵沉淀层用饱和硝酸钠溶液混匀，于计数框中静置漂浮后镜检，即可测得水样中蛔虫卵的数量。
2.2分析步骤2.2.1过滤充分摇匀样品，转入不锈钢开口直壁容器10L刻度。
如样品中含有草梗、纸渣等较大杂质，需将样品用筛网过滤,并用吐温80溶液清洗筛网及杂质，洗液并入过滤后的10L样品中。
2.2.2沉淀样品在15℃～25℃室温下静置过夜沉淀12h～24h，用虹吸管小心吸取并弃去上清液，避免扰动，保留1L含沉淀物的样品，转入1000ml开口直壁量筒，分别用50ml吐温80溶液彻底清洗不锈钢开口直壁容器3次，洗液并入开口直壁量筒。
饱和硝酸钠漂浮法测土壤中蛔虫卵
一、原理
先用碱性溶液与土壤样品充分混合以分离蛔虫卵和土壤颗粒，再加入比重较大的溶液使得比重较轻的蛔虫卵飘浮在液体表面，收集后镜检计数。
二、方法
1.土壤样品处理：剔除菜叶、树皮等大杂物，压碎土壤中的大颗
粒；然后用孔径3mm的铜筛过筛，收集过筛后的土壤。
2.分离虫卵：取50mL大离心管，放入过筛后的土壤10g，加5%
氢氧化钠溶液至40或45mＬ刻度线。
用橡皮塞塞紧管口，在
振荡器上振荡15分钟，可反复3~4次，待充分混合后，以
2000rpm离心4min。
3.漂浮：弃去上部的氢氧化钠，加入饱和硝酸钠溶液充分搅拌，
2000rpm离心4min，再加饱和硝酸钠溶液满至管口，覆上18m m
×18mm盖玻片。
4.计数：静置15min后，将盖玻片迅速翻转取下，置于载玻片上
镜检，同时再覆上第二块盖玻片，如此反复，共计数3~4张盖
玻片。
三、注意事项
1.漂浮液的比重：漂浮液的比重是影响蛔虫卵检出率的重要因
素，用比重大的溶液做为漂浮液效果较为理想，与饱和硫酸锌、硫酸镁、氯化钠等盐溶液相比，饱和硝酸钠的比重最高，用作
漂浮液，蛔虫卵的检出率最高。
2.土壤性质：土壤性质决定了蛔虫卵和土壤颗粒的粘合程度，蛔
虫卵检出率沙土最高，壤土次之，粘土最低。
3.离心的时间与次数：延长离心时间、提高离心速度或增加离心
次数均可以提高蛔虫卵与土壤颗粒的分离效果从而提高检出率。
美蓝、伊红、硼砂染色法
一、原理
美蓝、伊红、硼砂（简称Ｍ.Ｅ.Ｂ）溶于水呈碱性。
活虫卵可以还原碱性染料，降低着色力，不易被染色。
死虫卵不能还原碱性染料，容易着色。
蛔虫卵外层膜蛋白容易被染色，染色前需脱去膜蛋白。
二、配制
将0.2g美蓝加入100mL蒸馏水中煮沸10min，加入硼砂0.5g，再煮沸10min，冷却后加入伊红0.1g，待完全溶解后过滤备用，ＰＨ值为10~11，在室温中可放置1.5年。
三、步骤
1.脱膜蛋白：将收集的蛔虫卵加入30%次氯酸钠，作用数分
钟，并经常振荡，再用蒸馏水洗2次，即可脱掉蛋白膜。
2.染色镜检：吸取虫卵沉淀物一滴置于载玻片上，加Ｍ.Ｅ.Ｂ
染色液一滴，上覆盖玻片，静置3~5min后镜检。
或者，吸
取虫卵沉淀物一滴放入小试管内，加入染色液染30min再
用蒸馏水洗2~3次，吸取沉淀物镜检。
3.注意：Ｍ.Ｅ.Ｂ的ＰＨ值应在10左右，不宜太高：脱蛋白
膜后，应洗净次氯酸钠，否则影响碱性染料的着色效果。
4.鉴别死活：活卵内含物不着色，死虫卵内含物染成蓝色。
培养法
在直径10~12cm的玻璃平皿底部平铺一层厚约0.5cm的脱脂棉；脱脂棉上铺一张与平皿等大的普通滤纸；在滤纸上，再放一张直径2cm的小滤纸，将虫卵滴在小滤纸上。
加入２%福尔马林，以湿透滤纸和脱脂棉。
放入28~30℃温箱中培养一个月观察虫卵死活，培养一个月后自皿中取出小滤纸片，将虫卵置于载玻片上，滴加50%甘油溶液，使其透明后，根据其形态，鉴定卵的死活。
凡含有幼虫的，都认为是活卵；其它阶段的或单细胞的，都判为是死卵。
