简析牛奶中三聚氰胺的检测方法
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原料乳及乳制品中三聚氰胺检测方法 楚雪 郑州谱尼测试技术有限公司众所周知,三聚氰胺是一种常见的工业原料,在纺织、橡胶、塑料等行业得到了广泛的应用,而且它的含氮量极高,如果添加到原料乳以及乳制品中,可以造成数据假象,让人们误以为里面含有较多的蛋白质成分。
典型的三聚氰胺检测方法三聚氰胺是一种无色无味的晶体,低毒,微溶于乙醇,可溶于甲醇、甘油、乙酸,不溶于乙醚、苯酚。
目前,三聚氰胺的主要用途是加工塑料、胶水、涂料和阻燃剂。
虽然三聚氰胺毒性较低,但是对于幼儿而言,如果一次性摄入量过多,就会导致肾功能衰竭。
我国明确规定婴幼儿配方奶粉中三聚氰胺的含量不得超过1.0mg/L,其他食品中三聚氰胺的含量不得超过2.0mg/L。
色谱检测。
第一种,高效液相色谱法。
这种方法简称HPLC法,适用的范围特别广,而且分析速度很快,能够实现自动化检测,是最普遍的检测方法。
目前人们已经加大了研究的力度,并且对检测条件进行了优化,明显缩短了检测时间,而且高效液相色谱法日渐成熟,已经成为了人们检测三聚氰胺的首选方法,具体的检测内容会在本文的第二章节详细介绍。
第二种,气相色谱质谱法。
这种方法简称GC-MS法,灵敏度很高,但是由于三聚氰胺的分子质量较小,不容易挥发,所以需要进行衍生处理,提高挥发性,这一过程会造成一定的样品损失。
如果使用硅烷进行衍生处理,可以降低外界环境的干扰,而结合反吹技术,可以省略固相萃取柱净化的环节,这样简化了处理流程。
第三种,液相色谱-串联质谱法。
这种方法使用三氯乙酸溶液对目标分析物进行提取,然后通过离子固相萃取柱净化,在对三聚氰胺进行检测时,方法检测低限为18μg/kg,与上述两种方法相比,这种方法更加便捷,并且可以使用外标法和内标法进行测量。
光谱检测。
第一种,拉曼法。
SERS技术可以增强金属表面附着物质的散射信号,并且搜集到具体的结构信息,所以检测人员可以建立一套拉曼光谱扫描系统,对原料乳与三聚氰胺颗粒的混合样本进行检测,就会发现拉曼强度与三聚氰胺的比例存在明显的线性关系。
牛奶中的三聚氰胺含量的快速测定三聚氰胺(melamine)即蜜胺,又称氰尿酰胺,是一种白色晶体,其分子中含氮量高达66. 7% 。
在生鲜乳及乳制品中添加三聚氰胺,可以提高含氮量,冒充成高蛋白食品,从而大幅度降低成本.。
2008年“奶粉中非法添加三聚氰胺”事件的出现对乳制品中三聚氰胺的检测方法提出了迫切需求。
2008年10月7日,国家质检总局、国家标准委员会批准了GB /T22388—2008《原料乳与乳制品中三聚氰胺检测方法》和GB /T22400—2008《原料乳中三聚氰胺快速检测2液相色谱法》。
该国标法是目前奶制品生产企业和各个实验室所用的主要方法。
上述检测方法,都需要对样品进行前处理,而且还需要多种化学药品和较为昂贵的仪器设备,虽然检测精度较高,但不便于现场的快速检测。
近红外技术(N IR)是20世纪70年代后发展起来的一种新的快速定性定量分析技术,近红外光谱包含丰富的物质信息,其谱图与物质本身的组成密切相关,通过对光谱特征的分析,可以获得有关物质结构与组成的信息。
其主要特点是无需复杂的前处理即可通过对光谱信息的分析提取出物质的特征信息,因此特别适合用于快速鉴别物质的品质,已广泛地应用于农业、化工和食品行业中。
本实验用近红外光谱法快速定量检测纯牛奶中三聚氰胺。
实验分别配制了两组不同三聚氰胺含量的纯牛奶样品,用于定量分析。
结果表明,近红外光谱分析是一种快速、方便和环保有效的测定乳制品中三聚氰胺含量的新方法。
样品制备所需主要材料和仪器:三聚氰胺分析纯500g,同一批次的超市购买某品牌纸袋纯牛奶4L,感量为0. 1mg的电子天平,水浴锅,容量瓶,移液管等。
样品用于定量分析:共配制三聚氰胺含量范围为0. 9754~19. 5672mg/kg的牛奶样品共20个(样品标号为01~20) ,制样时,用电子天平称取一定质量的三聚氰胺加入到牛奶样品中来得到不同含量的样品,摇匀, 在40℃水浴锅中加热10min。
牛奶中三聚氰胺的检测方法牛奶是我们日常生活中常见的食品之一,而牛奶中是否含有三聚氰胺成为了人们关注的焦点。
三聚氰胺是一种有毒化学物质,长期摄入可能对人体健康造成危害,因此对牛奶中三聚氰胺的检测成为了必不可少的工作。
一、高效液相色谱-质谱联用技术(HPLC-MS)。
HPLC-MS技术是目前较为常用的牛奶中三聚氰胺检测方法之一。
该技术结合了高效液相色谱(HPLC)和质谱(MS)两种分析手段,能够对样品中的三聚氰胺进行高效、快速、准确的检测。
首先通过色谱柱将样品中的混合物分离,然后再通过质谱进行定性和定量分析,能够有效地避免其他成分对三聚氰胺检测的干扰,提高了检测的准确性和可靠性。
二、酶联免疫吸附法(ELISA)。
ELISA法是一种常用的免疫学分析方法,也可以用于牛奶中三聚氰胺的检测。
该方法利用酶标记抗体与待检测物发生特异性反应,再通过底物显色从而对三聚氰胺进行定性或定量检测。
ELISA法具有操作简便、灵敏度高、特异性强等优点,但也存在着对样品的预处理要求较为严格、易受其他成分干扰等缺点。
三、红外光谱法。
红外光谱法是一种基于样品对红外辐射的吸收、散射、透射等现象进行分析的方法,也可以用于牛奶中三聚氰胺的检测。
通过测定样品在红外光谱区的吸收峰,可以得到样品中三聚氰胺的含量信息。
该方法操作简便、分析速度快,但对仪器的精度要求较高,且受样品基质的影响较大。
四、原子吸收光谱法。
原子吸收光谱法是一种常用的重金属元素分析方法,也可以用于三聚氰胺的检测。
该方法通过样品中三聚氰胺原子吸收光谱的特征进行定性和定量分析,具有操作简便、分析速度快的优点。
但是该方法对样品的预处理要求较高,且仪器设备成本较高。
在进行牛奶中三聚氰胺检测时,应根据实际情况选择合适的检测方法,并严格按照操作规程进行操作,以确保检测结果的准确性和可靠性。
同时,加强对牛奶生产企业的监督检查,提高牛奶质量安全水平,对保障消费者的健康具有重要意义。
乳中三聚氰胺的测定概述三聚氰胺是一种有机化合物,常用于工业生产中的胶粘剂和树脂制造等。
然而,由于其毒性和致癌性,三聚氰胺被禁止在食品和饲料中使用。
因此,对于乳制品中三聚氰胺的测定显得尤为重要。
本文将介绍乳中三聚氰胺的测定方法及其应用。
一、乳中三聚氰胺的来源和危害乳制品是人们日常生活中常见的食品之一,而乳中三聚氰胺是一种常见的污染物。
三聚氰胺通常来自于牲畜饲料中的添加剂,当牲畜摄入三聚氰胺过多时,其代谢产物会通过牛奶等分泌物进入乳制品中。
三聚氰胺对人体健康有严重危害,可能导致泌尿系统疾病、肾结石甚至导致肾衰竭。
二、乳中三聚氰胺的测定方法1. 红外光谱法红外光谱法是一种常用的乳中三聚氰胺测定方法。
该方法基于三聚氰胺在特定红外光波长下吸收的特性,通过测量样品中红外光的吸收强度来确定三聚氰胺的含量。
红外光谱法具有快速、准确的优点,但需要专业的仪器设备和操作技术。
2. 气相色谱法气相色谱法也是一种常用的乳中三聚氰胺测定方法。
该方法通过将样品中的三聚氰胺蒸发并分离,然后通过气相色谱仪进行定量分析。
气相色谱法具有灵敏度高、分离效果好的优点,但需要较长的操作时间和较高的设备要求。
3. 液相色谱法液相色谱法是一种常用的乳中三聚氰胺测定方法。
该方法通过将样品中的三聚氰胺溶解并分离,然后通过液相色谱仪进行定量分析。
液相色谱法具有准确度高、操作简便的优点,但需要一定的样品前处理步骤。
三、乳中三聚氰胺的应用1. 食品安全检测乳中三聚氰胺的测定在食品安全检测中具有重要意义。
通过对乳制品中三聚氰胺的测定,可以保障消费者的健康和权益,防止不合格产品上市和流入市场。
2. 生产控制与质量保障乳制品生产过程中对三聚氰胺的测定也非常重要。
通过对原料和成品中三聚氰胺的监测,可以及时发现和控制潜在的污染源,确保产品质量和生产工艺的稳定性。
3. 法律监管与标准制定乳中三聚氰胺的测定在法律监管和标准制定中起着重要的作用。
通过对乳制品中三聚氰胺含量的限制和监测,可以制定相应的法律法规和标准,保障乳制品行业的健康发展。
ICS 67.100C 53中华人民共和国国家标准GB/T 22388—2008 原料乳与乳制品中三聚氰胺检测方法Determination of melamine in raw milk and dairy products2008-10-07 发布2008-10-07 实施中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局中国国家标准化管理委员会发布前言本标准包括三个方法:第一法高效液相色谱法,第二法液相色谱-质谱/质谱法,第三法气相色谱-质谱联用法,检测时,应根据检测对象及其限量的规定,选用与其相适应的检测方法。
本标准的附录A 为资料性附录。
本标准由全国食品安全应急标准化工作组、全国质量监管重点产品检验方法标准化技术委员会提出并归口。
本标准第一法起草单位:中国检验检疫科学研究院、中国疾病预防控制中心、国家食品质量安全监督检验中心、北京市疾病预防控制中心、国家乳制品质量监督检验中心、浙江省质量技术监督检测研究院、国家加工食品质量监督检验中心(广州)。
本标准第一法主要起草人:宋书锋、鲁杰、安娟、杨大进、李淑娟、张晶、刘艳琴、杨红梅、杨金宝、鄂来明、廖上富、陈小珍、蔡依军、郭新东、吴玉銮。
本标准第二法起草单位:中国检验检疫科学研究院、北京市疾病预防控制中心、国家食品质量安全监督检验中心、中国疾病预防控制中心、中华人民共和国江苏出入境检验检疫局。
本标准第二法主要起草人:彭涛、吴永宁、邵兵、王浩、李晓娟、郭启雷、苗虹、赵云峰、丁涛、李立、蒋原。
本标准第三法起草单位:上海市质量监督检验技术研究院、国家食品质量安全监督检验中心、中国检验检疫科学研究院。
本标准第三法主要起草人:巢强国、常宇文、雷涛、陈冬东、赵玉琪、周耀斌、穆同娜、葛宇、曹程明、张辉、麦成华、曹红。
原料乳与乳制品中三聚氰胺检测方法1 范围本标准规定了原料乳、乳制品以及含乳制品中三聚氰胺的三种测定方法,即高效液相色谱法(HPLC)、液相色谱-质谱/质谱法(LC-MS/MS)和气相色谱-质谱联用法[包括气相色谱-质谱法(GC-MS),气相色谱-质谱/质谱法(GC-MS/MS)]。
牛奶中三聚氰胺的检测方法牛奶是我们日常生活中常见的饮品,但是近年来,关于牛奶中是否含有三聚氰胺的问题引起了人们的关注。
三聚氰胺是一种有毒化学物质,长期摄入可能对人体健康造成危害。
因此,对牛奶中三聚氰胺的检测方法变得尤为重要。
本文将介绍几种常见的牛奶中三聚氰胺的检测方法,希望能对大家有所帮助。
首先,常见的检测方法之一是高效液相色谱法。
这种方法利用高效液相色谱仪对牛奶样品中的三聚氰胺进行定量分析。
具体操作步骤是将样品制备成溶液,然后通过色谱柱进行分离,最后利用色谱检测器进行检测。
这种方法操作简便,准确性高,因此被广泛应用于牛奶中三聚氰胺的检测。
其次,质谱法也是一种常用的检测方法。
质谱法是利用质谱仪对样品中的化合物进行分析,通过化合物的质荷比来确定其分子结构和含量。
对于三聚氰胺的检测,质谱法具有高灵敏度和高准确性的优点,能够有效地检测出牛奶中极微量的三聚氰胺。
因此,质谱法也是一种常见的牛奶中三聚氰胺检测方法。
除了以上两种方法外,还有一种常用的检测方法是酶联免疫吸附法。
这种方法利用酶标仪对样品中的三聚氰胺进行检测,通过酶标仪测定样品中三聚氰胺的含量。
酶联免疫吸附法操作简便,不需要昂贵的仪器设备,因此被广泛应用于牛奶中三聚氰胺的快速检测。
综上所述,牛奶中三聚氰胺的检测方法主要包括高效液相色谱法、质谱法和酶联免疫吸附法。
这些方法各有优缺点,可以根据实际情况选择合适的方法进行检测。
在日常生活中,我们应该选择有资质的检测机构对牛奶进行定期检测,确保牛奶的质量安全,保障我们的健康。
希望本文对大家对牛奶中三聚氰胺的检测方法有所帮助。
三聚氰胺检测分析的样品前处理针对三聚氰胺检测,目前常用的方法有酶标法、HPLC、LC-MS 、GC-MS等。
在进行上述方法检测之前。
均需对样品进行前处理。
由于样品的种类多种多样,如奶粉、液体奶、饲料、宠物食品、肉类、高蛋白食品等,前处理的方法各不相同。
一般来讲,液体样品(如液态奶)可以直接通过离心或过膜进行处理,固体样品可以先萃取,再通过离心或过膜进行处理,处理后的样品可以用酶标或HPLC进行检测。
下面分别以液态奶及奶粉为例,说明两种样品的前处理过程,以及离心机在样品制备过程中的应用。
1奶粉中三聚氰胺的检测方法(HPLC法)样品前处理方法(1) 标准样品配制:取50mg三聚氰胺标准品,用50%乙腈水定容50mL配得到1000ug/ml的标准溶液,使用时用50%乙腈稀释配得曲线。
(2) 提取:称取奶粉样品5g(或牛奶10ml),,加入50ml 50%乙腈水,充分混匀,涡旋30s,超声20min。
然后取部分溶液转移至10mL离心管中,8000rpm/min离心10min,取上清液过膜上机。
(3)色谱条件:色谱柱:C18 4.6×250mm;缓冲液:10mM柠檬酸, 10mM庚烷磺酸钠(或己烷磺酸钠、辛烷磺酸钠);流动相:缓冲溶液:乙腈=92:8;流速:1.0mL/min;柱温:35℃;波长:240nm2牛奶中三聚氰胺的检测方法(酶标法)牛奶样品前处理方法(以BioXL酶标检测试剂盒为例)1 直接法----4℃,2000g离心15min, 撇去上层脂肪----取150ul用于检测注意:对于酸奶样品,应将PH值调节至中性再进行检测。
2抽提法----5ml牛奶样品,0-4℃,2000g离心15min, 撇去上层脂肪----转移2.5ml脱脂奶到玻管与5ml乙酸乙酯混合,涡旋1min,静置5-10min令其发生相分离----转移4ml乙酸乙酯上层到干净玻璃管仲,50℃温和氮流蒸发乙酸乙酯----残留物溶解于500ul稀释缓冲液(20mM PBS)(相当于2ml牛奶/500ul缓冲液)----取150ul用于检测(脱脂奶粉处理方法:将90ml蒸馏水加入10g脱脂奶粉,再按上述步骤操作。
牛奶中三聚氰胺的检测方法牛奶是我们日常生活中非常常见的食品,它富含蛋白质、脂肪、糖类、维生素和矿物质,是人们饮食中重要的营养来源。
然而,近年来牛奶中三聚氰胺的问题引起了广泛关注。
三聚氰胺是一种有毒化学物质,长期摄入会对人体健康造成严重危害,甚至引发肾脏疾病。
为了保障消费者的健康,牛奶中三聚氰胺的检测方法变得尤为重要。
目前,常见的牛奶中三聚氰胺检测方法主要包括物理法、化学法和生物法。
物理法是通过仪器设备对牛奶中的物理性质进行测定,例如密度测定、折射率测定等。
这种方法简单易行,但对于三聚氰胺的检测准确度有限,往往需要结合其他方法进行验证。
化学法是利用化学试剂对牛奶中的成分进行反应,通过观察反应产物的形态和颜色变化来判断是否含有三聚氰胺。
这种方法准确度较高,但需要专业的化学知识和实验技能,操作复杂且耗时。
生物法是利用生物学原理对牛奶中的三聚氰胺进行检测,常见的方法包括酶联免疫吸附测定法(ELISA)和质谱法。
这种方法灵敏度高、准确度较高,但设备昂贵,操作技术要求高。
除了上述方法外,近年来还出现了一些新型的牛奶中三聚氰胺检测技术,例如纳米材料传感器技术、光谱技术等。
这些新技术在提高检测准确度的同时,也降低了检测成本和时间,具有较大的应用前景。
总的来说,牛奶中三聚氰胺的检测方法多种多样,各有优劣。
在实际应用中,需要根据具体情况选择合适的检测方法,并结合多种方法进行验证,以确保检测结果的准确性和可靠性。
同时,加强对牛奶生产环节的监管和抽检工作,也是保障消费者健康的重要举措。
在日常生活中,消费者也可以通过选择正规渠道购买牛奶,注意产品的生产日期和保质期,以及留意相关的质量认证标识,来降低牛奶中三聚氰胺对健康的潜在风险。
同时,加强对牛奶的正确存储和使用,也是保障健康的重要环节。
综上所述,牛奶中三聚氰胺的检测方法是保障消费者健康的重要环节,各种方法各有优劣,需要根据具体情况选择合适的方法,并加强对牛奶生产和消费环节的监管,才能有效降低三聚氰胺对健康的潜在风险。
编号______新疆农业职业技术学院简析牛奶中三聚氰胺的检测方法分院名称园林科技学院___专业食品营养与检测___班级09食品营养与检测(2)班学生姓名岩亚娟______指导老师杜鹃讲师_____二O一一年三月九日目录摘要……………………………………………………………………..1、三聚氰胺的简介……………………………………………………………….. 1.1三聚氰胺的名称…………………………………………………1.2三聚氰胺的性质………………………………………………………………1.3三聚氰胺的危害………………………………………………2、三聚氰胺的检测方法…………………………………………………………….2.1配位化学法…………………………………………………………………...2.1.1适用范围…………………………………………………….2.1.2检测原理……………………………………………………..2.1.3试剂和器材……………………………………………….2.1.4检测方法. ………………………………..……………………………………2.1.5最低检限……………………………………………………………………2.2试剂盒定量检测方法……………………………………………………………….2.2.1检测原理………………………………………………………….2.2.2试剂及材料………………………………………………………….2.2.3检测方法………………………………………………………….2.2.4结果分析………………………………………………………….2.3三聚氰胺胶体金试纸卡检测………………………………………………2.3.1检测原理………………………………………………………2.3.2检测方法……………………………………………2.3.3结果判定……………………………………………3、结果讨论…………………………………………………………………4、参考文献…………………………………………………………5、致谢………………………………………………………本文的写作思路比较清晰,涂红的地方是平行的内容,调整以下让序号内容规整些,参照模板修改格式!牛奶中三聚氰胺的检测方法摘要:自2008年的三聚氰胺爆发事件以来,乳制品一直备受关注。
要有效的提高乳制品的安全系数,奶站收奶环节中原奶检测尤为重要,同时为了保证牛奶不发生腐坏变质现象,必须在短时间内进行检测并立即入罐冷藏,这些都对乳制品的的检测提出了挑战,因此就具体情况而选择快速有效的检测方法很重要。
关键词:乳制品原奶三聚氰胺绪论1、三聚氰胺的简介1.1三聚氰胺的名称三聚氰胺(Melamine)(化学式:C3H6N6),俗称密胺、蛋白精,IUPAC命名为“1,3,5-三嗪-2,4,6-三氨基”,是一种三嗪类含氮杂环有机化合物,被用作化工原料。
它是白色单斜晶体,几乎无味,微溶于水(3.1g/L常温),可溶于甲醇、甲醛、乙酸、热乙二醇、甘油、吡啶等,不溶於丙酮、醚类、对身体有害,不可用於食品加工或食品添加物。
三聚氰胺是氨基氰的三聚体,由它制成的树脂加热分解时会释放出大量氮气,因此可用作阻燃剂。
它也是杀虫剂环丙氨嗪在动物和植物体内的代谢产物。
三聚氰胺(英文名:Melamine),是一种三嗪类含氮杂环有机化合物,重要的氮杂环有机化工原料。
简称三胺,俗称蜜胺、蛋白精,又叫 2 ,4 ,6- 三氨基-1,3,5-三嗪、1,3,5-三嗪-2,4,6-三胺、2,4,6-三氨基脲、三聚氰酰胺、氰脲三酰胺。
更多英文名称:1,3,5-Triazine-2,4,6-triamine;2,4,6-Triamino-1,3,5-triazine;2,4,6-Triamino-s-triazine;Aero;Cyanuramide;Cyanuric triamide;Cyanurotriamide;分子模型Cyanurotriamine;DG 002 (amine);Hicophor PR;Isomelamine;Melamine;NCI-C50715;Pluragard;Pluragard C 133;s-Triazine, 2,4,6-triamino-;Teoharn;Theoharn;Virset 656-4;分子结构化学式(分子式) C3H6N61.2三聚氰胺的性质三聚氰胺性状为纯白色单斜棱晶体,不可燃,无味,低毒,密度1.573g/cm3 (16℃)。
常压熔点354℃,急剧加热则分解;快速加热升华,升华温度300℃。
在水中溶解度随温度升高而增大,在20℃时,约为3.3 g/L,即微溶于冷水,溶于热水,极微溶于热乙醇,不溶于醚、苯和四氯化碳,可溶于甲醇、甲醛、乙酸、热乙二醇、甘油、吡。
呈弱碱性(pH值=8),与盐酸、硫酸、硝酸、乙酸、草酸等都能形成三聚氰胺盐。
在中性或微碱性情况下,与甲醛缩合而成各种羟甲基三聚氰胺,但在微酸性中(pH值5.5~6.5)与羟甲基的衍生物进行缩聚反应而生成树脂产物。
遇强酸或强碱水溶液水解,胺基逐步被羟基取代,先生成三聚氰酸二酰胺,进一步水解生成三聚氰酸一酰胺,最后生成三聚氰酸。
1.3三聚氰胺的危害三聚氰胺是一种低毒的化工原料。
动物实验结果表明,在动物体内新陈代谢很快而且不会存留,主要影响泌尿系统。
三聚氰胺量剂和临床疾病之间存在明显的量效关系。
三聚氰胺在婴儿体内最大耐受量为每公斤奶粉15毫克。
专家对受污染婴幼儿配方奶粉进行的风险评估显示,以体重7公斤的婴儿为例,假设每日摄入奶粉150克,其安全预值即最大耐受量为15毫克/公斤奶粉。
根据美国食物及药物管理局的标准,三聚氰胺每日可容忍摄入量为每日0.63毫克/公斤体重。
2、三聚氰胺的检测方法三聚氰胺检测方法有很多种,本文主要针对于配位化学法、试剂盒半定量检测法、三聚氰胺快速检测法、三聚氰胺高效液相色谱法进行讨论和研究,并对几种方法的特性做出比较。
2.1配位化学法2.1.1适用范围本方法适用于液态奶生鲜奶、液态成品奶等三聚氰胺定性检测。
2.1.2检测原理样品中的三聚氰胺经特异性富集、净化后,选择性的和配位沉淀剂形成难溶配合物,在水中可以产生明显的浑浊现象,从而可以判断某一限量三聚氰胺的存在与否。
2.1.2试剂和仪器试剂:吸附剂、解析剂Ⅰ、解析剂Ⅱ、沉淀剂A、沉淀剂B器材:磁子、自制 1.8ml漏勺、漏斗、小勺、注射器、试管、烧杯、洗液瓶、恒温水浴锅2.1.2检测方法2.1.2.1用量筒量取待测牛奶样品30ml于50ml烧杯中,用漏勺从试剂瓶中取出1.8ml(约1.5g)吸附剂A移至上述烧杯中,加入棒状磁子,在电磁搅拌器上常温搅拌至少10分钟2.1.2.2将烧杯中的物品用装有蒸馏水的洗液瓶边冲洗边倒入漏斗中并取出磁子,用洗液瓶充分清洗漏斗中的吸附剂A至其表面完全没有奶液,将漏斗中的吸附剂A倒入另一干净的烧杯内,备用2.1.2.3加入1ml解析剂Ⅰ同时再加入60毫克-80毫克解析剂Ⅱ(约三小勺),再将烧杯稍倾斜置于60℃以上的水浴锅中加热至少3分钟(烧杯倾斜确保解析液没过吸附剂A,期间不停用玻璃棒搅拌),用注射器将上述烧杯中的解析液吸入注射器中,将注射器中的解析液(此时为混浊液)移入干净的试管中2.1.2.4用滴管向试管中加入0.25ml(约5滴)沉淀剂A,震荡得到更为浑浊的液体,用加入针头的另一注射器将上述试管中的沉淀剂A吸入注射器中,将针头换成微孔过滤膜,至入(12mm*100mm)试管通过微孔过滤膜时慢慢的过滤得到澄清液2.1.2.5用滴管向上述试管中加入0.20ml(约4滴)沉淀剂B,振荡(所用滴管与上述滴管不可混用)2.1.5最低检限不变浑浊表示三聚氰胺元素低于2mg/kg变浑浊表示含有三聚氰胺。
2.2试剂盒定量检测方法2.2.1检测原理酶联免疫吸附测定法定量测定三聚氰胺残留。
利用萃取液通过均质及振荡的方式提取样品中的三聚氰胺进行免疫测定。
先将三聚氰胺酶标记物,样品萃取物及标准加入到已经包被有三聚氰胺抗体的微孔中开始反应。
在30分钟的孵育过程中,样品萃取物中的三聚氰胺与三聚氰胺酶标记物竞争结合微孔中的三聚氰胺抗体,孵育30分钟后洗掉小孔中所有没有结合的三聚氰胺及三聚氰胺酶标记物。
在用去离子水清洗结束后,每孔中加入清澈的底物溶液,结合的酶标记物将无色的底物转化为蓝色的物质。
孵育30分钟后停止此反应,根据各孔颜色深浅进行数据读取。
依据标准的颜色得出样品中三聚氰胺的浓度值。
2.2.2试剂2.2.2.1试剂盒:在2-8℃贮存(不要冷冻),请于盒上标注日期前用完。
2.2. 2.2 蒸馏水或去离子水。
2.2.2.3 可吸取150ul、50ul、100ul的移液器及吸头。
2.2.2.4 吸水纸或相当的吸水材料。
2.2.2.5 450nm的酶标仪。
2.2.2.6 吐温20:化学纯。
2.2.2.7 20 mMPBS:0.62g NaH2PO4-2H2O + 5.73 g Na2HPO4-12H2O+9gNaCL,蒸馏水定容到1000ml。
2.2.2.8 清洗液:0.62g NaH2PO4 -2H2O+5.73 g Na2HPO4-12H2O+9gNaCL,蒸馏水定容到1000ml+0.5ml吐温20。
2.2.2.910%甲醇/20 mMPBS:吸取10ml甲醇用20 mMPBS定容至100ml。
60%甲醇/水溶液:取60ml甲醇定容至100ml。
2.2.2检测方法2.2.2.1将所有试剂及样品回升至室温20-28℃,但不要放置超过24小时。
2.2.2.2从铝箔袋中拿出要求数量的微孔条,放入干燥剂并重新封好袋子以免微孔条受潮。
2.2.2.3 吸取150ul标准、样品到对应微孔中,必须保证每种溶液使用干净的吸头吸取,避免交叉污染。
加入50ul三聚氰胺酶标记溶液到每个小孔中。
2.2.2.4 混合60秒,20-28℃下孵育30分钟。
2.2.2.5 将微孔中的溶液倒入水槽中,用清洗液完全充满微孔,振荡后倒掉,重复三次,总共四次洗板。
2.2.2.6在吸水纸上拍打,尽可能将水拍干。
2.2.2.7每个微孔中加入100ul底物溶液。
2.2.2.8 混合60秒,20-28℃下孵育30分钟。
2.2.2.9每个微孔中加入100ul停止液。
2.2.2.10450nm下读板。
2.2.2.11在分析软件中进行数据处理,得到最终样品浓度值。
2.2.3结果分析定量分析需要绘制以标准样的吸光率Y轴,以标准样的浓度的半对数为X轴的曲线图,依据标准样吸光率的点画成一直线,如此样品的吸光率可在线上找到,与此相应的Y轴则为样品的浓度。
样品吸光率范围应比标准样的最底范围高,比最高范围低,即可说明此样品中三聚氰胺的含量大于500µg/Kg或小于。