伪狂犬病活疫苗
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刚断奶的猪什么时候打伪狂犬疫苗比较好?这是一个很实际的问题,因为伪狂犬病是一种常见的猪病,而伪狂犬疫苗是预防伪狂犬病的重要手段。
那么,什么时候打伪狂犬疫苗比较好呢?
我们需要了解一下伪狂犬病的传染途径和症状。
伪狂犬病是由伪狂犬病病毒引起的一种急性、传染性疾病。
病毒主要通过唾液、鼻涕、粪便等分泌物传播,猪只要接触到被感染的猪或者其分泌物,就有可能感染上伪狂犬病。
病猪的症状主要包括食欲不振、发热、呼吸急促、神经症状等。
那么,什么时候打伪狂犬疫苗比较好呢?猪只要断奶后就可以开始打伪狂犬疫苗了。
因为猪只有在断奶后才能开始进食固体饲料,而固体饲料可能会受到污染,容易成为病毒的携带者,因此断奶后尽早打伪狂犬疫苗可以有效预防伪狂犬病的发生。
我们还需要注意猪只打伪狂犬疫苗的时间间隔。
猪只需要在断奶后的第1、2、4个月分别打一次伪狂犬疫苗,以后每年打一次即可。
这样可以保证猪只的免疫力,预防伪狂犬病的发生。
刚断奶的猪只要尽早开始打伪狂犬疫苗,可以有效预防伪狂犬病的发生。
我们还需要注意猪只打伪狂犬疫苗的时间间隔,以保证猪只的免疫力。
在猪只的生长过程中,我们需要时刻关注它们的健康状况,及时进行疫苗接种和治疗,以保证猪只的健康和生长。
伪狂犬病活疫苗(基因缺失)
孔令达
【期刊名称】《畜牧兽医科技信息》
【年(卷),期】2000(000)011
【摘要】伪狂犬病是对猪、牛、绵羊威胁很大的一种传染病。
哈尔滨兽医研究所的科技人员根据现地存在的问题对其进行了研究。
本品由伪狂犬病弱毒株经蚀斑挑选,培养增殖后,加适量稳定剂冷冻真空冻干制成基因缺失疫苗。
该产品为淡黄色、疏松的海绵状团块,加稀
【总页数】1页(P13-13)
【作者】孔令达
【作者单位】副研究员
【正文语种】中文
【中图分类】S859.79
【相关文献】
1.猪伪狂犬病病毒gE-/gI-/TK-多基因缺失活疫苗对猪的安全性与免疫效力研究[J], 吕素芳;郭广君;魏凤;王文秀;董炳梅;毕研丽;苗立中;沈志强
2.猪伪狂犬病基因缺失灭活疫苗(JS-2012-△gI/gE株)最小免疫剂量测定 [J], 童武;王涛;郑旭晨;单同领;童光志;李国新;郑浩;刘飞;梁超;田青;李林;曹艳云;武吉强
3.猪伪狂犬病基因缺失灭活疫苗(JS-2012-△gI/gE株)的制备及免疫效力评价[J], 童武;王涛;郑旭晨;单同领;童光志;李国新;郑浩;刘飞;梁超;李林;田青;曹艳云;武吉强
4.猪伪狂犬病基因缺失活疫苗SA215株的生物学特性及临床应用 [J], 王印
5.猪伪狂犬病病毒基因缺失灭活疫苗(LA-A株)的最小免疫剂量和制品保存期的研究 [J], 乔永峰; 侯继波; 范红结; 王继春; 郭容利; 宋增财; 刘娅梅; 许梦微; 郑亚婷; 陈赛赛; 王志胜; 张传健
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2021年第6期浙江畜牧兽医猪伪狂犬病疫苗及其免疫 近年来,猪伪狂犬病病毒在国内猪场的阳性感染率居高不下,严重威胁养猪业的健康发展。
而养殖场户病急乱投医,随意选择疫苗,不按程序免疫,首免日龄不正确,甚至多种疫苗轮番使用等,免疫效果往往事与愿违。
笔者通过多年的免疫实践与调查研究,认为只要抓住伪狂犬病毒易感的关键时间节点,避开母源抗体干扰,选用高效安全疫苗,并科学掌握免疫的时机和方法,就能达到比较理想的效果。
现将具体做法介绍于下,与同行探讨。
1 常用的疫苗种类猪伪狂犬病毒属于甲型疱疹双链DNA病毒,虽然只有一个血清型,但毒力有强弱之分,毒株的致病性也有高有低。
近年来,我国科研团队已经分离到多个不同的毒株,证明猪伪狂犬病毒毒株已经发生变异,且不同毒株感染同一动物时,病毒可以重组,产生更强毒力的毒株,引起新的疫情暴发。
因此,对合理选择疫苗预防控制该病提出了较高的要求。
目前,有多种疫苗可用于预防控制与净化猪伪狂犬病,现简要介绍于下。
1.1 灭活疫苗 灭活疫苗安全性较高,不易引起散毒与潜伏感染,在世界各地区都有应用。
由于其难以诱导细胞毒T细胞产生反应(CTL),因而只会产生体液免疫,甚至不能引起细胞免疫的缺陷,同时,接种后产生的抗体滴度可随着时间的推移而逐渐下降,因此,需要重复接种,且免疫剂量较大,成本费用较高,有时还易发生过敏反应。
1.2 自然缺失弱毒活疫苗 常规意义上的弱毒活疫苗,是将分离到的野毒株经非猪源细胞反复传代,加入突变剂培养而获得的疫苗。
国际上主流毒株都是Bartha和Buk株。
目前,国内猪场使用较多的常规基因缺失疫苗有Bartha株,SA215株,HB 98株和BUK株等。
其中,广泛使用的是gI/gE双基因缺失PR弱毒冻干活疫苗(Bartha k61。
也叫k61)。
一般而言,自然基因缺失弱毒活疫苗,仍有良好的免疫原性,且安全性高,价格又低廉,一直在防控中发挥着重要作用。
但缺点是主要的毒力基因TK基因没有缺失,有可能导致返强而致该病重新流行,同时还存在造成潜伏感染或向未免疫生猪散毒的可能性。
不同伪狂犬病活疫苗免疫效力比较陈娟;喻正军【摘要】为临床科学选用疫苗,对来自三个生物制品厂的伪狂犬病活疫苗的免疫效力进行了评价.试验选取35日龄伪狂犬阴性猪20头,试验根据疫苗接种情况分为5组,分别为:免疫疫苗稀释液的对照组(第一组)、免疫进口活疫苗组(第二组)、免疫国产活疫苗组(第三组)、免疫本公司ST细胞系增殖制备活疫苗组(第四组)、免疫本公司鸡胚成纤维细胞增殖制备活疫苗组(第五组),然后进行免疫监测和效力评价,观察不同疫苗组仔猪的抗体水平后攻毒保护情况.结果显示:一次免疫后各组抗伪狂犬病毒抗体水平增长缓慢,进行二次免疫后,抗体水平迅速增加并保持较高水平.攻毒后,从身体耐受性、体温变化、体重下降率以及gE抗体水平来看,第二组疫苗B和第四组疫苗D耐受性较强,较快恢复健康,体重下降率较小且gE抗体水平较高.%Immune Efficacy of pseudorabies vaccine from three bio-factories was evaluated to provide data for the selection of this kind of vaccine in practice.Twenty 35-day pigs with both sero-geative and pathogen negative was selected and divided into five groups,the first group was the blank control,the second to the fifth group was invidually intramuscular injected with one kind of imported vaccine from a famous company,one kind of vaccine from a company in China,ST origin vaccine from our factory,CEF origin vaccine from our factory.Antibody titres and immune efficacy was monitored at two time points.The data demonstrated antibody titres for the gB fragment of pocine pseudorabies rised slowly after the first innoculation,then this certain antibody titres for gB elevated rapidly and stably after the second vaccination.Furthermore,some clinicindex,including body resistaned,temperature fluctuation,weightloss,etc.and antibody levels for gE after poison attacking was comprehensively evaluated.The result showed that there were more tolerance,more recovery,higher gE antibody and less weight losing in the second and the fourth group.【期刊名称】《中国兽药杂志》【年(卷),期】2017(051)001【总页数】4页(P15-18)【关键词】伪狂犬病;活疫苗;免疫效力【作者】陈娟;喻正军【作者单位】湖南中岸生物药业有限公司,长沙 410000;湖南中岸生物药业有限公司,长沙 410000【正文语种】中文【中图分类】S852.5伪狂犬病是由伪狂犬病毒(Pseudorabies virus,PRV)引起的以发热,奇痒,脑脊髓炎为主要特征的一种烈性传染病。
母猪产前10天打伪狂犬可以吗?
母猪产前10天打伪狂犬是否有效,参考如下:
母猪产前10天打伪狂犬是有效的。
这一时间段是母猪接种过疫苗之后的最佳免疫时间段。
一般在母猪产前25-45天内接种伪狂犬疫苗,可以起到不错的防护效果。
母猪伪狂犬病每年都可能发生,尤其在冬春交替时,必须加强防范。
接种伪狂犬疫苗时的注意事项:
1、接种的猪必须健康,严禁给发热的病猪接种;
2、接种完疫苗后,用中药制剂增强母猪的抵抗力,同时做好猪场的消毒工作,避免出现被感染的猪。
3、接种疫苗后,猪可能出现过敏反应,个别母猪有呕吐现象,过敏不严重的约1天左右症状消失,呕吐严重的必须去兽医服务站使用抗过敏药物。
4、给母猪打伪狂犬疫苗一般注射2毫升(只能打灭活苗),在产前1个月对母猪注射疫苗,可以使母猪具有1年的免疫期。
补充资料:猪伪狂犬疫苗
猪伪狂犬疫苗是我国主要的猪免疫疫苗之一,猪场常用的伪狂犬疫苗是基因缺失苗。
当伪狂犬病传入猪场后,很难消灭。
在停止使用猪伪狂犬疫苗之后,猪可能会重新发作此病。
因此,在疫区进行疫苗接种的同时,还必须做好非疫区的卫生工作,以减少该病的发生与传播。
HB-98株”伪狂犬活疫苗将成主流?•点击次数:654•日期:2014-01-02 09:16•编辑:admin•来源:养猪信息网•评论目前国际上及国内大多数伪狂犬疫苗生产厂家都用经典毒株Bartha株,如哈尔滨维科、广东永顺、硕腾、勃林格、海博莱等都是以Bartha株疫苗为主打,而以HB-98株为主打的厂家为数不多,武汉科前生物制品有限公司是其中比较典型的一家企业。
为了解“HB-98株”伪狂犬疫苗的销售情况,以及所反映的问题,养猪信息网记者联系了武汉科前相关负责人,以探知一二。
“HB-98株伪狂犬疫苗使用群体在增加”据科前内部人士透露,“目前,武汉科前的伪狂犬疫苗目前在全国销量第一,2012年我们公司猪伪狂犬活疫苗HB-98株在全国销量达到8千万销售额,加上返赠给经销商的二千多万,实际销售了一个多亿的猪伪狂犬活疫苗HB-98,在而全国第二的厂家是3千万销售额。
”据称,相比较去年,科前公司的销售额基本都是按照30-40%的增长比例增加。
科前内部人士继续解释道,“今年销量的增加,一方面是使用伪狂犬活疫苗免疫的客户群增加,这点和去年开始全国各地普遍发生猪伪狂犬病有一定关系;另一方面也反映出使用猪伪狂犬活疫苗HB98株进行治疗的客户群在增加。
”“当前流行的猪伪狂犬毒株存在一定的变异”?据记者了解,实际上武汉科前并非只生产HB-98猪伪狂犬疫苗。
科前的伪狂犬产品一共有三种,分别是猪伪狂犬活疫苗HB-98株、伪狂犬活疫苗和猪伪狂犬灭活疫苗。
那为何猪伪狂犬活疫苗HB98株最受欢迎?受访者告诉记者,原因有:1)该疫苗的种毒为我国地方流行毒株,免疫原性强;2)该毒株定向缺失了伪狂犬主要毒力基因TK,因此不存在毒力返强,对种猪和仔猪均是安全、有效的;3)该毒株定向缺失了gG基因,强化VP22蛋白和免疫趋化因子双效作用,增强体液及非特异性免疫反应;可激发机体产生很好的α和β两种干扰素及细胞免疫因子,不仅对伪狂犬病具有很好的特异性免疫,而且对其它病毒性疾病具有很好的非特异性免疫,可以显著提高猪群对疫病的抵抗力;4)自然缺失了gE基因,可用于伪狂犬病的鉴别诊断和猪群伪狂犬病的根除与净化。
姓名:张克龙专业:动物科学院预防兽医学学号:1618305017作为新型疫苗使用的活的减毒的重组伪狂犬病毒的概述摘要:伪狂犬病病毒(PRV)是一种双链,猪源DNA病毒,其基因组大小约为150kb。
PRV具有许多非必需基因,其可以被编码异源抗原但对病毒繁殖没有有害影响的基因替代。
表达的天然和外来抗原的重组PRV能够刺激免疫应答。
在本文中,我们对当前具有控制动物中的病毒感染的可能的活减毒重组PRV和基于PRV的活载体疫苗进行概述。
简介1.1PRV背景伪狂犬病病毒(PRV)是疱疹病毒家族的一个成员,α疱疹病毒亚亚科和伪狂犬病(PR)或Aujezsky氏病的病原体。
感染PRV之后导致神经紊乱,呼吸困难,消瘦,年轻仔猪死亡,流产感染。
该病毒具有双链线性DNA基因组1.43×10 5 kb 的长度和含有独特的长区域(UL),独特的短区域(US),一个末端重复序(TRS),和内部重复序列(IRS)。
到目前为止,已经鉴定了至少11种不同的PRV糖蛋白(gB,gC,gD,gE,gG,gH,gI,gK,gL,gM或gN),并且编码这些蛋白质的基因已经测序。
PRV的必需糖蛋白包括gB gD,gH,gL和gK; 其他被可以被异源基因替代而不影响感染性或病毒繁殖,只要基本基因保持完整。
显示在关于在PRV基因组的基因插入常见的部位的示意图如图1.图1PRV基因组中用于插入外源基因的常见位点。
编码TK,PK,gG的,国电电力,GI和gE基因的基因是插入外源序列的最常见位点。
TK基因位于独特的长区(UL)内,并且PK,gG的,国电电力,GI和gE 基因基因位于独特的短区(US)内。
IR =内部重复序列; TR =末端重复序列。
附图不是按比例的。
已经研究了多价PRV疫苗的功效。
在这里,我们概括研究使用减毒重组PRV(rPRVs)作为疫苗候选的作为应用应用的进展,用于推动rPRV 载体疫苗的发展。
1.2减毒活PRV疫苗的简介重组PRV病毒最有希望改进现有疫苗和开发新的的途径以及即将开发新疫苗。
猪伪狂犬病是危害全球养猪业的重大急性传染病之一,该病在猪中呈暴发性流行,感染后可引起妊娠母猪流产、死胎,公猪不育,新生仔猪大量死亡,育肥猪呼吸困难、生长停滞等。
现如今,猪伪狂犬病在我国大大小小的猪场中出现得越来越普遍,那么这是为什么呢?我们又该如何防治?下面我们就一起来来了解一下猪伪狂犬病高发的原因以及防治措施。
为什么伪狂犬病会越来越普遍1.不良的后备母猪引入是猪伪狂犬病不稳定的重要因素在猪场中为了保证猪群正常生产,因此不断地引入后备母猪。
持续不断的引种增加了猪伪狂犬病的感染风险,造成猪伪狂犬病的散发或者流行。
所以引进的后备母猪一定要做好的狂犬病野毒的检测,不要引进阳性猪。
2.种猪长期带毒增加了仔猪感染几率目前母猪带毒普遍存在,带毒的妊娠母猪可通过胎盘感染胎儿,带毒的泌乳母猪可通过乳汁感染仔猪。
这就是我在上一帖当中要大家给哺乳仔猪腹泻时,用伪狂犬病疫苗加鸡瘟疫苗在一起治疗病毒性腹泻的原因。
另外在农村的散养户,由于自己不养公猪,都是外购精液。
很多养公猪的配种员,对公猪的伪狂犬病疫苗接种总是忽略。
所以公猪带毒危害更大,配种时可通过接触污染的阴道黏膜,或精液等途径感染。
所以公猪的疫苗工作也非常重要。
3.易感动物多,增加了伪狂犬病防控的难度伪狂犬病的自然宿主是猪,但是同时会感染犬猫、牛、绵羊、老鼠等。
如果猪场中饲养犬猫等,也会增加传播几率,猪场的灭鼠工作也非常重要。
4.免疫忽视是猪伪狂犬病不稳定的诱因近年随着猪病复杂化,大家多关注圆环病、蓝耳病、流行性腹泻、口蹄疫,但忽略了伪狂犬病的防控。
一般的人都认为只要猪有神经症状,那就表示可能有伪狂犬病。
孰不知保育猪如果有呼吸道疾病,有时候也是伪狂犬病在作怪。
因此,伪狂犬病的免疫在养猪过程中是一个不可忽视的免疫工作。
现在市面上无论是传统的经典毒株,还是改良后的三基因缺失苗,都是属于一个血清型。
在临床上,用经典毒株疫苗依然还是能给猪提供良好的免疫保护作用。
作为养殖户对伪狂犬病不要过多纠结病毒变异问题,只要提高防范意识,做好生物安全。
伪狂犬病活疫苗 Company number:【0089WT-8898YT-W8CCB-BUUT-202108】 伪狂犬病活疫苗 (Bartha-K61株)生产工艺规程 编制人: 年 月 日 审核人: 年 月 日 批准人: 年 月 日 目 录 一、目 的:伪狂犬病活疫苗(Bartha-K61株)生产工艺规程的方法和程序。 二、适用范围:适用于伪狂犬病活疫苗(Bartha-K61株)的生产的全过程 三、依 据:《伪狂犬病活疫苗(Bartha-K61株)制造及检验试行 规程》 四、责 任 者:生产车间、质管部。 五、正 文: Ⅰ 工艺流程及质量控制要点 Ⅱ 操作细则 1、制苗材料的制备 2、生产用种毒的制备 3、半成品的配制 4、配苗 5、疫苗的分装 6、疫苗的冻干 7、轧盖贴标 8、包装 Ⅲ 成品检验 Ⅳ 工艺卫生与人员卫生 Ⅴ 生产设备一览表 Ⅵ 包装机检查方法 Ⅶ 物料平衡 Ⅷ 劳动定员及劳动保护 吉林和元生物工程有限公司GMP管理文件
题 目 伪狂犬病活疫苗(Bartha-K61株)生产工艺规程 编 码: SOP-SC- - 共 13 页 制 定 审 核 批 准 制定日期 审核日期 批准日期 颁发部门 办公室 颁发数量 生效日期 分发单位 办公室、生产技术部、质管部
一、目 的:规定制造伪狂犬病活疫苗(Bartha-K61株)的方法和程序。 二、适用范围:适用于伪狂犬病活疫苗(Bartha-K61株)的生产的全过程 三、依 据:《伪狂犬病活疫苗(Bartha-K61株)制造及检验试行规程》 四、责 任 者:生产车间、质管部。 五、正 文: 【品 名】 伪狂犬病活疫苗(Bartha-K61株) 【质量标准】 本企业《伪狂犬病活疫苗(Bartha-K61株)质量标准》 【外 观】 本品为淡黄色海绵状疏松团块,易与瓶壁脱离,加稀释液后迅速溶解。
【规 格】 10头份/瓶、20头份/瓶、70头份/瓶 【储 藏】 在-15℃以下,有效期暂定为18个月 【作用与用途】 用于高致病性猪繁殖与呼吸综合征。免疫期为4个月。
【用法与用量】
1 按瓶签注明的头份加生理盐水稀释,耳根后部肌肉注射。
2 仔猪断奶前免疫1次,1头份/头。 3 母猪配种前免疫1次,1头份/头。
【成品代码】 C 【批 量】 40000瓶 I 工艺流程及质量控制要点
接 种 半成品检验 种 毒 制 备 轧盖贴标包装 入 待 检 库 成 品 检 验 不合格入报废品库 销 售 无 害 化 处 理 合格入成品鸡胚成纤维细胞制及检验
旋 转 培 养 收 获
不 合 格 合 格
无害化处理 分 装
冻 干
配 苗 伪狂犬病活疫苗(Bartha-K61株)质量控制要点 工 序 质量控制要点 质量控制项目 频次 毒种制备 种 毒 无菌检验 每批 病毒含量 每批
细胞制备 消 化 时间、温度 每批 细 胞 外源病毒检验 每批
毒液制备 接 种 接 种 量 每批 观 察 细胞再生状况 每批
半成品检验 无菌检验 每批 病毒含量 每批
配 苗 半成品、保护剂 无菌检验 每批 配苗比例 每批
分 装 分装过程 无菌检验 分装过程中前、中、后检验 分 装 量 间隔半小时标定分装量 冻 干 冻干曲线 共融点、真空度 每批
成品检验 成 品 理化指标 每 批 无菌检验 每 批 鉴别检验 每 批 效力检验 每 批 安全检验 每 批 外源病毒检验 每 批 支原体检验 每 批 II 操作细则 本品系用伪狂犬病病毒弱毒株接种于鸡胚成纤维细胞收获感染病毒液,加适宜稳定 剂,经冷冻干燥制成,用于预防猪、牛及绵羊伪狂犬病。 1 制苗材料的制备 条件准备 根据细胞制备所需物品及设备条件,进行全面准备。 按使用时间,提前做好灭菌工作后将准备好的各种物品提前移入洁净工作间待用。 在工作开始前30~40min,按净化级别要求调整送风量,达到洁净级别要求。 操作规则 细胞的制备 发育良好的9~10日龄SPF鸡胚。 选择9~10日龄发育良好的SPF鸡胚,先用碘酒棉消毒蛋壳气室部位,无菌取出鸡胚,去头、四肢和内脏,放入灭菌的玻璃器皿中,用汉克氏液洗涤胚体,用灭菌剪刀剪成米粒大小的组织块,再用汉克氏液洗涤2~3次,然后加%胰酶溶液(每胚4ml),~℃消化20~30分钟,吸出胰酶溶液,用汉克氏液洗涤2~3次再加入适量的营养液(用含5%~10%犊牛血清乳汉液,加适宜的抗生素适量)吹打,用4~6层纱布过滤,制成每1ml含活细胞数约100~150万的细胞悬液,分装于培养瓶中进行培养,形成单层后备用。 细胞培养物应无细菌、霉菌(见《无菌(纯粹)检验标准操作规程》)和支原体(见《支原体检验标准操作规程》)污染,无特异性病变。 将细胞冻融液接种Marc-145细胞,应不出现任何病变(见《外源病毒检测标准操作规程》)。 清场和记录 工作结束后,应全面清场,对工作间、所用器具、玻璃器皿、物料及废弃物等应按规定分别进行处理。 全面填写《生产工序记录》。 2 生产用毒种的制备 条件准备 根据毒种制备所需物料及设备条件,进行全面准备。 按使用时间,将准备好的各种物品提前移入洁净工作间待用。 在工作开始前30~40min,按净化级别要求调整送风量,达到洁净级别要求。 操作规则 制苗用病毒液的制备 细胞单层培养 将扩大培养的种子细胞接种到转瓶中培养,控制转速9~12转/小时。 接种 取所需数量的、细胞覆盖率达到80%以上的细胞转瓶,弃去生长液,按2%(V/V)接种病毒,加入含2%胎牛血清的细胞培养液,37°C旋转(9~12转/小时)培养。 收获 在显微镜下观察由病毒引起的细胞病变(CPE),直至CPE达到70%以上收获细胞培养物,反复冻融1次,经离心或过滤除去细胞碎片,冻存于-40°C以下。 毒种鉴定 毒标准 病毒含量 将毒种用无血清培养基做10倍系列稀释,取10-4、10-5、10-6、10-74个稀释
度,分别接种于96孔细胞板,每个稀释度接种6孔,每孔,设置正常的细胞对找孔,放置5%CO2,37℃下培养观察3~5日,根据Reed-Muench法计算TCID50。病毒含量应≥。
鉴别检验 中和试验:将毒种用无血清培养基稀释成103TCID50/mL,取与等量呼吸综合征病
毒特异性阳性血清混合,同时设病毒对照组和正常细胞对照组,37℃作用1小时后,接种Marc-145细胞培养板,观察5日。应不产生细胞病变(CPE)。 病毒基因鉴定 应用下列引物进行RT-PCR检测,毒种可扩增出581bp的特异性条带,以而猪繁殖与呼吸综合征病毒NVDC-JXA1-R株为代表的高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒以及其他猪繁殖与呼吸综合征病毒核酸为阴性(猪繁殖与呼吸综合征病毒 JXA1-R株RT-PCR检测方法见附注3)。 U1 ATTTGAATGTTCGCACGGTCTC D2 CGGAACCATCAAGCACAACTCT 毒力
对仔猪的毒力 用JXA1-R-R株毒种(≥mL)接种4~6周龄抗原猪繁殖与呼吸综合征病毒、抗体阴性仔猪(阴性猪标准见附注1)5头,每头颈部肌肉注射2mL,同时设5头阴性猪作对照,隔离饲养。接种猪逐日测量体温,观察临床症状,均不发病(发病猪判定标准见附注2)。 对妊娠母猪的毒力 用JXA1-R-R株毒种(≥mL)接种怀孕80~90天的母猪3头,每头颈部肌肉注射2mL,同时设同期怀孕母猪3头做对照,隔离饲养,观察母猪临床症状和分娩产仔状况。怀孕母猪应不发生流产,所产仔猪的存活率与未接种对照组无统计学差异。 免疫原性 取4~6周龄猪繁殖与呼吸综合征病毒抗原、抗体阴性猪(阴性猪标准见附注1)10头,其中5头肌肉注射JXA1-R-R株毒种2mL(mL),另5头作为对照,同条件下隔离饲养。28日后,所有猪肌肉注射检验用强毒NVDC -JXA1株病毒培养液(病毒含量≥mL)3mL,每天测温并观察21日。对照猪均应发病,且至少2头死亡,免疫猪应至少4头保护(发病猪判定标准见附注)。 纯净 按现行《中国兽药典》进行检验,应无细菌、霉菌、支原体和外源病毒污染。 基础种子代数82~90代。 种毒保存 -70℃下,保存期暂定为12个月。 强毒标准 病毒含量 将毒种用无血清培养基做10倍系列稀释,取10-3、10-4、10-5、10-64个稀释度,分别接种于96孔细胞板,每个稀释度接种6孔,每孔,在37℃下培养观察5~7日,根据Reed-Muench法计算TCID50。病毒含量应≥mL。 对猪的毒力 取8~10周龄的猪繁殖与呼吸综合征病毒抗原抗体阴性猪(阴性猪标准见附注1)5头,每头猪肌肉注射检验用强毒NVDC-JXA1-R(~mL)3mL,每天测温并观察21
日。猪均应发病,且至少2头死亡。 毒种代次 5~6代。 毒种保存 在-70℃以下,保存期暂定为12个月。 3 细胞系 病毒培养用细胞为Marc-145,由中国动物疫病预防控制中心鉴定、保管和供应。 细胞标准 细胞形态 用含8%犊牛血清的DMEM细胞培养液,37℃、5%CO2培养2h即可贴壁,24h内可长成单层。显微镜下,细胞呈三角形、多角形、圆形等多种形态。 外源病毒检验 3取2个细胞单层,每个单层至少6cm2,培养7天,每日观察细胞,应无细胞病变。
血吸附病毒检验 按现行《中国兽药典》进行检验,应无红细胞吸附现象。 其它特定病毒的检验 采用PCR或RT-PCR方法检测,应无BVDV、PCV、CSFV、PPV、PRV和JEV污染。 胞核学检查 对不同传代水平的细胞,取50个处于有丝分裂中期的细胞进行检查。在基础细胞库细胞中存在的染色体标志,在最高代次细胞中也应存在。与基础细胞库的细胞相比,所有细胞的染色体模式数不得高出15%。核型必须相同。 致瘤性检验 用无胸腺小鼠至少10只,各皮下或肌肉注射107个待检细胞,同时用Hela细胞皮下或肌肉注射无胸腺小鼠,每只106个细胞,作为阳性对照,用鸡胚成纤维
细胞作为阴性对照。观察21日,Marc-145细胞应无肿瘤形成,阳性对照组应出现明显的肿瘤,阴性对照组应为阴性。