第18章 全自动DNA测序仪和蛋白质自动测序仪

第十三章全自动DNA测序仪和蛋白质自动测序仪一、名词解释1.荧光标记引物法：将荧光染料预先标记在测序反应所用引物的5′端，称为荧光标记引物法。

2.荧光标记终止底物法：将荧光染料标记在作为终止底物的双脱氧单核苷酸上，称为荧光标记终止底物法。

3.多色荧光标记引物法：是DNA测序反应常用的一种荧光标记方法。

将荧光染料预先标记在测序反应所用引物的5′端，当相同碱基排列的寡核苷酸链作为骨架分别被4种荧光染料标记后，便形成了一组（4 种）标记引物。

特定颜色荧光标记的引物则与特定的双脱氧核苷酸底物保持对应关系。

4.多色荧光标记终止底物法：是D NA 测序反应常用的一种荧光标记方法。

将荧光染料标记在作为终止底物的双脱氧单核苷酸上。

反应中将4种d dNTP 分别用4种不同的荧光染料标记，带有荧光基团的ddNTP 在掺入DNA 片段导致链延伸终止的同时，也使该片段3′端标上了一种特定的荧光染料。

根据荧光颜色的不同来判断所代表的不同碱基信息。

5.Edman降解法：是检测蛋白质一级结构的方法。

在弱碱条件下，多肽链N末端N H2与P ITC 反应，生成PTC－多肽。

在无水强酸如三氟醋酸的作用下，可使PTC－多肽形成ATZ 衍生物和一个失去末端氨基酸的剩余多肽。

剩余多肽链可以进行下一次以及后续的降解循环。

如此不断循环，可依次使多肽链的氨基酸逐一降解，形成A TZ 衍生物。

ATZ 衍生物经水溶酸处理转化为稳定的P TH 氨基酸。

6.Sanger 双脱氧链末端终止法：是检测D NA 序列的一种方法。

其原理是利用P CR，但反应体系中除了dNTP 外，还有ddNTP。

ddNTP 可掺入到正在延伸的DNA 链中，但不能同后续的dNTP 形成磷酸二酯键，从而使正在延伸的DNA 链在此终止。

由于存在ddNTP 与dNTP 的竞争，生成的反应产物是一系列长度不同的多核苷酸片段。

7.平板电泳型DNA测序仪：为D NA 测序仪的一种类型。

平板型电泳的凝胶灌制在两块玻璃板中间，聚合后厚度一般小于 0.4mm 或更少，因此又称为超薄片层凝胶电泳。

全自动DNA测序仪的原理和应用1. 前言DNA测序技术是现代生物学、医学研究中的重要工具之一。

随着技术的不断进步，全自动DNA测序仪在DNA测序领域占据重要地位。

本文将介绍全自动DNA测序仪的原理和应用。

2. 原理全自动DNA测序仪基于Sanger测序技术，通过离心分离、扩增和合成等步骤来获取DNA序列信息。

其原理主要包括以下几个步骤：2.1 模板制备全自动DNA测序仪需要将待测的DNA样品进行模板制备。

一般采用PCR（聚合酶链式反应）技术来扩增目标DNA片段，以增加其浓度和复制数目。

2.2 扩增产物净化PCR扩增产生的扩增产物中会包含引物和杂质，需要进行净化处理。

常用的方法是利用凝胶电泳分离扩增产物，并使用各类商业化学试剂盒进行提取和净化操作。

2.3 DNA片段测序将净化后的DNA片段进行测序。

全自动DNA测序仪采用Dye-termination测序方法，使用一系列特殊的引物，通过DNA链延伸过程中的不同颜色发光来标记每个碱基。

之后，仪器会通过激光扫描读取每个碱基的发光信号。

2.4 数据分析与测序结果全自动DNA测序仪会生成一系列的发光数据，这些数据需要进行分析和处理。

通常会使用相关软件进行碱基识别、序列拼接和测序结果的校正等步骤，从而获得准确的DNA序列信息。

3. 应用全自动DNA测序仪广泛应用于各个领域，例如：3.1 生物学研究在生物学研究中，全自动DNA测序仪可以用于基因组测序、转录组测序、蛋白质相互作用的研究等。

通过测序获得的DNA序列信息可以帮助研究者了解生物体的遗传信息、功能和相互关系。

3.2 医学领域在医学领域，全自动DNA测序仪可以用于诊断遗传性疾病、癌症等疾病的基因突变。

通过测序可以快速准确地分析患者的基因组信息，从而为临床医生提供准确的诊断和治疗方案。

3.3 农业和食品安全全自动DNA测序仪在农业和食品安全领域也有广泛的应用。

它可以用于鉴定转基因作物、检测食品中的基因改造成分、追溯食品来源，保证食品安全和品质。

临床医学检验：临床检验仪器真题1、问答题常用的离心方法分几类？正确答案：常用的离心方法大致可分为平衡离心法、等密度离心法、经典式沉降平衡离心法等三类。

2、问答题简述蛋白质测序仪的主要应用。

正确答案：蛋白质测序仪（江南博哥）获得的蛋白质序列信息主要应用在以下三个方面。

（1）新蛋白质的鉴定：在凝胶电泳中出现的未知条带可以利用蛋白质测序仪来测定其序列，为探索蛋白质的功能提供线索。

（2）分子克隆探针的设计：是蛋白质序列信息的基本用途之一。

用蛋白质序列信息设计PCR引物和寡核甘酸探针。

可以利用这些探针进行cDNA文库或基因组文库的筛选。

（3）抗原的人工多肽合成：由合成多肽免疫产生的抗体常用来证实和纯化新发现的蛋白质。

此外，合成的多肽类似物能够揭示蛋白质重要结构特征和提示蛋白质的功能特性。

3、问答题第三代自动血培养仪有哪些性能特点？正确答案：（1）培养基营养丰富；（2）以连续、恒温、振荡方式培养，细菌易于生长；（3）培养瓶多采用不易碎材料制成，提高了使用的安全性；（4）采用封闭式非侵入性的瓶外监测方式，避免标本交叉感染，且无放射性污染；（5）自动连续监测，缩短了检测时间，阳性标本检测可快速、准确；（6）结果报告及时，85%以上的阳性标本能在48小时内被检出；（7）培养瓶多采用双条形码技术，只需用电脑上的条码阅读器扫描报告单上的条码，就可直接查询到病人的结果及生长曲线；（8）培养瓶可随时放入培养系统，并进行追踪检测；（9）数据处理功能较强，数据管理系统随时监测感应器的读数，依据数据的变化来判定标本的阳性或阴性，并可进行流行病学的统计分析；（10）设有内部质控系统，可保证仪器的正常运转；（11）可进行血液及所有无菌体液的细菌培养检测。

4、单选库尔特原理中血细胞的电阻与电解质溶液电阻的关系是OoA.相等B.大于C.小于D.大于或等于E.小于或等于正确答案：B5、问答题电泳技术根据分离原理如何分类？正确答案：根据分离原理可分为移界电泳、区带电泳、等速电泳、等电聚焦、免疫电泳等。

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第一章测试1.冰中的1个水分子通常可以形成（）氢键。

A:1B:3C:2D:4答案:D2.下列（）是人体的微量元素。

A:CB:HC:SeD:O答案:C3.DNA是脱氧核糖核苷酸分子之间通过（）形成的。

A:磷酸酐键B:酰胺键C:磷酸二酯键D:肽键答案:C4.氨基酸分子之间通过（）形成蛋白质。

A:醚键B:酯键C:磷酸酐键D:肽键答案:D5.核酸的5’端含有（）。

A:磷酸基团B:羟基C:羧基D:氨基答案:A6.离子键是指（）。

A:水分子驱使非极性分子聚集的作用B:发生在带相反电荷基团之间的相互作用C:极性分子与非极性分子之间的相互排斥D:是非极性分子之间瞬时偶极的相互作用答案:B7.非共价相互作用包括（）。

A:配位建B:离子键C:肽键D:氢键E:范德华力答案:BDE8.水分子（）。

A:能够参与生命有机体的代谢反应。

B:有利于生物大分子结构的形成。

C:具有高的蒸发热和热容量等特性，有助于调节哺乳动物的体温。

D:可作为溶剂。

E:排开疏水基团的作用就是疏水作用。

答案:ABCDE9.下列（）是生物大分子。

A:RNAB:三酰甘油/脂肪C:蛋白质D:纤维素E:DNA答案:ACDE10.下列（）是人体的大量元素。

A:P、O、S、CuB:C、H、O和 NC:Ca、P、K和SD:Cl、 Fe、Mo和Zn答案:BC11.氢键具有方向性。

（）A:对B:错答案:A12.氢键没有饱和性。

（）A:错B:对答案:A13.范德华半径是一种原子允许另外一种原子可以与它接近程度的度量。

（）A:对B:错答案:A14.范德华作用包括极性基团之间、极性与非极性基团之间以及非极性基团之间的相互作用。

（）A:对B:错答案:A15.很多情况下，酶的抑制剂可以作为人类或者动物疾病治疗的药物。

（）A:对B:错答案:A第二章测试1.下列携带咪唑基的氨基酸是（）。

A:HisB:ValC:PheD:Glu答案:A2.下列含有硫元素的氨基酸是（）。

A:天冬氨酸B:亮氨酸C:精氨酸D:半胱氨酸答案:D3.下列不含手性碳的氨基酸有（）。

DNA测序仪的测序原理和操作规程DNA测序仪DNA序列测定分手工测序和自动测序,手工测序包括sanger双脱氧链终止法和maxam-gilbert化学降解法。

自动化测序实际上已成为当今DNA序列分析的主流。

美国pe abi 公司已生产出373型、377型、310型、3700和3100型等DNA测序仪,其中310型是临床检测实验室中使用最多的一种型号。

本实验介绍的是abi prism 310型DNA测序仪的测序原理和操作规程。

原理abi prism 310型基因分析仪(即DNA测序仪),采用毛细管电泳技术取代传统的聚丙烯酰胺平板电泳,应用该公司专利的四色荧光染料标记的ddntp(标记终止物法),因此通过单引物pcr测序反应,生成的pcr产物则是相差1个碱基的3''''末端为4种不同荧光染料的单链DNA混合物,使得四种荧光染料的测序pcr产物可在一根毛细管内电泳,从而避免了泳道间迁移率差异的影响,大大提高了测序的精确度。

由于分子大小不同,在毛细管电泳中的迁移率也不同,当其通过毛细管读数窗口段时,激光检测器窗口中的ccd(charge-coupled device)摄影机检测器就可对荧光分子逐个进行检测,激发的荧光经光栅分光,以区分代表不同碱基信息的不同颜色的荧光,并在ccd摄影机上同步成像,分析软件可自动将不同荧光转变为DNA序列,从而达到DNA测序的目的。

分析结果能以凝胶电泳图谱、荧光吸收峰图或碱基排列顺序等多种形式输出。

它是一台能自动灌胶、自动进样、自动数据收集分析等全自动电脑控制的测定DNA片段的碱基顺序或大小和定量的高档精密仪器。

pe公司还提供凝胶高分子聚合物,包括DNA 测序胶(pop 6)和genescan胶(pop 4)。

这些凝胶颗粒孔径均一,避免了配胶条件不一致对测序精度的影响。

它主要由毛细管电泳装置、macintosh 电脑、彩色打印机和电泳等附件组成。