免疫透射比浊法检测降钙素原的方法学评价

免疫增强透射比浊法定量检测降钙素原的技术性能评价邹燕;沙柳娟;冯彩莲;植奇升;黄湘宁;梁智慧;杨显豪;魏续红【摘要】目的:评价免疫增强透射比浊法定量检测血清降钙素原(PCT)的技术性能.方法:按照NCCLS标准化的评价方案,应用全自动生化分析仪评价免疫增强透射比浊法定量检测PCT的准确度、精密度、干扰因素和线性范围.结果:平均回收率为97.4％;0.15ug/L(正常值)和17.85ug/L(高值)的批内CV均＜4.5％,批间CV均＜8.0％;类风湿因子浓度在200IU/mL以下、血红蛋白浓度在4.0g/L以下、三酰甘油浓度在10.0mmoL/L以下和胆红素浓度在340umol/L以下时对PCT的定量检测均无显著性干扰(P＞0.05);线性范围为0.00-80.00ug/L.结论:免疫增强透射比浊法具有自动化程度高、检测速度快、成本低、安全的优点,而且各项技术性能优良,因此具有较高的临床推广应用价值.【期刊名称】《宜春学院学报》【年(卷),期】2017(039)009【总页数】3页(P65-67)【关键词】透射比浊法;降钙素原;技术性能评价【作者】邹燕;沙柳娟;冯彩莲;植奇升;黄湘宁;梁智慧;杨显豪;魏续红【作者单位】广东药科大学附属第二医院(广州新海医院)检验科,广州510300;中山大学孙逸仙纪念医院,广州510120;广东药科大学附属第二医院(广州新海医院)检验科,广州510300;广东药科大学附属第二医院(广州新海医院)检验科,广州510300;广东药科大学附属第二医院(广州新海医院)检验科,广州510300;广东药科大学附属第二医院(广州新海医院)检验科,广州510300;广东药科大学附属第二医院(广州新海医院)检验科,广州510300;广东药科大学附属第二医院(广州新海医院)检验科,广州510300【正文语种】中文【中图分类】R392血清降钙素原(procalcitonin，PCT)是诊断或鉴别诊断微生物感染性疾病的重要指标[1]，血清降钙素原定量检测在疾病的早期诊断、病程监测、用药指导等方面具有显著优势[2]，从而可以避免滥用抗生素,减少细菌耐药性的产生。

AU5800全自动生化分析仪检测降钙素原的方法学评价目的在AU5800全自动生化分析仪上用免疫透射比浊法检测降钙素原（PCT）进行方法学评价。

标签：降钙素原；免疫比浊法；方法学评价；免疫荧光法降钙素原（Procalcitonin PCT）在临床主要应用于感染性疾病的鉴别[1]，是诊断血行感染、菌血症、败血症的一个较好指标[2-3]。

目前PCT的检测方法主要有放射免疫法、双抗体夹心法、胶體金法、免疫荧光法、免疫透射比浊法等。

本研究选用国产免疫透射比浊法，具有快速、简便，且价格相对较低廉的特点。

根据美国临床和实验室标准化协会9CLSI）和医学实验室认可标准（ISO15189）对实验室质量的要求[4]，实验室对检测系统（仪器、试剂、校准品等）必需进行性能验证[5]。

因此，实验室需要对厂商声明的主要分析性能进行验证。

本文对AU5800检测系统测定降钙素原（PCT）进行精密度、线性范围、参考区间等指标的方法学评价，再与酶免疫荧光法检测结果进行比对，观察结果相关性，以此来评价该检测方法在临床上的价值。

1 资料1.1仪器贝克曼AU5800全自动生化分析仪，梅里埃全自动荧光分析仪。

1.2试剂1.2.1安徽大千生物工程有限公司生产的降钙素原测定试剂盒（免疫透射比浊法）（批号085813），标准品（批号084113）和质控品（批号084213）。

1.2.2梅里埃诊断产品（上海）有限公司进口的降钙素原测定试剂盒（酶免疫荧光法）（批号1002326640），校准品（批号1057790）和质控品（批号1057880）。

1.3 标本患者标本为2013年10～11月实验室接收的67例临床送检标本。

酶免疫荧光法随时检测送检标本，剩余血清-80℃保存用于免疫比浊法测试（一次性完成）。

正常人群均为健康体检者，年龄16～77岁，选择血常规、CRP正常，即无急、慢性炎症的体检合格标本20例。

2 方法2.1免疫透射比浊法样品中的PCT与试剂中的PCT抗体发生抗原-抗体反应，形成复合物，从而引起透光度的减低，在一定范围内与样本中的PCT的量呈线性相关。

近来血清降钙素原（ｐｒｏｃａｌｃｉｔｏｎｉｎ，ＰＣＴ）作为一个新的诊断细菌性感染的指标，在感染性疾病的诊断中得到广泛应用。

我们对ＩＣＵ病房的危重患者进行ＰＣＴ的检测，以评价ＰＣＴ对细菌感染的诊断价值。

１材料与方法１．１标本细菌感染组：３０例均为常州市第一人民医院２００７年１月～５月ＩＣＵ收治的危重感染患者，男１７例，女１３例。

在入院的第一个２４小时内对每个患者测定并记录其体温、血压、白细胞，并抽血送微生物培养，做ＰＣＴ和ＣＲＰ测定，同时记录胸部Ｘ片资料。

患者被认为是有感染指征至少符合以下５点中的２个条件：①发热，体温＞３８℃；②外周血白细胞计数＞１２×１０９／Ｌ，未成熟的（杆状核）中性粒细胞＞１０％；③胸部Ｘ线检查示肺部有感染；④体内有脓性分泌物；⑤临床决定开始或已经维持抗生素治疗。

对照组：常州市中心血站的健康初次献血者３０例，男１７例，女１３例，年龄１８～４０岁。

１．２方法标本采集：所有检测对象均在清晨空腹采前臂静脉血，一份送普通血培养，另一份３～４ｍｌ置真空干燥管内，待血液凝固后立即１５００ｒ／ｍｉｎ离心１０ｍｉｎ，分离血清２ｍｌ，分两份置于Ｅｐｐｅｎｄｏｒｆ管中，于－２０℃冰箱保存待测。

测定方法：采用免疫比浊法定量检测ＰＣＴ及ＣＲＰ，ＰＣＴ所用试剂盒由广东虹叶抗体科技有限公司提供，ＣＲＰ所用试剂由上海基恩有限公司提供，所用仪器是由日本日立公司提供的全自动生化分析仪７６００－１２０，所有参数设置与实验步骤均严格按其操作规程进行。

１．３统计学方法所测数据用（均数±标准差）表示，两样本间比较采用ｔ检验，计数资料比较用四格表资料的χ２检验，以Ｐ＜０．０５差异有统计学意义。

以ＰＣＴ＞０．５μｇ／Ｌ为血清ＰＣＴ阳性；以ＰＣＴ＜０．５μｇ／Ｌ为血清ＰＣＴ阴性。

血清降钙素原在危重患者细菌感染检测中的应用刘息平芦嘉陈雪琴黄慧孙根喜季云【摘要】目的评价血清降钙素原（ＰＣＴ）对危重患者细菌感染诊断的临床价值。

降钙素原（PCT）降钙素原(procalcitonin,PCT)是一种由116个氨基酸组成的糖蛋白，是降钙素(calcitonin，CT)的前体肽。

降钙素可被酶裂解为许多小的片断，最终形成氨基降钙素原、成熟的降钙素和钙抑肽。

降钙素原可以以游离形式存在于正常人血清中。

在正常情况下，人体内血清PCT水平很低，大多低于O.lng/ml；新生儿出生2天内PCT生理性增高，最高可达21ng/ml；长期血液透析患者血浆PCT值可达1.5ng/ml。

正常情况下，CALC-I基因在甲状旁腺中的转录处于抑制状态。

微生物感染可诱发CALC-I基因表达的普遍增加。

并且从所有的实体组织和全身各种类型的细胞中（比如肝、肾、脂肪细胞和肌细胞等）不断的释放出PCT。

在败血症时CT-mRNA的转录表达普遍升高，超过许多经典炎症细胞因子，如TNF,IL-6的mRNA的表达。

然而由于实体细胞缺少分泌颗粒，所合成的PCT未被酶加工成CT就直接释放入血使血清中PCT水平迅速升高。

这种升高与感染的严重性和死亡率相关。

与此同时血清中降钙素水平正常或仅轻度升高。

这是由于在经典的神经内分泌过程中，CT-mRNA的表达被甲状腺C细胞负反馈抑制，并且由于实体细胞中缺乏分泌颗粒和内切酶，生成的PCT不能被加工成CT。

另外，白细胞也不是PCT的主要来源。

研究表明，在应用化疗药物治疗几乎完全清除了白细胞的败血症病人体内，依然存在高浓度的血清PCT水平，而在败血症中实体细胞才是PCT的主要来源。

炎症反应释放的PCT可以被细菌毒素，如内毒素直接诱导，也可由细胞介导的宿主反应，如IL-1、TNF-α、IL-6间接诱导产生。

此诱导过程可以被病毒感染时释放的细胞因子如干扰素阻断，所以病毒性感染疾病患者中的PCT浓度一般都低。

二动力学过程降钙素原在感染后2-3h，水平即可增高，例如使用内毒素诱导后，在2-3h即可检测到PCT 水平轻度升高。

随后PCT水平快速升高，6-12h后到达顶峰，在48h内保持较高水平，2d 后降到基线水平。

两种方法检测降钙素原结果的比较目的了解颗粒增强免疫比浊法（PETIA）和化学发光法测定血清降钙素原（PCT）结果的相关性，为不同的方法学检测血清降钙素原是否具有一致性提供参考依据。

方法取我院住院患者40例，按照美国临床实验标准化委员会（NCCLS）EP9-A2文件进行评估，将每种方法用双份测定，测得的数据进行相关回归分析，计算2种方法间的偏倚。

结果颗粒增强免疫比浊法和化学发光法测定血清降钙素原（PCT）的相关方程为y=1.009x-0.015，相关系数（R2）=0.996。

结论这两种方法测定血清降钙素原（PCT）有良好的相关性.当实验室内同一项目存在2套以上分析系统检测时，应对其进行对比分析和偏倚评估，为室间评价结果提供参考依据。

标签：降钙素原；免疫比浊法；化学发光；EP9-A2散点图显示两种方法测定PcT有较好的相关性，计算化学发光法对免疫比浊法线性回归方程y=1.009x-0.015，R2=0.996。

3.讨论PCT是一种无激素活性的降钙素前体物质，由116个氨基酸组成，分子量为12.7KD。

正常人血液中降钙素原的浓度很低，通常无法检测到。

PCT在细菌毒素和炎性因子的诱导下产生，当严重细菌、真菌、寄生虫感染以及脓毒血症和多脏器功能衰竭时，它在血浆中的水平升高，升高浓度与感染的严重程度及预后相关，在全身性细菌感染和脓毒症辅助鉴别诊断、预后判断、疗效观察等方面有很高的价值。

引。

另处PCT还可鉴定自身免疫性疾病患者是否合并感染，PCT不受自身免疫活动的影响，只有在感染时才会升高，且不受某些激素和免疫抑制劑的影响，能真实反映机体是否存在感染。

本试验是参照NCCLS EP9-A2文件以化学发光法为比对方法，对免疫比浊法进行评估，其结果表明，免疫比浊法与化学发光法测定的PCT结果具有很好的相关性（R2=0.996），同一实验室不同方法测定同一項目，结果及参考区间应该是一致的。

此方法证明在两种仪器相关性良好的情况下，可消除仪器间的系统误差，以保证为临床提供可靠的实验室依据。

免疫透射比浊法检测降钙素原的实验评价金强;姚晓玲;胡恩赑【摘要】Objective To evaluate the method of procalcitonin detection by immunoturbidmetric assay. Methods Immunoturbidmetric assay was established to determine serum procalcitonin, and then its precision, linearity, recovery and interference test were evaluated. Results The method had a good linearity response ( y = 1. 152x -0.0452 ), and the linear correlation coefficient r =0. 999. The inter and intra CVs of the serum procalcitonin levels were lower than 5% and 10% , respectively. The average recovery was 97. 7% . Some degree of bilirubin, hemoglobin and triglycerides did not interfere with the procalcitonin results significantly. Conclusion Immunoturbidmetric assay is a simple, fast and automated detection method, which shows good performance in clinical use.%目的对免疫透射比浊法定量测定降钙素原的方法进行实验评价.方法实验评价包括精密度、线性、回收实验及干扰实验.结果该方法测定降钙素原线性良好(y=1.152x-0.0452,r=0.999),批内CV<5%,批间CV<10%;回收率平均97.7%;对胆红素、血红蛋白及三酰甘油具有较好的干扰能力.结论该方法简便、快速,便于自动化检测,适合临床使用.【期刊名称】《安徽医学》【年(卷),期】2012(033)009【总页数】2页(P1222-1223)【关键词】降钙素原;免疫透射比浊法;方法学评价;精密度;线性;干扰【作者】金强;姚晓玲;胡恩赑【作者单位】233000,蚌埠市第三人民医院;233000,蚌埠市第三人民医院;233000,蚌埠市第三人民医院【正文语种】中文降钙素原(procalcitonin，PCT)作为一种炎症介质，近年来成为鉴别细菌感染的新型标志物。

降钙素原的检测方法是什么降钙素原是蛋白质的一种，当人体受到细菌、病毒的感染的时候会引起降钙素原的升高，这也代表着人体的免疫力下降了以及肾脏功能也会产生衰竭的现象。

当降钙素原过高时可能会使人体有休克的现象，也会使得人体中的器官功能紊乱，产生一些全身性的疾病反应，面对降钙素原，检测是很重要的一个方面，下面就来介绍一下其检测方法。

★检测方法:★1.放射免疫学分析法利用人工合成的多克隆抗体特异地识别和连接合成氨基酸降钙素原。

该方法能检测正常人的血清PCT，可靠敏感度为4pm/mL，检测的是游离PCT、结合型PCT和降钙素基因相关肽前体的混合物，而不能区分上述三种物质。

该法检测耗时长(19～22h)，而且有放射性元素的污染使用受到限制。

★2.双抗夹心免疫化学发光法(ILMA)运用双单克隆抗体，其中一个抗体为降钙素抗体，另一个为抗钙素抗体，分别结合到PCT分子的降钙素和抗钙素部位，可排除交叉反应。

其中一个抗体是光标记的，另一个未标记的抗体固定在试管的内壁，反应过程中两个抗体与PCT分子结合而形成三明治复合体，发光部位于反应管的表面。

该法操作简便，特异性强，敏感性高，测定的低限值为0.1ng/mL，2h可以出结果。

★3.胶体金比色法（B.R.A.H.M.SPCT-Q-半定量快速实验）采用胶体金技术，包括胶体金标记的抗抗钙素的单克隆抗体和用作包被的抗降钙素多克隆抗体，当标本(血清或血浆)加人标本孔，金标单克隆抗体与标本中的PCT结合，形成金标记的抗原抗体复合物。

该复合物在反应膜上移动，与固定在膜上的抗降钙素抗体结合形成更大的复合物。

当PCT浓度超过0.5ng/mL，该复合物显示红色，红色的深浅与PCT的浓度成正比，与标准比色板比较即可得出PCT的浓度范围。

结果分为四级:正常&lt;0.5ng/mL；轻度升高&gt;0.5ng/mL；明显升高&gt;2ng/mL；显著升高&gt;10ng/mL。

降钙素原综述1临床背景资料降钙素原（procalcitonin，PCT）是降钙素的前肽，一种无激素活性的糖蛋白，由116个氨基酸组成。

生理情况下，甲状腺C细胞可产生极少量的PCT，健康人血清中PCT水平通常测不到，但在细菌感染时，除甲状腺外，肝脏的巨噬细胞和单核细胞，肺、肠道组织的淋巴细胞及内分泌细胞都能合成分泌PCT，此时血清PCT水平会明显升高，且随感染进展或控制而持续在高水平或逐渐下降。

生成PCT和降钙素的过程开始于转录141个氨基酸组成的多肽-前降钙素原，它由一个信号序列、PCT的N端、降钙素序列、PCT的C端组成，当信号序列介导前降钙素原被内质网摄取后，信号序列被降解，剩余的蛋白质即为PCT。

若蛋白质溶解，降钙素即从PCT中分离；但在内毒素或某些细胞因子的干预下，这一蛋白质溶解过程可被抑制，此时PCT及其片段被释放进入循环。

有学者认为脂多糖和其他多种炎性因子诱导PCT的产生，其升高程度可显示炎性反应程度。

Oberhofer等[1]认为与其他细胞因子相比，脂多糖短时间内诱导大量PCT生成，提示脂多糖可能直接促进PCT mRNA的表达和蛋白质翻译，并对健康志愿者静脉注射一定量内毒素后进行连续观察，注射2h后可在血浆中检出PCT，6~8hPCT迅速上升，12~24h缓慢达平台期，2~3d降至正常范围。

Dandona等[2]认为细菌内毒素是诱导PCT产生的最主要刺激因子，健康人注射少量的细菌内毒素就能刺激PCT的合成。

除内毒素外，外毒素及某些细胞因子也可诱导PCT产生。

血浆中的PCT非常稳定，收集标本24h后PCT浓度在室温下约下降12%，4℃时下降6%。

PCT被特异性的蛋白酶降解，其在循环中的半衰期是25~30h。

肾功能异常患者中PCT的清除半衰期无显著延长。

2功能许多研究机构都试图揭示PCT的生物学作用，但除了明确其对血浆钙水平起作用外，其他作用均未能明确。

目前认为PCT是一种非固醇类抗炎物质，在调控细胞因子网络中发挥着重要作用，在全身严重细菌感染和脓毒症时异常升高；也有人认为PCT是一种次级炎性介质，放大并加重感染的炎性反应，但不是启动因素。

降钙素原的检测方法是什么降钙素原是蛋白质的一种，当人体受到细菌、病毒的感染的时候会引起降钙素原的升高，这也代表着人体的免疫力下降了以及肾脏功能也会产生衰竭的现象。

当降钙素原过高时可能会使人体有休克的现象，也会使得人体中的器官功能紊乱，产生一些全身性的疾病反应，面对降钙素原，检测是很重要的一个方面，下面就来介绍一下其检测方法。

★检测方法:★1.放射免疫学分析法利用人工合成的多克隆抗体特异地识别和连接合成氨基酸降钙素原。

该方法能检测正常人的血清PCT，可靠敏感度为4pm/mL，检测的是游离PCT、结合型PCT和降钙素基因相关肽前体的混合物，而不能区分上述三种物质。

该法检测耗时长(19～22h)，而且有放射性元素的污染使用受到限制。

★2.双抗夹心免疫化学发光法(ILMA)运用双单克隆抗体，其中一个抗体为降钙素抗体，另一个为抗钙素抗体，分别结合到PCT分子的降钙素和抗钙素部位，可排除交叉反应。

其中一个抗体是光标记的，另一个未标记的抗体固定在试管的内壁，反应过程中两个抗体与PCT分子结合而形成三明治复合体，发光部位于反应管的表面。

该法操作简便，特异性强，敏感性高，测定的低限值为0.1ng/mL，2h可以出结果。

★3.胶体金比色法（B.R.A.H.M.SPCT-Q-半定量快速实验）采用胶体金技术，包括胶体金标记的抗抗钙素的单克隆抗体和用作包被的抗降钙素多克隆抗体，当标本(血清或血浆)加人标本孔，金标单克隆抗体与标本中的PCT结合，形成金标记的抗原抗体复合物。

该复合物在反应膜上移动，与固定在膜上的抗降钙素抗体结合形成更大的复合物。

当PCT浓度超过0.5ng/mL，该复合物显示红色，红色的深浅与PCT的浓度成正比，与标准比色板比较即可得出PCT的浓度范围。

结果分为四级:正常&lt;0.5ng/mL；轻度升高&gt;0.5ng/mL；明显升高&gt;2ng/mL；显著升高&gt;10ng/mL。