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猪伪狂犬病病毒囊膜糖蛋白gD主要抗原表位区基因的克隆及原核表达罗飞;李宇琴;周洁;南文龙;陆明哲;陈义平【摘要】Use the genome DNA of pseudorabies (PRV) virus SD strain as template, the major epitope of PRV envelop glycoprotein gD was amplified by polymerase chain reaction (PCR)and cloned into pGEM-T vector, then inserted into the downstream of T7 promoter to construct an expression plasmid pET-32a. After induction by IPTG.the fusion protein was highly expressed in Escherichia coli BL2KDE3) in the form of inclusion bodies. The recombinant protein was purified with His-bind affinity chromatography. SDS-PAGE and Western blotting analyses revealed that the recombinant protein with the expected 45. 2 ku could react with pig serum containing antibody against PRV. All results indicated that the recombinant fusion protein can be used as an antigen of diagnostic assay to detect the PRV antibody in pig serum.%本试验通过PCR方法以猪伪狂犬病病毒SD株的基因组DNA为模板扩增得到了含gD主要抗原表位编码区的片段,将该PCR产物克隆到pGEM-T载体上,酶切后插入原核表达载体pET-32a的T7启动子下游.构建的重组质粒pET-gD经IPTG诱导,在大肠杆菌BL21( DE3)中获得了高效表达.SDS-PAGE 结果显示,表达产物分子质量约为45.2 ku,主要以包涵体形式存在.表达产物用His 亲和层析柱纯化.Western blotting结果显示,该纯化蛋白能与猪伪狂犬病病毒抗体阳性血清发生特异性反应,表明该重组蛋白具有良好的抗原反应性,可以作为猪血清伪狂犬病病毒抗体诊断用抗原.【期刊名称】《中国畜牧兽医》【年(卷),期】2011(038)011【总页数】4页(P83-86)【关键词】伪狂犬病病毒;gD糖蛋白;主要抗原表位;原核表达【作者】罗飞;李宇琴;周洁;南文龙;陆明哲;陈义平【作者单位】中国动物卫生与流行病学中心诊断试剂研究室,山东青岛 226032;扬州大学兽医学院,江苏扬州 225009;中国动物卫生与流行病学中心诊断试剂研究室,山东青岛 226032;扬州大学兽医学院,江苏扬州 225009;中国动物卫生与流行病学中心诊断试剂研究室,山东青岛 226032;中国动物卫生与流行病学中心诊断试剂研究室,山东青岛 226032;中国动物卫生与流行病学中心诊断试剂研究室,山东青岛226032;中国动物卫生与流行病学中心诊断试剂研究室,山东青岛 226032【正文语种】中文【中图分类】Q78伪狂犬病（pseudorabies，PR）是由伪狂犬病病毒（pseudorabies virus，PRV）引起的多种家畜和野生动物的一种重要传染病，其主要临诊特征为发热、奇痒（猪除外）及脑脊髓炎。
伪狂犬病病毒野毒株与gE基因缺失疫苗株微滴数字PCR鉴别方法的建立LAN De-song;WEI Shu;GU Gui-bo;HOU Zhen-zhong【摘要】为建立伪狂犬病病毒(PRV)野毒株与gE基因缺失疫苗株的鉴别诊断和准确定量的微滴数字PCR(ddPCR)方法,本研究以PRV gD和gE基因为靶基因,设计并合成了2套特异性引物和TaqMan探针,建立了分别针对PRV gD和gE基因的ddPCR方法.结果显示,本研究建立的ddPCR方法能够特异性地鉴别检测PRV野毒株和疫苗株,与圆环病毒2型、猪瘟病毒、猪流感病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒等均无交叉反应;该方法针对PRV gD、gE基因的检测限分别为3.9拷贝/μL、2.3拷贝/μL,分别比相应的荧光定量PCR (qPCR)方法敏感性高10倍和5倍;针对PRV gD、gE基因的批内和批间重复性试验结果变异系数(C.V)均小于4％;通过对45份临床样品的检测,结果显示,与病毒分离方法相比,ddPCR方法敏感性为91.7％,特异性为97.2％,符合率为97.8％;与ddPCR方法相比,qPCR的敏感性为83.3％,特异性为94.3％,符合率为95.6％.本研究建立的ddPCR方法在检测低拷贝临床样品时敏感性更高、特异性强、重复性好,可以作为PRV野毒株与疫苗株的鉴别、准确定量的有效检测手段.【期刊名称】《中国预防兽医学报》【年(卷),期】2018(040)012【总页数】6页(P1137-1141,1156)【关键词】伪狂犬病病毒;野毒株;gE基因缺失疫苗株;微滴数字PCR;鉴别;定量检测【作者】LAN De-song;WEI Shu;GU Gui-bo;HOU Zhen-zhong【作者单位】【正文语种】中文【中图分类】S852.65伪狂犬病病毒(Pseudorabies virus，PRV)为疱疹病毒科、α疱疹病毒亚科、水痘疱疹病毒属成员之一，该病毒具有广泛的宿主范围，能够感染大多数哺乳动物及一些禽类使其发生伪狂犬病(Pseudorabies，PR)，该病以发热、奇痒(猪除外)和脑脊髓炎为主要特征[1]。
伪狂犬病毒的gE蛋白胞外区真核表达以及单克隆抗体制备郎巧利; 吴梦; 黄楠; 何琦琳; 葛良鹏; 杨希【期刊名称】《《生物技术通报》》【年(卷),期】2019(035)011【总页数】8页(P96-103)【关键词】伪狂犬病毒; gE; 真核表达; 单克隆抗体【作者】郎巧利; 吴梦; 黄楠; 何琦琳; 葛良鹏; 杨希【作者单位】重庆市畜牧科学院生物工程研究所重庆 402460【正文语种】中文伪狂犬病（Pseudorabies，PR）是的一种由伪狂犬病毒（Pseudorabies virus，PRV）感染引起的，能引发多种动物奇痒、发热、脑脊髓炎的急性传染病，又称Aujeszky病。
其主要感染猪，仔猪感染后表现为严重的中枢神经症状，引发急性死亡，死亡率可达100%。
成年猪感染后可长期潜伏带毒，引发种猪不育、妊娠母猪繁殖障碍等症状，给我国养猪业造成了极大的经济损失［1-2］。
PRV是猪疱疹病毒I型病毒，属于疱疹病毒科和α-疱疹病毒亚科，是双链线状DNA病毒。
其中，gE是PRV重要的毒力基因，全长1.7 kb，位于病毒基因组US区，编码的蛋白属于I型跨膜糖蛋白［3］，在介导细胞之间病毒的扩散、细胞的感染融合、病毒粒子的释放以及病毒侵袭神经系统等方面均起着重要作用［4-5］。
近年来，PRV已在很多国家养猪业中得到净化，中国也颁布了相关的净化计划。
gEELISA诊断技术和gE基因缺失疫苗作为目前伪狂犬病防控的主要手段，是伪狂犬病能否净化的关键［6］。
目前国内外报道中［7-14］，PRV gE蛋白的表达方式主要有原核表达、昆虫细胞表达和酵母细胞表达3种。
然而，原核表达系统的缺点是包涵体蛋白不易纯化、蛋白修饰不完整、表达的蛋白生物活性低。
昆虫细胞表达系统的缺点是效率比较低，载体构建时间长，杆状病毒表达系统所能表达的外源蛋白基本为非分泌蛋白，不能表达带有完整N联聚糖的真核糖蛋白。
而酵母表达系统存在克隆基因的表达量低，发酵时间长，不正确的蛋白糖基化及抗细胞分裂，培养上清多糖浓度高不利于纯化等缺点。
检测猪伪狂犬病病毒gE抗体红细胞凝集试验的建立及应用廖文军;吴健敏;覃绍敏;袁书智;陈凤莲;华俊;谢彬【摘要】以纯化的抗人红细胞单链抗体(ScFv)-猪伪狂犬病病毒(PRV)gE蛋白双功能融合蛋白为抗原,建立了检测猪伪狂犬病毒gE抗体的红细胞凝集试验.利用方阵滴定试验筛选出最佳抗原T作浓度为55 gg/mL,血清最佳稀释度为1:20,作用时间15 min,与猪瘟(CSF)、猪细小病毒(PPV)、猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)、猪乙型脑炎(JE)、猪布氏杆菌病(Brucellosis)阳性血清和PRV gE缺失疫苗接种的猪免疫血清均不出现红细胞凝集现象,与PRV标准阳件血清反应出现肉眼可见的凝集圈.与美国进口的PRV抗体检测gE-ELISA诊断试剂盒榆测结果比较,50份猪血清的阴、阳性检出符合率均为100%.红细胞凝集试验检测方法具有操作简便、敏感性和特异性较高的特点,可用于PRV野毒感染的快速筛查.【期刊名称】《中国畜牧兽医》【年(卷),期】2010(037)002【总页数】4页(P162-165)【关键词】猪伪狂犬病病毒;红细胞凝集试验;gE基因;抗体检测【作者】廖文军;吴健敏;覃绍敏;袁书智;陈凤莲;华俊;谢彬【作者单位】广西兽医研究所,南宁530001;广西兽医研究所,南宁530001;广西兽医研究所,南宁530001;南宁惠朋动物药业有限责任公司,南宁530001;南宁惠朋动物药业有限责任公司,南宁530001;广西兽医研究所,南宁530001;南宁惠朋动物药业有限责任公司,南宁530001【正文语种】中文【中图分类】S852.4猪伪狂犬病是由猪伪狂犬病病毒(pseudorabies virus,PRV)引起的猪和多种动物共患的一种急性传染病(Salwa等,2004)。
PRV主要引起仔猪的高死亡率和妊娠母猪的繁殖障碍,流行广泛,一旦传入猪群,将导致巨大的经济损失,且很难根除(Ao等,2003)。
防控措施-养猪技术猪伪狂犬病是由猪伪狂犬病病毒引起的猪的急性传染病。
该病在猪呈暴发性流行。
可引起妊娠母猪流产、死胎，公猪不育，新生仔猪大量死亡，育肥猪呼吸困难、生长停滞等，是危害全球养猪业的重大传染病之一。
该病特点是能够长时间带毒、散毒,且各种应激因素都可能导致这种潜伏感染暴发疾病。
所以必须加强防治。
下面具体来了解一下：猪伪狂犬病的临床症状猪伪狂犬病的诊断及防控措施。
1、临床症状随着猪年龄的不断增长，患病后会表现出不同的临床症状。
新生仔猪患病后会表现出眼睛周围发红，双眼紧闭，陷入昏睡，体温升高达到41-42°C，呼吸困难，有混杂泡沫的黏液从口角流出，部分发生呕吐、腹泻。
乳猪患病后两耳后倾，初期受到刺激会兴奋且呜叫，后期受到任何刺激都不会叫出声，只会导致局部肌肉发生震颤；眼睑发生水肿，腹部存在粟粒大小的紫色斑点，部分甚至全身都呈紫色；初期行走摇晃，部分甚至后退行走，非常容易跌倒，之后会倒地不起，四肢不断划动，头颈后仰，往往呈现间歇性抽搐，肌肉痉挛，角弓反张，经过4T0min又能够站起。
病程持续最短时只有4-6h，最长时可达到5天，通常在2-3天。
患病仔猪断奶前后如果排出黄色水样稀粪，死亡率能够达到100%。
大于2月的猪患病后具有较轻的症状，且随着年龄的增长，基本不会表现出神经症状，通常表现出精神萎靡，咳嗽，呼吸困难等。
妊娠母猪患病后，体温能够升高大约o.5C，精神萎靡,食欲不振或者完全废绝，咳嗽，呈现腹式呼吸，伴有便秘，且容易发生延迟分娩、流产以及死产。
对于妊娠后期患病的母猪，尽管能够产出活仔猪，但由于其具有较差的生活力，一般会在出生1-2天内表现出神经症状，最终发生死亡。
2、实验室诊断细菌分离培养。
在无菌条件下，取病死猪的心血、肝脏、脑组织进行抹片，接着进行染色镜检，没有发现细菌。
同时，将以上病料在马丁肉汤及鲜血琼脂平板接种，置于37°C体条件下进行24-48h培养，也没有长出细菌。
Chinese Journal of Animal Infectious Diseases中国动物传染病学报2023,31(2):126-132·研究论文·猪伪狂犬病病毒gE 蛋白原核表达及野毒抗体间接ELISA 检测方法的建立与应用郭忠欣1，王天奇2（1.洛阳市动物疫病预防控制中心，洛阳471000；2.河南科技大学，洛阳471000）摘 要：为了建立一种简单、快速的猪伪狂犬病病毒（PRV ）野毒抗体检测方法，试验采用原核表达技术对PRV 流行毒株的gE 蛋白进行了原核表达，以表达的重组蛋白作为包被抗原建立了检测PRV 野毒抗体的间接ELISA 检测方法。
结果表明：获得了以包涵体形式表达的重组gE 蛋白，经W estern blot 鉴定表明重组gE 蛋白具有良好的免疫学活性，以该蛋白作为包被抗原建立的检测PR V 野毒抗体的间接ELISA 方法检测PR V 疫苗免疫血清、CSFV 、PRRSV 、PCV -2、PPV 、PEDV 、FMDV 阳性血清均为阴性，检测PR V 野毒阳性血清的最低检出效价为1∶10 240，批内和批间重复性试验的变异系数分别为2.19%~3.33%和3.01%~4.40%，与国外商品化gE-ELISA 试剂盒的符合率达98.72%，应用该ELISA 检测河南省部分地区采集的1128份猪血清样品，PR V 野毒抗体阳性率为8.07%。
说明建立的PR V 野毒抗体间接ELISA 检测方法具有良好的特异性、敏感性、重复性和临床适用性，为PR V 野毒抗体的流行病学监测和净化提供了技术支持。
关键词：猪伪狂犬病病毒；gE 蛋白；原核表达；野毒抗体；间接ELISA 中图分类号： S858.28文献标志码： A文章编号：1674-6422（2023）02-0126-07Development and Application of Indirect ELISA for Detection of Antibodies Against PRVand Prokaryotic Expression of gE ProteinGUO Zhongxin 1, WANG Tianqi 2(1. Luoyang Animal Disease Prevention and Control Center, Luoyang 471000, China; 2. Henan University of science and technology,Luoyang 471000, China)收稿日期：2020-12-11作者简介：郭忠欣，男，本科，高级兽医师，主要从事动物疫病防控工作通信作者：王天奇，E-mail：*************.cn Abstract: In order to develop a simple and rapid method for the detection of antibodies against P seudorabies virus (PRV), the gE protein was expressed by prokaryotic expression technology and the expressed recombinant protein was used as the coating antigen for an indirect ELISA method. The results showed that the recombinant gE protein expressed in the form of inclusion body and had good immunological activity. The indirect ELISA was then developed for detection of PRV wild-type antibodies. The positive sera of PRV vaccine, CSFV , PRRSV , PCV-2, PPV , PEDV and FMDV were all negative. The lowest detectable dilution of PRV wild virus positive serum was 1:10240. The coeffi cients of variation of intra and inter batch repeatability tests were 2.19%-3.33% and 3.01%-4.40%, and the coincidence rate with foreign commercial gE-ELISA kit was 98.72%. Total 1128 pig serum samples were collected from some areas of Henan province and tested for the positive rate at 8.07%. The results showed that the indirect ELISA method developed here had good specifi city, sensitivity, repeatability and clinical applicability, which provided technical support for the epidemiological monitoring and eradication of PRV infection.Key words: Pseudorabies virus; gE protein; prokaryotic expression; PRV antibody; indirect ELISA· 127 ·郭忠欣等：猪伪狂犬病病毒gE 蛋白原核表达及野毒抗体间接ELISA 检测方法的建立与应用第31卷第2期猪伪狂犬病（pseudorabies, PR）是由猪伪狂犬病病毒（Pseudorabies virus, PRV）引起的一种急性、接触性传染病[1-2]，该病一直都是严重危害我国养猪业的主要传染病之一，尤其自2011年以来PRV 变异毒株的流行给我国养猪产业造成了巨大的经济损失[3-5]。
