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二章细菌感染实验诊断

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[病原生物学] 第2章 细菌的形态与结构

[病原生物学] 第2章 细菌的形态与结构

只要能破坏肽聚糖结构或抑制其合成的物 质，都有杀菌或抑菌的作用。
• 溶菌酶能水解聚糖骨架中的糖苷键；
• 青霉素、头孢霉素可抑制五肽交联桥与 四肽铡链末端第四位D-丙氨酸的连接；
• 万古霉素、杆菌肽可抑制四肽侧链的连 接。
人体细胞无细胞壁、也无肽聚糖，故这些 物质对人体细胞无破坏作用。
2 革兰阴性菌细胞壁
病原生物学
细菌的形态与结构
学习目标
1、掌握：细菌的大小与基本形态；细菌的基本结构和特殊结构 2、熟悉：细菌的实验室诊断 3、了解：细菌感染治疗的基本原则
概念
细菌（bacterium）是属原核生物界（prokaryotae）的一种单细胞微生物，有广义和狭义之分。 广义上泛指各类原核细胞型微生物，包括细菌、放线菌、支原体、衣原体、立克次体、螺旋体。 狭义上则专指其中数量最大、种类最多、具有典型代表性的细菌，是本章讨论的主要对象。 它们形体微小，结构简单，有细胞壁和原始拟核，无核仁和核膜，除核糖体外无其他细胞器。
（三）细胞质（cytoplasm）
3，胞质颗粒 是细菌贮存的营养物质。一 般在细菌营养供应充足时，胞浆颗粒较多， 能源缺乏时减少或消失。
较常见的是异染颗粒，成分是RNA和多偏 磷酸盐，嗜碱性强，经染色后颜色明显不 同于菌体的其他部位，。白喉棒状杆菌有 此颗粒，可作为细菌鉴别的依据。
（四）核质（nuclear material）
2，核糖体 又称核蛋白体。是蛋白质的合 成场所。细菌核糖体沉降系数为70s，由 50s和30s两个亚基组成。链霉素能与细菌 核糖体30s小亚基结合，红霉素能与50s大 亚基结合，使核糖体失去功能，从而干扰 蛋白质的合成，导致细菌死亡。
但真核生物（包括人类）细胞的核糖体为 80s，由60s和40s两个亚基组成，所以上 述抗生素对人体细胞蛋白合成无影响。

细菌检验基本技术

细菌检验基本技术
混合营养物制品。
组成和作用
---营养物质：蛋白胨、肉浸液、牛肉膏、糖醇类、血液、 鸡蛋和动物血清、生长因子、无机盐类
---水 ---凝固剂：琼脂、明胶 ---抑制剂 ---指示剂
4
培养基的种类（按用途分类）
基础培养基：培养营养要求不高的细菌，如普通平板。 营养培养基：能满足营养需求较高细菌的生长，如血平板。 鉴别培养基：含有某些特定的底物，用于鉴别细菌，如克
液体培养基接种法 半固体穿刺接种法 :用于观察细菌动力 斜面接种法 倾注培养法:用于细菌计数 涂布法
分区划线法
第一区划线 灭菌接种环 第二区划线 灭菌接种环 第三区划线 灭菌接种环
其他接种方法
5
细菌培养法
一般培养（需氧培养）
---培养温度：35℃（采用恒温培养箱） ---培养时间：18～24h
二氧化碳培养法：二氧化碳培养箱、烛缸法、化学法 厌氧培养法：厌氧培养箱、厌氧袋、厌氧罐、疱肉培养
2017-10-11
细菌内毒素的检测
目的： 主要用于诊断病人是否发生革兰阴性细菌感染。 用于检测注射用液和生物制品有无内毒素污染。
检测方法： 家兔发热法 鲎试验
细菌外毒素的测定
体内毒力试验：细菌外毒素对机体的毒性作用，可被
相应抗毒素中和，若先给动物注射抗毒素，然后再注射外 毒素，则动物不产生中毒症状。
有动力 现象
无动力 现象
细菌的生物化学鉴定技术
3
6
细菌的代谢产物检测与鉴定
碳水化合物的代谢试验 蛋白质和氨基酸的代谢试验 碳源和氮源利用试验 酶类试验 抑菌试验
碳水化合物的代谢试验
糖类发酵试验 氧化－发酵试验 β－半乳糖苷酶试验（ONPG） 七叶苷水解试验 甲基红试验 VP试验

细菌与病毒的病原学检查法

细菌与病毒的病原学检查法
抗原检测：
凝集试验、对流免疫电泳、酶免疫技术、免疫荧光技 术
核酸检测：
1.核酸杂交技术:Southern印迹杂交、Northern印迹 杂交、原位杂交
2.PCR技术 3.基因芯片 4.16rRNA基因序列分析：编码rRNA，保守区、可变 区
三、抗体的检测（血清学诊断）
凝集试验：直接、间接、协同、冷凝集 沉淀试验：环状、絮状、双向、对流电泳 补体结合试验： 酶联免疫吸附试验（ELISA）：
取双份血清，抗体效价比早期高4倍以上有意
义。
第二节 病毒感染的微生物学检查法
一、形态学检查
1.电子显微镜检查
直接镜检法：107颗粒/ml，电镜观察病毒
颗粒的形态和结构
免疫电镜法（IEM）：
标本+特异性抗体 病毒颗粒聚集 电镜 观察
轮状病毒的粪便、HAV、HBV的血清、疱疹 病毒的疱疹液，可早期诊断。
三、病毒在培养细胞中增殖的鉴定指标
细胞的变化：CPE 红细胞吸附（HAd）： 红细胞凝集： 病毒干扰作用：风疹病毒，埃可病毒,Vero细
胞。
中和试验（NT）：是病毒在活体内或细胞培
养中被特异性抗体中和而失去感染性的一种试验
空斑形成试验：蚀斑形成单位（PFU），感染
性病毒的滴度用PFU/ml表示。
四、病毒成分的检测
血凝抑制试验
病毒+红细胞 血凝现象
病毒+抗体+红细胞 血凝现象消失
用于流感病毒、副流感病毒的诊断、流行 病学调查及鉴定病毒的型和亚型。
ELISA法：HSV、CMV、EB病毒等
蛋白印迹技术：用已知病毒蛋白检测未
知病毒
病毒抗原的检测：HIV和HBV抗原
病毒核酸的检测

第二章 细菌概论(二)

第二章 细菌概论(二)

课时授课计划审签编号组织教学：考勤、填写教学日志1基本课题：第二节细菌的生长繁殖与变异教学目标：1. 列出细菌的代谢产物说明其意义。

（重点）2. 简述细菌的人工培养。

3. 说出细菌生长繁殖的规律。

（重点）4. 理解细菌遗传与变异的机理。

（难点）5. 简述细菌的变异在医学实践中的应用。

（重点）教学内容教学设计时间（分）复习旧课：细菌的特殊结构有哪些？ 4第二节细菌的生长繁殖与变异一、细菌的生长繁殖（一）细菌生长繁殖的条件师生共同分析总结。

10（二）细菌生长繁殖的规律利用挂图解释生长曲线。

10二、细菌的代谢产物及意义201. 列举临床实例讲解其意义。

2. 利用板图讲解。

三、细菌的人工培养 1. 利用板图讲解细菌的生10长现象。

2. 重点放在实验课上讲解。

四、细菌的变异（一）细菌变异的现象结合临床实例及预防接种25阐述细菌的变异现象。

（二）细菌的遗传物质 5由生物学知识引入。

（三）细菌变异的机制简介、自学。

5 （四）细菌变异的实际意义应用临床实例讲解。

5小结 41. 列出细菌的代谢产物说明其意义。

2. 热原质具有什么特点？在临床实践中有何实际意义？布置作业与预习 1 作业：列出细菌的代谢产物说明其意义。

预习：第五节细菌的致病性与感染课后分析第二章细菌的生长繁殖与变异细菌与其他生物细胞一样，不断从外界环境中获得营养，合成自身细胞成分并获得能量，同时不断排除废物，完成新陈代谢，得以生长繁殖。

一、细菌的生长繁殖（一）细菌生长繁殖的条件1.营养物质：包括水分、碳源、氮源、无机盐类、生长因子。

2.酸碱度：大多数为pH7.2-7.6。

3.温度：大多数病原菌为37度。

4.气体：氧和二氧化碳。

（1）专性需氧菌：如结核杆菌。

（2）专型厌氧菌：如破伤风杆菌。

（3）兼性厌氧菌：大多数病原菌属此。

（二）细菌生长繁殖的规律1.细菌的繁殖方式：无性二分裂方式进行繁殖。

2.细菌的繁殖速度：一般20-30分钟，个别分裂缓慢。

3.细菌的生长曲线（1）迟缓期：最初1-3小时，菌数不增加。

(医学微生物学)8微生物感染的实验室诊断

(医学微生物学)8微生物感染的实验室诊断

3
核酸检测
通过检测病原体的DNA或RNA来快速准确地诊断微生物感染。
常见的细菌感染诊断
革兰染色
通过染色的方法快速鉴定细菌的类型，例如革兰氏阳性和革兰氏阴性细菌。
酶联免疫吸附法
利用抗体结合靶细胞表面的蛋白质，诊断细菌感染。
通过培养检测抗生素敏感性
将可疑的菌落放置在含有一系列抗生素的培养基上，以确定对哪种抗生素敏感，从而选择恰 当的治疗方案。
常见的真菌感染诊断
1
孢子培养
通过培养真菌孢子来鉴定真菌种类。
2ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
抗真菌药物敏感性测试
使用不同的真菌菌株检测哪种药物对该菌株敏感，用于治疗患者的真菌感染。
3
墨汁印迹
真菌孢子会在墨汁中留下一个特定的形状，可用来确定真菌属种。
病毒感染的实验室诊断方法
聚合酶链式反应
通过扩增病毒核酸来诊断病毒感 染。
电子显微镜
直接观察病毒颗粒，确认病毒感 染。
荧光显微镜
检测病毒抗原或通过标记病毒核 酸来诊断病毒感染。
实验室诊断技术的发展趋势
1 基于测序的新技术
通过高通量测序技术，大 规模测序微生物基因组， 促进对微生物的研究和进 一步的治疗。
2 微流控芯片技术
微小的流控芯片可用于诊 断多种疾病，特别适用于 早期诊断和治疗。
医学微生物学：8种微生 物感染的实验室诊断
微生物感染可导致许多疾病，而实验室诊断是及时准确地治疗这些疾病的关 键。
实验室诊断的重要性
提供快速检测
实验室诊断可以快速确定感染的病原体，为治疗提供关键信息。
避免误诊和漏诊
准确的实验室诊断可以避免不必要的治疗和患者进一步恶化。
微生物感染的常见病原体

细菌感染的分子生物学检验

细菌感染的分子生物学检验

第二节 结核分枝杆菌的分子生物学检验
结核分枝杆菌(TB)，简称结核杆菌，是引起结核 病的病原体。随着抗结核药物的不断发展和卫生 生活状况的改善，结核的发病率和死亡率曾一度 大幅下降。近年，由于艾滋病和结核分枝杆菌耐 药菌株的出现、免疫抑制剂的应用、吸毒、贫困 及人口广泛流动等因素，全球范围内结核病的疫 情死灰复燃。 据WHO统计，全世界约1/3的人感染了结核分枝 杆菌，在某些发展中国家成年人中群中结核分枝 杆菌携带率高达80%，其中的5%~10%携带者可 发展为活动性结核病。
TB是一种革兰氏阳性菌，G+C含量高，其细胞壁 除肽聚糖层外，还含有另外一层由特殊脂质、糖 脂和多糖组成的附加层。TB呈细长略弯曲，常聚 集成团，用抗酸性染色被染成红色。
对养要培求特殊条件，一 般要经4-6周才出现肉眼可 见的菌落。TB通过呼吸道、 消化道和破损的皮肤粘膜 侵入机体，它被吞噬后能 在吞噬细胞内繁殖，导致 巨噬细胞裂解，还可在细 胞外繁殖。
6、扩增结核分枝杆菌直接试验（ AMTDT）
AMTDT以结核分枝杆菌的16SrRNA为扩增模板，采 用转录介导的扩增技术对靶核酸进行扩增，采用化 学发光物吖啶酯标记的cDNA探针与扩增的靶基因杂 交，探针与扩增产物杂交后利用杂交保护试验除去 未杂交的标记探针，最后利用化学发光仪检测化学 发光信号。
结核分枝杆菌天然地对很多抗生素有抵抗力，使得 治疗极其困难。该菌的药物抵抗力主要由于其具有 高度疏水的细胞壁充当渗透屏障。同时，在基因组 中还发现有许多药物抗性决定因子的编码序列，包 括水解酶或者药物修饰酶，例如乙酰转移酶和很多 药物外排泵系统。
抵抗力特点：“三耐四敏” ※耐干燥、耐酸碱、耐孔雀绿（1：13000） ※对湿热、70％乙醇、紫外线、常用抗结核药物（但长

细菌感染的检测方法与防治原则

细菌感染的检测方法与防治原则

酶免疫技术
用酶标记的抗体检测特异性可溶性抗原的实验技术。
19
（四）细菌核酸的检测
PCR（含RTPCR、real time PCR等）
16S rRNA 基因序列
分析
核酸杂交 技术
基因芯片 技术
20
（五）生物芯片技术
将核酸片段、蛋白质或酶、抗原或抗体、 细胞及组织等生物样品有序地固定于硅片、尼 龙膜等固相支持物上，在一定的条件下进行生 化反应。用化学荧光法、酶标法或同位素法显 示反应结果，通过特定的仪器读取与收集数据， 并用软件进行数据分析，从而判断样品中靶分 子的种类和数量。
自然免疫
主动免疫：隐 性或显性感染 被动免疫：获 得母体的Ab(胎 盘/初乳)
人工免疫
主动免疫：疫 苗或类毒素等 被动免疫：抗 毒素或丙种球蛋 白等
25
一、人工主动免疫
人工主动免疫（artificial active immunization）是 将疫苗或类毒素接种于人体，刺激机体免疫系统产生特 异性免疫应答，机体主动产生获得性免疫力的一种防治 微生物感染的措施，主要用于特异性预防。
14
稀释法
• 以一定浓度的抗菌药物与含有待检细菌的 培养基进行一系列不同倍数稀释（通常为 双倍稀释），经培养后观察其最低抑菌浓 度。
• 稀释法
– 琼脂稀释法——使用琼脂培养基 – 肉汤稀释法——使用肉汤培养基
15
抗生素连续梯度法（E-test法）
将稀释法和扩散法的原理相结合，使用预先设 定的稳定且连续的抗菌药物浓度梯度，采用琼脂培 养基培养以确定不同抗菌药物对微生物的最低抑菌 浓度（MIC）。
血清（双 份）标本
形态学检查
细菌分离培 养与鉴定
细菌成 分检测

简介一次细菌学诊断的步骤

简介一次细菌学诊断的步骤

简介一次细菌学诊断的步骤细菌学诊断是通过对患者样本中的细菌进行检测和分析，从而确定感染的病原体的种类和性质。

它在临床诊断和治疗中起着至关重要的作用。

一次典型的细菌学诊断通常包括患者样本采集、培养、鉴定和药敏试验等步骤。

第一步：患者样本采集从患者身体不同部位采集样本，如血液、尿液、呼吸道分泌物、脓液等。

根据感染部位的不同，选择合适的采样方法，确保样本的纯净度和有效性。

采集样本时要遵守无菌操作的原则，防止细菌污染。

第二步：样本培养将采集到的样本移植到培养基上，为细菌提供生长所需的营养和环境条件。

常用的培养基包括血平板、巴氏琼脂、McConkey琼脂等。

样本在适当的温度、湿度和气氛条件下培养一段时间，通常在24小时到48小时内，以促进细菌的繁殖和生长。

第三步：鉴定在培养基上观察细菌的形态、生理特性等，进行初步鉴定。

通过显微镜观察细菌的形态、大小、排列等形态特征，如球菌、杆菌、弧菌等。

同时，进行各种生理和生化试验，如氧需求性、羟基溴苯蓝试验、氧化/发酵试验等，对细菌进行进一步鉴定。

还可以利用分子生物学技术如PCR、酶链反应等，鉴定细菌的特异基因序列，提高鉴定的准确性。

这些步骤主要通过专业实验室的技术人员进行。

第四步：药敏试验诱导鉴定细菌的敏感性和抗性。

药敏试验可以帮助医生选择合适的抗生素治疗感染。

常用的药敏试验包括纸片扩散法、微量稀释法等。

在培养基上，将多种抗生物质置于不同的纸片上，然后在培养基上分别放置细菌，观察抗生素对细菌的作用。

通过纸片周围的抑菌圈的直径或最小抑菌浓度等参数，可判断细菌对不同抗生素的敏感性和抗性。

第五步：结果解读和分析根据培养和鉴定结果以及药敏试验结果，综合分析，确定感染的细菌的种类和药物敏感性。

这将有助于医生选择适当的治疗方案，包括选择有效的抗生素和药物剂量。

细菌学诊断是一个复杂而精确的过程，需要专业的知识和技术。

通过这些步骤，可以辅助医生准确诊断细菌感染，并制定有效的治疗方案，提高患者的治疗效果。

微生物学细菌感染的检查方法与防治

微生物学细菌感染的检查方法与防治

甲基红 (methyl red) 试验
产气肠杆菌分解葡萄糖产生丙酮酸，后 者经脱羧后生成中性的乙酰甲基甲醇，故 培养液pH＞5．4，甲基红指示剂呈桔黄色， 是为甲基红试验阴性。大肠埃希菌分解葡 萄糖产生丙酮酸，培养液pH＜4．5，甲基 红指示剂呈红色，则为甲基红试验阳性。
枸橼酸盐利用 (citrate utilization) 试验
糖发酵试验
不同细菌分解糖类的能力和代谢产物 不同。例如大肠埃希菌能发酵葡萄糖和 乳糖；而伤寒沙门菌可发酵葡萄糖，但 不能发酵乳糖。即使两种细菌均可发酵 同一糖类，其结果也不尽相同，如大肠 埃希菌有甲酸脱氢酶，能将葡萄糖发酵 生成的甲酸进一步分解为CO2和H2，故 产酸并产气；而伤寒沙门菌缺乏该酶， 发酵葡萄糖仅产酸不产气。
Himalayan palm civet
6+/6
Chinese hare
0+/3
病毒在细胞中增值的指标： 1 细胞变化 2 红细胞吸附 3 干扰现象 4 细胞代谢改变
Uninfected cells
3 days
4 days
Fig. 1
Isolation of SCoV like animal virus in FRhK-4 cell cultures.
检测病毒抗原及抗体方法
对于一些血清型别不多的病毒或在寻常细胞培养 系统中还不能成功增殖的病毒，直接检测抗原是 快速而实用的方法。这一方法要求标本中有一定 量的抗原和具备高质量的抗体；其原则为免疫学 技术，即用特异标记的抗体检测相应的抗原。可 以用免疫荧光或免疫酶标记抗体检测在病毒感染 局部脱落细胞或分泌物细胞中的抗原，也可用酶 联免疫测定法 (ELISA) 或乳胶凝集法检测抗原。 这一方法在数小时或一天内可获得结果。

细菌感染的实验室诊断

细菌感染的实验室诊断

（二）培养基的种类
1.按培养基的物理性状 （1）液体培养基：增菌 （2）固体培养基：纯化，增菌 （3） 半固体培养基：动力检测，保种
液体培养基
固体斜面培养基
半固体培养基
2. 按营养成分和用途分类
（1）基础培养基：只有基本营养成分
（2）营养培养基：加有血液 、血清等
（3）鉴别培养基：含有特定底物和指示剂
5.负染法 背景着色
肺炎链球菌荚膜染色
墨汁负染法
芽胞染色
第三节 细菌分离培养和鉴定
一、培养基的种类和选择 培养基（culture medium） 由人工方法配制而成的，专供微生物 生长繁殖使用的混合营养物制品。
（一）培养基的组成成分
1. 营养物质 碳源、氮源、无机盐、水、生长因子 （1）蛋白胨 提供氮源
2. 吲哚（indol）试验 原理 色氨酸→吲哚→玫瑰吲哚 ↑ 吲哚试剂（对二甲基氨基苯甲醛） 培养基 蛋白胨水培养基 结果 阳性：红色
3. 硫化氢试验
原理 含硫氨基酸→ H2S+硫酸亚铁→FeS黑色 醋酸铅→ PbS黑色 培养基 醋酸铅培养基 结果 阳性：黑色沉淀 用途 肠杆菌科菌属间的鉴定
植物胨: 大豆 动物胨：牛肉、动物组织等
（2）肉浸液 碳源、氮源 （3）牛肉膏 氮源 （4）糖（醇）类 碳源和能源
（5）血液 提供特殊生长因子、观察溶血 （6）无机盐类
常用元素：P、S、K、Na、Mg、Ca、Fe等 微量元素：Co、Zn、Mn、Cu、Mu等
（7）鸡蛋与动物血清
用于某些特殊培养基
（8）生长因子
3. 复合染料（中性染料）

碱性染料与酸性染料的复合物，如瑞氏染料、 姬姆萨染料等
4. 单纯染料

细菌感染的实验室检查

细菌感染的实验室检查
谢谢您的观看
通过检测患者血清中的抗体以确定患者是 否感染某种细菌。
通过病理学方法对感染部位的组织进行观 察和诊断。
实验室检查的流程
样本处理
将采集的样本进行处理，如离 心、过滤等，以提取样本中的 细菌。
药敏试验
对分离鉴定的细菌进行药敏试 验，以确定患者对哪种抗生素 敏感。
采集样本
根据患者的症状和医生的诊断 ，采集患者的血液、尿液、粪 便、分泌物等样本。
推进实验室检查的标准化和规范化
制定行业标准
组织制定实验室检查相关的国际和国内标准，规范实验室检查的 操作流程和质量标准。
培训和教育
加强实验室检查人员的培训和教育，提高他们的专业素养和技术水 平。
质量控制
建立实验室检查的质量控制体系，定期对实验室进行检查评估，确 保实验室检查数据的准确性和可靠性。
THANKS
04
分子生物学检查
分子生物学检查方法
聚合酶链反应（PCR）
是一种常用的分子生物学检查方法， 通过复制目标DNA片段来增加其数量 ，从而进行快速、灵敏的检测。
基因测序
生物芯片技术
利用芯片上的微小点阵列进行多重检 测，可同时检测多种病原菌。
对细菌的基因组进行测序，以识别和 鉴定细菌的种类和亚种。
分子生物学检查结果解读
培养与鉴定
将提取的细菌进行培养、分离 和鉴定，以确定感染的细菌种 类和数量。
结果报告
将实验室检查结果报告给医生 ，以便医生根据结果制定合适 的治疗方案。
02
细菌培养与鉴定
细菌培养方法
01
02
03
常规培养
将样本接种在培养基上， 通过培养观察细菌的生长 情况、形态、染色等特征 ，以确定细菌种类。

【宠物微生物课件】细菌感染的实验室诊断方法

【宠物微生物课件】细菌感染的实验室诊断方法
宠物微生物
细菌感染的实验室诊断方法
细菌感染的实 验室诊断方法
一、检测细菌 二、检测细菌的抗原或抗体 三、检测细菌遗传物质
一、检测细菌
直接涂片显微 镜检查
分离培养动物接种试验Fra bibliotek生化试验
01
02
03
04
一、检测细菌
1、直接涂片显微镜检查
在细菌病的实验室诊断中，形态检查的应用 有两个时机，一是将病料涂片染色镜检；二 是在细菌的分离培养之后，将细菌培养物涂 片染色，观察细菌的形态、排列及染色特 性，这是鉴定分离菌的基本方法之一，也是 进行生化鉴定、血清学鉴定的前提。
一、检测细菌
2、分离培养
细菌的分离培养及移植是细菌学检验中最重 要的环节，细菌病的诊断与防治以及对未知 菌的研究，常需要进行细菌的分离培养。分 离纯化的病原菌，可为生化试验和血清学试 验提供纯的细菌，也可用于细菌的计数、扩 增和动力观察等。
一、检测细菌
3 、动物接种试验
实验动物接种可用于病原体的分离与鉴定， 此外，也可用于确定病原体的致病力，恢复 或增强细菌的毒力，测定某些细菌的外毒 素，制备疫苗或诊断用抗原，制备免疫血 清，检验药物的治疗效果及毒性等。
一、检测细菌
4、生化试验
细菌生化试验的主要用途是鉴别细菌。对革 兰氏染色反应、菌体形态及菌落特征相同或 相似细菌的鉴别具有重要意义。
细菌感染的实 验室诊断方法
一、检测细菌 二、检测细菌的抗原或抗体 三、检测细菌遗传物质
二、检测细菌的抗原或抗体
1、检测抗原
利用已知的特异性抗体测定 有无相应的细菌抗原可以确
感谢各位聆听
细菌感染的实验室诊断方法
定菌种或菌型。
细菌感染的实 验室诊断方法

细菌感染的实验室诊断（一）

细菌感染的实验室诊断（一）

细菌感染的实验室诊断（一）实验室诊断主要包括以检测致病菌及其抗原、产物或核酸为目的的细菌学诊断，以及检测患者血清中特异性抗体为目的的血清学诊断。

一、细菌学诊断（一）标本采集细菌感染性疾病的实验室检查结果主要取决于临床标本的质量、采集时间及方法、实验人员的技术熟练程度及经验。

临床医生应该知道何时和怎样采取标本，需作哪些实验室检查，以及如何解释结果。

为提高致病菌检出率，避免诊断错误或漏检，标本采集与送检过程应遵循下列原则：1．严格执行无菌操作，尽量避免患者正常菌群或外界环境中杂菌污染标本。

采取局部病变标本处，不可用消毒剂，必要时宜以无菌生理盐水冲洗，拭干后再取材。

从呼吸道、消化道、泌尿生殖道、伤口或体表分离可疑致病菌时，应与其特定部位的正常菌群及临床表现一并加以考虑，因为目前内源性感染呈不断上升趋势。

2．根据致病菌在患者不同病期的体内分布和排出部位，采集不同的标本（表7-1）。

例如流行性脑膜炎患者取脑脊液、血液或出血瘀斑；伤寒患者在病程第1～2周内取血液，第2～3周时可取粪便。

尽可能采集病变明显部位的材料。

3．应在疾病早期和使用抗菌药物之前采集标本，否则可能需停药数天后采集，或者在分离培养时加入药物拮抗剂。

4．标本必须新鲜，采集后尽快送检，尤其是检测抵抗力弱的细菌。

若不能立即送检，应将标本置于特殊的转运培养基中，低温保存，以减缓致病菌的死亡，阻止杂菌的过度生长。

送检过程中，除不耐寒冷的脑膜炎奈瑟菌、淋病奈瑟菌等要保温外，多数菌可冷藏送运。

（二）致病菌的检验程序主要有直接涂片染色镜检、分离培养、生化试验、血清学试验等，有的尚需作动物试验等。

细菌学快速诊断新技术主要有核酸杂交（nucleic acid hybridization）和聚合酶链反应（polymerase chain reaction, PCR）等。

敏感性、特异性和检测效率是影响临床诊断程序选择的重要因素。

1．直接涂片染色镜检直接涂片染色镜检法可在显微镜下直接观察致病菌的形态、大小、排列方式和染色特点。

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二、标本的处理
1.标本保存在4℃环境中，在2h之内送检。 脑脊液则要在25 ℃保存，用于细菌培 养的标本保存时间不应超过24h。对环 境敏感的细菌应保温并立即送检。
2.标本中可能含有致病菌，必须注意安全 防护。切勿污染环境。对于烈性传染病 标本运送时更要由专人运送，严格按规 定包装。
3.厌氧性标本应放在专门的运送瓶或试管 内运送，有时可直接用抽取标本的注射 器运送。
二、不染色细菌标本检查
1.主要用于检查生活状态下细菌的 动力及运动状况。可对某些病原 菌作出初步鉴定，如霍乱菌。
2.螺旋体由于不易着色并有形态特 征，故多用不染色标本作暗视野 显微镜检查。
三、细菌染色标本的检查
细菌标本经染色后，除能清楚看 到细菌的形态、大小、排列方式外， 还可根据染色反应将细菌进行分类。
(一)常用染料
分为碱性和酸性两大类。此外，还有复 合染料。 1．碱性染料 电离后显色离子带正电荷，
易与带负电荷的被染物结合。由于细菌 均带负电荷，易与染料结合而着色。常 用的有碱性复红、结晶紫、美蓝等。
2．酸性染料 电离后显色离子带负电荷， 易与带正电荷的被染物结合。细菌都带有 负电荷故不易着色。通常用来染细胞浆， 而很少用于细菌的染色。常用的酸性染料 有伊红、刚果红等。
第一节 临床感染性疾病 实验诊断要求
一、诊断的目的 1.以疾病的病原学诊断为目的,只需鉴
定到细菌的种。 2.为提供治疗方案为目的，要进行临
床标本的直接药物敏感试验。
3.以流行病学研究为目的,要鉴定到型。 4.以了解细菌与感染的关系为目的,应
该做细致的鉴定。
二、诊断试验的选择
1.选择有鉴定价值的试验。 2.选择简易、快速、方便的试验，达
第二章细菌感染实验诊断
疾病的种类不断发生变迁，传染病如 鼠疫等已明显减少，相反，由条件致病菌 引起的内源性感染却明显增多。同时，新 的病原菌不断出现，原有的病原菌因变异、 耐药等又重新流行。
目前，临床遇到主要是条件致病菌， 引起的感染。正常菌群与病原菌的致病 性是相对的，因此，既不要轻易认为分 离出的非致病菌是污染菌，也不要轻易 认为所发现的细菌就是该感染的病原菌， 必须结合临床进行进一步的诊断。
（一）细菌室的符合条件
1．细菌室必须安装严密的门窗，以防室 内环境受到外界的污染。且室内禁用 风扇，避免细菌的播散。
到目的即可。
3.综合考虑试验的敏感性和特异性。 敏感性=阳性结果数/感染病人数， 越高假阴性就越少。 特异性=阴性结果数/未感染病人数， 越高假阳性就越少。
三、常用诊断流程
1.双歧索引
用于相互区别比较容 易,有特征的细菌， 如革兰阴性杆菌初步 分群；对于相互区别 较难的细菌，鉴定项 目较多,用起来不太 方便。
组别 1 2 3 4 5
试验项目
硫化氢 苯丙氨酸 葡萄酸盐 靛基质 甲基红 枸橼酸盐 尿素 动力 产气 赖氨酸 鸟氨酸 棉子糖 山梨醇 侧金花醇 木胶糖
代码
4 2 1 4 2 1 4 2 1 4 2 1 4 2 1
结果
+ + + + + + + + + + -
结果代码
0 0 1 0 2 1 4 2 1 4 2 0 4 2 0
2.表解法：
将各种细菌及其多种特性列成矩阵表 格，使相互的区别点十分明显，便于 分析比较。此法对于相互区别比较复 杂的细菌，如肠杆菌科的初步分属。
3.数字编码鉴定法
将所得生化反应模式转化成数学 模式，可把细菌生化反应结果转化 成数字，经检索手册又可将转化成 细菌名称。与电脑分析软件配套， 形成了半自动或全自动细菌分析系 统。
总值 1 3 7 6采集的一般原则
1.病程早期、急性期或症状典型时， 使用抗生素前。
2.无菌采集 应无污染，严格进行无 菌操作。
3.根据目的菌的特性用不同的方法采集 适量标本，采集量不应过少。
4.注意在不同病程采集不同部位标本。 5.采集标本时要防止传播和自身感染。
第三节 细菌形态学检查
一、显 微 镜
1.普通光学显微镜用油镜放大1000倍，一般细菌 均能清 楚看到。
2.暗视野显微镜用于检查不染色的活细菌和螺旋 体的形态及运动观察。
3.相差显微镜主要用于检查不染色活细菌的形态 及某些内部结构。
4.荧光显微镜可看到发射荧光的细菌。还应用 于免疫荧光技术中。
5.电子显微镜有透射电子显微镜和扫描电子显 微镜。前者适于观察细菌内部超微结构，后 者适于对细菌表面结构及附件观察。
3．复合染料(中性染料)及荧光染料 复合染料是碱性染料和酸性染料的 复合物，如瑞氏染料(伊红美蓝)、 姬姆萨染料(伊红天青)等；荧光染 料如荧光标记的抗体，荧光素常用 异硫氢基荧光素。这些染色常用于 某些特殊的染色技术中。
（二）常用的染色方法
在细菌感染标本的检查中，临床上常 用的染色方法有革兰染色、抗酸染色 和荧光染色。
此外还有： 鞭毛染色可观察有无鞭毛、鞭毛的位置及数量， 在细菌鉴定中很重要。 异染颗粒染色镜检异染颗粒，为临床早期诊断 白喉提供依据。
第四节细菌分离培养与接种技术
绝大多数细菌在适宜的条件下可以生长， 细菌感染性患者标本只有经过细菌的分 离培养、鉴定和药物敏感试验，才可对 感染性疾病进行病原学诊断并指导临床 用药。因此，细菌培养对疾病的诊断、 预防和治疗具有重要的作用。
2．抗酸染色
将细菌分为抗酸性和非抗酸性细菌两 大类。因为大多数病原菌为非抗酸性，所 以抗酸染色不作为常规检查项目。
只用于结核病等检查。抗酸染色的鉴 定结果。对疾病的诊断和治疗具有重要参 考价值。
3．荧光染色
敏感性强，效率高而且容易观察结果，在 临床细菌鉴定中有很大的实用价值。主要用于 结核分枝杆菌、麻风分枝杆菌、白喉棒状杆菌 及痢疾志贺菌等的检测。
1．革兰染色
最经典、最常用的染色方法。在分离 培养前都要进行革兰染色、镜检。通 过革兰染色将所有细菌分为G+菌和G菌两大类，可初步识别细菌，有助于 进一步鉴定。
结合细菌特殊结构及排列方式，对病 原菌可进行鉴定，其结果为临床早期诊断 及治疗提供了依据。
革兰染色可为临床选择用药提供参考， 帮助临床制订有针对性的治疗方案。因为 G+菌和G-菌对抗生素敏感性不同，且致病 物质 及其作用机理也不同。