紫外分光光度计标准曲线

一、测定溶液中物质的含量可见或紫外分光光度法都可用于测定溶液中物质的含量。

测定标准溶液（浓度已知的溶液）和未知液（浓度待测定的溶液）的吸光度，进行比较，由于所用吸收池的厚度是一样的。

也可以先测出不同浓度的标准液的吸光度，绘制标准曲线，在选定的浓度范围内标准曲线应该是一条直线，然后测定出未知液的吸光度，即可从标准曲线上查到其相对应的浓度。

含量测定时所用波长通常要选择被测物质的最大吸收波长，这样做有两个好处：⑴灵敏度大，物质在含量上的稍许变化将引起较大的吸光度差异；⑵可以避免其它物质的干扰。

二、用紫外光谱鉴定化合物使用分光光度计可以绘制吸收光谱曲线。

方法是用各种波长不同的单色光分别通过某一浓度的溶液，测定此溶液对每一种单色光的吸光度，然后以波长为横座标，以吸光度为纵座标绘制吸光度──波长曲线，此曲线即吸收光谱曲线。

各种物质有它自己一定的吸收光谱曲线，因此用吸收光谱曲线图可以进行物质种类的鉴定。

当一种未知物质的吸收光谱曲线和某一已知物质的吸收光谱曲线开关一样时，则很可能它们是同一物质。

一定物质在不同浓度时，其吸收光谱曲线中，峰值的大小不同，但形状相似，即吸收高峰和低峰的波长是一定不变的。

紫外线吸收是由不饱和的结构造成的，含有双键的化合物表现出吸收峰。

紫外吸收光谱比较简单，同一种物质的紫外吸收光谱应完全一致，但具有相同吸收光谱的化合物其结构不一定相同。

除了特殊情况外，单独依靠紫外吸收光谱决定一个未知物结构，必须与其它方法配合。

紫外吸收光谱分析主要用于已知物质的定量分析和纯度分析。

选几个体积梯度，然后稀释成相同的体积，得到了不同浓度C的几个标准溶液样组，用紫外分光光度计分别测得相应的吸光度A1、A2、A3……，然后要以浓度为横坐标，吸光度A为纵坐标，绘制曲线。

当然有时候根据实际需要，也会有小小的变动。

配制标准溶液，用紫外可见分光光度计测量，得到浓度与吸光度的曲线，并且利用线性拟合得到回归方程，直接利用Origin的线性拟合功能得到的方程往往截距不等于零，即方程的形式为y=A+Bx。

紫外分光光度法测定未知物1.仪器1.1紫外分光光度计（UV-1801型）；配石英比色皿（1cm）2个1.2容量瓶（100mL）：10个；容量瓶（250mL）1个1.3吸量管（10mL、5mL）：各1支1.4移液管（20mL、25mL、50mL）：各1支2.试剂2.1标准溶液（1mg/mL）：维生素C、水杨酸、苯甲酸、山梨酸、邻二氮菲分别配成1mg/mL的标准溶液，作为储备液。

2.2未知液：浓度约为（40~60ug/mL）。

（其必为给出的五种物质之一）3.实验操作3.1比色皿配套性检查石英比色皿装蒸馏水，以一只比色皿为参比，在测定波长下调节透射比为100%，测定其余比色皿的透射比，其偏差应小于0.5%，可配成一套使用。

3.2未知物的定性分析将五种标准储备液均稀释成10ug/mL的试液（配制方法由选手自定）。

以蒸馏水为参比，于波长200~350nm范围内扫描五种溶液，绘制吸收曲线，根据所得到的吸收曲线对照标准谱图，确定被测物质的名称，并依据吸收曲线确定测定波长。

五种标准物质溶液的吸收曲线参五种标准物质溶液的吸收曲线参五种标准物质溶液的吸收曲线参五种标准物质溶液的吸收曲线参考考考考附图附图附图附图。

3.3未知物定量分析根据未知液吸收曲线上测定波长处的吸光度，确定未知液的稀释倍数，并配制待测溶液3份，进行平行测定。

推荐方法3.3.1维生素C含量的测定：准确吸取1mg/mL的维生素C标准储备液50.00mL，在250mL容量瓶中定容（此溶液的浓度为200ug/mL）。

再分别准确移取1、2、4、6、8、10mL上述溶液，在100mL容量瓶中定容（浓度分别为2、4、8、12、16、20 ug/mL）。

准确移取20.00mL维生素C未知液，在100mL容量瓶中定容，于最大吸收波长处分别测定以上溶液的吸光度。

由标准曲线上查得未知液的浓度。

3.3.2苯甲酸含量的测定：准确吸取1mg/mL的苯甲酸标准储备液25.00mL，在250mL容量瓶中定容（此溶液的浓度为100 ug/mL）。

紫外分光光度计测定固体或粉末中的游离甲醛摘要：本文建立了一种采用紫外可见分光光度计测试易溶于水的固体或粉末样品中甲醛含量的方法。

通过样品蒸馏，馏出液中的甲醛与乙酰丙酮反应生成黄色化合物溶液，用紫外分光光度计在412nm波长下测定黄色溶液的吸光度值，通过标准曲线换算得到游离甲醛的含量。

结果表明，甲醛在0.04µg/mL~1.6µg/mL范围内线性良好（r2>0.999），回收率为98~99%，相对标准偏差<10%，方法定量限可低至5mg/kg，可用于测定固体或粉末样品中游离甲醛的含量。

关键词：固体；粉末；甲醛；蒸馏法；紫外可见分光光度计Determination of Formaldehyde in Solid or Powder by UVYanfen Huang Yufa MiaoAbstract: A method was established for testing the formaldehyde content in solid or powder samples that are easily soluble in water using a UV spectrophotometer.Through distillation, formaldehyde in the distillate reacts with acetylacetone to form a yellow compounds. The absorbance value of the yellow solution is measured using a UV spectrophotometer at a wavelength of 412nm, and the content of free formaldehyde is obtained through standard curve conversion. Theresults showed that formaldehyde have good linearity in the range of 0.04µg/mL~1.6µg/mL (r2>0.999), values of recovery in the range of98%~99%, the RSDs were less than 10%, and the quantitative limit of the method can be as low as 5mg/kg. It can be used to determine the content of free formaldehyde in solid or powder samples.Keywords: solid; powder; formaldehyde；distillation；UV spectrophotometer引言甲醛又称蚁醛，是一种无色、刺激性气体，化学式CH2O，易溶于水和乙醇。

紫外分光度计的标准曲线紫外分光度计是一种常用的分析仪器，广泛应用于化学、生物、药物等领域。

在使用紫外分光度计进行分析时，标准曲线是一个非常重要的概念。

标准曲线是指在一定条件下，用标准溶液测得的吸光度与物质浓度之间的关系曲线。

通过标准曲线，我们可以准确地测定未知溶液中物质的浓度。

本文将详细介绍紫外分光度计的标准曲线的建立方法及其应用。

一、标准曲线的建立方法。

1. 选择标准溶液。

在建立标准曲线之前，首先需要选择一系列浓度已知的标准溶液。

这些标准溶液的浓度应该覆盖到需要测定的物质的浓度范围。

同时，标准溶液的制备应该严格按照标准操作程序进行，以确保其浓度的准确性和稳定性。

2. 测定吸光度。

将所选标准溶液分别置于紫外分光度计样品池中，测定其在特定波长下的吸光度。

通常情况下，我们会选择物质的最大吸收波长进行测定。

3. 绘制标准曲线。

将测得的吸光度数据与标准溶液的浓度数据对应，绘制出吸光度与浓度的标准曲线。

通常情况下，标准曲线会呈线性关系，可以通过线性回归分析得到拟合直线方程，用于后续测定未知样品的浓度。

二、标准曲线的应用。

1. 测定未知样品的浓度。

在实际分析中，我们可以通过测定未知样品的吸光度，利用已建立的标准曲线，反推出其浓度。

这种方法简便快捷，且具有较高的准确性和可靠性。

2. 质量控制。

标准曲线也常用于质量控制中。

通过定期测定标准溶液的吸光度，检查标准曲线的稳定性，以确保分析结果的准确性。

3. 方法验证。

在建立新的分析方法时，我们也可以利用标准曲线对新方法进行验证。

通过比较新方法测得的标准溶液的浓度与已有方法的结果，评估新方法的准确性和可靠性。

三、注意事项。

在建立和应用标准曲线时，还需要注意一些事项：1. 标准曲线的制备应该在相同的条件下进行，如温度、湿度、光照等因素都应保持一致。

2. 标准曲线的测定应该重复多次，以确保结果的准确性和可靠性。

3. 在测定未知样品浓度时，应该选择与标准曲线范围相近的浓度进行测定，以提高测定的准确性。

紫外分光光度计标准曲线绘制步骤
绘制紫外分光光度计的标准曲线的步骤如下：
1. 准备标准溶液：选择适当的标准物质，制备一系列浓度递增的标准溶液，每个浓度至少重复3次。

确保标准物质的纯度和溶液的稳定性。

2. 调整仪器参数：将紫外分光光度计设置到所使用的检测波长，通常是所测化合物的最大吸收波长。

确保光度计的基线稳定。

3. 制备空白溶液：使用相同的溶剂制备一定体积的空白溶液，作为比色杯中的基准。

4. 测量标准溶液：将标准溶液依次倒入比色杯中，每次测量前都要搅拌均匀，并用空白溶液进行零位（基线）校正。

5. 记录吸光度数据：在每个标准溶液的浓度下测量吸光度值，并将其记录下来。

6. 绘制标准曲线：将吸光度值绘制在纵轴上，浓度值绘制在横轴上，使用适当的尺度和坐标轴标注。

通过将吸光度值与浓度进行拟合，可以得到标准曲线的方程。

7. 分析待测样品：使用相同的方法测量待测样品的吸光度，并通过标准曲线的方程计算出待测样品的浓度。

注意事项：
- 在测量吸光度之前，请确保比色杯是清洁干燥的，以防止污染和误差。

- 在每个浓度下进行多次测量，并计算平均值，以提高测量结果的准确性。

- 在制备标准溶液和测量过程中，严格控制温度和pH值，以确保结果的可靠性。

实验三 紫外分光光度法测定蛋白质一、原理由于蛋白质中酪氨酸和色氨酸残基的苯环含有共轭双键，因此蛋白质具有吸收紫外光的性质，吸收高峰在280nm 。

在此波长范围内，蛋白质溶液的光吸收值与其含量呈正比关系，可用作定量测定。

利用紫外吸收法测定蛋白质含量准确度较差，这是由于：(1)对于测定那些与标准蛋白质中酪氨酸和色氨酸含量差异较大的蛋白质，有一定的误差。

故该法适于测定与标准蛋白质氨基酸组成相似的蛋白质。

(2)若样品中含有嘌呤、嘧啶等吸收紫外光的物质，会出现较大干扰。

核酸强烈吸收波长为280nm 的紫外光，它对260nm 紫外光的吸收更强。

但是蛋白质恰恰相反，在280nm 的紫外吸收值大于260nm 的紫外吸收值。

利用这些性质，通过计算可以适当校正核酸对于测定蛋白质含量的干扰作用。

但是，因为不同的蛋白质和核酸的紫外吸收是不同的，虽然经过校正，测定结果还存在着一定的误差。

在测定工作中，可利用在280nm 及260nm 下的吸收差求出蛋白质的浓度。

蛋白质浓度(mg/ml)=1.45A280nm —0.74A260nm ，式中：A280nm 是蛋白质溶液在280nm 下测得的光吸收值；A260nm 是蛋白质溶液在260nm 下测得的光吸收值。

Warburg 和Christian 用结晶的酵母烯醇化酶和纯的酵母核酸作为标准，对有核酸存在时所造成的误差作了评价，并作出了一个校正表(如下)。

紫外吸收法测定蛋白质含量的校正因子F0.6565.500.8461.1160.001.750.6320.6070.5850.5650.5450.5080.4780.4220.3770.3220.2786.006.507.007.508.009.0010.0012.0014.0017.0020.000.8220.8040.7840.7670.7530.7300.7050.6710.6440.6150.5951.0811.0541.0230.9940.9700.9440.8990.8520.8140.7760.7430.6820.250.500.781.001.251.502.002.503.003.504.005.001.631.521.401.361.301.251.161.091.030.9790.9390.874校正因子核酸%A 280nm /A 260nm校正因子核酸%A 280nm /A 260nm注：一般纯蛋白质的A280nm/A260nm 值为约1.8，而纯核酸的A280nm/A260nm 值为约0.5。

紫外―可见分光光度计在药品检测中的应用药品分析是保证药品安全有效的重要手段，在药品的研究、生产、流通、使用和监督管理等环节中均有举足轻重的作用，其主要内容包括性状分析、鉴别、检查和含量测定等方面。

高效液相色谱仪、气相色谱仪、紫外分光光度计等是制药生产中常用的检测仪器。

其中，紫外分光光度计由于准确度高、测定限度低、设备简便、仪器成本低、易于操作等优点，已成为制药生产中必备的检测设备之一，用于药物鉴别、检查和含量测定等。

紫外-可见分光光度法是通过测定物质在紫外-可见光区（200-760nm）产生紫外-可见吸收光谱，根据吸收光谱的特性，对该物质进行定性和定量分析的方法。

其理论基础为朗伯-比耳定律，溶液的吸光度和吸光物质含量、液层厚度乘积成正比。

对于一般的紫外分光光度法，其测量的相对误差在1%～3%。

随着大量心得显色剂的合成及应用，尤其是有关多元络合物和各种表面活性剂的应用研究，推进了元素测定的灵敏度的大幅提高。

采用预富集和示差法，适用质量分数从常量（1%～50%）到痕量（10-10～10-8）。

紫外-可见分光光度法由紫外分光光度法和可见分光光度法两种方法构成，这两种方法在测定的原理、仪器、操作等方面皆相同。

因此，统称为紫外-可见分光光度法，测定仪器一般采用紫外-可见分光光度仪。

在各国药典中，药品的理化常数、鉴别、检查和含量测定等很多项目中，都能见到紫外分光光度法的应用实例。

在制药生产中，紫外分光光度法应用最多的是药物含量的测定、药物杂质检测、药物稳定性考察、释放度、药物负载行为测定及物质结构鉴定等方面。

目前利用紫外分光光度计分析的药物品种有维生素、抗生素、解热药、去痛药、降血压药、安定药、镇咳药、滴眼药、磺胺类药、利尿药、某些妇科药、痢疾药、腹泻药、抗肿瘤药、抗结核药等。

1 紫外分光光度法应用于药物含量测定紫外-可见分光光度法由于灵敏度较高，不仅可用于常量组分的含量测定，也可用于测定微量组分、超微量组分以及多组分混合物同时测定等，在药物分析中主要用于原料药含量测定、制剂含量测定、含量均匀度和溶出度的检查等。

紫外分光光度计的0%,t%基线概述说明以及解释1. 引言1.1 概述紫外分光光度计是一种常见的实验仪器，用于测量和分析样品中的紫外光吸收。

其原理是通过将紫外光传递到样品中并测量出射光强度与入射光强度之间的差异，从而得出样品的吸收特性。

在使用紫外分光光度计进行实验时，如何正确地建立基线非常重要。

1.2 文章结构本文将首先介绍紫外分光光度计的基本原理（第2.1节），然后详细描述0%基线和t%基线的概念以及其在紫外分光光度计中的应用（第2.2节和第2.3节）。

接下来，我们将进一步解释0%基线和t%基线技术在紫外分光光度计中的作用和原理，并对二者之间的关联与区别进行解析（第3节）。

随后，我们设计了一系列实验来验证这些概念，并对实验结果进行数据收集与分析讨论（第4.1节和第4.2节）。

最后，我们将总结本文的主要观点，并提出一些研究局限性及未来研究方向的建议（第5.1节和第5.2节）。

1.3 目的本文的目的是介绍紫外分光光度计中常用的基线建立技术，特别是0%基线和t%基线。

通过对这些技术的详细讨论和解析，读者将能够更好地理解紫外分光光度计实验中基线的重要性以及其在样品测量中的应用。

此外，本文还将通过实验验证和结果分析来支持和论证这些概念，并探索一些未来研究方向。

2. 正文:2.1 紫外分光光度计的基本原理紫外分光光度计是一种常用的分析仪器，它利用紫外光的吸收特性测定样品中的化学物质含量。

其基本原理是根据伯-朗比尔定律，即溶液中溶质浓度与吸收强度成正比。

紫外分光光度计通过分离紫外光谱中不同波长的组成部分，并测量样品在不同波长下的吸收强度来研究溶液中化学物质的含量。

2.2 0%基线的概念和重要性0%基线是指在实验开始之前，将仪器校准至无样品时所测得的相对强度值。

它代表了没有吸收物质存在时所测得的背景信号强度。

在使用紫外分光光度计进行实验测量时，必须先设定好0%基线值，以排除背景噪音对实验结果的影响。

0%基线十分重要，因为它提供了一个标准参照点，可以确保测量结果准确可靠。