支气管哮喘小鼠气道反应性无创检测方法的建立

支气管哮喘小鼠气道反应性无创检测方法的建立李斌恺赖克方洪燕华王法霞陈如冲林少建钟南山【摘要】目的目前国内对支气管哮喘(简称哮喘) 小鼠的评价多数仅立足于气道炎性指标,不能完全反映哮喘的病理生理特征。

本所率先从国外引进了小动物无创检测和有创检测肺功能仪。

无创法检测时小鼠不必麻醉,而且每次可以同时检测多只小鼠,具有较大的优越性,但能否取代有创法尚需更多的数据。

本研究旨在建立无创检测小鼠气道高反应性的检测方法,并与有创检测方法进行比较。

方法根据动物模型和气道反应性检测方法不同,动物分为: ①无创哮喘组; ②无创对照组; ③有创哮喘组; ④有创对照组。

采用卵白蛋白致敏和激发,建立BALB/ c 小鼠哮喘模型,生理盐水作为对照,分别用无创和有创的方法测定气道反应性。

哮喘动物雾化吸入0 . 2～50 g/ L 倍增浓度的乙酰甲胆碱( Mch) ,测定相应浓度下的增强呼气间歇( Pe nh) 值或气道阻力( RL ) 值等指标。

将小鼠吸入Mc h 后RL 或Penh 增加 2 倍的激发浓度以PC100 来表示。

所有动物都行支气管肺泡灌洗, 收集灌洗液, 涂片染色后分类计数。

结果无创哮喘组PC100 均≤6 . 25 g/ L ,对照组PC100 均≥12 . 5 g/ L 。

其Lo g2 ( 10 PC100 ) 值( 5 . 36 ±0 . 84) 显著低于对照组( 7 . 97 ±0 . 82)( P < 0 . 01) 。

无创哮喘组从Mc h 浓度3 . 12 g/ L 开始, 其Pe nh 值明显高于对照组。

有创哮喘组RL 值从Mc h 浓度0 . 39 g/ L开始就明显高于相应对照组( P < 0 . 05) 。

无创组与有创组的气道反应性相关系数R =0 . 96 ( P < 0 . 01) 。

无创哮喘组和有创哮喘组的嗜酸粒细胞分别为( 54 . 00 ±5 . 96) % , ( 55 . 93 ± 5 . 92) % ,显著高于各自对照组的( 0 . 38 ±0 . 52) % , ( 0 . 63 ±0 . 74) %( P < 0 . 01) 。

气道反应性及其测定气道反应性（airway responsiveness）是气管支气管对各种物理化学药物以及变应原等刺激引起气道阻力变化的反应。

在含量较低的情况下，正常人的气道对这些刺激物或变应原的刺激并不发生收缩反应或仅有微弱的反应，而某些人的气道则发生过度的收缩反应，引起气道管腔狭窄和气道阻力明显增高，这就是气道高反应性（airway hyper-responsiveness）.气道高反应性是支气管哮喘主要的病理生理特征和诊断依据。

临床上通过支气管激发试验来测定气道反应性。

早在1873年，英国人Blackleey首先进行了支气管激发试验，自1950年，这项技术有了较快发展，1975年，美国Chai H等用肺功能测定仪进行了支气管激发试验，并制定了标准，与此同时，日本Takishima T等采用气道反应性测定仪（astograph）进行了支气管激发试验。

此后这项技术在呼吸生理，变态反应以及哮喘的基础和临床研究中得到广泛的应用和发展，并进行了标准化和规范化。

第一节气道反应性增高机制及其测定原理吸入某些刺激物或变应原可通过刺激气道平滑肌细胞的受体或感受器直接引起气道平滑肌收缩，也可激活气道炎性细胞释放炎性介质和细胞因子引起气道黏膜充血水肿，气道平滑肌收缩，导致气道管腔狭窄和阻力增高，即气道反应性增高。

目前的研究表明支气管哮喘产生气道反应性增高的机制有以下几个方面：一、气道慢性炎症支气管哮喘是气道慢性炎症性疾病，各种因素作用于气道，使得气道黏膜炎性细胞增多，聚集，释放炎性介质和细胞因子，造成气道黏膜充血水肿，腺体分泌亢进，上皮细胞脱落，气道平滑肌收缩，引起气道管腔狭窄，从而出现气道反应性增高。

气道炎性反应是产生气道高反应性的主要机制。

二、气道神经受体的影响迷走神经反应性增高，释放乙酰胆碱使气道平滑肌收缩，导致气道高反应性。

哮喘患者的气道在长期炎症刺激下和长期应用β 2 –受体激动剂的情况下，使得气道内β 2 –肾上腺能受体数量和功能低下，从而导致气道反应性增高。

建立小鼠哮喘模型两种不同方法的比较哮喘是一种慢性呼吸系统疾病，特征为阵发性呼吸困难、喘息、咳嗽和胸闷，严重影响患者的生活质量。

为了深入研究哮喘的发病机制和寻找有效的治疗方法，科学家使用小鼠建立了哮喘模型。

目前，有多种方法可以建立小鼠哮喘模型，其中最常用的包括感染性哮喘模型和变态反应性哮喘模型。

本文将对这两种方法进行比较。

感染性哮喘模型是通过感染细菌或病毒引发哮喘样症状。

首先，科学家选择一种感染性病原体，如肺炎克雷伯菌或呼吸道合胞病毒。

然后，将这些病原体通过吸入或直接注射等方式引入小鼠的呼吸道。

之后，小鼠的免疫系统就会开始产生炎症反应，导致呼吸道狭窄和气道高反应性。

这种方法的优点是可以真实地模拟感染性哮喘的病理过程，更符合人类疾病的特点。

但是，此方法需要使用病原体，存在一定的安全风险，并且操作比较繁琐。

与感染性哮喘模型相比，变态反应性哮喘模型更常用且操作相对简单。

变态反应是导致哮喘发生的主要原因之一，患者的免疫系统对特定的抗原物质产生过敏反应，导致气道炎症和收缩。

在小鼠中建立变态反应性哮喘模型，科学家首先选择一个合适的抗原物质，如牛血清白蛋白（BSA）或植物花粉等。

然后，将抗原物质与辅助剂混合，并通过皮下或鼻腔注射的方式给小鼠。

随着时间的推移，小鼠的免疫系统会对该抗原物质产生过敏反应，导致气道炎症和收缩。

此方法的优点是操作相对简单，不需要使用病原体，安全性较高。

但是，由于变态反应的机制相对复杂，该模型无法完全模拟感染性哮喘的病理过程。

除了以上两种方法，小鼠哮喘模型还可以通过化学物质诱导方法来建立。

例如，通过酸性盐类或花粉等刺激物来诱导小鼠产生气道高反应性和炎症反应。

这种方法的优点是操作简单，结果稳定，但是不能真实地模拟人类哮喘的病理特点。

综上所述，感染性哮喘模型和变态反应性哮喘模型是目前小鼠哮喘研究中最常用的两种方法。

感染性哮喘模型能够更真实地模拟人类的哮喘病理特点，但操作繁琐且存在一定的安全风险；而变态反应性哮喘模型操作简单且安全性较高，但不能完全模拟感染性哮喘的病理过程。

·临床论著·支气管哮喘患者FeNO 的表达及临床意义尹利剑*（商丘市第三人民医院，河南 商丘 476000）摘要 目的：探讨不同呼出气一氧化氮（Fractional exhaled nitric oxide ，FeNO ）水平下支气管哮喘患者痰液、血液、肺功能检测等多个观察指标的表达特点，并分析在气道高反应性中的预测价值。

方法：选取2017年1月至2019年5月于我院就诊的120例疑似支气管哮喘患者作为研究对象进行前瞻性分析，根据FeNO 水平不同，将FeNO ＞49 ppb 的42例患者列为高水平组，FeNO 为26～49 ppb 的33例患者为低水平组，FeNO ≤25 ppb 的45例患者为正常组。

比较三组患者的基本临床资料、痰嗜酸性粒细胞、痰中性粒细胞、血嗜酸性粒细胞阳离子蛋白（Eosinophilic cationic protein ，ECP ）和免疫球蛋白E （Immunoglobulin E ，IgE ）以及第1s 用力呼气容积（Forced expiratory volume at 1s ，FEV1）、FEV1占预测值百分比（FEV1%Pred ）、用力肺活量（Forced vital capacity ，FVC ）以及FEV1与FVC 比值（FEV1/FVC ）等肺功能检测结果进行统计分析。

结果：经Spearman 相关性分析显示，血IgE 、ECP 水平与FeNO 水平呈正相关（r=0.615/0.629，P>0.01），FEV1%pred 、FEV1/FVC 与FeNO 水平呈负相关（r=-0.494/0.789，P>0.01）。

其中血IgE 、ECP 、FEV1%pred 、FEV1/FVC 对于预测支气管哮喘有一定的价值，而联合上述指标对于预测支气管哮喘的准确性最佳（AUC=0.920，P>0.01）。

结论：不同FeNO 水平支气管哮喘患者在临床表现中具有显著差异，在血IgE 、ECP 和肺功能FEV1%pred 、FEV1/FVC 指标检测的基础上增加FeNO 可大大增加预测支气管哮喘的准确性。

支气管哮喘小气道功能障碍的检测方法及临床应用进展2023摘要支气管哮喘(简称哮喘)是常见的慢性气道炎症性疾病。

小气道功能障碍(SAD)可存在于不同表型、不同临床分期和不同病情严重程度的哮喘患者，并影响药物疗效和患者预后。

目前哮喘合并SAD的判定标准未能达成共识，炎症机制尚不明确。

本文对哮喘合并SAD的评估方法、发生状况、发病机制、临床特征和治疗方面的研究进展进行综述，以提高临床医生对本病的认识。

支气管哮喘(简称哮喘)是常见的慢性气道炎症性疾病。

小气道功能障碍(SAD)可存在于不同表型、不同临床分期和不同病情严重程度的哮喘患者，并影响药物疗效和患者预后。

目前哮喘合并SAD的判定标准未能达成共识，炎症机制尚不明确。

本文对哮喘合并SAD的评估方法、发生状况、发病机制、临床特征和治疗方面的研究进展进行综述，以提高临床医生对本病的认识。

一、SAD的评估方法小气道通常是指内径小于2mm的气道,包括传导区和腺泡区。

由于小气道异常不易被评估和治疗，故被称作〃沉默区〃。

目前尚缺乏判定SAD的金标准，临床常用的小气道功能评估方法如下。

1 .通气肺功能测定[5]:SAD的特点是气道过早闭塞，用力肺活量的降低是反映气体滞留的指标。

用力呼气流量（FEF）[包括最大呼气中期流量（FEF25~751用力呼出50%和75%肺活量时的呼气流量（FEF50和FEF75）]下降提示小气道阻塞。

《成人肺功能诊断规范中国专家共识》推荐将FEF25~75∖FEF50和FEF75至少两项下降至正常预计值的80%以下作为SAD的判定标;宙6I S近期国内一项大样本流行病学研究将SAD定义为FEF25~75%预计值、FEF50%预计值和FEF75%预计值三项中两项及以上小于65%[4]0该法应用广泛，但局限性在于FEF25~75可受肺容量影响，老年人和儿童肺容量受用力不足的影响较大，导致该指标可重复性受限[7]o2 .脉冲振荡法（impu1seosci11ometryJOS）通气肺功能测定中，患者用力呼气后可导致气道张力改变而IOS法是一种在平静呼吸时进行的测试,无需特殊配合且无创、操作简单，能反映整个呼吸系统的小气道功能。

•论著.三种哮喘小鼠动物模型的对比研究黄超文赵强钟莲娣钟雪莺仝金斋黄炎明【摘要】目的探讨三种哮喘小鼠造模方式在病理改变、灌洗液中细胞组分、气道反应性、气道炎症指标等方面的差异。

方法分别采用屋尘蠕提取物（HDM）、卵清蛋白（OVA）和甲苯二异氧酸酯（TDI）构建小鼠哮喘模型,检测小鼠肺病理改变、肺泡灌洗液（BALF）中炎症细胞和上皮细胞数量、气道高反应性、炎症因子表达情况。

结果HDM、OVA所诱导的哮喘小鼠BALF中细胞组分主要以嗜酸性粒细胞为主。

三组哮喘小鼠在接受不同浓度的乙酰甲胆碱雾化后气道阻力明显增高，与浓度呈正相关，而HDM和OVA诱导的哮喘小鼠气道阻力较TDI组更高。

三组小鼠的血清IgE和BALF中嗜酸性粒细胞炎症指标IL-4、IL-5JL-13明显增高，TDI组所诱导的IgE和BALF IL-4JL-5JL-13均分别低于HDM组和OVA组。

结论不同造模方式建立的哮喘小鼠动物模型在气道反应性、气道炎症和病理特点各有不同，HDM哮喘小鼠和OVA哮喘小鼠具有典型的嗜酸性粒细胞哮喘表现，而TDI哮喘小鼠表现为混合细胞性哮喘动物模型。

【关键词】哮喘；动物模型；屋尘螭提取物；卵清蛋白；甲苯二异氤酸酯［中图分类号］R562.2［文献标识码］A DOI:10.3969/j.issn.1002-1256.2019.11.001支气管哮喘是一种由多种炎症细胞和炎症组参与的慢性气道变应性炎症,并以气道黏液高分泌、气道高反应性和气道重塑为主要特征⑴。

Brown Norway、Wistar大鼠、Sprague Dawly大鼠为常见的大鼠哮喘动物模型，而BALB/c小鼠、C57BIV6小鼠则是常见的哮喘小鼠动物模型⑷。

目前造模方式常采用屋尘蟻提取物（HDM）、卵清蛋白（OVA）、甲苯二异氤酸酯（TDI）、灭活的呼吸道合胞病毒（RSV）等刺激诱导哮喘动物模型⑶。

本研究拟建立HDM、OVA、TDI分别诱导的三种哮喘小鼠动物模型，对比其在气道反应性、气道炎症和病理方面的差异，评价各模型的优劣。

(10)申请公布号 CN 101897627 A(43)申请公布日 2010.12.01C N 101897627 A*CN101897627A*(21)申请号 201010214192.8(22)申请日 2010.06.30A61D 7/00(2006.01)A61B 5/00(2006.01)(71)申请人广州医学院第一附属医院地址510120 广东省广州市越秀区沿江西路151号申请人美国Buxco 电子有限公司广州呼吸疾病研究所呼吸疾病国家重点实验室(72)发明人陈莉延 约瑟夫·马克·罗麦斯克赖克方 钟南山 蒋波(74)专利代理机构广州市华学知识产权代理有限公司 44245代理人陈燕娴(54)发明名称一种小鼠咳嗽模型的建立和检测方法(57)摘要本发明公开了一种小鼠咳嗽模型的建立和检测方法，包括以下操作步骤：(1)提供雌性Balb/c 小鼠，小鼠的年龄为10周龄，小鼠体重为22～25g ，动物级别为SPF 级；(2)提供Buxco 无创检测系统，该Buxco 无创密闭体描舱连接有声音监听设备和信号转化器，将上述小鼠置于体描舱内自由活动；(3)使用辣椒素激发液雾化激发小鼠咳嗽，实时监听小鼠咳嗽声音，通过声音分析软件记录声波，并通过Finepointe 软件将舱内气流变化转化为呼吸波形进行记录并自动实时分析。

本方法同时监测小鼠咳嗽声音和呼吸波形，可大大降低工作强度，节省工作时间，提高工作效率，有利于小鼠咳嗽模型的推广和应用。

(51)Int.Cl.(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请权利要求书 1 页 说明书 4 页 附图 2 页权 利 要 求 书CN 101897627 A1/1页1.一种小鼠咳嗽模型的建立和检测方法，其特征在于包括以下操作步骤：(1)提供雌性Balb/c小鼠，小鼠的年龄为6～15周龄，小鼠体重为22～25g，动物级别为SPF级；(2)提供Buxco无创检测系统，该Buxco无创密闭体描舱连接有声音监听设备和信号转化器，将上述小鼠置于体描舱内自由活动；(3)使用辣椒素激发液雾化激发小鼠咳嗽，实时监听小鼠咳嗽声音，通过声音分析软件记录声波，并通过Finepointe软件将舱内气流变化转化为呼吸波形进行记录并自动实时分析。

不同品系小鼠肥胖哮喘模型建立及比较陈一平;姜晓红;封广义;孙起翔;罗明洁;李超乾【摘要】目的：建立并比较不同品系小鼠营养性肥胖哮喘模型。

方法选用KM、C57BL/6J、BALB/c 3个品系♀小鼠,随机分为对照组、哮喘组、肥胖组、肥胖哮喘组,分别以高脂饲料或普通饲料饲喂12周后,以卵清蛋白( OVA)或磷酸盐缓冲液( PBS)致敏激发小鼠,实验终点测定小鼠体重、身长、脂肪重量、肝脏重量、Lee′s 指数、血清总胆固醇( TC)及甘油三酯( TG)水平、支气管肺泡灌洗液( BALF)中OVA特异性IgE浓度。

观察各组脂肪细胞形态及气道病理学改变。

测定各组小鼠的特殊气道阻力( sRaw)。

结果 KM肥胖组体重及Lee′s指数增长最快,但哮喘特征性表现不明显；C57BL/6J小鼠能形成哮喘特征性表现,但肥胖相关指标差异无显著性；BALB/c肥胖组小鼠肥胖指标较之正常组差异有显著性。

经OVA致敏激发后,BALB/c小鼠显示出更加明显的哮喘症状、气道高反应性和气道炎症表现。

结论BALB/c小鼠经高脂饲料诱导,OVA致敏激发能形成良好的肥胖合并哮喘模型。

%Aim To establish and compare asthma models among different strains of obese mice. Methods Different strains of SPF female mice, namely Kunming ( KM ) , C57BL/6J and BALB/c mice, were randomly divided into four groups ( control group, asthma group, obesity group and obese asthma group). The mice were fed a high-fat diet or a normal diet for 12 weeks, following which they were sensitized and challenged with ovalbu-min ( OVA) or phosphate-buffered saline ( PBS) . Body weight, fat weight, liver weight, Lee′s index, OVA-specific IgE concen-tration in bronchoalveolar lavage fluid ( BALF) , serum total cho-lesterol ( TC) and triglyceride ( TG) levels, and lung and adi-pose morphologies wereevaluated. The specific airway resistance ( sRaw) was measured using double-chamber plethysmography. Results The mice on a high-fat diet showed a more rapid in-crease in body weight compared with those on a normal diet. Af-ter 12 weeks of feeding, body, fat, and liver weights and Lee′s index were higher for the obese mice than for the lean mic e. The adipocyte cross-sectional area was significantly greater in the obese BALB/c and KM mice than in their lean counterparts;the C57BL/6J groups showed no significant differences. The BALB/c mice demonstrated more significant symptoms of acute asthma, local inflammation and airway hyper-responsiveness ( AHR ) . Conclusion Compared with C57BL/6J and KM mice, BALB/c mice fed a high-fat diet and sensitized and challenged with OVA provide the most suitable model for evaluating the relationship between obesity and asthma.【期刊名称】《中国药理学通报》【年(卷),期】2016(000)002【总页数】5页(P288-292)【关键词】肥胖;哮喘;动物模型;KM 小鼠;C57BL/6J 小鼠;BALB/c小鼠【作者】陈一平;姜晓红;封广义;孙起翔;罗明洁;李超乾【作者单位】广西医科大学第一附属医院呼吸内科，广西南宁 530021;广西医科大学第一附属医院老年呼吸内科，广西南宁 530021;广西医科大学第一附属医院呼吸内科，广西南宁 530021;广西医科大学第一附属医院呼吸内科，广西南宁530021;广西医科大学第一附属医院呼吸内科，广西南宁 530021;广西医科大学第一附属医院呼吸内科，广西南宁 530021【正文语种】中文【中图分类】R-332;R363-332;R562.25;R589.2中国图书分类号：R-332；R363-332；R562.25；R589.2流行病学资料显示，肥胖会增加哮喘的发病风险，在成人是2~3倍[1]，儿童是1~2倍[2]。

支气管哮喘疾病模型的建立设计背景：在学习药理学这门课程时，我们了解到在炎症反应中，细胞膜磷脂在磷脂酶A2 作用下释放出花生四烯酸。

花生四烯酸经过环氧化酶作用生成前列腺素，血栓素，前列环素;经脂氧酶作用生成白三烯类化合物。

而非甾体抗炎药则能抑制环氧化酶的活性，从而使环氧化酶/脂氧酶失平衡。

导致大量未被环氧化酶利用的花生四烯酸底物通过脂氧酶生成大量的白三烯类化合物（LTs），其中C型LT能够强有力的收缩支气管和促进血管通透性，因此，该类药物可以引发支气管哮喘，其中吲哚美辛对环氧合酶抑制作用最强，据相关文献报道，有人使用吲哚美辛15min后就出现哮喘症状。

据此，我设计用吲哚美辛作为引发剂来建立支气管哮喘模型。

豚鼠性格温顺，极易致敏，对某些药物也非常的敏感，是建立支气管哮喘模型的常用动物。

设计目的：1.复制支气管哮喘模型2.了解支气管哮喘的表现和发生的机理实验动物：豚鼠2只（150-200g）雌雄不限仪器与药品：豚鼠固定板0.2%消炎痛（吲哚美辛）注射液1ml ，5ml注射器1%普鲁卡因医用酒精棉球手术器材木槌方法：1.给药：作后脚掌外侧静脉注射，捉豚鼠并固定一条后腿，另一人剪去注射部位的毛，用酒精棉球涂擦后脚掌外侧的皮肤，使血管显露，取0.2ml 0.2%消炎痛对豚鼠进行后脚掌外侧静脉注射2.注射药物后观察动物的表现3.当出现相应哮喘症状时，将豚鼠固定于板上，取1ml 1%普鲁卡因于腹下部进行局部麻醉，剪开腹下部皮肤3-4cm，分离股动脉左动脉插管，每10分钟于豚鼠股动脉取1ml血进行血气分析（取血次数可根据实验具体情况进行分析）4.白三烯含量测定将豚鼠进行开胸手术取其肺部组织进行匀浆处理，以2000-3000r/min速度进行离心操作10min，取其上层清液1ml，用豚鼠白三烯C4(LTC4)ELISA试剂盒进行检测。

另取正常豚鼠为对照组，用木槌敲击致死后，取其肺部组织按照同样的条件进行操作，将所测得的数值与模型组相比较，分析结果。