LC3000高效液相色谱仪的操作规程

LC3000液相色谱仪操作规程1、首先将色谱仪电源打开，让仪器进行预热。

2、进行样品前处理，以及流动相进行过滤和脱气，过滤流动相时使用溶剂过滤器，有机试剂使用有机膜，水使用水系膜。

过滤完后对其进行脱气处理。

注意脱气处理大概需要15-20分钟左右。

3、甲醇处理完后将其接入液路，然后将P3000泵的放空阀打开，并启动泵让甲醇充满液路，并保证没有汽泡，然后关闭放空阀。

也可借助外力（使用洗耳球或注射器）在放空阀处将液体吸过来再启动泵，这样可以省时间。

走30分钟，停止泵，等待泵没有压力。

换10%甲醇水冲洗30分钟以上。

停泵，等待压力降至0左右。

换流动相冲洗，查看管路中有无气泡，保证没有汽泡的情况下，启动泵。

4、双击CXTH-3000色谱工作站→点击CXTH-3000（中文版）→出现提示，关闭即可；→出现色谱数据处理及仪器控制面板界面。

5、在色谱数据处理及仪器控制面板界面中设置所分析样品的色谱条件，如果使用单泵操作时，先确定所用泵是A泵还是B泵。

点开时间程序中查看有无打［√］,如果有［√］；去掉√为［］。

6、设置参数：6.1在基本控制栏中设置波长（nm) ,然后点击［！］确认。

时间常数、量程切换都为2.［切记开灯不要点］。

6.2设定流速（ml/min): 后点击［！］确认。

6.3设定最小压力为0，最大压力为35，如果数据已经符合，就不要改动。

6.4确定管路有无气泡，如果没有气泡，点击电脑上的第一个绿色图标（启动图标）7、做样品之前，保证仪器先用色谱甲醇走30分钟，采集基线。

把满屏量程改至100，其他参数不变。

查看基线走直后，停止采集，进样。

8、如果分析的样品流动相中含有酸、盐，必须用甲醇：水（10:90）及（20:80）的甲醇水过渡40分钟左右。

即先用色谱纯甲醇走基线30min，停止泵，换上甲醇水走基线40min,再停止泵，更换为流动相。

注意：没走一步都要先确认管路中有无气泡后，才能启动泵。

9、等待流动相基线走直后方可进样，所进样品必须用0.45μm有机系滤头过滤。

1.目的规范LC3000N型液相色谱仪开关机注意事项，正确使用仪器，保证检测工作顺利进行、操作人员人身安全和设备安全。

2.适用范围适用于LC3000N型液相色谱仪3.职责3.1使用人员：按照本作业指导书，正确对仪器使用、维护，做使用登记。

3.2保管人员：负责对仪器进行定期维护、保养。

3.3设备管理员：负责仪器综合管理。

4.操作规程4.1打开计算机。

4.2打开LC3000各部分（P3000泵、UV3000检测器等）电源。

4.3待检测器和泵自检完成后，双击打开CXTH-3000（中文版）工作站软件图标。

4.4将入液管放入到过滤超声好的流动相中（A泵为乙腈B泵为水，原则上两月互换一次）。

4.5拧开排空阀，将泵冲洗流量设定3ml/min。

点击泵面板上PURGE键。

此时泵开始运行冲洗功能。

直到管线内（由溶剂瓶到泵入口）无气泡为止。

再按PUMP/STOP键停止冲洗。

4.6关闭排空阀，打开工作站上控制面板中泵和检测器，设置流速、设置工作站上控制面板中时间程序。

4.7点击工作站上采集基线图标，点击执行首行，观察基线稳定情况。

4.8点击停止采集，进样扳阀，触发工作站采集谱图。

4.9保存谱图到指定位置。

4.10谱图处理和谱图校正。

4.11打印报告。

4.12实验结束前，用纯乙腈或者其他纯有机相清洗系统。

4.13关闭工作站和仪器电源5.日常维护及注意事项5.1一定要在保证抑制器内有水流通时再开抑制器电源否则抑制器将烧毁5.2色谱柱切忌用大量清水冲洗否则会冲毁色谱柱5.3色谱柱用淋洗液保存，不须用水冲洗5.4色谱柱、抑制器长时间不用需卸下，并用死堵头堵上第1页共2页6.期间核查正常状态下，半年进行一次期间核查。

当仪器处在超出规定环境条件（恶劣条件或容易产生漂移情况）下工作或工作频次超出规定的限度后或发生漂移，对仪器设备的计量特性产生一定的影响时,进行期间核查。

核查项目及方法如下：6.1基线噪声和基线漂移核查将衰减置于最灵敏档，用零位调节器调节，使输出信号在记录器或积分仪的中间位置，待基线稳定后，记录半小时，测量并计算基线噪声和基线漂移，根据计量检定证书、检测项目依据的标准、仪器说明书判断是否合格。

RIGOL-L3000高效液相色谱仪1.目的：明确RIGOL-L3000高效液相色谱仪使用及维护保养。

2.范围：本规程适用于RIGOL L-3000高效液相色谱仪使用及维护保养。

3.职责：仪器操作员对本操作规程负责实施，QC主管、质量部长负责监督。

4.操作环境：电压：220V±10% 频率：50~60HZ 温度：20～30℃；相对湿度<80％；远离高电磁干扰、高振动设备，有良好的通风设施，避免仪器处于强对流空气环境下。

5.内容：5.1 准备：5.1.1配制所需的流动相(HPLC级)，用对应的0.45μm微孔滤膜过滤，超声脱气20min；5.1.2准备系统清洗液。

5.1.3配制样品和标准溶液，用对应的0.45μm针式过滤器过滤。

5.1.4根据相应的检测方法更换合适的色谱柱(注意方向)。

5.1.5检查仪器各部件的电源线、数据线和输液管道是否正确连接，废液管和废液瓶是否接好。

5.2依次开启L-3000各模块电源，打印机、电脑显示器与主机电源。

开通电源后仪器将进行自检，待自检结束后，运行RIGOL色谱工作站软件。

5.3更换流动相，排气泡：5.3.1将对应的滤杯放入装有少量新流动相的烧杯中；5.3.2逆时针转动泵的排液阀旋钮90°～ 180°以打开排液阀；5.3.3用针筒连接放空阀排液管，抽尽泵头内的空气，直至管线内无可见‘气柱’；5.3.4打开设备监视器界面,点击“清洗”，将流速设置为5mL/min，冲洗2分钟；5.3.5排完空气后，将排液阀顺时针旋转拧紧，关闭排液阀。

5.4 开启在线清洗：打开在线清洗，设置清洗速度为中速，用10%异丙醇水溶液清洗泵头。

5.5方法设置5.5.1 通过RIGOL色谱工作站选择所需的使用方法。

如需新建方法，依次设置仪器各组件、积分和校正等参数，然后保存并发送方法；5.5.2 点击“发送方法”，系统将自动开始平衡。

5.6 平衡系统5.6.1检查管路连接、柱接头及系统各处是否漏液，如漏液可按各组件相应的手册指导予以排除。

LC3000液相色谱仪操作规程一、仪器和试剂准备1.确保LC3000液相色谱仪处于稳定的电源供应状态。

2.检查仪器的运行状态，确保漆面、玻璃器皿和连接管道均无损坏。

3.校正色谱仪的移液器，并确保移液器能够正常工作。

4.检查分析柱的状态，确保柱是干净的，并根据需要准备好相应类型和规格的分析柱。

5.检查色谱仪的溶剂储存器，确保溶剂剩余量足够。

二、样品准备和进样1.准备样品溶液，根据分析需要选择合适的溶剂，并按比例配制好样品溶液。

2.超微量进样模块的试剂架和样品架清洗干净，并确保试剂架和样品架上无残留的试液。

3.通过固定时间进样或体积进样设置进样模式，并根据需要设置样品进样量和流速。

4.将样品溶液注入进样模块，调整进样量和流速，确保样品能够顺利进入分析柱。

三、色谱柱和流动相分析1.打开色谱仪软件，选择合适的分析方法。

2.设置流动相的组成和梯度条件，根据分析需要设置好流变条件。

3.打开色谱柱和色谱仪的阀门，启动流动相泵，确保流动相能够正常循环。

4.监测流动相的压力和流速变化，确保流动相能够保持稳定的压力和流速。

5.根据色谱图和设置的分析方法，分析样品中所含的化合物。

四、数据分析和结果处理1.根据色谱图和峰面积计算定量分析结果，如果需要可以导出数据报告。

2.根据数据结果进行结果分析和对比，确保分析结果的准确性。

3.对分析结果进行整理和归档，保存相关实验记录，并做好数据的备份工作。

五、仪器的保养和维护1.在使用完毕后，保持仪器的干净和整洁。

2.定期检查仪器的各个部件，维护和更换损坏的零部件。

3.定期校正仪器的性能，确保仪器的准确性和稳定性。

4.清洗和保养色谱柱，确保色谱柱的使用寿命和分离效果。

六、安全注意事项1.在操作过程中，严禁接触有毒和腐蚀性试剂，必要时戴好防护手套、口罩和护目镜。

2.操作过程中注意实验室的通风情况，避免有害气体的积累。

3.在更换试剂和溶剂时，要小心操作，避免溅洒和皮肤接触。

4.注意电源的安全使用，确保仪器正常工作，避免电源过载和短路。

高效液相色谱仪操作规程1开机先打开电脑，再依次接通2695分离单元、检测器和打印机的电源（注：在打开2424蒸发光散射检测器电源之前，先开启气体供应）。

接通2695分离单元后，约20秒仪器自检，约1分钟后，显示主屏幕，此时继续各部件的初始化，待主屏幕上主标题区出现“Idle”仪器自检通过，进入待命状态。

2溶剂管理系统的准备2.1流动相的脱气确认所有溶剂管路都充满溶剂，按[Menu/Status]，进入“Status（1）”屏幕，光标选“Degasser”按[Enter]显示选项屏幕，Mode为“on”。

2.2启动溶剂管理系统2.2.1干启动当溶剂的管路是干的或是需要更换溶剂时，在“Status（1）”屏幕下，按[Direct Function]，光标选中“Dry Prime”，按[Enter]，显示“Dry Prime”屏幕，按欲启动的溶剂管路的屏幕键，如[Open A]，光标选“Duration”，按数字键输入时间（一般为5分钟），按[Continue]，待限定时间结束后，重复操作，使实验所需的各溶剂管路均启动、排气并充满流动相。

2.2.2湿启动在“Status（1）”屏幕下，光标选“Composition”中欲使用的流动相，输入100%，按[Direct Function]，光标选“Wet prime”，按“Enter”，显示Wet prime”屏幕，输入流速和时间（5ml/min和5min）按[OK]。

待限定时间结束后，对每种流动相重复操作。

3样品管理系统的准备A管带黄色标记、B管带蓝色标记号、C管带红色标记、D管带绿色标记，绿色管为冲洗泵头用，白色管为冲洗进样器用，所用溶剂均为甲醇：水=50%（v/v）。

将样品瓶插到样品盘合适的位置，打开样品仓门，显示“Door is Open”屏幕，装入样品盘，按[Next]，直至所有样品盘装毕，关仓门。

4编辑分析方法及执行样品分析表4.1创建项目双击电脑桌面图标“Empower”，用户名输入“system”密码输入“manager”选中操作项目和色谱系统→确定。

Ultimate 3000型高效液相色谱仪操作规程一、开机前的准备工作1.检查设备电源、流路、信号连接是否完好。

2.流动相：配制相应的流动相，经0.45µm微孔滤膜抽真空过滤后，超声脱气15分钟，必须使用色谱纯的溶剂，水或缓冲盐溶液要用超纯水；盛放样品溶液和流动相所用的玻璃容器必须用超纯水清洗。

3.样品溶液：按方法取样或配制标准样品溶液，0.45µm滤膜过滤。

二、仪器的组成及开机平衡系统1.仪器组成：本仪器由Ultimate 3000分离单元、DAD-3000（RS）检测器、Chromeleon 7色谱工作站和打印机组成。

Ultimate 3000分离单元包括四元梯度洗脱的溶剂输送系统，四通道在线真空脱气机，可容纳120个样品瓶的自动进样系统，柱温箱，内置的柱塞密封垫清洗系统，溶剂托盘，液晶显示器，键盘用户界面及软盘驱动器。

2.开机：依次接通Ultimate 3000分离单元、检测器、计算机和打印机的电源。

接通Ultimate 3000分离单元后，仪器开始自检约20s，打开电脑，双击电脑右下角的变色龙软件的服务管理器，单击“启动Chromeleon仪器控制器”，激活服务管理器，双击电脑桌面的“Chromeleon 7”图标，进入变色龙软件。

3.脱气（Degasssger）：向上掀开泵头前面板，拧松快速清洗阀（逆时针两圈左右），然后按“冲洗”键，泵将以3.0ml/min的速度自动快速清洗泵类残留的气泡，5min将自动停止。

若想手动停止，只要再按“冲洗”键，将停止清洗。

4.清洗有缓冲盐的那个通道前后，一定要用超纯水清洗管路和泵头，以防止缓冲盐溶液直接与纯有机相混合而产生结晶堵塞比例阀。

5.清洗完毕，先停泵，再拧紧快速清洗阀。

切记不要在泵未停止清洗前拧紧快速清洗阀。

三、编辑仪器方法1.在Chromeleon Console“创建”菜单中点击“仪器方法”。

2.采集时间和采集通道设置：在弹出的“仪器方法向导”窗口中输入分析运行时间；在“诊断通道”项下点击“取消选择所有通道”，点击下一步。

1_LC3000系列高效液相色谱仪标准操作规程（初稿）LC3000系列高效液相色谱仪标准操作规程一目的规范LC系列高效液相色谱仪的操作和维护。

二适用范围该操作规程仅适用于皖仪LC3000系列高效液相色谱仪的使用及维护操作。

三仪器组成LC3000高效液相色谱仪由高压输液泵、进样器、柱温箱、色谱柱、检测器、色谱工作站及相关组件构成，实际配置以用户现场为准。

四操作环境电压：220V±10% 频率：50~60Hz 温度：20℃~30℃相对湿度：≤75% 远离电磁干扰和高振动设备；防止仪器放置在阳光直射和空调设备直吹位置；保持实验室良好通风。

五操作程序1.准备流动相：液相用水必须是超纯水；所用液体试剂为HPLC级；固体试剂最好为优级纯；配制好的流动相需经0.45μm的微孔滤膜过滤，并超声脱气15min以上。

清洗液：系统配置自动进样器，测试前需要补充清洗瓶中的清洗液，清洗液也需要过滤并超声脱气。

制备测试用对照品和供试品，注入系统前需用0.45μm的滤膜过滤。

根据测试方法查看流动相是否与高压泵输液管对应，二元高压梯度注意识别A泵和B泵，四元低压梯度系统注意识别A、B、C、D四个通道。

选择合适的色谱柱，并按照色谱柱上标注的方向正确安装。

检查仪器各个模块的电源及管路是否安装正确2.开机分别开启仪器各个部分的电源开关，并打开计算机。

仪器自检结束后，运行Cactus色谱工作站。

打开“采集”界面中的仪器控制，查看仪器各个模块是否联机正常。

3.更换流动相、排气取小烧杯倒入适量的流动相，将对应管路的滤头浸入烧杯中的流动相中，轻轻搅拌洗去滤头原来残留的溶剂；将清洗好的滤头放入流动相瓶中，逆时针拧开高压泵上的放空阀，点击仪器控制面板中的排空按钮，排空3-5分钟。

二元高压梯度系统点击“启动purge”按钮，四元低压梯度系统点击“purge”按钮后需要选择通道，然后点击“开始”按钮才能启动排空操作。

注意：对于首次安装或者管道内有大量气泡的情况，需要使用注射器辅助排空。

高效液相色谱仪LC3000培训教程LC3000现场培训教程——基础部分一、培训目的A、了解LC3000高效液相色谱仪结构和基本操作。

B、掌握CXTH-3000色谱工作站的打开、设备连接、数据采集、数据处理，打印报告。

C、常见故障排除二、培训设备CXTH LC3000色谱仪P3000高压输液泵UV3000紫外检测器7725i手动进样阀T2000柱温箱(可选)C18色谱柱250×4.6 5u (可选)其它色谱基本条件(流动相准备、电脑和实验台等)三、溶剂准备1、条件:色谱级纯或者优级纯甲醇或者乙腈(ACN)、二次蒸馏水、流动相的过滤和超声 23、样品的前处理和过滤四、 LC3000色谱仪组成1、 P3000泵和UV3000检测器一元(等度)系统两元(梯度)系统1P3000泵界面和基本操作高压输液泵泵头压力传感器+排空泵壳体结构图2泵头以及传动结构图单向阀单向阀内部结构基本操作:泵的基本操作可以通过CXTH-3000工作站(推荐使用)或者泵仪器面板控制。

工作站的控制在下面色谱工作站基本控制内容中讲到，以下是泵面板的基本控制按钮:3PUMP/STOP 键:按一下该按键可以运行泵，再按一下停止泵运行。

START/HOLD键:按一下该键运行预先设定的程序链(PROGRAM)。

再按一下保持此时的程序运行。

PURGE键:冲洗键。

按一次泵按照(SYSTEM SETING)系统设定中设定冲洗流量运行冲洗。

再按一次泵停止冲洗。

作用:冲洗泵头气泡和快速更换流动相。

DEL键:退出键或者删除键。

进入子菜单下通过此键退回上一菜单。

ENTER键:进入键或者确认键。

按该键进入子菜单。

方向键:光标的上下左右移动。

2、UV3000检测器UV3000紫外检测器流通池基本操作:检测器基本操作可以通过CXTH-3000工作站(推荐使用)或者检测器仪器面板控制。

波长的设定:按下λ 按键进入波长设定界面，通过数字键设定预设波长TIME CONSTANT(时间常数):在MAIN MENU主菜单下，按ENTER键进入第一项DETECTOR PARAMETERS，将光标移动到TIME CONTANT下修改合适的TC值。

高效液相色谱法的标准操作规程1 定义及概述：1.1 高效液相色谱法是一种现代液体色谱法，其基本方法是将具不同极性的单一溶剂或不同比例的混合溶液作为流动相，用高压输液泵将流动相注入装有填充剂的色谱柱，注入的供试品被流动相带入柱内进行分离后，各成分先后进入检测器，用记录仪或数据处理装置记录色谱图或进行数据处理，得到测定结果。

由于应用各种性质的微粒填料和加压的液体流动相，本法具有分离性能高、分析速度快的特点。

1.2 高效液相色谱法适用于能在特定填充剂的色谱柱上进行分离的药品的分析测定，特别是多组分药品的测定、杂质检查和大分子物质的测定。

有的药品需要在色谱分离前或后经过衍生化反应，方能进行分离或检测。

常用的色谱柱填充剂有：硅胶，用于正相色谱；化学键合固定相，根据键合的基团不同可用于反相或正相色谱，其中最常用的是十八烷基硅烷（又称ODS）键合硅胶，可用于反相色谱或离子交换色谱；凝胶或玻璃微球等填充剂是有一定孔径的大孔填料，用于排阻色谱。

1.3 高效液相色谱仪基本由泵、进样器、色谱柱、检测器和色谱数据处理组成。

检测器最常用的为可变波长紫外检测器或紫外—可见检测器。

色谱信息的收集和处理常用积分仪或数据工作站进行。

梯度洗脱，可用两台泵或单台泵加比例阀进行程控实现。

2 高效液相色谱仪的使用要求：2.1 按国家技术监督局国家计量检定规程汇编中“实验室液相色谱仪检定规程”的规定作定期检定，应符合规定。

2.2 仪器各部件应能正常工作，管路为无渗漏连结，流路中无堵塞或漏液，在设定的检测器灵敏度条件下，色谱基线噪音和漂移应能满足分析要求。

2.3 具体仪器在使用前应详细参阅各操作说明书。

3 操作前的准备：3.1 流动相的制备：用高纯度的试剂配制流动相，必要时照紫外分光光度法进行溶剂检查，应符合要求；水应为新鲜制备的高纯水。

对规定pH值的流动相，应使用精密pH 计进行调节。

配制好的流动相应通过0.45µm适宜的滤膜滤过，用前脱气。

高效液相色谱仪操作规程1．开关机顺序●开机顺序：打开LC各单元电源－控制器电源－电脑－LC-Solution工作站，开机后能听到“哔”声。

●关机顺序：与开机顺序相反，即先关闭LC-Solution工作站－控制器－LC各单元电源2．流动相及样品的准备●流动相配制所用的有机相必须是色谱级的，所用的水必须是双重蒸馏水。

流动相必须经0.45um 的微孔滤膜过滤后方能进入LC系统。

水和有机相所用的微孔滤膜不同，有机相（如甲醇）的过滤用F膜，水用水膜。

●样品溶液亦必须用0.45um 的微孔滤膜过滤后才能进样。

3．工作站的进入及系统的开启●双击桌面上的“labsolution”图标，选择“operation”项并单击，在弹出窗口后按OK进入工作站。

●首先打开A、B泵上的排空阀（open方向旋转180度）。

然后按二泵面板上的“purge”键开始自动清洗A、B流路3分钟，然后在分析参数设置页中设置流速1ml/min，BCONC 0％，并设置合适的检测波长，柱温，停止时间。

在完成后点击“Download”将分析参数传输至主机。

●分析方法的保存：选择file－save method file as－取名保存文件●系统的启动：点击“instrument on/off”键开启系统（此时泵开始工作。

4．进样准备●观察基线及柱压，待基线平直（－5～80mv），压力稳定（0.5Mpa内）时方可进样。

5. 进样●点击助手栏中的“single start”键，弹出对话框，在对话框中输入“sample name”“method”“data file”等。

●填完后点击“start”，出现触发窗口，进样，仪器开始自动采样分析。

6. 数据文件的调用及查看●点击助手栏中的“Postrun analysis”键，打开数据处理窗口。

●打开文件搜索器，定位至数据文件所在文件夹，选择文件的类型，双击文件名即可打开数据文件（此时可以查看峰面积、保留时间等参数）。