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一、实训目的1. 掌握水溶性维生素的提取、分离和检测方法。
2. 熟悉高效液相色谱（HPLC）技术在食品分析中的应用。
3. 了解水溶性维生素对人体健康的重要性。
4. 培养实验操作技能和数据分析能力。
二、实训时间2023年11月1日-2023年11月5日三、实训地点实验室四、实训内容1. 实训材料与仪器- 仪器：高效液相色谱仪（HPLC）、紫外检测器（UV）、电子天平、漩涡混合器、离心机、移液器、容量瓶、试管等。
- 材料：水溶性维生素标准品（维生素B1、维生素B2、维生素B3、维生素B5、维生素B6、维生素B12、维生素C）、样品（蔬菜、水果、肉类等）、溶剂（甲醇、乙腈、水等）、其他试剂。
2. 实训步骤1. 样品前处理：将样品进行粉碎、过筛、混合等处理，以确保样品均匀。
2. 提取：采用溶剂提取法，将水溶性维生素从样品中提取出来。
3. 净化：采用固相萃取（SPE）等方法对提取液进行净化，去除杂质。
4. 色谱分析：采用HPLC对净化后的样品进行分离和检测。
- 流动相：乙腈-水（体积比：80:20）。
- 检测波长：240 nm。
- 柱温：30℃。
- 流速：1.0 mL/min。
5. 数据分析：根据标准曲线计算样品中水溶性维生素的含量。
3. 实训结果1. 样品中水溶性维生素的提取率和回收率均达到90%以上。
2. HPLC色谱图显示，各水溶性维生素峰形良好，分离度达到要求。
3. 样品中水溶性维生素的含量与标准曲线拟合度良好，相关系数R²均大于0.99。
五、实训讨论1. 水溶性维生素的提取- 在提取过程中，选择合适的溶剂和提取方法对提取率有很大影响。
本实训采用溶剂提取法，通过优化提取条件，提高了水溶性维生素的提取率。
- 在提取过程中，要注意控制提取时间、温度、pH值等参数，以确保提取效果。
2. 净化- 净化是提高检测灵敏度和准确性的关键步骤。
本实训采用固相萃取（SPE）方法，通过选择合适的SPE柱和洗脱剂，有效去除杂质，提高了检测的准确性和灵敏度。
蜂花粉破壁及蜂花粉产品研究进展摘要：综述了目前国内的花粉破壁方法，讲述了每种方法的优缺点并相互进行了比较，分析总结了国内外对花粉破壁的观点，总结了目前国内的蜂花粉产品研究情况并提出了开发花粉产品过程中需要注意的问题，并对未来蜂花粉的研究开发进行了展望。
关键词：蜂花粉；破壁；产品花粉（pollen）是植物有性繁殖的雄性配子体，是植物繁衍后代的“精子”，来自于蜜源植物和专门的粉源植物[1]。
蜂花粉是蜜蜂采集花蜜过程中粘在后脚上的花粉团状物，不仅包含了花粉还被加入了蜜蜂腺上分泌物和唾液。
蜂花粉营养极其丰富，几乎包含了人体所需的所有营养物质。
其主要营养成分包括蛋白质、氨基酸、碳水化合物、维生素、脂类等，还含有酶、辅酶、激素、黄酮、多肽、微量元素等生物活性物质，因此有“微型营养库”之美誉[2-3]。
丰富的营养和多种的生物活性物质赋予了蜂花粉多种医疗效用。
蜂花粉能够改善心脑血管疾病、增强免疫、防癌、抑菌、防治辐射损伤、抑制前列腺增生及增强体力，调节神经系统[4]。
但是蜂花粉具有坚硬的细胞壁，其结构中的孢粉素耐压、耐碱、耐酸、耐温，其性质坚固，能抗化学及生物分解，同时也不溶于无机和有机溶剂，这样既影响了蜂花粉内容物的释放又影响了营养成分的吸收，因此蜂花粉破壁与蜂花粉产品的开发同时成了研究热点。
1 花粉细胞结构及破壁形态1.1 细胞结构花粉粒的形状大体分为圆形、扁圆形、椭圆形、三角形等，直径介于10～200μm之间，一般为40～50μm。
不同的花粉粒形态、大小各异，但其基本结构有共性。
花粉细胞由细胞壁及其内容物两大部分构成，细胞壁分为内壁和外壁，内壁上存在萌发孔和萌发沟，是物质交换和管萌发的起点，在通常条件下萌发孔的闭锁点是闭锁的[5]。
内壁的主要成分为纤维素、果胶质、半纤维素及蛋白质等，较薄、较软，而且有弹性，抗性较差，在地表容易腐烂，经酸碱处理则分解。
其外壁较厚，很坚硬，缺乏弹性，其主要成分为孢粉素，此外还有纤维素、类胡萝卜素、类黄酮素、脂类物质及蛋白质等。
第三节水溶性维生素的测定水溶性维生素B1、B2和C，广泛存在于动植物组织中，饮食来源充足，但由于它们本身的水溶性质，除满足人体生理、生化需求外，任何多余量都会从机体中排出。
为避免缺乏，需要经常由饮食来提供。
水溶性维生素都易溶于水，而不溶于苯、乙醚、氯仿等大多数有机溶剂。
在酸性介质中很稳定，既使加热也不破坏；但在碱性介质中不稳定，易于分解，特别在碱性条件下加热，可大部分或全部被破坏。
它们易受空气、光、热、酶、金属离子等的影响；维生素B2对光，特别是紫外线敏感，易被光线破坏；维生素C对氧、铜离子敏感，易被氧化。
由于水溶性维生素具有上述特性，测定水溶性维生素时，一般都在酸性溶液中进行前处理。
维生素B1、B2通常采用盐酸水解，或再经淀粉酶、木瓜蛋白酶等酶解作用，使结合态维生素游离出来，还可用活性人造浮石、硅镁吸附剂等进行纯化处理。
测定水溶性维生素常用高效液相色谱法、荧光法、比色法和微生物法等。
一、维生素B1的测定(荧光法，GB/T5009.84—2003)维生素B1又名硫胺素、抗神经炎素，通常以游离态，或以焦磷酸酯形式存在于自然界。
在酵母、米糠、麦胚、花生、黄豆以及绿色蔬菜和牛乳、蛋黄中含量较为丰富。
动物组织不如植物含量丰富。
维生素B1在水中溶解度较大，在酸性溶液中较稳定，在碱性溶液中加热极易分解。
近年来对利用带荧光检测器的高效液相色谱测定法进行了许多研究，并应用于实际试样测定。
这里我们主要介绍荧光法（参考GB/T 5009.84-2003食品中硫胺素(维生素B1)的测定）（一）荧光法1．原理试样在酸性溶液中加热，提取维生素B1，经蛋白分解酶处理，使维生素B1成为游离型。
再经层析柱纯化，去除荧光淬灭物质，同时浓缩，用碱性铁氰化钾溶液将其氧化成硫色素，在紫外线下，硫色素发出荧光，再给定的条件下以及没有其他物质干扰时，此荧光之强度与硫色素量成正比即与溶液中维生素B1量成正比。
如试样中含杂质过多，应经过离子交换剂处理，使硫胺素与杂志分离，然后以所得溶液做测定。
饲料添加剂中七种水溶性维生素的检测1.摘要应用HALO柱，建立一种用反相高效液相色谱测定饲料添加剂中7种水溶性维生素的分析方法。
方法采用HALO C18色谱柱（4.6×50 mm，2.7 μm），以乙腈－磷酸二氢钠缓冲溶液（pH=6.2）为流动相进行梯度洗脱，流速1.5 mL/min，检测波长200 nm，7种水溶性维生素在5 min内完成分离检测。
测得维生素的检测限介于0.5×10-9 g/mL~1.0×10-8 g/mL之间(S/N>2)。
回收率91%-115%。
这一方法操作简便快速、准确可靠，适用于饲料中水溶维生素的测定。
2.关键词反相高效液相色谱；水溶性维生素；HALO柱。
3.范围本方法适用于饲料中水溶维生素的检测。
本方法适用于高效液相色谱法分析水溶性维生素。
本方法可测定7种维生素，包括烟酸、叶酸、维生素B1、维生素B2、维生素B5、维生素B6、维生素B12。
本方法测定各维生素最低检测限不高于1×10-8 g/mL。
4.规范性引用文件GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法。
5.定义5.1维生素维生素又名维他命，通俗来讲，即维持生命的物质，是维持生物体生命活动必须的一类有机物质，也是保持生物体健康的重要活性物质。
维生素在体内的含量很少，但不可或缺。
各种维生素的化学结构以及性质不同。
维生素是个庞大的家族，目前所知的维生素就有几十种，大致可分为脂溶性和水溶性两大类。
6.原理样品经提取后，用反相高效液相色谱进行色谱分析，采用外标法定量。
7.试剂与材料除非另有说明，所有试剂均为分析纯，水为GB/T 6682规定的一级水。
7.1 乙腈：色谱纯7.2 磷酸二氢钠：分析纯7.3 磷酸氢二钠：分析纯7.4 20 mM磷酸二氢钠缓冲溶液（pH=6.2）：精密称取磷酸二氢钠（NaH2PO4·12H2O）0.6625 g，磷酸氢二钠（Na2HPO4·2H2O）1.9070 g完全溶于500 mL水，以0.22 um水系滤膜过滤即得。
HPLC法测定蘑菇粉等中水溶性维生素的含量
黄红霞
【期刊名称】《海峡药学》
【年(卷),期】1999(11)4
【摘要】本文探讨了应用HPLC法对食物中的水溶性维生素测定的一种方法.样品采用稀盐酸提取,经μ Bondapak C18柱分离,流动相为甲醇-水体系中加入0.1 mol/L NaAc,0.02%三乙胺用HAC调pH为4.18,254 nm处紫外测定.梯度洗脱,样品中7种水溶性维生素完全分离并定量测定.回收率为91.6～104.2%,相对标准偏差小于3.90%,线性相关系数在0.9950以上.
【总页数】3页(P33-35)
【作者】黄红霞
【作者单位】福建省食品质量监督检验站
【正文语种】中文
【中图分类】R9
【相关文献】
1.HPLC法测定六合维生素丸中4种水溶性维生素的含量 [J], 杨宏伟
2.RP-HPLC法测定美容液中水溶性维生素的含量 [J], 张秀真;高素莲
3.HPLC-UV法测定蝙蝠蛾拟青霉菌粉中腺苷的含量 [J], 赵雁冰; 张艳华; 杨恒; 顾娅楠; 张丽娟
4.HPLC法测定云南白药瑶浴粉中盐酸水苏碱的含量 [J], 李黎仙;高鹰;陈邈;孔祥烨
5.HPLC法测定磷酸替米考星可溶性粉中替米考星含量的研究 [J], 马春芳;李敏;张雯;吴春燕;陈建蓉;邓亚婷;王旗;余永涛;杨奇
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食品中水溶性维生素的分析与测定方法研究随着人们对健康意识的增强，对食品中维生素含量的需求越来越高。
维生素是人体生命活动中必需的有机化合物，可以促进新陈代谢、增强免疫力、维持身体健康。
而水溶性维生素由于其易溶于水，容易在加热、煮食等过程中流失，因此食品中水溶性维生素的分析与测定方法研究具有重要意义。
一、基于高效液相色谱的分析方法高效液相色谱是一种常用的分析方法，在水溶性维生素的分析中也被广泛应用。
该方法通过溶液在色谱柱中的移动速度、峰形和峰面积等参数来分析和确定样品中维生素的含量。
高效液相色谱技术具有分离效果好、灵敏度高、准确度高的特点，能够快速而准确地测定食品中的水溶性维生素含量。
二、基于进口分析仪器的测定方法随着科学技术的不断发展，进口的分析仪器也被广泛应用于水溶性维生素的测定。
进口仪器具有精确度高、测量范围广、操作简便等特点，可以快速地分析出食品中维生素的含量。
其中，UV-Vis分光光度计和荧光分析仪等仪器常被用于测定食品中的维生素B和C。
三、基于生物技术的测定方法生物技术在食品分析中的应用也得到了越来越多的关注。
通过使用特定的生物试剂，可以对食品中的水溶性维生素进行快速而准确的检测。
比如，可以利用酶法、免疫测定法等生物技术手段测定维生素C的含量。
这些方法具有灵敏度高、结果可靠等特点，可以满足对食品中维生素含量准确测定的需求。
四、进一步完善分析与测定方法尽管目前已有多种分析与测定方法可供选择，但是在实际应用中还存在一些问题和挑战。
比如，样品的前处理和提取方法对分析结果的准确性有着重要影响；分析过程中的色谱柱效应和峰分离也需要进一步优化。
因此，继续研究并完善分析与测定方法对食品中水溶性维生素的测定具有重要的意义。
综上所述，食品中水溶性维生素的分析与测定方法研究是一个复杂而重要的课题。
通过高效液相色谱、进口分析仪器和生物技术等手段，可以快速而准确地测定食品中维生素的含量。
然而，仍需进一步完善方法并解决现有方法中的问题。
水溶性维生素的测定
一、维生素B1的测定
VB1又叫硫胺素
1、食品中VB1的存在形式
⑴常以游离态存在；
⑵复合脂形式存在（磷蛋白）；
⑶辅羧酶形式存在
VB1在酵母、米糠、麦胚、花生、黄豆以及绿色的蔬菜和牛乳、蛋黄中比较丰富，动物组织不如植物含量丰富。
2、VB1的性质
⑴VB1在中性、碱性下不稳定，易分解；
⑵VB1在酸性条件下稳定，即使加热酸性也稳定；
⑶VB1为白色结晶，微溶于C2H5OH，不溶于乙醚或CHCl3，易溶于水。
3、VB1的测定
世界各国都用荧光法测定
⑴原理：硫胺素在碱性铁氰化钾溶液中，被氧化成一种兰色荧光物质，即为硫色素，在紫外光
下，硫色素发出荧光。
⑵方法
①萃取
100g样品于干燥烧杯中，加入100ml0.1N H2SO4，打成匀浆，煮沸30分钟，称取一定的样品经高压锅121℃、20分钟高压酸解
②水解
在酸解的样品中冷却后加入含有10%糖化酶的10ml2.5MNaAC溶液，摇匀，用15%NaOH 调PH=4.5，用淀粉酶使淀粉水解，也可用磷酸酶使淀粉水解，于50℃恒温箱中12小时
③纯化
采用柱层析提纯
吸附剂采用的是人造浮石。
人造浮石用25%KCl溶液分数次洗涤，主要是把VB1吸附上去，吸附上去后，再用热水淋洗，最后用25%KCl-HAC把VB1洗脱下来，这样就得到纯VB1，再根据上面的原理在碱性下分析。
④分析
装填柱子（离子交换柱）提纯氧化测定
编辑：foodyy。
高效液相色谱法同时测定发酵前后果蔬中4种水溶性维生素聂启兴;冯蕾;张媛媛;聂少平;熊涛;谢明勇【期刊名称】《食品科学》【年(卷),期】2015(036)020【摘要】建立高效液相色谱-串联紫外-荧光检测器同时测定发酵前后果蔬中4种水溶性B族维生素(硫胺素(VB1)、核黄素(VB2)、烟酸(VBs)和吡哆醇(VB6))的分析新方法.在已优化的实验条件下,4种待测物的分离效果较好,仪器检出限在0.23～54 μg/L之间,线性相关系数在0.998 2～0.999 9之间,线性关系良好.枸杞果浆在3个添加水平的平均回收率在86.99％～110.23％之间,相对标准偏差在1.25％～6.88％之间.该方法简便、快捷、准确、选择性好,可用于发酵前后果浆中4种水溶性维生素的同时测定.【总页数】4页(P101-104)【作者】聂启兴;冯蕾;张媛媛;聂少平;熊涛;谢明勇【作者单位】南昌大学食品科学与技术国家重点实验室,江西南昌 330047;南昌大学食品科学与技术国家重点实验室,江西南昌 330047;石家庄学院化工学院,河北石家庄 050035;南昌大学食品科学与技术国家重点实验室,江西南昌 330047;南昌大学食品科学与技术国家重点实验室,江西南昌 330047;南昌大学食品科学与技术国家重点实验室,江西南昌 330047【正文语种】中文【中图分类】Q563【相关文献】1.高效薄层色谱测定果蔬沙棘中的水溶性维生素 [J], 赵淑琴;叶晓红2.高效液相色谱法测定九合维生素丸中水溶性维生素 [J], 顾鑫荣;张晓凡;董广彬;李鹏3.利用高效液相色谱法同时测定瘤胃液中几种水溶性维生素 [J], 赵芸君;孟庆翔4.利用高效液相色谱法同时测定瘤胃液中几种水溶性维生素 [J], 赵芸君5.超高效液相色谱法测定保健食品中的多种水溶性维生素 [J], 蒲明清;戴舒春;张连龙;周华生;成恒嵩因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
食品中的水溶性维生素检测随着现代人们对健康饮食的重视，食品安全问题备受关注。
在食品中，水溶性维生素被认为是维持人体健康所必需的。
然而，水溶性维生素具有易溶于水的特性，这给其检测带来了一定的挑战。
本文将探讨食品中水溶性维生素检测的方法及其在实践中的应用。
一、水溶性维生素概述水溶性维生素是人体无法自行合成的物质，包括维生素B群（如维生素B1、B2、B6等）和维生素C。
它们对人体具有重要的生理功能，如参与新陈代谢、促进能量产生、增强免疫力等。
由于水溶性维生素无法储存在体内，人们必须通过日常饮食摄入足够的量。
二、常用的水溶性维生素检测方法1. 高效液相色谱法（HPLC）HPLC是一种常用且精确的水溶性维生素检测方法。
该方法利用高压输送液相，通过色谱柱中的填料将样品中的目标物分离并进行检测。
HPLC具有灵敏度高、分离度好等优点，适用于复杂样品的分析和定量。
2. 生物传感技术生物传感技术是近年来发展迅速的一种水溶性维生素检测方法。
该方法利用生物传感元件（如酶或抗体）与目标物相互作用产生信号，通过检测信号的变化确定水溶性维生素的含量。
生物传感技术具有快速、灵敏和特异性高的特点，适用于快速检测和实时监测。
3. 免疫分析法免疫分析法是通过抗原与抗体的特异性反应来检测水溶性维生素的方法。
通常包括酶联免疫吸附测定法（ELISA）和放射免疫测定法（RIA）。
免疫分析法具有高灵敏度和高特异性的特点，常用于食品中的水溶性维生素含量检测。
三、水溶性维生素检测在食品安全中的应用1. 食品加工过程中的监测在食品加工过程中，水溶性维生素可能因受热、光照、氧化等因素而降解，从而影响食品的品质和营养价值。
因此，及时监测食品中水溶性维生素的含量，对于保障食品的品质和安全至关重要。
各种检测方法可以应用于食品生产线上，实时监测水溶性维生素的含量，并及时采取措施进行调整和改善。
2. 食品质量控制水溶性维生素含量也是评价食品质量的一个指标之一。
