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浅谈T细胞γ干扰素释放实验对诊断潜伏性结核感染的临床应用四川省德阳市人民医院心胸外科，四川绵竹618000结核病是由结核分枝杆菌感染引起的慢性传染病，好发于15岁到35岁的青少年。
其潜伏期为4～8周，其中80%发生在肺部，其它部位（颈淋巴、脑膜、腹膜、肠、皮肤、骨骼）也可继发感染。
人与人之间呼吸道传播是主要传播方式。
我国是全球22个结核病流行最严重的国家之一。
早发现、早诊断、早治疗是控制结核病情的根本所在，本文就T细胞γ干扰素释放实验对诊断潜伏性结核感染的临床应用进行阐述。
标签：T细胞γ干扰素释放实验；诊断；潜伏性结核感染1.传统检验方法1.1涂片检测将患者的痰液或是其它部位的体液制成涂片在镜下检测患者的阴、阳性。
1.2 X线检查可早期发现结核，而且可对病灶的部位、范围、性质、发展情况和效果作出诊断。
1.3结核菌素试验（PPD试验）（1）阳性表示结核感染，但并不一定患病。
皮试呈阳性者，常提示体内有活动性结核灶。
（2）阴性提示没有结核菌感染。
但仍要排除下列情况。
①结核菌感染后，需4～8周变态反应才能充分建立；所以在变态反应前期，结素试验可为阴性。
②应用糖皮质激素等免疫抑制剂者营养不良以及麻疹、百日咳患者，结素反应可暂时消失。
③严重结核病和各种危重患者对结素无反应。
④其它：如淋巴免疫系统缺陷（白血病、结节病）患者和老年人的结素反应也常为阴性。
由于我国几乎所有人群均有卡介苗（BCG ）接种史，PPD结果不准确，仅供于筛查。
传统的诊断方法检测率相对低且肺外结核诊断困难、常有“假阴/阳性”出现，延误了早期发现及早期治疗的最佳时机，随着对IFN-γ在调节结核感染引起的细胞介导的免疫反应中起到的关键性作用的不断了解，人们逐步认识到γ-干扰素释放试验（interferon gamma release assays，IGRAs）可用于结核感染的诊断1。
资料显示，IGRA特异性为98%～100%；在免疫功能正常成人中，IGRA （T-SPOT.TB和QFT-G-IT）对2年内进展为结核的阴性预测值（NPV）分别为97.8%和99.8%；当免疫诊断检测不局限于既往其他检测阳性受试人群时，在随访19～24个月IGRA阳性者中结核进展率处于8%～15%，并且高于TST相关结果2。
γ干扰素释放试验在检测结核分枝杆菌潜伏感染中的应用引言结核病是一种由结核分枝杆菌引起的慢性传染病，在全球范围内仍然具有较高的发病率和死亡率。
虽然结核病可以通过药物治疗进行控制，但由于其长期潜伏期和传染性，解决结核病问题依然是全球范围内的重大挑战。
检测结核分枝杆菌潜伏感染的方法成为了目前研究和实践中的重要课题之一。
一、γ干扰素释放试验基本原理γ干扰素释放试验是一种利用免疫细胞对结核分枝杆菌特定抗原的反应来检测T细胞免疫应答的方法。
其基本原理是通过检测T细胞在受到结核分枝杆菌特定抗原刺激后产生的γ干扰素水平来判断被检测者是否感染了结核分枝杆菌。
与传统的结核菌素试验相比，γ干扰素释放试验不受卡介苗免疫和非结核分枝杆菌的感染等因素的影响，具有更高的特异性和更好的区分力。
2.对活动性结核病和非结核分枝杆菌感染的区分γ干扰素释放试验不受卡介苗免疫和非结核分枝杆菌感染的影响，因此能够更好地区分活动性结核病患者和非结核分枝杆菌感染者。
这对于临床诊断和治疗的选择具有重要意义。
研究显示，γ干扰素释放试验在活动性结核病和非结核分枝杆菌感染的区分上具有更高的灵敏性和特异性，可以帮助医生更准确地判断患者的感染状态，从而更好地进行治疗和管理。
3.适用于特定人群γ干扰素释放试验适用于各种特定人群，包括HIV感染者、免疫抑制患者、接受生物制剂治疗的患者等。
这些人群在结核病的感染和发展过程中具有特殊的情况和风险，传统的检测方法在这些人群中存在一定的局限性。
而γ干扰素释放试验不受外部因素的干扰，可以为这些特定人群的筛查和诊断提供重要的帮助。
γ干扰素释放试验在临床实践中的应用前景广阔。
4.便捷、快速、安全γ干扰素释放试验不需要特殊的培养设备和条件，只需一次采血即可进行检测。
相比之下，结核菌素试验需要48-72小时的培养时间，且结果受到诸多因素的影响。
γ干扰素释放试验具有更快速、便捷的特点。
γ干扰素释放试验不使用活体结核分枝杆菌或卡介苗，减少了对实验人员和被检测者的潜在危害，具有更高的安全性。
结核分枝杆菌相关γ-干扰素体外释放试验在结核病诊断中的应用价值李晓非;熊俊辉;汪亚玲;朱莉莉;吕松琴;张军【摘要】目的探讨结核分枝杆菌相关γ-干扰素体外释放试验(TB-IGRA)在结核病诊断中的应用价值.方法用国产TB-IGRA试剂定量检测268例结核病患者和104例体检健康者外周血结核特异性γ-干扰素的含量,同时与澳大利亚QFT-GIT试剂和结核菌素纯化蛋白质衍生物(PPD)皮试进行平行比较分析.结果国产TB-IGRA试剂、QFT-GIT试剂和PPD皮试3种方法的敏感性分别为90.7％、88.1％和75.4％,特异性分别为76.9％、80.8％和54.8％,阳性预测值分别为91.0％、92.2％和81.1％,阴性预测值分别为76.2％、72.4％和46.3％,准确性分别为86.8％、86.0％和69.6％.三种方法对肺结核与肺外结核的检测效果无显著差异.结论 TB-IGRA法对诊断结核病有较高的敏感性和准确性,在结核病防控中有较好的应用价值.【期刊名称】《临床检验杂志》【年(卷),期】2011(029)005【总页数】2页(P342-343)【关键词】γ-干扰素体外释放试验;结核分枝杆菌;结核病;诊断【作者】李晓非;熊俊辉;汪亚玲;朱莉莉;吕松琴;张军【作者单位】昆明市第三人民医院检验科,昆明650041;厦门大学国家传染病诊断试剂与疫苗工程技术研究中心,福建厦门361005;昆明市第三人民医院检验科,昆明650041;昆明市第三人民医院检验科,昆明650041;昆明市第三人民医院检验科,昆明650041;厦门大学国家传染病诊断试剂与疫苗工程技术研究中心,福建厦门361005【正文语种】中文【中图分类】R446.6;R378.91+1随着耐药结核菌株增多、HIV合并结核感染、人口流动增大等问题的出现，结核病疫情日趋严重。
如何快速、准确诊断结核病一直是临床关注的问题。
近年来，以T 细胞免疫为基础的体外γ干扰素释放试验(interferon-γ release assays，IGRA)被证实在结核分枝杆菌(MTB)感染检测中有较好的特异性和敏感性［1-4］，在欧美国家已经成为一种结核临床常规检测方法［5］。
结核病是由结核分枝杆菌（tubercle bacilus ，TB ）引起的一种慢性肉芽肿性炎，可侵染全身各个器官。
全世界约1/3的人感染结核，我国更是结核病的高发国家之一，感染者的数量不断增加，因此控制结核病的流行是非常重要且迫切的，而其关键就在于结核病的早发现、早诊断、早治疗。
本研究通过对本院就诊患者中筛查及确诊结核病患者分别进行结核抗体（TB⁃DOT ）、抗酸染色、结核杆菌聚合酶链反应（PCR ）和结核感染T 细胞检测，比较各检测方法的特点。
1资料与方法1.1一般资料：对照组：2019年9月至2020年2月来我院就诊非结核病50例，其中男性26例，女性24例；年龄13~87岁，平均（40±11）岁。
观察组：2019年9月至2020年2月我院就诊结核病患者50例，其中男性27例，女性23例；年龄12~88岁，平均（45±10）岁。
1.2仪器与试剂：SM⁃3酶标仪；ZMX⁃988B 洗板机；37℃体外培养箱；DA9600扩增仪；结核抗体试剂盒为PBT⁃X4生物芯片仪及配套试剂；TB⁃PCR 检测试剂为中山达安基因股份有限公司生产；TB⁃干扰素释放试验（IGRA ）定量检测试剂盒北京万泰生物药业有限公司生产。
1.3方法：入选患者分别在清晨采集空腹血标本进行结核抗体检测和TB⁃IGRA 检测，同时采集痰标本进行抗酸染色和TB⁃PCR 检测。
结核抗体检测：按照结核杆菌抗体检测试剂盒说明书进行检测，出现3种抗体（LAM 、16000、38000）中任一阳性即可判定为阳性。
TB⁃IGRA 检测：空腹血4~5ml 于肝素锂抗凝管，2h 内将其分装在对照培养管（N ）、测试管（T ）、阳性对照管（P ）中，置于37℃体外培养箱培养24h ，取出后离心，离心后析出血浆进行酶联免疫吸附试验（ELISA ）检测。
当T -N≥14且≥N 辕4时为阳性。
抗酸染色：将患者痰液按抗酸染液染色法进行处理。
γ干扰素释放试验在检测结核分枝杆菌潜伏感染中的应用1. 引言1.1 潜伏感染与结核病潜伏感染与结核病是结核分枝杆菌感染的两个重要阶段。
潜伏感染是指机体内结核分枝杆菌存在，但并未引起症状或临床表现的情况。
在潜伏感染期间，结核菌可长期潜伏在宿主内，随时可能激活引发结核病。
而结核病是由结核分枝杆菌引起的一种慢性传染病，其临床症状多样，可侵及全身各器官，严重影响患者的生活质量。
早期诊断和治疗潜伏感染至关重要，可以有效预防结核病的发生和传播。
潜伏感染与结核病之间存在着复杂的关系，很多潜伏感染者最终并不会发展成为结核病患者，但也有一部分患者会在未来发展成为结核病。
准确地判断潜伏感染的存在及其风险程度对于结核病的控制和预防至关重要。
γ干扰素释放试验是一种用于检测结核分枝杆菌感染的方法，可以辅助医生进行早期诊断和干预，有助于控制结核病的传播。
在接下来的正文中，我们将更详细地探讨γ干扰素释放试验在检测结核分枝杆菌潜伏感染中的应用及其优势和局限性。
1.2 γ干扰素释放试验简介γ干扰素释放试验（IFN-γ release ass ay，IGRA）是一种用于检测结核分枝杆菌感染的新型诊断方法。
相比传统的结核菌素皮试（TST），γ干扰素释放试验具有更高的特异性和耐受性，且不会受到疫苗接种和疫苗学效应的影响。
γ干扰素释放试验基本原理是利用结核菌蛋白质特异性的抗原刺激患者的淋巴细胞产生γ干扰素，并通过检测γ干扰素的释放量来判断是否感染结核分枝杆菌。
相比TST需要24-72小时的等待时间，γ干扰素释放试验只需一次采血，几个小时内就可得出结果，大大缩短了等待时间。
γ干扰素释放试验目前主要有两种商业化的产品：T-SPOT.TB和Quantiferon-TB Gold。
它们的原理和操作流程基本相同，在临床应用中具有较高的准确性和可靠性。
2. 正文2.1 γ干扰素释放试验在结核分枝杆菌感染中的应用γ干扰素释放试验（IGRA）是一种用于检测结核分枝杆菌感染的技术，它通过检测机体对结核分枝杆菌特异性抗原的γ干扰素释放来判断是否感染了结核菌。
结核分析杆菌y-干扰素体外释放定量试验对诊断结核病的应用价值裴新发摘要：目的观察分析结核分枝杆菌特异性抗原y-干扰素释放试验（IGRA）对诊断结核病的应用价值。
方法选择我院2017年2月至2018年2月收治的疑似活动性结核患者84例患者的细菌学、影像学、病理学结果作为观察组，进行回顾性整理并随访，同时选择健康人84例作为对照组，用来识别和判断疑似结核病患者的是否真正的患病。
并随访治疗效果，与IGRA检查方法对照，评价IGRA的临床应用价值，结果结核病例IGRA检测敏感性为85.27%，特异性为81.03%，阳性预测值81.04%，阴性预测值86.12%。
结论 IGRA作为活动性结核病的辅助检查手段，具有较高的特异性，同时对肺结核外其他结核的临床诊断价值也较高，可为菌阴患者、肺外结核等特殊情况结核病患者进行抗结核治疗提供依据。
关键词：结核病；y-干扰素释放试验；临床应用价值结核病作为一种传染病，严重危害着人类的健康，近年来，随着人口大规模的流动，结核病与艾滋病同时流行及多重耐药结核菌菌株的出现，该病患病率呈上升趋势。
据世界卫生组织（WHO）估计，全球约1/3人口携带结核分枝杆菌，每年死于结核病的人数约200万。
中国结核病人数居世界第二位[1]，目前结核病诊断主要依据临床症状、胸部X线片及细菌培养和涂片抗酸染色等，这些传统诊断方法费时费力且检出率低，延误了早期诊治的最佳时机，而如何快速、准确诊断结核病也逐渐成为临床关注的重要问题。
近年来，以T细胞免疫为基础的体外酌鄄干扰素释放试验（IGRA）被证实在结核分枝杆菌感染检测中有较好的特异性和敏感性。
笔者通过对该院收治的疑似结核病患者采用IGRA诊断，以探讨其临床应用价值，现做如下报告：1资料与方法1.1一般资料选择我院2017年2月至2018年2月收治的疑似活动性结核患者84例患者的细菌学、影像学、病理学结果作为观察组，进行回顾性整理并随访，同时选择健康人84例作为对照组，用来识别和判断疑似结核病患者的是否真正的患病。
γ干扰素释放试验在检测结核分枝杆菌潜伏感染中的应用1. 引言1.1 研究背景结核病是一种由结核分枝杆菌引起的传染病，全球范围内具有较高的发病率和死亡率。
据世界卫生组织统计，每年有数百万人感染结核分枝杆菌，其中约10%的人会患上活动性结核病。
许多感染者并不表现出明显的症状，而是处于潜伏感染状态。
这些潜伏感染者患结核病的风险较高，因此及早发现和治疗潜伏感染者对于控制结核病传播至关重要。
研究γ干扰素释放试验在检测结核分枝杆菌潜伏感染中的应用具有重要的意义，可以为结核病的早期诊断和防控提供更加有效的手段。
1.2 研究意义结核病是一种由结核分枝杆菌引起的传染病，全球范围内造成了严重的健康问题。
根据世界卫生组织的数据，每年约有1000万人感染结核分枝杆菌，其中约有150万人死亡。
预防和控制结核病至关重要。
对于结核病的检测和诊断，一直是医学界研究的焦点之一。
传统的结核菌素试验和结核菌培养的方法存在着一定的局限性，无法准确地检测结核病的潜伏感染和早期感染。
寻找一种敏感性高、特异性好的检测方法显得尤为重要。
研究γ干扰素释放试验在检测结核分枝杆菌潜伏感染中的应用具有重要的意义。
通过深入研究该方法的准确性和可靠性，可以为结核病的早期诊断和治疗提供更为有效的手段，有效地控制和预防结核病的传播。
2. 正文2.1 γ干扰素释放试验简介γ干扰素释放试验（interferon-gamma release assay，简称IGRA）是一种用于检测结核感染的新型方法，其原理是通过检测患者血液中由γ干扰素释放的分泌物质来判断是否感染结核分枝杆菌。
IGRA相较于传统的结核菌素试验（TST）具有更高的特异性和灵敏度，且不受卡介苗免疫的影响，因此在结核感染的筛查和诊断中具有重要的应用价值。
IGRA主要通过特定的抗原激发T细胞，引起其释放γ干扰素，然后以酶联免疫吸附实验等方法检测γ干扰素的含量。
常用的IGRA试剂盒包括TB-Gold和T-SPOT.TB等，通过测定γ干扰素的水平来判断患者是否感染结核分枝杆菌以及感染的程度。
论 著结核分枝杆菌 -干扰素体外释放定量试验诊断结核感染的临床应用张 华,黄圣文,罗振元(贵州省人民医院检验科,贵州贵阳550002)摘要:目的 探讨结核分枝杆菌 -干扰素体外释放(T B -IGRA)定量试验用于临床诊断结核的实验价值。
方法 收集患者血清及痰标本,ELISA 法定量检测血清特异性 -干扰素的含量、EL ISA 法定性检测血清HI V 抗体、胶体金法检测结核抗体,FQ -PCR 检测痰中结核分枝杆菌核酸。
结果 T B -IGR A 的敏感度为90.24%,特异度为93.34%;82例肺结核病患者中,痰涂片镜检、结核分枝杆菌D NA 和结核抗体检测的阳性率分别为:64.63%、76.83%和40.24%,经卡方检验,T B -IGR A 与另3种方法阳性率差异有统计学意义(P <0.05、<0.01、<0.01)。
结论 T B -IGR A 较灵敏、特异,是一种诊断肺结核的有价值的检测方法。
关键词: -干扰素体外释放试验;结核分枝杆菌;诊断中图分类号:R378.91 文献标识码:A 文章编号:1005-4529(2009)14-1898-02IFN - Release Assays for Rapid Diagnosis of Active Tuberculosis:Clinical ApplicationZH ANG H ua,H UAN G Sheng -w en,LU O Zhen -yuan(G uiz hou Pr ovincial P eop le s H osp ital ,Guiy ang,Guiz hou 550002,China)Abstract:OBJECTIVE T o evaluate the clinical applicatio n of T -cell based IF N - r elease assays (IGRA )for t he r apid diag nosis of act ive tuber culosis.METHODS IFN - and H IV antibo dy were detected by using EL ISA.A nt ibody to M y cobacter ium tuber culosis w as detect ed by collo idal go ld.A t the same time,the M.tuberculosis DN A lo ads w ere examined by F Q -PCR.Statist ical ana lysis w ere perfor med to analyze t he cor relation of IF N - w ith M.tuber culos is antibody and DN A,r espectiv ely.RESULTS T he sensit ivity of T B -IGRA was 90.24%,specif icity was 93.34%;the posit ive rate of T B -IGRA in 82tuberculosis pat ient s w as hig her than fro m sput um smear (64.63%),T B -PCR (76.83%)and t uberculo sis antibody (40.24%).CONCLUSIONS A s a r eplacement of T B -PCR,IFN - can be used as a v alued index to evaluate tuberculosis infectin.Key words:IF N - release assays;M y cobacter ium tuber culos is ;Diagnosis收稿日期:2009-02-14; 修回日期:2009-05-15目前临床普遍采用的结核诊断主要依赖于临床症状、影像学特征和病原学诊断。
至今没有一种准确、快速、可靠检测结核分枝杆菌的方法[1]。
结核分枝杆菌可诱导强烈的细胞免疫反应,因此,检测结核分枝杆菌菌特异的T 淋巴细胞可作为检测感染的一种新路径。
我们利用北京万泰公司研制的结核分枝杆菌 -干扰素体外释放(T B -IGRA)定量诊断试剂盒,对贵阳市疾控中心结防科确诊的肺结核患者进行检测,并初步探讨其临床意义。
1 资料与方法1.1 资料 正常对照组:本院健康体检者30名,年龄25~48岁。
肺结核组:贵阳市疾控中心结防科确诊的肺结核患者82例,其中,男42例,女30例,年龄20~52岁,平均32.73岁。
两组均空腹抽取静脉血2ml,同时采集患者晨痰。
1.2 仪器 主要仪器为美国ABI 公司的7500FAST 荧光定量PCR 仪;瑞士H am ilto n 公司AT 2/FAM E 16/20全自动酶标仪;H eal Force 二级生物安全柜。
1.3 检测方法 抗酸染色法进行晨痰涂片镜检;ELISA 法定量检测结核分枝杆菌特异性 -干扰素的含量,试剂盒由北京万泰生物技术有限公司惠赠;ELISA 法定性检测血清H IV 抗体,试剂盒购自北京万泰生物技术有限公司;结核抗体检测胶体金法,试剂盒购于上海奥普生物医药有限公司;结核分枝杆菌-DNA 采用荧光定量-聚合酶链反应技术(FQ -1898 Chin J No so comio l V ol.19N o.142009PCR)检测,试剂盒购于深圳匹基生物工程有限公司。
以上均严格按照各自说明书进行操作,同时进行室内质量控制。
1.4 统计学分析 采用PEMS3.1软件进行 2检验。
2 结 果2.1 血清H IV抗体检测结果 我们采用ELISA 法对对照组和肺结核疾病组所有病例均进行了血清H IV抗体检测,结果均为阴性,部分排除了受试者自身免疫缺陷所致T B-IGRA的假阴性。
2.2 TB-IGRA反应频率比较 正常对照组和肺结核疾病组的TB-IGRA阳性率。
见表1。
表1 各组 -干扰素阳性率(%)组 别例数阳性例数阳性率肺结核组827490.24健康对照组302 6.672.3 TB-IGRA与其他检测方法的比较 82例肺结核病患者还进行了痰涂片镜检、结核分枝杆菌DNA和结核抗体检测,阳性率见表2。
表2 82例患者T B-IGRA与T B-P CR及T B-抗体检测阳性率(%)方 法阳性例数阳性率T B-IGRA7490.24涂片5364.63T B-PCR6376.83T B-抗体3340.242.4 涂片阳性与阴性肺结核患者TB-IGRA结果比较 T B-IGRA阳性率在抗酸杆菌涂片阳性与阴性结核病患者中,经四格表卡方检验,差异无统计学意义(P>0.05),见表3。
表3 痰涂片阳性与阴性结核病患者 -干扰素反应阳性率(%)痰涂片检查例数阳性例数阳性率阳性535094.34阴性292482.763 讨 论目前临床普遍采用的结核诊断主要依赖于临床症状、影像学特征和病原学诊断。
患者临床症状和影像学特征有助于疑似患者的发现,但进一步诊断需要结合病原学检测。
结核菌感染的免疫反应主要是细胞介导免疫反应,作为细胞介导反应的一部分, T淋巴细胞被结核菌抗原致敏,这些抗原再次刺激时,活化的效应T淋巴细胞,产生细胞因子 干扰素。
IGRA的原理正是通过加入结核特异性抗原ESAT-6和CFP-10,经过全血中的抗原递呈细胞刺激特异性Th细胞产生IFN- ,于37 体外培养16~24h后,检测培养液中IFN- 含量,以反应体内结核特异性T细胞应答的强弱,来间接判断结核分枝杆菌感染状况。
本试验用TB-IGRA检测30例健康对照、82例肺结核病患者外周血中,结核分枝菌特异抗原 干扰素释放含量,结果显示,该方法具有较高特异度(93.34%)和较高敏感度(90.24%),与国外报道一致[2-4]。
整个检测过程,仅需26h。
本研究将T B-IGRA与涂片镜检、结核抗体检测,结核分枝杆菌核酸检测进行比较,其阳性率分别为:90.24%、64.63%、76.83%和40.24%。
经统计学分析,TB-IGRA检测阳性率显著高于另3种方法,差异有统计学意义;说明TB-IGRA是用于检测结核分枝杆菌感染的较为敏感的指标。
我们的结果还显示,对痰涂片镜检阳性与阴性结核病患者,其T B-IGRA阳性率分别为:94.34%和82.76%,差异无统计学意义。
说明该方法可作为痰菌阴性结核病诊断有效方法之一。
我们认为T B-IGRA快速简便,检测过程中仅需用到37 体外培养箱、酶标仪等常规设备,在绝大多数县级以上卫生机构都可以进行,是一种值得推广的检测方法。
参考文献:[1] Garg SK,T iw ari D.Diagnosis of active tuberculosis:availa-ble technologies,limitations,an d pos sibilities[J].J Clin LabAnal,2003,17:155-163.[2] Fathy M M,Asaad A,M ans ou r M,et al.Cellular interferon-gam ma b as ed as say for diagnosis of pulmonary tu berculosis[J].Egypt J Immu nol,2007,14(1):33-41.[3] Diel R,Lodd enkemper R,M eyw ald-Walter K,e t al.Predic-tive value of a w hole blood IFN-gamm a ass ay for th e d evelop-ment of active tuberculosis dis ease after recent infection withM yc obac te rium tuberc ulosis[J].Am J Respir Crit Care M ed,2008,177(10):1164-1170.[4] T siouris SJ,Austin J,Toro P,et al.Results of a tuberculo-sis-specific IFN-gam ma assay in child ren at high risk for tu-berculosis infection[J].In t J T uberc Lung Dis,2006,10(8):939-941.1899中华医院感染学杂志2009年第19卷第14期。
