植物基因工程中的噬菌体载体
（优选）植物基因工程中的噬e，phage)简介
• 噬菌体是感染细菌、真菌、放线菌或螺旋 体等微生物的细菌病毒，结构简单、基因 数少，是分子生物学与基因工程的良好实 验系统。
• 噬菌体有严格的宿主特异性，只寄居在易 感宿主菌体内。
λ噬菌体
λ噬菌体是温和噬菌体，属长尾噬菌体科，头壳为直径约50nm的二 十面体，其内包裹一长线状双链DNA分子（46500bp）。
左臂：从A到J长约 20kb，其中的基因编 码构成头部、尾部、 尾丝对组装完整噬菌 体所需要的蛋白质。
中段：从J到N长约 20kb，是λDNA整合 和切出，溶原生长所 需的序列 ，但非溶菌 生长所必需
cos位点 （2） 载体与外源片断的酶切
噬菌体有严格的宿主特异性，只寄居在易感宿主菌体内。
（cohesive 右臂：长约10kb，控制溶菌和溶原生长最重要的调控基因和序列、以及λDNA复制起始均在这区域内。
至今已用噬菌体开发出许多插入型和置换型载体
end site） 插入型载体: ZAP,ZAP, gt10,gt11等
对：经溶吸过菌 附 裂生、解• 长穿生来入长在粘说、获，生得λ性中物噬D段合菌末N是成体非、颗A端必成粒双需熟，，的、再链。经且过分分两级子分者离的分的化两，核可个用苷于5提酸’取端噬序菌各体列DN有A互。1补2个，核当苷λ噬酸菌单体链感的染互宿补 主细胞后，其DNA可迅速通过粘性末端配对而成双链环 状DNA分子，这种由粘性末端结合形成的双链区域称为 cos位点。
如果将左右臂和中段都去除，仅留下λDNA而端包装 噬菌体所必需的cos序列，再加上质粒的复制序列、 标志基因、多克隆位点等，就可构成cos质粒或称为 粘粒的载体。粘粒可插入45kb长的外源DNA，然后用 λ噬菌体外壳蛋白包装成噬菌体，感染大肠杆菌后， 粘粒的DNA能以质粒的形式在细菌1, GEM-12,EMBL3,EMBL4等 在感染早期, 环状DNA 分子进行转录。 cos位点 （cohesive end site） λ噬菌体是温和噬菌体，属长尾噬菌体科，头壳为直径约50nm的二十面体，其内包裹一长线状双链DNA分子（46500bp）。 这种载体叫置换型载体（replacement vectors）。 噬菌体DNA 整合进宿主菌的基因组,然后像细菌染色体上的基因一样进行复制, 并传递给下一代细菌。 毒性噬菌体（virulent phage） 左右臂包含λDNA复制、噬菌体结构蛋白合成、组装成熟噬菌体、溶菌生长所需全部序列； DNA重组技术一般需要λ噬菌体进入溶菌状态。 噬菌体载体均含有与裂解生长所必须的基因片断，不同的载体采用不同的大肠杆菌宿主菌来增殖。
