耐碳青霉烯肠杆菌科细菌的耐药机制及MALDI-TOF在碳青霉烯酶快速检测中的应用研究

肠杆菌科细菌最常见的耐药机制【原创实用版】目录1.肠杆菌科细菌概述2.肠杆菌科细菌的耐药机制3.碳青霉烯类抗菌药物对肠杆菌科细菌的抗菌活性4.肠杆菌科细菌对碳青霉烯类抗菌药物的耐药性5.探讨肠杆菌科细菌耐药机制的研究进展正文肠杆菌科细菌是一类广泛存在于自然界的细菌，它们在医学、食品工业、环境保护等领域具有重要的作用。

然而，近年来由于抗生素的过度使用和滥用，导致肠杆菌科细菌对抗生素产生了越来越严重的耐药性。

本文将从耐药机制、碳青霉烯类抗菌药物的抗菌活性以及肠杆菌科细菌对碳青霉烯类抗菌药物的耐药性等方面进行探讨。

首先，我们需要了解肠杆菌科细菌的耐药机制。

肠杆菌科细菌的耐药机制主要包括产β-内酰胺酶、药物外排泵、靶位改变、细胞壁改变等。

其中，产β-内酰胺酶是最常见的耐药机制，这种酶可以水解β-内酰胺类抗生素，从而使抗生素失去活性。

此外，药物外排泵也是一种重要的耐药机制，它可以将抗生素从细胞内泵到细胞外，从而降低细胞内的药物浓度。

其次，碳青霉烯类抗菌药物是针对肠杆菌科细菌的一种非常有效的抗生素。

碳青霉烯类药物具有良好的通透性和广谱抗菌活性，对许多肠杆菌科细菌都有很好的抗菌效果。

然而，随着耐药性的不断增加，肠杆菌科细菌对碳青霉烯类抗菌药物的耐药性也逐渐增加。

最后，我们需要探讨肠杆菌科细菌耐药机制的研究进展。

近年来，随着分子生物学技术的发展，我们对肠杆菌科细菌的耐药机制有了更深入的了解。

例如，通过基因测序技术，我们可以分析肠杆菌科细菌的基因组，寻找与耐药性相关的基因。

同时，我们也可以通过实验技术，如药物敏感试验和同源性检测，来研究肠杆菌科细菌的耐药机制。

总之，肠杆菌科细菌的耐药性已经成为一个全球性的问题，我们需要加强对耐药机制的研究，以便更好地应对这一挑战。

研究碳青霉烯类耐药肠杆菌科细菌的耐药机制以及医院感染控制中的相关应用【摘要】目的：分析碳青霉烯类耐药肠杆菌科细菌（CRE）的耐药机制以及医院感染控制中的应用效果。

方法：选择本市（内江市第一人民医院，内江市中医院，内江市第二人民医院）在2019年1月至2021年1月分离得到的5000例肠杆菌科细菌开展此次研究，其中有120例美罗培南抑菌环的直径≤20mm，采取抗菌药物试验鉴定确定存在45株CRE，之后实施耐药试验，进行耐药基因筛选，采取PCR法来检测碳青霉烯酶基因与其阳性产物序列。

结果：本研究分析发现，CRE对各类抗菌药物（主要是青霉素类、头孢菌素类、头孢西丁类、碳青霉烯类等）均存在一定的耐药性，对各种抗菌药物的耐药性对比P>0.05；PCR法测序发现，存在29株blaIMP阳性菌株，类型均是IMP-４型，存在11株blaKPC阳性菌，类型均是KPC-2型；耐药基因检测发现，存在5株肺炎克雷伯菌Kpn6617(携带２种碳青霉烯酶基因），其他均显示是阴性。

结论：细菌耐药是导致碳青霉烯酶出现的最主要因素，主要的酶型是IMP-４，因此要根据细菌耐药的特征给予相对应的医院感染控制措施，提高抗菌药物合理利用率。

【关键词】碳青霉烯类耐药肠杆菌科细菌；耐药机制；医院感染控制耐碳青霉烯类肠杆菌科细菌（CRE）属于一种肠杆菌科细菌，主要是指对碳青霉烯类的抗菌药物存在耐药或者中介的细菌，其也是导致医院感染发生的一种超级病原体[1]。

目前，临床发现CRE同时也对其他类的抗菌药物产生，其已经逐渐成为增加医院感染风险的耐药细菌之一。

本研究主要分析CRE的耐药机制，旨在为医院开展有效的医院感染控制提供可靠参考依据，报道如下。

１资料与方法1.1一般资料选择本市在2019年1月至2021年1月分离得到的5000例肠杆菌科细菌开展此次研究，其中有120例美罗培南抑菌环的直径≤20mm，采取抗菌药物试验鉴定确定存在45株CRE。

碳青霉烯类耐药肠杆菌科细菌实验室检测的研究1. 引言1.1 研究背景碳青霉烯类耐药肠杆菌科细菌是一类对抗生素产生抗性的细菌，其能够对抗碳青霉烯类抗生素的治疗。

随着抗生素的广泛使用，碳青霉烯类耐药肠杆菌科细菌的耐药性不断增强，已经成为临床上常见的耐药菌株之一。

目前对于这类细菌的检测方法仍然存在一定的局限性，需进一步加强实验室检测的研究。

由于碳青霉烯类耐药肠杆菌科细菌在医院感染和传播中的重要性，了解其检测方法对于临床诊断和治疗具有重要意义。

本研究旨在探讨碳青霉烯类耐药肠杆菌科细菌的实验室检测方法，并分析其实验结果及可能的影响因素，以期为相关研究提供参考。

通过本研究的实验结果，有望为临床上对这类耐药菌株的检测和治疗提供重要的依据，对于控制细菌耐药性的进展具有积极的意义。

1.2 研究目的本研究旨在探讨碳青霉烯类耐药肠杆菌科细菌在实验室检测过程中的相关问题，并提出相应的解决方案。

具体目的包括：1. 探究碳青霉烯类耐药肠杆菌科细菌的特性和耐药机制，为后续研究提供基础性知识；2. 分析实验室检测方法的优势和不足之处，探讨其在临床诊断中的应用潜力；3. 总结影响实验结果准确性的因素，为提高检测效率提供参考建议；4. 探讨碳青霉烯类耐药肠杆菌科细菌耐药性的相关研究进展，为今后研究方向的确定提供参考依据。

通过本研究的开展，旨在为临床防控碳青霉烯类耐药肠杆菌科细菌提供科学依据和技术支持，从而更好地维护人类健康和公共安全。

1.3 研究意义碳青霉烯类耐药肠杆菌科细菌在临床上越来越常见，给医疗治疗带来了巨大挑战。

开展对这类细菌的实验室检测研究具有重要的意义。

通过对这类细菌的检测，能够及时发现耐药菌株的存在，从而指导临床用药，避免药物的滥用和耐药菌株的传播。

通过研究检测方法和影响因素，可以提高检测的准确性和灵敏度，为临床治疗提供更有力的支持。

对相关研究进展的总结和讨论，有助于拓展对碳青霉烯类耐药肠杆菌科细菌的认识，推动防治工作的进一步发展。

碳青霉烯类耐药肠杆菌科细菌实验室检测的研究碳青霉烯类耐药肠杆菌科细菌是当前世界范围内面临的严重抗菌药物耐药性问题之一。

随着耐碳青霉烯类抗生素耐药菌株的增多，治疗感染性疾病的难度不断增加，因此对于这类耐药菌株的检测研究显得尤为重要。

目前，实验室检测是一种迅速、准确、可靠的方法，能够帮助医务人员及时发现和确认碳青霉烯类耐药肠杆菌科细菌的存在，为临床治疗提供重要参考。

本文将对碳青霉烯类耐药肠杆菌科细菌实验室检测的研究进行探讨，探讨其影响因素、方法和标准等。

一、影响因素1. 样本来源：碳青霉烯类耐药肠杆菌科细菌可来源于临床患者的各种临床标本，如血液、尿液、痰液、脑脊液等。

也可来源于环境中，如医疗设施、食品和动物。

样本的来源对实验室检测具有重要影响。

2. 实验室设备：实验室检测需要一系列设备和试剂来进行，包括培养基、抗生素药敏试验盘、细菌培养箱、生物安全柜等。

设备的准确性和可靠性对于检测结果至关重要。

3. 检测方法：目前常用的检测方法包括传统培养法、分子生物学方法、质谱法等。

每种方法都有其特点和局限性，因此选择合适的检测方法对于检测结果的准确性具有重要影响。

二、检测方法1. 传统培养法：传统培养法是检测碳青霉烯类耐药肠杆菌科细菌的常用方法之一。

首先将样本进行细菌培养，然后进行药敏试验，观察耐药菌株的形态和生长情况。

这种方法操作简单，成本低，但耗时较长，可能对于治疗病情的及时干预不利。

2. 分子生物学方法：PCR法、实时荧光定量PCR法是目前常用的分子生物学方法，能够快速准确地检测出碳青霉烯类耐药肠杆菌科细菌的存在。

这种方法操作简便，灵敏度高，特异性强，但设备成本较高，需要专业技术人员进行操作。

3. 质谱法：质谱法是一种新兴的检测方法，通过质谱仪对样本中的分子进行分析，可以准确识别出碳青霉烯类耐药肠杆菌科细菌。

这种方法操作简单，快速准确，但需要较高的设备和技术要求。

三、标准化由于碳青霉烯类耐药肠杆菌科细菌的检测方法多样化，要求进行标准化是十分必要的。

碳青霉烯类耐药肠杆菌科细菌实验室检测的研究
碳青霉烯类耐药肠杆菌科细菌是一种常见的耐药菌株，对多种抗生素产生耐药性。

这种细菌在临床治疗中常引起感染，并且对抗生素的治疗效果较差，因此对其进行实验室检测非常重要。

本研究旨在探索碳青霉烯类耐药肠杆菌科细菌的实验室检测方法及其耐药机制。

我们收集了临床分离的碳青霉烯类耐药肠杆菌科细菌样品，包括从感染患者和环境中分离的菌株。

然后，我们使用常见的实验室检测方法，如抗生素敏感试验和基因分析，来评估这些菌株的耐药性。

在抗生素敏感试验中，我们测试了常见的抗生素类别，如β-内酰胺类和氨基糖苷类抗生素，以判断菌株对这些抗生素的敏感性。

结果显示，碳青霉烯类耐药肠杆菌科细菌对β-内酰胺类抗生素，特别是第三代头孢菌素耐药，而对氨基糖苷类抗生素的耐药性较低。

基因分析结果揭示了碳青霉烯类耐药肠杆菌科细菌的耐药机制。

我们发现这些菌株中普遍存在产β-内酰胺酶的基因，这是导致菌株对β-内酰胺类抗生素产生耐药性的主要原因。

我们还发现菌株中存在编码氨基糖苷类抗生素修饰酶的基因，这可能是导致菌株对氨基糖苷类抗生素产生耐药性的原因。

第１６期 收稿日期：２０２０－０５－２８作者简介：殷俪宁（１９９６—），女，山东临沂人，硕士研究生，主要从事细菌耐药机制研究。

碳青霉烯耐药肠杆菌科细菌耐药机制的研究进展殷俪宁（佳木斯大学，黑龙江佳木斯　１５４００７）摘要：碳青霉烯耐药肠杆菌科细菌（ＣＲＥ）是一组多重耐药革兰阴性杆菌，主要包括大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌，全球范围内ＣＲＥ感染率和耐药率呈急速上升趋势。

本文将对ＣＲＥ的感染现状及耐药机制的相关研究作一简要综述，以期为临床合理使用抗生素，预防耐药菌的爆发流行、感染的控制提供依据。

关键词：碳青霉烯耐药肠杆菌科细菌；耐药机制；研究现状中图分类号：Ｒ４４６．５ 文献标识码：Ａ 文章编号：１００８－０２１Ｘ（２０２０）１６－００６９－０１ 肠杆菌科细菌分布广泛、易于生长繁殖，是条件致病菌，容易引起免疫缺陷病人的各种感染，如呼吸道、泌尿道感染［１］。

碳青霉烯耐药肠杆菌科细菌（ＣＲＥ）是一组主要栖居在人和动物肠道内的一群形态、生物学形状相似的革兰阴性杆菌，可以对三类或三类以上抗菌药物同时呈现耐药，是临床上常见的多重耐药菌（ＭＤＲＯ）。

ＣＲＥ含有７０多种细菌，主要包括大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌，自首例携带ＫＰＣ－２型碳青霉烯酶的肺炎克雷伯菌于２００１年被报道以来，世界各地开始相继出现产碳青霉烯酶肠杆菌科细菌相关的报道［２］。

因此，研究ＣＲＥ的耐药机制有助于人们更好地理解细菌如何传播和控制某些传染性疾病的流行。

１　ＣＲＥ的感染现状过去十年，全球范围内ＣＲＥ感染发病率呈急速上升趋势。

在我国，ＣＲＥ感染情况也非常严峻，根据２０１７年全国耐药监测报告结果显示，肺炎克雷伯菌对碳青霉烯类的耐药率均超过２０％，比２０１６年有所上升；超过５０％的大肠杆菌分离株表现出对第三代头孢菌素的耐药性以及对氟喹诺酮类和第三代碳青霉烯类药物的快速耐药性［３－４］，患者发生ＣＲＥ感染后，可供治疗使用的抗菌药物选择极少，在２０１４年世界卫生组织（ＷＨＯ）发布了全球耐药监测报告就指出革兰氏阴性杆菌的耐药现象特别严重，且在过去的３０年中没有开发出新类型的抗生素［５］。

耐碳青霉烯肠杆菌科细菌的耐药机制及MALDI-TOF在碳青霉烯酶快速检测中的应用研究目的:研究不同人群分离的碳青霉烯类耐药肠杆菌科细菌（CRE）的耐药谱、CRE菌株对碳青霉烯类药物的耐药机制及其对磷霉素耐药的主要机制,应用MALDI-TOF建立产碳青霉烯酶菌株的快速检测方法,为临床的合理用药及医院感染的防控提供帮助。

方法:1.收集我院2015年1月-2017年12月临床分离的CRE 菌株,使用全自动微生物分析系统进行常规药物的体外药敏实验,用纸片扩散法（K-B）检测头孢哌酮/舒巴坦和替加环素、琼脂稀释法检测磷霉素的体外药敏实验。

2.对227株CRE（其中166株肺炎克雷伯菌,29株大肠埃希菌,32株阴沟肠杆菌）进行PCR扩增耐药基因（包括碳青霉烯酶基因、ESBLs基因、AmpC基因及fos基因）和改良碳青霉烯酶灭活试验（mCIM）和EDTA抑制的碳青霉烯酶灭活试验（eCIM）。

用脉冲场凝胶电泳试验（PFGE）检测CRKP菌株的DNA指纹图谱,分析菌株的同源性。

3.对fos基因阳性菌株进行质粒接合转移实验。

对fos基因阴性的磷霉素耐药菌株进行碳源生长试验、用PCR扩增和测序技术对靶酶基因、转运体相关基因进行检测和比对分析;4.收集我院2018年1月-2018年6月临床分离的74株CSKP 和前面收集的102株CPKP做质谱仪自建模型,利用MALDI-TOF质谱仪和ClinProTools3.0软件建立CPKP和CSKP的筛选模型,用于临床产酶菌株的快速筛查;5.将CPKP菌株分别与不同浓度的亚胺培南和美罗培南共孵育,用MALDI-TOF检测不同时间段内菌株对底物水解情况,摸索最佳条件。

结果:1.我院三年间共检出272株CRE,主要分离自痰液,其中成人组标本类型前三位的是痰液、尿液和血液（分别占62.96%、20.83%和6.94%）,儿童组前三位则是痰液、血液和尿液（分别占50.00%、30.36%和10.71%）;成人CRE菌株主要来源于ICU（占40.82%）和神经外科（占13.43%）),儿童CRE菌株则主要来源于新生儿科（占30.35%）和呼吸内科（占17.86%）。

碳青霉烯类耐药肠杆菌科细菌实验室检测的研究引言随着抗生素的广泛使用和滥用，细菌耐药性问题日益严重，尤其是碳青霉烯类抗生素耐药肠杆菌科细菌（Carbapenem-resistant Enterobacteriaceae，CRE）的出现，给临床治疗带来了极大挑战。

及早发现和控制CRE的传播对维护公共卫生和临床治疗至关重要。

实验室检测是CRE感染控制的重要手段，本研究旨在探讨碳青霉烯类耐药肠杆菌科细菌的检测方法及其临床应用。

碳青霉烯类耐药肠杆菌科细菌简介CRE是指对碳青霉烯类抗生素（carbapenems）耐药的肠杆菌科细菌，包括大肠杆菌、肺炎克雷伯菌、产气杆菌等。

这些细菌产生了碳青霉烯酶（carbapenemases），能够降解碳青霉烯类抗生素，使其失去抗菌活性。

CRE感染往往导致严重的医院感染，且难以治疗，极易造成临床治疗失败和传染病的传播。

实验室检测方法目前，对CRE的实验室检测主要包括以下几种方法：1. 非选择性培养基筛选：将患者的标本（如尿液、血液、分泌物等）分别接种于非选择性培养基中，利用CRE对碳青霉烯类抗生素的耐药特性进行筛选，较为简单快捷，但可能漏检。

2. 选择性培养基筛选：使用包含碳青霉烯类抗生素的选择性培养基进行细菌筛选，可以提高检出率，但也可能存在假阳性结果。

3. 分子生物学方法：通过PCR扩增、基因测序等技术，检测碳青霉烯酶相关基因的存在，是一种准确性较高的检测方法，但操作复杂、耗时较长。

以上方法各有优劣，实验室可根据具体情况选择合适的检测方法，并结合临床表现、病史等进行综合判断。

实验室检测的临床应用CRE感染的治疗对策主要包括以下几点：1. 早期发现：及早发现CRE的感染患者，有利于进行个体化治疗和隔离措施，避免交叉感染和疫情扩散。

2. 个体化治疗：根据细菌对抗生素的敏感性进行个体化治疗，包括选择敏感的抗生素、控制用药时机和剂量等。

3. 隔离措施：对已确诊的CRE感染患者进行严格的隔离措施，避免其传播给其他患者和医护人员。

【前沿速递】碳青霉烯耐药肠杆菌科细菌研究进展一CRE耐药机制肠杆菌科细菌对碳青霉烯类耐药的机制包括产碳青霉烯酶和非产碳青霉烯酶（高产AmpC酶或ESBL酶合并外膜蛋白缺失、以及外排泵的过度表达）两类，其中产碳青霉烯酶是主要的耐药机制。

碳青霉烯酶基因常位于MDR质粒上，可在不同肠杆菌科细菌之间传播。

按照Ambler分子分类方法可将碳青霉烯酶分为A、B、D 三类：A类包括KPC、IMI、NMC、SME、GES等，B类也称为金属酶，包括IMP、VIM、NDM、SPM、GIM等，D类包括OXA-48、OXA-181、OXA-204和OXA-232。

其中，A类酶中的KPC，B类酶中的NDM、VIM和IMP，以及D类酶中的OXA-48是肠杆菌科细菌中最常见的碳青霉烯酶。

除此之外，关于GES/IBC、IMI/NMC-A、SFC-1、SPM、GIM、SIM、AIM、DIM、FIM、POM等碳青霉烯酶引起肠杆菌科细菌碳青霉烯类抗生素MIC值不同水平升高的研究报道也逐年增多[3-5]。

由外排泵和膜孔蛋白表达改变引起的细胞膜通透性改变可单独或合并ESBLs引起肠杆菌科细菌碳青霉烯耐药。

RND外排泵中的AcrAB-T olC系统是肠杆菌科细菌对包括碳青霉烯在内的多种抗生素耐药的主要机制之一。

其中AcrAB突变、AraC调节子过表达等导致的外排泵表达增多，以及膜孔蛋白OmpK、OmpC、OmpF等的突变、缺失都可引起肺炎克雷伯菌、大肠埃希菌等的碳青霉烯MIC值升高[4,5]。

二CRE流行情况近10年来，CRE已从最初的散发发展为目前全球流行的耐药菌株，目前CRE分离率较高的国家包括希腊、意大利、巴西和中国，其次是美国和哥伦比亚[5,6]。

2015年欧洲CDC发布的关于欧洲30个国家细菌耐药性监测报告显示，大肠埃希菌对碳青霉烯的耐药率较低（2015年为为0.1%），其中只有希腊（1.2%）和罗马尼亚（1.9%）两个国家高于1.0%。