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细菌感染的诊断与防治川大

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细菌总论8—细菌感染检查与防治原则

细菌总论8—细菌感染检查与防治原则



＊常用的血清学诊断试验

凝集试验：肥达反应、外斐试验 沉淀试验：RPR、VDRL 补体结合试验：检测Q热柯克斯体 中和试验：抗O试验

ELISA：检测炭疽杆菌保护性抗体
第二节 细菌感染的特异性防治
特异性防治是应用获得性免疫 的原理给机体注射或服用病原微生 物抗原或特异性抗体，以达到预防 和治疗疾病的目的，这种方法称为 人工免疫。
获得性免疫的产生的方式
自然主动免疫：患病、隐性感染
主动免疫 人工主动免疫：接种疫苗、类毒素等 自然被动免疫：通过胎盘、初乳 被动免疫
人工被动免疫：注射抗毒素、转移因子
丙种球蛋白、
一、人工主动免疫
指人为地将疫苗(vaccine)或类毒 素接种于人体，刺激机体主动产生特 异性免疫力，从而对相应病原体感染

试列举细菌感染的病原学检查方法。 对于一种未知的微生物传染病，如何 确定病原体？ 简述人工被动免疫和人工主动免疫的 区别。 试述核酸疫苗、亚单位疫苗、全细胞 疫苗（灭活疫苗和减毒活疫苗）的主 要优缺点。


区别要点
免疫物质 接种次数
人工主动免疫
抗 原 1-3次
人工被动免疫
抗体或细胞因子 1次
免疫出现时间
免疫持续时间
慢 2-4周
长,数月-数年
快
立即
短,2-3周
主要用途
预 防
治疗或紧急预防
四、生物制剂的使用及注意事项
（一）接种对象： 根据发病的年龄、职业、流行地区确 立接种对象。 （二）接种途径： 死疫苗、类毒素接种量大，常用皮下 注射；活疫苗接种量小，常用皮肤划痕、 皮内注射、口服及喷雾等；丙种球蛋白、 动物血清和抗毒素采用肌肉注射。

7细菌感染的诊断与防治

7细菌感染的诊断与防治
是临床细菌性疾病诊断和病原菌鉴定的重 要手段之一。
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常用有玻片凝集试验，简单易行且特异性强。尚 有免疫荧光、酶免疫、协同凝集、乳胶凝集等试验， 优点：快速、灵敏且不受抗生素等药物影响。
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5、动物试验：
主要用于分离致病菌，测定菌株产毒性和科研等。 常用动物：小鼠、豚鼠、家兔 接种途径：皮内、皮下、腹腔、肌肉、静脉、脑内等。
一、标本采集的原则 区别取材 无菌操作 妥善处理 及时送检
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二、致病菌检查程序
1、直接涂片镜检：
形态和染色性上有特征的致病菌，直接涂片 镜检后有助于初步诊断。
如：痰中查抗酸性杆菌，脓液中找G+葡萄串 状球菌等等。
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4
2、分离培养：
分离培养是微生物学诊断的金标准，是最可靠 的传统诊断技术。原则上所有标本均应作分离培 养获得纯培养后进一步鉴定，根据不同要求选用 不同培养基。
中和试验
DNA指纹 DNA芯片技术
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第二节 血 清 学 诊 断
病原菌刺激免疫系统发生免疫应答产生特异 性抗体。抗体的量常随感染过程而增多，表现为 效价（titer）或称滴度的升高。
用已知的细菌或其特异性抗原检测患者体液 中有无相应抗体及其效价的动态变化，可作为某 些传染病的辅助诊断。
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结 果：
分离培养比直接涂片镜检阳性率高，但需时 较久；大多细菌16～24h，结核杆菌需4～8W。
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3、生化试验：
是鉴定细菌的重要方法之一 针对一个菌落或纯培养物进行鉴定
Sugar Fermentation H2S Test
VITEK细：
用含有已知的特异性抗体检测标本中或分 离培养物中未知的细菌，以确定致病菌的种或 型；

第7章 细菌感染的诊断和防治

第7章 细菌感染的诊断和防治

抗毒素 抗菌血清 胎盘球蛋白、丙种球蛋白 细胞免疫制剂

人工被动免疫常用的生物制品
（1）抗毒素 （2）抗血清 （3）免疫球蛋白：胎盘球蛋白、丙种球蛋白 （4）细胞免疫制剂 两种人工免疫的比较
人工主动免疫 免疫物质 免疫出现时间 免疫维持时间 主要用途 人工被动免疫 抗体或细胞因子 快，立刻 短，2-3周 治疗或紧急预防
人工主动免疫
人工主动免疫 (artificial active immunity)—— 将疫苗 或类毒素接种于人体，使机体产生免疫力。主要用于平 时预防。

死疫苗： 选用免疫原性强的细菌，经人工大量培养后，
用理化方法杀死而成。
活疫苗：用减毒或无毒力的活病原体制成。 类毒素： 细菌外毒素经 0.3%-0.4%甲醛液作用 3-4 周后，
人工主动免疫常用的生物制品 （1）疫苗 死菌（疫）苗 活菌（疫）苗 亚单位疫苗 DNA疫苗 （2）类毒素
人工被动免疫
人工被动免疫 (artificial passtive immunity)：注射含有特 异性抗体的免疫血清或纯化免疫球蛋白，或细胞因子等免 疫制剂，使机体即刻获得特异性免疫，主要用于治疗或紧 急预防。
第七章 细菌感染的诊断和防治
细菌感染的诊断
细菌学诊断 血清学诊断源自一. 细菌学诊断标本
直接涂片检查 分离培养 分子生物学技术 （核酸杂交、PCR） 其它
生化试验 血清学试验 动物试验 药敏试验
二.血清学诊断

人体受致病菌感染后，其免疫系统被刺激后发生免疫应 答而产生特异性抗体。抗体的量常随感染过程而增多， 表现为效价（滴度）的升高。因此，用已知的细菌或其 特异性抗原检测患者体液中有无相应特异抗体和其效价 的动态变化，可作为某些传染病的辅助诊断。一般采取 病人的血清进行试验，故称为血清学诊断 (serological diagnosis)。

病原生物学-细菌感染的诊断和与防治

病原生物学-细菌感染的诊断和与防治
2. 类毒素(toxoid) 细菌外毒素经0.3％-0.4％甲 醛处理后，毒性消失而仍保持其免疫原 性，即成类毒素。如破伤风，白喉类毒素 等。
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(三) 人工被动免疫常用的生物制品：
1. 抗毒素 用类毒素多次给马注射，待马产生 高效价抗毒素后采血，分离血清、纯化制成。
2. 抗菌血清 仅用于多重耐药菌株所致疾病的 治疗。
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1. 沉淀反应；
Hale Waihona Puke (二)细菌成分检查： 2. 协同凝集试验；
1. 抗原的检测： 3. 免疫荧光法(IF)；
• 早期诊断；
4. 对流免疫电泳(CIE)；
• 常用方法：ELISA；5. 酶联免疫测定(ELISA);
• 特点：特异、敏感、6. 简免疫便印、迹快技速术。。
2. 核酸的检测：更特异、敏感
(1) 核酸杂交(nucleotide hybridization)
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抗原→未知抗体
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第二节 抗感染防治原则
一、微生物感染的特异性防治 (一) 微生物感染的特异性防治原则
特异性免疫获得方式 自然主动免疫：患病、隐性感染。 自然免疫： 自然被动免疫：通过胎盘、初乳。 人工免疫： 人工主动免疫：接种菌苗、类毒素等。 人工被动免疫：注射抗毒素、丙种球
蛋白、细胞因子等。
要新鲜，应低温保存 (-20oC)，尽快送检。 (4) 在使用抗生素前，在疾病的急性期采集
标本，分离阳性率高。 (5) 做好标记，详填化验单。
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细菌感染的检查
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一、标本直接检查 (一) 形态学检查：
1. 直接涂片镜检：染色、形态、大小、排 列、运动(不染色标本)。 形态和染色上具有特征的病原菌
2. 荧光显微镜或电子显微镜等特殊检查：

细菌感染的检测方法与防治原则

细菌感染的检测方法与防治原则
利用双向琼脂扩散与电泳技术相结合的方法。由于电泳 和电渗作用，抗原向正极移动，抗体向负极移动，在比 例合适处形成肉眼可见的沉淀线。
酶免疫技术
用酶标记的抗体检测特异性可溶性抗原的实验技术。
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（四）细菌核酸的检测
PCR（含RTPCR、real time PCR等）
16S rRNA 基因序列
分析
核酸杂交 技术
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抗毒素(antitoxin)
将类毒素或外毒素给马进行多次免疫后，待马 匹产生高效价抗体后采血，分离血清，提取其 免疫球蛋白精制成抗毒素制剂。
主要用于外毒素所致疾病的治疗和紧急预防。 临床常用的有破伤风、白喉精制抗毒素、肉毒 抗毒素以及气性坏疽多价抗毒素等。
使用这种异种抗毒素时应注意避免Ⅰ型超敏反 应的发生。
核酸杂交、PCR 16S rRNA基因序列分析
基因芯片等
直接凝集试验 乳胶凝集试验 补3 体结合试验
ELISA等
一.临床标本的采集与运送原则
标本采集
早期采集 无菌操作 选感染部位 最佳时间采集 双份血清
标本运送
做好标记 置于密闭容器内
尽快送检
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二、细菌的检测
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（一）细菌的形态学检查
暗视野 显微镜
基因芯片 技术
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三、细菌感染的血清学诊断
用已知的细菌或其特异性抗原检测病人血清 或其他体液中的抗体及其效价的变化，可以 作为感染性疾病的辅助诊断。
由于本实验多采取病人血清检测抗体，故常 称为血清学诊断（serological diagnosis）。
一般适用于抗原性较强的细菌，以及病程较 长的感染性疾病。也可用于调查人群对某病 原菌的免疫应答水平以及检测疫苗接种后的 预防效果。

细菌感染的诊断和防治

细菌感染的诊断和防治
一、标本采集与送检原则
❖ 标本采集时应注意无菌操作，尽量避免杂菌污染。 ❖ 根据不同疾病以及同一疾病不同时期采取不同标本。 ❖ 应在使用抗菌药物前采集标本，否则在培养时应加入
药物拮抗剂。采集局部不得使用消毒剂。 ❖ 标本必须新鲜，采集后尽快送检。尽可能采集病变式。（冷藏、保温、
第二节 细菌感染的防治
➢ ※ 获得性免疫产生的方式
主动免疫 被动免疫
自然免疫 患病、隐性感染 人工免疫 疫苗、类毒素 自然免疫 胎盘、初乳 人工免疫 抗毒素、丙球
一、细菌感染的预防
（一） ※人工主动免疫(artificial active immunity)
将疫苗(vaccine)或类毒素接种于人体，使机体产 生获得性免疫力的一种防治微生物感染的措施， 主要用于预防。
（二）抗菌药物作用机制 1、影响细胞壁合成 2、影响细胞膜功能 3、影响蛋白质合成 4、影响核酸代谢
本章总结
➢ 病原菌的基本检验程序有哪些？ ➢ 获得性免疫产生的方式有哪些？ ➢ 概念：人工主动免疫、人工被动免疫
类毒素、疫苗 ➢ 人工主动免疫与人工被动免疫的区别？ ➢ 疫苗的种类？ ➢ 灭活疫苗与减毒活疫苗的区别有哪些？
➢ 抗毒素 ➢ 抗菌血清 ➢ 胎盘球蛋白、丙种球蛋白 ➢ 细胞免疫制剂
人工主动免疫与人工被动免疫比较
区别要点 人工主动免疫 人工被动免疫
免疫物质
抗原
免疫出现时间 免疫维持时间
主要用途
慢，2-4周
长， 数月-数年
预防
抗体或 细胞因子等 快，立即
短，2-3周
治疗或 紧急预防
二、细菌感染的治疗
（一）抗菌药物种类 1、抗生素（antibiotics) 2、化学合成药物
第七章 细菌感染的诊断和防治

第13章 细菌感染诊断与防治


细菌的分离培养
分离培养是利用培养基进行培养，使细 菌能分散生长出成单个菌落。
各种培养基
分离培养
分离培养出菌落，还需要用以下方法作进一 步的细菌鉴定，才能检测细菌种的特性、对 药物的敏感性等。
观察菌落特征：化脓性链球菌—小而透明、溶 血环 观察细菌染色特征 做细菌生化试验 做细菌血清学试验 动物试验 药物敏感试验（AST）
ß -内酰胺类：青霉素、头胞菌素 大环内酯类：红霉素、阿奇霉素、罗红霉素 氨基糖苷类：链、庆大、卡那霉素 四环类：四环素 氯霉素 人工合成：喹诺酮类、磺胺类 其他抗生素：糖肽类包括万古霉素和替考拉宁
（二）抗菌药物的作用机制
影响细菌细胞壁的合成：青霉素 损伤细胞膜的结构：多黏菌素、两性霉 素B 影响蛋白质的合成
死疫苗 选用免疫原性强的细菌，经人 工培养后，用理化方法杀死而成。如伤寒、 霍乱、狂犬病疫苗 活疫苗 用减毒或无毒力的活菌制成。 如天花、脊髓灰质炎减毒活疫苗
区别点 制剂特点 接种剂量与特 点 保存及有效期 免疫效果
死疫苗 死，强毒株 量较大，2~3 次 易保存，约1 年 较低， 维持数月~2年
血清学试验
原理
用已知抗原或抗体检测患者体液中未知的抗原 或抗体。 血清学鉴定
用已知特异性抗体检测患者体液中未知的细菌抗 原（O抗原、H抗体等）
血清学诊断
用已知的细菌抗原检测患者血清中的抗体及其效 价的动态变化，可作为某些传染病的辅助诊断
血清学试验
种类
凝集试验、中和试验、免疫荧光法、酶联 免疫吸附试验等
标本
双份血清标本，恢复期血清抗体效价比急 性期升高≥4倍者才有意义。单份血清效价 超过一定标准才有诊断意义

第八章细菌感染的诊断与防治

包括核酸探针杂交和PCR。 主要用于标本中含量少、生长极为缓慢或难
于生长的细菌检测。 核酸探针检测较为准确，但操作较复杂；
PCR技术快速、敏感，但常受到非特异性因素的 影响。
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3.临床细菌鉴定系统
主要用于对临床分离获得的细菌进行种、属鉴定和抗 生素敏感试验快速自动化的分析。
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活疫苗与死疫苗比较
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3.类毒素
细菌的外毒素经o.3％一o.4％甲醒处理，毒性 消失而保留其免疫原性，即为类毒素
常用的类毒素有白喉、破伤风类毒素
2019/10/10
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4.新疫苗的研制
(1)亚单位疫苗
不含病原体核酸，仅含能诱发宿主产生中和抗 体的蛋白或表面抗原
如流感病毒血凝素、神经氨酸酶亚单位疫苗、 腺病毒衣壳、脑膜炎球菌、肺炎球菌荚膜多糖亚 单位疫苗等
(2)基因工程疫苗或DNA重组疫苗 (3)核酸疫苗 (4)转基因植物疫苗
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二、人工被动免疫
生物制品： 免疫血清（抗毒素、抗菌血清）、丙种球蛋白、 免疫球蛋白、免疫细胞、细胞因子等
1．抗毒素
主要有破伤风抗毒素、白喉抗毒素、肉毒抗毒
素及气性坏疽多价抗毒素等。 2.胎盘球蛋白和血浆丙种球蛋白
目前已用于多种与免疫相关病的治疗，如肿瘤、 病毒感染、自身免疫病、艾滋病等。特别是在肿 瘤的免疫治疗中，显示出较好效果.
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三、生物制品使用的注意事项
对象 途径 剂量 次数 时间 禁忌症等
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人工主动免疫与被动免疫比较
人工主动免疫
人工被动一面免疫
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各类抗感染药具体销售情况是：抗生素占世界抗感染 药物市场的最大份额(约250亿～260亿美元)；抗病毒药 居第二位(约55亿～56亿美元)；第三位为抗真菌药(40 亿～42亿美元)；其余则为疫苗和抗原生动物药等抗感染 药小品种。
头孢菌素类在世界抗感染药物市场中占较大比重，目 前其销售额约占抗感染药销售额的40%，有的国家高于这 一数值。在美国市场，头孢菌素的销售额占抗感染药销售 额的45%。
由丹麦医生Hans Christian Gram于1884年创立。
细胞壁结构学说
原 理： 等电点学说
化学结构学说
步骤
一、制备涂片标本
涂片
干燥
固定
镜检
水洗、吸干
染色
二、染 色
涂片固定 结晶紫初染
碘液媒染 乙醇脱色 复红复染
结果
紫色——革兰阳性（G+）菌 红色——革兰阴性（G-）菌
意义
（1）鉴别细菌 （2）选择药物 （3）与致病性有关
死疫苗 活疫苗 类毒素 新型活疫苗 基因工程疫苗
亚单位疫苗 重组载体疫苗
合成疫苗
DNA疫苗 转基因植物疫苗 治疗性疫苗
灭活疫苗
伤寒、霍乱、流脑、钩体病等
减毒活疫苗
BCG、鼠疫、炭疽、脊灰、麻疹
亚单位疫苗
肺炎链球菌、脑膜炎奈瑟菌、流 感嗜血杆菌的荚膜多糖，钩端螺 旋体外膜蛋白等。
类毒素
百白破三联疫苗
08：甲肝疫苗、流脑疫苗、乙脑疫苗、麻风腮疫苗
重点人群和地区：出血热疫苗、炭疽疫苗、钩体疫苗
预防的传染病15种:
乙肝、结核、脊灰、百日咳、白喉、破伤风、 麻疹、甲肝、流脑、乙脑、风疹、腮腺炎、出血 热、炭疽、钩体
三、细菌感染的治疗
1、影响细胞壁的合成 2、影响细胞膜的功能 3、影响蛋白质的合成 4、影响核酸代谢
比较
区别点
死疫苗
活疫苗
制剂特点
死，强毒株 活减毒株
接种剂量与特点 量较大，2~3次 量较小，1次
保存及有效期 易保存，约1年 不易保存，4℃数周
免疫效果
较低，
较高，
维持数月~2年 维持3~5年甚至更长
国家免疫规划疫苗:2008年2月
以前：乙肝疫苗、卡介苗、脊灰疫苗、百白破疫苗、 麻疹疫苗、白破疫苗
种类
凝集试验 --
肥达试验、外斐试验等
中和试验 --
梅毒VDRL、RPR试验等
沉淀试验 --
抗“O”试验等
补体结合试验 --
Q热柯克斯体抗体检测等
使机体获得特异性免疫力和正确使用抗菌 药物治疗细菌感染，是防治病原菌感染的重 要原则。
一、人工主动免疫
将疫苗或类毒素接种于人体，使机体获得 免疫力
主要生物制品
二、人工被动免疫
注射含有特异性抗体的免疫血清、纯化免疫球蛋白 抗体、细胞因子等免疫制剂，使机体获得特异性免疫力
主要生物制品
抗毒素 胎盘、丙种球蛋白 抗菌血清 干扰素
细胞免疫制剂
区别要点
人工主动免疫
免疫物质
抗原
免疫出现时间 满，2~4周
免疫维持时间 长，数年~数月
主要用途
预防
人工被动免疫 抗体或细胞因子等 快，立即 短，2~3周 治疗或紧急预防
金葡菌菌血症的死亡率
%
80
70
Rubin RJ et al. Emerging Infect Dis 1999;5:9-17
70
60 抗生素 50 前时代
50
40 30 20 10 0
1937
28
青霉素 时代
1944
耐青霉素 时代
1954
30
苯唑西林 时代
1962
11
万古霉素 时代
1995
近年来，世界抗生素市场的平均年增长率约为 8%，世界抗感染药物市场销售额为400亿美元， 约占全球治疗性药物市场的10%。
细菌学诊断
避免杂菌污染 不同期不同标本 标本的采集和运送 抗菌素使用前 标本必须新鲜 运送注意保存 采集病变明显部位
细菌形态检查法
一）不染色标本检查法
活菌轮廓 动力
二）染色标本检查法
单染色法 复染色法 鉴别染色法 革兰染色
抗酸染色 特荚殊膜染染色色法
鞭毛染色 芽胞染色
革兰染色法（Gram Stain）
病原菌的检查程序
直接涂片镜检
Байду номын сангаас
初步诊断
分离培养
观察菌落形态
染色镜检
病原菌抗原检测 生化试验
明 确
血清学鉴定 病原菌核酸检测
其他检测技术
动物试验
诊 断
（鲎试验、气象色谱分析）
药物敏感试验
血清学的诊断
原理 -- 已知抗原检测未知抗体
结 果 判 -- 效价高低 断
-- 动态观察
双份血清标本，恢复期血清中抗体效价比 急性期血清中抗体效价升高≥4倍者方有意义