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40中国处方药 第16卷 第7期·实验研究·均逐渐趋向正常值，而对照组中的小白鼠的SMC 内LPO 指标为22.3±0.1，SOD 指标为30.49±0.3，均处在异常且较高指标上，并且研究组小白鼠有效率为90%，对照组仅为10%，两组数据对比差异具有统计学意义（P ＜0.05）。
因此，当归补血汤对治疗动脉硬化病症有极好的疗效。
参考文献[1]胡冠英，张三印，杨苗. 当归补血汤治疗动脉粥样硬化的机制研究. 陕西中医学院学报，2014，37（1）:103-105.[2]乐智卿. 当归补血汤及黄芪、当归提取物对动脉粥样硬化大鼠血脂及斑块的影响.广州: 广州中医药大学，2009.[3]职玉娟. 当归补血汤及有效成分对动脉粥样硬化及心肌细胞凋亡的影响. 广州:广州中医药大学，2013.[4]林利生. 益本活血方治疗2型糖尿病合并脑梗塞的临床与实验研究.济南:山东中医药大学，2014.[5]佘玉清. 落新妇苷通过上调PPAR α/γ对大鼠糖尿病肾病的保护作用及机制探讨.扬州: 扬州大学，2017.吴茱萸具有较高的药用价值，在中药治疗应用中，具有散寒止痛、助阳止泻、降逆止呕等功效，能够用于厥阴头痛、寒疝腹痛、脘腹胀痛、五更泄泻等疾病治疗，且作用效果十分显著[1]，此外，在口疮以及高血压外治中，效果也比较突出。
吴茱萸中包含化学成分类型相对多样，其中以生物碱与柠檬苦素类化合物为主要有效成分；而生物碱中又以吴茱萸碱、吴茱萸次碱为主，在镇痛、止呕、抗炎、强心、血管扩张上作用功效显著，同时吴茱萸次碱还能够抵抗胃黏膜损伤[2]。
本研究对HPLC 法测定吴茱萸中吴茱萸碱与吴茱萸次碱含量进行研究，以供参考。
1 仪器与试剂本次实验使用仪器为Agilent1220型高效液相色谱仪、Agilent 紫外检测器以及EclipseXDB-C 18色谱柱（250 mm ×4.6 mm ，5 μm ）、HH-2数显恒温水浴锅、MettlerAE240电子天平、KQ318T 型超声清洗器（昆山市超声仪器有限公司生产）等，此外，实验试剂为吴茱萸碱、吴茱萸次碱对照品（均由成都彼祥生物科技有限公司购买，纯度≥98%）；实验使用甲醇、乙醇、乙酸乙酯为分析纯[3]，乙腈为色谱纯[4]，还包括纯化水、吴茱萸（产自江西新干县）等。
HPLC法测定吴茱萸超微速溶饮片中吴茱萸碱、吴茱萸次碱及柠檬苦素的含量目的建立一种同步测定吴茱萸超微速溶饮片中吴茱萸碱，吴茱萸次碱及柠檬苦素含量的高效液相色谱方法。
方法采用Hypersil ODS2 C18柱（4.6 mm×250 mm，5μm），岛津LC-20AD高效液相色谱仪，流动相为乙腈-水-四氢呋喃-冰醋酸（34︰64.7︰1.1︰0.2），流速：1.0 mL/min，检测波长：225 nm，柱温：30℃。
结果吴茱萸碱、吴茱萸次碱、柠檬苦素进样量分别在0.101 6～2.032μg（r2=0.999 9，n=6）、0.097 4～1.948μg（r2=0.999 9，n=6）、0.7010～14.02μg（r2=0.999 9，n=6）范围内与峰面积呈良好线性关系，平均回收率分别为100.37%（RSD=1.29%，n=6）、99.11%（RSD=0.83%，n=6）、99.30%（RSD=0.52%，n=6）。
结论该测定方法简便，测定结果准确，重复性好，可作为质量控制方法。
标签：吴茱萸碱；吴茱萸次碱；柠檬苦素；HPLC吴茱萸为芸香科植物吴茱萸Evodia rutaecparpa（Juss）. Benth，石虎E.rutaecarpa（Juss.）benth.var.offcinalis（Dode）Huang或疏毛吴茱萸E.rutaecarpa （Juss.）benth.var.Bodinieri（Dode）Huang的干燥近成熟果实，具有散寒止痛、降逆止呕、助阳止泻等功效[1]。
吴茱萸主要有效成分为生物碱类和柠檬苦素类，其中吴茱萸碱和吴茱萸次碱，具有镇痛和抗炎作用[2]，柠檬苦素具有调节体内胆固醇水平，防止动脉粥样化和除虫等作用[3]。
吴茱萸经超微粉碎后制成的饮片可提高中药成分的利用率，减少中药资源的浪费[4]。
本实验通过对吴茱萸超微速溶饮片的研究，建立了高效液相色谱法测定吴茱萸超微速溶饮片中吴茱萸碱，吴茱萸次碱及柠檬苦素含量的方法。
吴茱萸及其习用品药材中7个成分的HPLC含量测定建立HPLC同时测定吴茱萸及其习用品药材中柠檬苦素、吲哚类生物碱（14N-甲酰二氢吴茱萸次碱、吴茱萸碱和吴茱萸次碱）及喹诺酮类生物碱（1-甲基-2-正十一烷基-4（1H）-喹诺酮、吴茱萸卡品碱和二氢吴茱萸卡品碱）含量的方法。
采用YMC C18 （4.6 mm ×250 mm，5 μm）色谱柱；流动相为乙腈（A）-四氢呋喃（B）-5 mmol·L-1醋酸铵缓冲液（pH 3.8）（C），梯度洗脱；流速1.0 mL·min-1；柱温30 ℃；检测波长220，250 nm。
7个成分的分离度良好，标准曲线在检测范围内均呈良好线性，r=0.999 9。
加样回收率平均值为96.69%～102.4%，RSD为1.4%～3.1%。
该方法简便、准确，重复性好。
对5种18批吴茱萸类药材进行含量测定，结果显示7个被测成分在5种药材中均有分布，但含量差异很大。
16批正品吴茱萸中7个成分的总质量分数在9.46～69.9 mg·g-1，平均为28.2 mg·g-1。
密果吴萸中7个成分的总含量为25.8 mg·g-1，在正品含量范围内，略低于平均值；臭辣吴萸中7个成分的总质量分数为7.69 mg·g-1，低于正品的含量下限。
密果吴萸和臭辣吴萸与正品吴茱萸相比，主要成分一致，含量总体低于正品吴茱萸。
标签：吴茱萸；柠檬苦素；生物碱；含量测定；高效液相色谱法吴茱萸为传统中药，始载于《神农本草经》，列为中品。
其性味辛、苦，热，有小毒；具散寒止痛，降逆止呕，助阳止泻的功效。
主要用于治疗厥阴头痛，寒疝腹痛，寒湿脚气等[1]。
1977～2010年版《中国药典》均收载吴茱萸为芸香科植物吴茱萸Evodia rutaecarpa（Juss.）Benth.，石虎E. rutaecarpa（Juss.）Benth. var. officinalis （Dode）Huang或疏毛吴茱萸E. rutaecarpa（Juss.）Benth. var. bodinieri （Dode）Huang的干燥近成熟果实。
HPLC法测定吴茱萸碱分散片中吴茱萸碱的含有量及其均匀度盛蓉;宋英;呼梅;陈佳;朱璐璐
【期刊名称】《中成药》
【年(卷),期】2012(034)012
【摘要】目的建立吴茱萸碱分散片中吴茱萸碱的含有量及其均匀度的测定方法.方法采用高效液相色谱法,色谱柱为依利特C18柱(150 mm ×4.6 mm,5μm),流动相为乙腈-0.1％酸(每100 mLn酸溶液含2 mL四氢呋喃)(38∶62),体积流量为1 mL/min,检测波长为225 nm.结果吴茱萸碱在0.017 25 ～0.69μg范围内,吴茱萸碱峰面积值与进样量有良好线性关系,r=0.9999；平均回收率为98.45％,RSD为1.4％ (n=6)结论该方法简便且精确,重复性好,可用于吴茱萸碱分散片的质量控制.【总页数】4页(P2352-2355)
【作者】盛蓉;宋英;呼梅;陈佳;朱璐璐
【作者单位】成都中医药大学,四川成都610075
【正文语种】中文
【中图分类】R927.2
【相关文献】
1.高效液相色谱法测定四神片中吴茱萸碱和吴茱萸次碱含量 [J], 潘瑞玲;韩慧琴
2.HPLC法测定吴茱萸超微速溶饮片中吴茱萸碱、吴茱萸次碱及柠檬苦素的含量[J], 胡晓艳;陈乐;熊犇;熊学敏;邱卓星;唐细英
3.HPLC法测定复方吴茱萸碱纳米乳中吴茱萸碱的含量 [J], 晏子俊;李万玉;万坤;张景勍
4.高效液相色谱法测定左金胃内滞留漂浮型缓释片中吴茱萸碱和吴茱萸次碱含量[J], 周臻;孟繁姝;曹高
5.HPLC双波长法测定荜铃胃痛颗粒中吴茱萸碱和吴茱萸次碱的含量 [J], 耿冶飞;陈秀杰;龚亚飞;娄靖
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基于超高效液相色谱分析黄连、吴茱萸配伍药对的有效成分虞文妹;周宝玉【摘要】目的:评价通过超高效液相色谱(UPLC)分析黄连、吴茱萸配伍药对的有效成分.方法:选取4对不同产地的黄连、吴茱萸配伍药对进行研究,采用ACQUITY UPLC BEH C18作为本研究的色谱柱(1.7μm,100 mm×2.1 mm),柱温为40℃;加入2μL10℃的样品后,以乙腈(流动相A)-纯水加0.05％甲酸(流动相B),流速为0.4 mL/min进行梯度洗脱,建立UPLC-质谱(MS)指纹图谱分析方法.结果:在黄连、吴茱萸配伍药对的对照指纹图谱和样品指纹图谱的比较中,相对保留时间标定16个较有特征的共有峰分别与单味黄连药物及单味吴茱萸的指纹图谱特征峰比较,发现9、15和16号共有峰是黄连、吴茱萸都存在的特征峰,而1、2、13、14号共有峰仅吴茱萸方有的特征峰,余下共有峰为黄连药物的特征峰.9、15和16号黄连、吴茱萸配伍药对共有的特征峰,结合质谱分析和化合物质裂解规律,推测出木兰花碱、格陵兰黄连碱和1-甲基-2壬基-4(1H)-奎若酮等3中化合物.结论:采用UPLC-MS技术建立黄连、吴茱萸配伍药对有效成分,为黄连和吴茱萸药材的有效成分和质量评估提供参考.【期刊名称】《世界中医药》【年(卷),期】2018(013)011【总页数】4页(P2868-2871)【关键词】黄连;吴茱萸;配伍;药对;超高效液相;质谱;指纹图谱;有效成分【作者】虞文妹;周宝玉【作者单位】南京中医药大学附属常州市武进中医医院中药房,南京,213161;南京中医药大学附属常州市武进中医医院中药房,南京,213161【正文语种】中文【中图分类】R282药对又名对药，是医师在长期的临床疾病诊疗过程归纳和总结出来的宝贵用药经验，是临床用药复方的最小配伍单位[1]。
药对配伍一直是传统中药学的主要组成部分，历代医家对其十分重视，并一直在进行研究和改进；通过不同形式的配伍使用，药对或可通过相须、相使的作用以增强疗效、并对主药提供相辅作用而增强疗效，使方中诸药直达病所；或可通过相畏相杀而对组方中的药物进行相互制约而降低药物的不良反应[2-4]。
原药材检验标准操作规程目的：建立一个中药饮片原药材检验标准操作程序，确保检验结果准确可靠。
适用范围：中药原药材。
责任人：质量保证部主任、质量控制部主任、化验员。
标准来源：《中华人民共和国药典》2010年版一部、《安徽省中药饮片炮制规范》。
内容：1、性状取本品适量，放入白瓷盘中，用眼观察，可见以下性状特征：本品呈球形或略呈五角状扁球形，直径2～5mm 。
表面暗黄绿色至褐色，粗糙，有多数点状突起或凹下的油点。
顶端有五角星状的裂隙，基部残留被有黄色茸毛的果梗。
质硬而脆，横切面可见子房5室，每室有淡黄色种子 1 粒。
气芳香浓郁，味辛辣而苦。
2、鉴别主要使用仪器：电子分析天平、电子显微镜、紫外光灯等。
2.1显微鉴别：2.1.1 试液配制2.1.1.1水合氯醛试液:取水合氯醛50克，加水15毫升与甘油10毫升使溶解,即得。
2.1.1.2 甘油醋酸试液：取甘油、醋酸及水各等份混匀，即得。
2.1.1.3 稀甘油：取甘油33毫升，加水稀释至100毫升，再加樟脑一小块或液化苯酚1滴，即得。
2.1.2 供试品制备2.1.2.1 取本品10g，研细后取少量粉末，置载玻片上，滴加水合氯醛搅拌均匀，置酒精灯上加热透化；加稀甘油数滴，搅拌均匀，分装2~3片，加盖玻片，即得。
2.1.2.2 取研细的粉末少量置载玻片上，加甘油醋酸试液，搅拌均匀，加盖玻片，即得。
2.1.2.3取研细后取少量粉末，置载玻片上，滴加水搅拌均匀，同时滴加少许稀甘油，加盖玻片，即得。
2.1.3 置显微镜下观察本品粉末褐色。
非腺毛2～6细胞，长140～350μm，壁疣明显，有的胞腔内含棕黄色至棕红色物。
腺毛头7～14细胞，椭圆形，常含黄棕色内含物；柄2～5细胞。
草酸钙簇晶较多，直径10～25μm；偶有方晶。
石细胞类圆形或长方形，直径35～70μm，胞腔大。
油室碎片有时可见，淡黄色。
2.2薄层鉴别：取本品粉末0.4g，加乙醇10ml，静置30分钟，超声处理30分钟，滤过，取滤液作为供试品溶液。
反相高效液相色谱法同时测定五味香连丸中10种成分含量吴璐叶;杨正英;于上林【期刊名称】《中国药业》【年(卷),期】2024(33)9【摘要】目的建立同时测定五味香连丸中盐酸小檗碱、黄连碱、巴马汀、延胡索乙素、木香烃内酯、去氢木香内酯、吴茱萸碱、吴茱萸次碱、柠檬苦素、芍药苷10种成分含量的反相高效液相色谱法。
方法色谱柱为Waters SunFire C18柱(250 mm×4.6 mm,5µm),流动相为含0.02%三乙胺的0.02 mol/L磷酸二氢钾溶液(用磷酸调pH至3.5)-乙腈(梯度洗脱),流速为1.0 mL/min,柱温为35℃,检测波长为225 nm,进样量为10µL。
结果盐酸小檗碱、黄连碱、巴马汀、延胡索乙素、木香烃内酯、去氢木香内酯、吴茱萸碱、吴茱萸次碱、柠檬苦素、芍药苷的质量浓度分别在6.852~51.39µg/mL、2.956~22.17µg/mL、2.918~21.88µg/mL、4.643~34.82µg/mL、4.871~36.53µg/mL、4.007~30.05µg/mL、4.519~33.89µg/mL、4.482~33.62µg/mL、2.724~20.43µg/mL、2.809~21.07µg/mL范围内与峰面积线性关系良好(r≥0.9992,n=6);定量限分别为0.66,0.31,0.29,0.45,0.48,0.41,0.42,0.46,0.27,0.28µg/mL;精密度、稳定性、重复性试验结果的RSD均小于2.0%(n=6);回收率分别为100.36%,98.74%,98.71%,99.67%,99.86%,99.59%,98.70%,98.38%,98.25%,98. 72%,RSD分别为0.89%,1.02%,1.04%,1.17%,0.84%,1.15%,1.33%,1.20%,1.07%,1.23%(n=6)。
ＤＡＤ ＨＰＬＣ法同时测定戊己丸中４种成分的含量耿冶飞，陈秀杰，龚亚飞，冯俊旗（鹤壁市食品药品检验检测中心，河南鹤壁４５８０３０）摘要 目的：建立戊己丸中芍药苷、盐酸小檗碱、吴茱萸碱与吴茱萸次碱４种成分的含量测定方法。
方法：采用高效液相色谱法，应用ＸＳｅｌｅｃｔＣＳＨ Ｃ１８（４ ６ｍｍ×１５０ｍｍ，５μｍ）色谱柱，以乙腈 ０ １％磷酸溶液（含０ ０５ｍｏｌ·Ｌ－１磷酸二氢钾）为流动相，梯度洗脱，流速为１ ０ｍＬ·ｍｉｎ－１，柱温３０℃，检测波长：芍药苷２３２ｎｍ，盐酸小檗碱２３０ｎｍ，吴茱萸碱２２６ｎｍ，吴茱萸次碱３４２ｎｍ。
结果：芍药苷、盐酸小檗碱、吴茱萸碱、吴茱萸次碱分别在３ ８５６×１０２～３ ８５６×１０３ｎｇ、４ ２３９×１０２～４ ２３９×１０３ｎｇ、１６ ４６～１ ６４６×１０２ｎｇ、８ ３４０～８３ ４０ｎｇ范围内与峰面积呈良好的线性关系，加样回收率分别为９８ ７％、１０３％、９５ ３％、９４ ３％。
结论：本方法专属性强，前处理操作简单，检测结果准确，可为戊己丸全面质量控制提供参考。
关键词：ＤＡＤ ＨＰＬＣ；戊己丸；芍药苷；盐酸小檗碱；吴茱萸碱；吴茱萸次碱中图分类号：Ｒ９２１ ２ 文献标识码：Ａ 文章编号：１００９－３６５６（２０２１）０２－０１２４－０５ｄｏｉ：１０ １９７７８／ｊ ｃｈｐ ２０２１ ０２ ００５ＳｉｍｕｌｔａｎｅｏｕｓｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎｏｆｆｏｕｒｃｏｍｐｏｎｅｎｔｓｉｎＷｕｊｉｐｉｌｌｓｂｙＤＡＤ ＨＰＬＣＧＥＮＧＹｅｆｅｉ，ＣＨＥＮＸｉｕｊｉｅ，ＧＯＮＧＹａｆｅｉ，ＦＥＮＧＪｕｎｑｉ（ＨｅｂｉＦｏｏｄａｎｄＤｒｕｇＩｎｓｐｅｃｔｉｏｎａｎｄＴｅｓｔｉｎｇＣｅｎｔｅｒ，ＨｅｎａｎＨｅｂｉ４５８０３０，Ｃｈｉｎａ）Ａｂｓｔｒａｃｔ Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ：ＴｏｅｓｔａｂｌｉｓｈａｎＨＰＬＣｍｅｔｈｏｄｆｏｒｓｉｍｕｌｔａｎｅｏｕｓｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎｏｆｐａｅｏｎｉｆｌｏｒｉｎ，ｂｅｒｂｅｒｉｎｅｈｙｄｒｏｃｈｌｏｒｉｄｅ，ｅｖｏｄｉａｍｉｎｅａｎｄｒｕｔａｅｃａｒｐｉｎｅｉｎＷｕｊｉｐｉｌｌｓ Ｍｅｔｈｏｄｓ：ＴｈｅｔｅｓｔｗａｓｐｅｒｆｏｒｍｅｄｉｎＸＳｅｌｅｃｔＣＳＨ Ｃ１８ｃｏｌｕｍｎ（４ ６ｍｍ×１５０ｍｍ，５μｍ）ｕｎｄｅｒｔｈｅｇｒａｄｉｅｎｔｅｌｕｔｉｏｎｏｆａｃｅｔｏｎｉｔｒｉｌｅ ０ １％ｐｈｏｓｐｈｏｒｉｃａｃｉｄ（ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ０ ０５ｍｏｌ·Ｌ－１ｍｏｎｏｐｏｔａｓｓｉｕｍｐｈｏｓｐｈａｔｅ） Ｔｈｅｆｌｏｗｒａｔｅｗａｓ１ ０ｍＬ·ｍｉｎ－１，ａｎｄｔｈｅｃｏｌｕｍｎｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅｗａｓ３０℃ Ｔｈｅｄｅｔｅｃｔｉｏｎｗａｖｅｌｅｎｇｔｈｓｆｏｒｐａｅｏｎｉｆｌｏｒｉｎ，ｂｅｒｂｅｒｉｎｅｈｙｄｒｏｃｈｌｏｒｉｄｅ，ｅｖｏｄｉａｍｉｎｅａｎｄｒｕｔａｅｃａｒｐｉｎｅｗｅｒｅ２３２，２３０，２２６ａｎｄ３４２ｎｍｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ Ｒｅｓｕｌｔｓ：Ｔｈｅｌｉｎｅａｒｉｔｙｏｆｐａｅｏｎｉｆｌｏｒｉｎ，ｂｅｒｂｅｒｉｎｅｈｙｄｒｏｃｈｌｏｒｉｄｅ，ｅｖｏｄｉａ ｍｉｎｅａｎｄｒｕｔａｅｃａｒｐｉｎｅｆｅｌｌｉｎｔｏ３ ８５６×１０２－３ ８５６×１０３ｎｇ，４ ２３９×１０２－４ ２３９×１０３ｎｇ，１６ ４６－１ ６４６×１０２ｎｇａｎｄ８ ３４０－８３ ４０ｎｇｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ．Ｔｈｅｓｐｉｋｅｄｒｅｃｏｖｅｒｉｅｓｗｅｒｅ９８ ７％，１０３％，９５ ３％ａｎｄ９４ ３％，ｒｅｓｐｅｃ ｔｉｖｅｌｙ Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ：Ｔｈｅｅｓｔａｂｌｉｓｈｅｄｍｅｔｈｏｄｈａｓｔｈｅｇｏｏｄｓｐｅｃｉｆｉｃｉｔｙａｎｄａｃｃｕｒａｃｙ，ａｎｄｉｔｉｓｓｉｍｐｌｅ ＩｔｃａｎｂｅｕｓｅｄａｓａｒｅｆｅｒｅｎｃｅｆｏｒｔｈｅｑｕａｌｉｔｙｃｏｎｔｒｏｌｏｆＷｕｊｉｐｉｌｌｓ．Ｋｅｙｗｏｒｄｓ：ＤＡＤ ＨＰＬＣ；Ｗｕｊｉｐｉｌｌｓ；ｐａｅｏｎｉｆｌｏｒｉｎ；ｂｅｒｂｅｒｉｎｅｈｙｄｒｏｃｈｌｏｒｉｄｅ；ｅｖｏｄｉａｍｉｎｅ；ｒｕｔａｅｃａｒｐｉｎｅ 戊己丸收载于《中华人民共和国药典》２０２０年版一部，由黄连、炒白芍、制吴茱萸三味药材按照６∶６∶１的比例粉碎成细粉，混匀，用水泛丸制成。
中药吴茱萸中生物碱类成分的HPLC指纹图谱杨立芳;李小燕;尹显洪【期刊名称】《沈阳药科大学学报》【年(卷),期】2007(24)10【摘要】目的研究中药吴茱萸中生物碱类成分的HPLC特征指纹图谱。
方法应用HPLC法分析吴茱萸药材生物碱类成分色谱图。
色谱柱:Agilent Extend C18柱(250 mm×4.6 mm,5μm);流动相:乙腈-水系(水-四氢呋喃-乙酸,体积比48∶1∶0.1);洗脱方式:线性梯度洗脱;柱温:35℃;流速:1 mL.min-1;检测波长:240 nm;进样量:20μL。
理论板数按吴茱萸次碱计算不低于3 000。
结果10批不同来源的吴茱萸药材所含生物碱类成分均得到很好的分离,获得14个共有特征峰。
结论HPLC指纹图谱法能较好地识别吴茱萸药材,为吴茱萸的质量控制提供了方法学依据。
【总页数】5页(P631-635)【关键词】吴茱萸;生物碱;高效液相色谱法;指纹图谱【作者】杨立芳;李小燕;尹显洪【作者单位】广西民族大学化学与生态工程学院【正文语种】中文【中图分类】R917【相关文献】1.吴茱萸HPLC指纹图谱的建立及3种成分含量的测定 [J], 曾金祥;刘勇;黄碧涛;杨雅琴;朱继孝;张忠立;罗光明;熊红红2.中药鬼臼毒性成分HPLC/UV指纹图谱分析方法研究及与威灵仙、龙胆HPLC图谱比较 [J], 粟晓黎;林瑞超;王兆基;徐树棋;关锡耀3.苦参生物碱类成分的HPLC指纹图谱研究 [J], 易远红;郝月莆4.吴茱萸不同产地加工方法HPLC指纹图谱及多成分含量比较 [J], 王先菊;李玮;杜洪志;张敏;刘亚琴;邱亚磊5.吴茱萸生物碱类成分指纹图谱的研究 [J], 张敏;袁金斌;黄加龙;黄兴发;王慧军因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
高效液相色谱法波长切换法同时测定吴茱萸中3组分含量申丽莎;陈国庆;杨帆;邓开英【摘要】Objective To develop an HPLC method for simultaneous determination of 3 components in Euodiae Fructus. Methods A C18 column ( 250 mm × 4. 6 mm, 5 μm ) was used with the mobile phase of acetonitrile-0. 2% phosphoric acid ( 35:65 ) with the flow rate of 2. 0mL/min and the column temperature was 30 ℃. The detection wavelength was set at 205 nm for Evodine in the first 15. 01 min, and then changed to 225 nm for evodiamine and rutaecarpine between 15. 01 and 28 min. Results The linear ranges of evodine, evo-diamine and rutaecarpine fell within the ranges of 0. 186~3. 72 μg, 0. 040 24~0. 804 8 μg, 0. 040 08~0. 801 6 μg, respectively ( r=0. 999 7,0. 999 9,0. 999 9 ) . The average recoveries were 96. 30%, 97. 66% and 97. 46% with RSD were 1. 43%, 1. 32% and 1. 80%, respectively( n=6). Conclusion The method isconvenient,quick,accurate and suitable for the qulity control of Euodiae Fructus.%目的建立同时测定吴茱萸中吴茱萸内酯、吴茱碱和吴茱萸次碱含量的高效液相色谱(HPLC)波长切换法.方法色谱柱为C18柱(250 mm × 4. 6 mm,5μm),流动相为乙腈-0. 2%磷酸溶液(35:65),流速为2. 0 mL/min,柱温为30℃,波长切换(0~15 min,205 nm;15. 01~28 min,225 nm).结果吴茱萸内酯、吴茱萸碱和吴茱萸次碱进样量分别在0. 186~3. 72μg,0. 040 24~0. 804 8μg,0. 040 08~0. 8016μg范围内与峰面积线性关系良好( r=0. 999 7,0. 999 9,0. 999 9 ) ,平均回收率分别为96. 30%,97. 66%,97. 46%,RSD分别为1. 43%,1. 32%,1. 80%( n=6).结论该法简便,快速准确,灵敏度高,重复性好,可用于吴茱萸药材的质量控制.【期刊名称】《中国药业》【年(卷),期】2015(024)021【总页数】3页(P115-117)【关键词】吴茱萸;吴茱萸内酯;吴茱萸碱;吴茱萸次碱;高效液相色谱法;含量测定【作者】申丽莎;陈国庆;杨帆;邓开英【作者单位】重庆市中药研究院,重庆 400061;重庆市中药研究院,重庆 400061;重庆市食品药品检验检测研究院,重庆 401121;重庆市药物过程与质量控制工程技术研究中心,重庆 401121;重庆市食品药品检验检测研究院,重庆 401121;重庆市药物过程与质量控制工程技术研究中心,重庆 401121【正文语种】中文【中图分类】R284.1;R282.71吴茱萸为常用中药，具有散寒止痛、降逆止呕、助阳止泻之功效，主治厥阴头痛、寒疝腹痛、寒湿脚气、经行腹痛、脘腹胀痛、呕吐吞酸、五更泄泻，外治口疮、高血压[1-3]。
吴茱萸药材中的吴茱萸内酯、吴茱萸碱和吴茱萸次碱是其主要的3个活性成分[4]，故建立高灵敏度、干扰少、精密度高及处理简单的测定3种成分的检测方法十分必要。
2010年版《中国药典（一部）》[5]和文献[6-9]中，分别采用乙腈-水-四氢呋喃-冰醋酸和乙腈-庚烷磺酸钠溶液等为流动相、225 nm波长检测吴茱萸药材中3组分的含量。
还有研究报道，采用甲醇-水为流动相，梯度洗脱后225 nm波长同时检测3组分的含量[10]。
此类方法虽能同时测定 3组分，但其流动相组成较复杂或含缓冲盐，对色谱柱和仪器系统不利，且吴茱萸内酯在225 nm波长处响应低，灵敏度不够。
故本试验中建立了以乙腈-0．2%磷酸为流动相，以205 nm波长检测吴茱萸内酯、225 nm波长检测吴茱萸碱和吴茱萸次碱的高效液相色谱(HPLC)法，色谱峰分离良好，基线平稳，各成分响应灵敏，可为吴茱萸的质量控制提供参考。
Agilent 1100型高效液相色谱仪（美国），HP-Chmestation色谱工作站；BP211S型电子天平（北京赛多利斯仪器有限公司）；Simplicity-185型超纯水机（美国Millipore公司）；KQ500型超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）。
吴茱萸内酯对照品（批号为110800-200203）、吴茱萸碱对照品（批号为110802-200504）和吴茱萸次碱对照品（批号为110801-200505）均购自中国食品药品检定研究院；吴茱萸饮片（重庆慈晟药业有限公司、重庆市中药饮片厂有限公司和重庆鑫斛药房连锁有限公司各1批），经重庆市食品药品检验检测研究院杨帆副主任药师鉴定，均为芸香科植物吴茱萸 Evodia rutaecarpa（Juss．）Benth．的干燥果实；乙腈为色谱纯，水为超纯水，其余试剂均为分析纯。
2．1 色谱条件与系统适用性试验色谱柱：Agilent Zobax SB C18柱（250 mm4．6 mm，5 μm）；流动相：乙腈-0．2%磷酸溶液（35∶65）；流速：2．0 mL／min；柱温：30℃；检测波长切换：0～15 min时205 nm，15．01～28 min时225 nm；进样量：10 μL。
在此色谱条件下，样品色谱峰分离良好，色谱图见图1。
2．2 溶液制备称取吴茱萸内酯对照品23．25 mg，精密称定，置25 mL容量瓶中；精密称取吴茱萸碱10．06 mg、吴茱萸次碱10．02 mg，精密称定，分置50 mL容量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，即得对照品溶液；分别精密量取上述3种对照品溶液各1 mL，置同一5 mL容量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，即得混合对照品溶液。
取吴茱萸样品，粉碎，过3号筛，取粉末0．5 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入80%乙醇25 mL，密塞，称定质量，浸泡1 h，超声处理40min，放冷，再称定质量，用80%乙醇补足减失的质量，摇匀，滤过，取续滤液，即得供试品溶液。
2．3 方法学考察线性关系考察：取2．2项下对照品溶液，分别进样1，5，10，15，20 μL，测定峰面积。
以进样量（C,μg）为横坐标、峰面积（A）为纵坐标进行线性回归，得回归方程：A=319．61 C-23．644，r= 0．999 6；A=4 704．6 C-17．892，r=0．999 9；A=2 551．9 C-10．306，r=0．999 9。
结果表明，吴茱萸内酯、吴茱萸碱、吴茱萸次碱进样量分别为0．186～3．72 μg、0．040 24～0．804 8 μg、0．040 08～0．801 6 μg时与峰面积呈良好线性关系。
精密度试验：精密吸取同一对照品溶液10 μL，连续进样 5次。
结果，吴茱萸内酯、吴茱萸碱、吴茱萸次碱峰面积的 RSD分别为1．1%，0．9%，1．3%（n=5），表明仪器精密度良好。
重复性试验：取同一批样品，依法制备供试品溶液各5份，测定含量。
结果，吴茱萸内酯、吴茱萸碱、吴茱萸次碱含量的 RSD分别为1．5%，1．6%，2．0%（n=5），表明方法重复性良好。
稳定性试验：取新制备的同一供试品溶液，分别于0，2，4，8，12 h时进样10 μL。
结果，吴茱萸内酯、吴茱萸碱、吴茱萸次碱峰面积的 RSD分别为1．0%，0．3%，1．1%（n=5），表明供试品溶液在12 h内稳定。
加样回收试验：精密称取已知含量的同批样品0．25 g 6份，分别置具塞锥形瓶中，分别精密加入混合对照品溶液适量，按2．2项下方法制备供试品溶液，依法测定，计算回收率。
结果见表1。
2．4 样品含量测定按拟订方法测定3批吴茱萸样品的含量。
结果3批样品吴茱萸内酯含量分别为20．6，10．2，5．4 mg／g；吴茱萸碱含量分别为 19．8，2．1，15．7 mg／g；吴茱萸次碱的含量分别为13．1，1．8，8．7 mg／g。
本试验中采用2010年版《中国药典（一部）》吴茱萸药材项下含量测定方法，以80%乙醇作为提取溶剂，经浸泡后再超声提取，基本能将样品中的待测成分提取完全。
本试验中简化了流动相，在保证各成分分离效果的基础上，可减少对仪器和色谱柱的损伤。
流动相考察中，比较了乙腈-水、乙腈-0．1%磷酸、乙腈-0．2%磷酸不同溶剂系统，结果表明以乙腈-0．2%磷酸为流动相，各峰分离度好。
分别采用205 nm检测吴茱萸内酯、225 nm检测吴茱萸碱和吴茱萸次碱，可使3组分分别达到较好的响应值，灵敏度更高。
经DAD检测，样品中3组分色谱峰与对应的对照品紫外光谱一致。
【相关文献】[1]戴媛媛，刘保林，窦昌贵．吴茱萸及其有效成分的药理研究进展[J]．中药材，2003，26（4）：295．[2]龚慕辛，王智民，张启伟，等．吴茱萸有效成分的药理研究进展[J]．中药新药与临床药理，2009，20（2）：183．[3]杨云云，郭惠，王昌利．吴茱萸生物碱及其主要成分吴茱萸次碱药理研究进展[J]．中药药理与临床，2010，26（5）：182．[4]姚迪，孙晶晶，刘雷，等．LC-MS／MS法测定大鼠血浆中的吴茱萸碱、吴茱萸次碱和吴茱萸内酯及其生物利用度的研究[J]．华西药学杂志，2014，29（3）：298．[5]国家药典委员会．中华人民共和国药典（一部）[M]．北京：中国医药科技出版社，2010：282．[6]何咏梅，田静，邓晶．HPLC法同时测定吴茱萸中吴茱萸碱、吴茱萸次碱与吴茱萸内酯的含量[J]．中国药房，2012，23（31）：2 944．[7]宋亚芳，王智民，朱晶晶，等．一测多评法测定吴茱萸中吴茱萸内酯、吴茱萸碱及吴茱萸次碱的含量[J]．中国中药杂志，2009，34（21）：2 781．[8]鲍天冬，董宇，杨庆，等．高效液相色谱法同时测定制吴茱萸及其提取物中吴茱萸碱、吴茱萸次碱和吴茱萸内酯含量[J]．中国实验方剂学杂志，2007，13（6）：1．[9]吴建平，谭桂山，徐康平，等．高效液相色谱法测定吴茱萸提取物中吴茱萸碱、吴茱萸次碱及吴茱萸内酯的含量[J]．湖南中医药导报，2002，8（5）：227．[10]苏娟娟，张璐，何明珍，等．HPLC同时测定吴茱萸中吴茱萸碱、吴茱萸次碱和吴茱萸内酯的含量[J]．江西中医学院学报，2009，21（6）：53．。
