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高效液相色谱法检测奶制品中的三聚氰胺一、实验目的1、掌握反相离子对色谱法测定奶制品中三聚氰胺的原理和方法。
2、了解复杂样品进行色谱分析时前处理的方法和必要性。
二、实验原理三聚氰胺是一种常见的化工原料，有毒，若人体大量摄入，将引起泌尿系统结石等疾病。
2008年9月，三鹿奶粉事件发生后，三聚氰胺的危害被深入广泛的认识，同时食品安全问题也更加受到重视与关注。
反相高效液相色谱（RP-HPLC ）具有分离效率高，分析速度快，灵敏度高等优点，而且仪器较简单、工作条件要求较低，在有机物的分离与测定中有极为广泛的应用。
但三聚氰胺是强极性物质，在反相色谱柱上保留能力很弱，难以达到分离的目的。
三聚氰胺具有弱碱性，在酸性溶液中能形成阳离子。
若在流动相中加入与具有两亲作用的阴离子，则可与三聚氰胺形成具有疏水作用的离子对，从而使保留能力明显增强，达到与干扰组分分离的目的，这就称作离子对色谱。
测定阳离子一般采用烷基磺酸盐作为离子对试剂，测定阴离子一般采用烷基胺类作为离子对试剂。
奶制品的组成较复杂，一般含有大量的蛋白质和脂肪类物质，若不经过预先的分离处理，不仅干扰三聚氰胺的检出，还会对色谱柱造成一定的损伤，因此对待测样进行分离，纯化等预处理是十分重要的。
加入重金属离子可使蛋白质变性、凝聚，从而沉淀分离。
脂类和高级脂肪酸可在酸性条件下通过乙酸乙酯、乙醚、氯仿等的萃取除去。
反相离子对色谱测定三聚氰胺的定量下限约为0.1mg·L -1。
对于更低浓度的试样，需要使用灵敏度更高的色谱-质谱联用技术。
但由于仪器昂贵，维护较复杂，色谱-质谱联用技术的应用受到了限制。
通过阳离子交换树脂可使溶液中的三聚氰胺得到富集，从而有效的改善检出限。
近年来发展的固相微萃取技术将净化除杂和分离富集等步骤简化合并，使色谱分析试样前处理的效率有了显著的提高。
三、试剂与仪器试剂：PbAc （AR ） 0.2 mol·L -1（乙酸酸化），乙酸乙酯（AR ），乙酸（AR ），甲醇（AR ），氨水（AR ），732型强酸性离子交换树脂（40~60日）色谱流动相：A 、乙腈（色谱纯）；B 、KH 2PO 4（GR ） 0.05 mol·L -1；C 、H 3PO 4（GR ） 0.5 mol·L -1；D 、十二烷基磺酸钠（AR ） 0.2 mol·L -1仪器：P230型高效液相色谱仪，配UV 检测器；ODS C-18 色谱柱标样：三聚氰胺（纯度大于99.5%），用水配制成1.001g L -⋅标准储备液，4℃保存。
三聚氰胺高效液相色谱法检测原理及步骤嘿，咱今儿来聊聊三聚氰胺高效液相色谱法检测这档子事儿哈！你想想看，三聚氰胺这玩意儿，就像个偷偷摸摸的捣蛋鬼，要是不小心让它混进了食品里，那可不得了哇！那为啥要用高效液相色谱法来检测它呢？这就好比咱有双火眼金睛，能把这个捣蛋鬼给揪出来！高效液相色谱法检测的原理呢，其实就像是一场巧妙的分选游戏。
样品被送进这个“大舞台”，各种成分就开始了它们的“表演”。
由于它们的性质不同，在这个特殊的“舞台”上跑的速度也就不一样啦。
就像跑步比赛，有的跑得快，有的跑得慢。
而三聚氰胺呢，它也有自己独特的“步伐”，通过一系列精巧的设计和操作，我们就能把它给识别出来啦！那具体咋操作呢？来，咱一步步说。
首先得准备好样品，就像给运动员们做好准备活动一样。
把样品处理得妥妥当当的，可不能有啥马虎。
然后呢，就是让样品进入这个神奇的色谱仪啦，这就好比运动员们站上起跑线。
在这个过程中，各种条件都得把握好，温度啦、流速啦，都得恰到好处，不然检测结果可就不准确喽！接下来，就是等待的时刻啦，就像等待比赛结果一样让人有点小紧张呢。
看着那些成分一个个地跑出来，显示在屏幕上，真有点像看比赛的成绩呢。
一旦三聚氰胺这个“捣蛋鬼”出现了，咱就能立马发现它。
你说这神奇不神奇？这不就像是有个超级侦探，能在一堆东西里准确地找到我们要找的那个坏家伙嘛！而且这个方法准确性高、灵敏度也高，能把三聚氰胺这个小坏蛋给抓个正着。
咱可不能小瞧了这个检测方法呀，它可是保障我们食品安全的重要手段呢！要是没有它，那我们怎么能放心地吃那些食品呢？想想看，如果那些含有三聚氰胺的食品大摇大摆地进入我们的生活，那该多可怕呀！所以说呀，这高效液相色谱法检测就像是我们的食品安全卫士，守护着我们的健康呢！咱平时买食品的时候，也得多长个心眼儿，看看是不是经过了严格检测的。
可别让那些坏东西有可乘之机呀！这不光是为了我们自己，也是为了咱的家人和朋友呢！总之呢，三聚氰胺高效液相色谱法检测原理和步骤都很重要，咱得好好了解了解，这样才能吃得放心，过得安心呀！你说是不是这么个理儿呢？。
原料乳中三聚氰胺快速检测液相色谱法实验报告应化0901 4103090137 金立峰一、实验目的1.了解用液相色谱法快速检测原料中三聚氰胺的方法。
2.了解和掌握高效液相色谱的使用方法。
3.学习使用液相色谱的软件分析数据。
二、实验原理用乙腈作为原料乳中的蛋白质沉淀剂和三聚氰胺提取剂，强阳离子交换色谱柱分离，高效液相色谱-紫外检测器，加标回收率。
三、实验器材1.实验试剂除另有说明外，所用试剂均为分析纯，水为GB/T6682规定的一级水。
乙腈（CH3CN）：色谱纯磷酸（H3PO4）磷酸二氢钾（KH2PO4）三聚氰胺标准物质（C3H6N6）：纯度大于或等于99%标准溶液A：2.00×102mg/L2.实验器材一次性注射器滤膜：水相，0.45μm 针式过滤器：0.45μm具塞刻度试管：50mL 液相色谱仪分析天平：感量0.01gPH计：测量精度±0.02 溶剂过滤器四、实验步骤1.流动相的配制配制磷酸盐缓冲液：0.05mol/L.称取6.8g磷酸二氢钾（准确至0.01g），加水800ml完全溶解后，用磷酸调节PH至3.0，用水稀释至1L，用滤膜过滤后备用.②将磷酸缓冲液350mL与乙腈150mL（体积比）超声波震荡混匀.2.标准溶液的配制按下表移取不同体积的标准溶液A，置于100mL容量瓶中，用水稀释至刻度，混匀。
3.试样的制备①分别称取光明纯牛奶、光明高钙奶、伊利舒化奶三种样品15g，置于50mL具塞刻度试管中并做标记为1,2,3，加入30mL乙腈，剧烈震荡6min，加水定容至满刻度，充分混匀后静置3min，用一次性注射器吸取上清液用针式过滤器过滤后，作为高效液相色谱分析用试样。
②称取光明纯牛奶15g于三支50mL具塞刻度试管中并标为4,5,6;分别加入20mL、40mL、60mL的三聚氰胺标准溶液（1mg/L),加入30mL 乙腈，剧烈震荡6min，加水定容至满刻度，充分混匀后静置3min，用一次性注射器吸取上清液用针式过滤器过滤后，作为高效液相色谱分析用试样。
普通蛋白质含氮量只有16%，但三聚氰胺含氮量可达66.7%，为提高饲料中蛋白质的含氮量，部分非法分子将三聚氰胺添加到饲料和食品中。
动物长期摄入含三聚氰胺的饲料，会产生很大的毒性作用。
动物会不仅出现肾衰竭而死亡，而且会危害人体健康。
我国明令禁止在任何饲料中添加以三聚氰胺等为原料的“蛋白精”。
检测三聚氰酸的常用方法有GC-MS/MS 法、LC-MS/MS法、HPLC法等。
目前只有农业行业有对饲料中三聚氰胺残留的标准，国家标准尚没有。
GC-MS法、HPLC法是农业行业标准中的规定方法。
GC-MS 法的前处理比较繁琐，需衍生化。
饲料及食品添加剂中有复杂的基质成分，存在许多干扰因素，影响检测结果。
本文优化质谱条件，应用高效液相色谱-质谱法（HPLC-MS），为从源头控制饲料及食品安全提供保障。
1 材料与方法1.1 仪器与试剂 三聚氰胺分析纯，不低于99.5%的纯度。
称取10 mg三聚氰胺，使用10 mL容量瓶，设置三聚氰胺标准溶液，作为标准储备液，用流动相定容。
分析纯为甲酸、乙醇。
使用仪器为安捷伦1100LC-Trap-XCT系统。
1.2 处理样品 在批发市场购买饲料与食品样品。
粉碎样品，将5 g样品放入具塞锥形瓶中。
加入20 mL体积比1∶1的水-乙醇溶液，含体积分数0.1%的甲酸。
10 min超声波振荡，然后过滤，使用20 mL上述提取液再次提取残渣。
过滤，合并滤液。
定容至 5 mL。
使用氮吹仪上浓缩，使用滤膜0.45μm过滤。
1.3 检测条件 质谱条件：扫描范围为m/ z44-150。
4.0×105Pa的雾化器压力，97.4 V的毛细管出口电压，3909 V的毛细管电压，正离子化模式的电喷雾电离，9 L/min的干燥气流量，0.5 V的碎裂电压，350℃的干燥气温度。
色谱条件：体积比5∶95，流动相为乙腈-0.1%甲酸。
色谱柱Kromasil-C18柱，5μm，4.6 mm×250 mm，进样量5μL，0.4 mL/min的流速。
固相萃取一高效液相色谱法测定液态奶中三聚氰胺含量一、引言三聚氰胺是一种无机化合物，常用于工业制造和农业生产中，然而高浓度的三聚氰胺会对人体造成严重危害，特别是对婴儿和幼儿的影响更为严重。
由于近年来液态奶中三聚氰胺事件的频繁发生，因此对液态奶中三聚氰胺含量的检测显得尤为重要。
固相萃取一高效液相色谱法是目前常用的一种高效、准确的检测方法。
本文将介绍使用固相萃取一高效液相色谱法测定液态奶中三聚氰胺含量的方法和结果。
二、实验材料和仪器1. 实验材料：液态奶样品、甲醇、乙腈、乙酸、二氯甲烷、硅胶2. 仪器：高效液相色谱仪、固相萃取柱、离心机、显微天平、pH计、紫外可见分光光度计等三、实验方法1. 样品处理：首先将液态奶样品样瓶放在冰箱中冷藏，取出一定量的样品后使用显微天平称取出适量样品，并将其加入样品离心管内。
然后加入适量的甲醇，进行振荡混合，最后使用离心机离心沉淀，得到混合物的过滤液。
2. 固相萃取：将得到的过滤液加入到固相萃取柱中，使用甲醇等洗脱混合物，得到固相萃取柱的萃取液。
3. 色谱分析：将获取到的固相萃取液置于高效液相色谱仪中进行色谱分析，根据三聚氰胺的特征峰进行定性和定量分析。
四、实验结果经过实验验证，使用固相萃取一高效液相色谱法测定液态奶中三聚氰胺含量的结果显示，样品中三聚氰胺的含量为xmg/kg，达到了食品卫生安全标准。
五、实验结论通过该实验结果可以得出结论：固相萃取一高效液相色谱法是一种准确可靠的测定液态奶中三聚氰胺含量的方法。
该方法操作简便，结果准确，可以满足食品安全检测的需求。
六、实验改进尽管该方法已经得到了实验结果的验证，但在实际操作中还是存在一些可以改进的地方。
例如固相萃取柱的选择、色谱分析条件的优化等方面可以进行进一步的改进，以提高该方法的灵敏度和稳定性。
液相色谱测三聚氰胺的流程下载温馨提示:该文档是我店铺精心编制而成，希望大家下载以后，能够帮助大家解决实际的问题。
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提取，称取适量样品，加入提取溶剂，振荡或搅拌提取一定时间，使三聚氰胺从样品中溶解出来。
高效液相色谱法测定奶制品中三聚氰胺1引用标准按照国家标准GB/T 22388-2008，三聚氰胺简称三胺，是一种重要的氮杂环有机化工原料。
因三聚氰胺分子中含有大量氮元素，一些不法厂商通过添加这种化工原料，提高产品中蛋白质含量。
2方法原理：采用HPLC法测定三聚氰胺，成本低，不需要衍生，简便易行。
采用外标法进行定量分析。
本方法采用南京科捷LC-600二元高压梯度，按照国家标准GB/T 22388-2008对牛奶中三聚氰胺进行检测。
该方法稳定可靠，检测范围广泛。
3. 仪器和试剂LC-600二元高压梯度系统：输液泵，配梯度单元和在线脱气装置；LC-600紫外检测器；手动进样器7725i，色谱工作站N2000P,离心机1台（转头6*50ml）；固相萃取小柱和萃取装置；氮吹仪；三聚氰胺对照品购自sigma公司，样品液态奶购买于超市，实验中用到的其他试剂如三氯乙酸、氢氧化钠、柠檬酸和辛烷磺酸钠均为分析级。
4. 色谱条件色谱柱：V enusil ASB-C18 4.6×250mm （也可选用C8柱）缓冲液：10mM柠檬酸, 10mM辛烷磺酸钠流动相：缓冲溶液:乙腈=90：10进样量：20uL流速：1.0mL/min柱温：40℃5. 样品制备按照GB/T 22388-2008中3.4节进行：称取2g（精确到0.01g）试样（液态纯牛奶）于50mL 具塞塑料离心管中，加入15ml 1%三氯乙酸提取液和5mL乙腈，充分混匀，超声提取20min，再振荡提取10min后，以4000r/min离心10min。
上清液经三氯乙酸溶液润湿的滤纸过滤后，用三氯乙酸溶液定容至25mL，移取5mL滤液，过混合型阳离子固相萃取小柱(PCX)。
洗脱液于50℃下氮气吹干，残留物用20%甲醇的水溶液定容至1mL。
6. 定性分析称取三聚氰胺标准品适量，流动相溶解，按照上述色谱条件，进入色谱仪分析。
保留时间分别为4.75min。
7. 样品测试按照上述样品处理方法和色谱条件，对样品进行测定，得到色谱图如图1所示。
