靛玉红的合成

靛玉红(Indirubin)的含量测定
佚名
【期刊名称】《中草药》
【年(卷),期】1979(0)2
【摘要】靛玉红是从中药青黛中提取分离得到的一种治疗慢粒白血病的有效成分。

基于靛玉红分子中具有发色团的原理,藉此,作者以无水乙醇为溶媒,用72型分光光
度计进行了比色法测定靛玉红含量的研究。

作者进行了成色稳定性的考察;靛玉红
标准曲线的制作;靛玉红回收率及加样回收率的测定;样品中微量靛蓝对靛玉红测定的影响;靛玉红片含量测定等工作。

【总页数】5页(P7-10)
【关键词】靛玉红;回收率;精密量取;合成品;乙醇液;Indirubin;光密度;含量测定
【正文语种】中文
【中图分类】R284.1
【相关文献】
1.高效液相色谱法测定双料喉风散中靛蓝和靛玉红含量 [J], 王婷婷; 李玲; 陈乃江
2.高效液相色谱-质谱法测定大青叶中靛蓝和靛玉红的含量 [J], 王巍嵩; 朱贲贲; 徐智宇
3.高效液相色谱-质谱法测定大青叶中靛蓝和靛玉红的含量 [J], 王巍嵩;朱贲贲;徐
智宇
4.高效液相色谱法同时测定喉康散中靛蓝和靛玉红含量 [J], 李玲;王婷婷;陈乃江
5.清肠栓中没食子酸、靛蓝和靛玉红含量测定 [J], 于天源;周昕;徐俐伟
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青黛中靛玉红的提取及其抗氧化活性陈莉华;王晓静;廖薇;肖斌;谭林艳;龙进国【摘要】利用超声波辅助乙酸乙酯提取青黛中靛玉红,考察提取物对羟基自由基的清除作用及对油脂氧化的抑制效果,并与柠檬酸和Vc作比较.用乙酸乙酯为提取剂,料液比为1∶10(g/mL),在40 W超声功率、13 kHz超声频率及250 W加热功率的条件下超声50 min,提取率达到0.12％.提取物对羟基自由基有一定的清除作用,并呈现一定的量效关系,能增加植物油的抗氧化能力,相同条件下对油脂的抗氧化效果强于Vc、柠檬酸.【期刊名称】《吉首大学学报（自然科学版）》【年(卷),期】2013(034)001【总页数】5页(P72-76)【关键词】超声波;乙酸乙酯;青黛;靛玉红;抗氧化活性【作者】陈莉华;王晓静;廖薇;肖斌;谭林艳;龙进国【作者单位】吉首大学化学化工学院,湖南吉首 416000;吉首大学植物资源保护与利用湖南省高校重点实验室,湖南吉首 416000;吉首大学化学化工学院,湖南吉首416000;吉首大学化学化工学院,湖南吉首 416000;吉首大学化学化工学院,湖南吉首 416000;吉首大学化学化工学院,湖南吉首 416000;吉首大学化学化工学院,湖南吉首 416000【正文语种】中文【中图分类】R284.1青黛是一种常用传统中药，为十字花科菘蓝Isatis indigotica For-tune、蓼科蓼蓝Polygonumtinctorium Ait.、爵床科马蓝Bap-hicacanthuscusia Bremek.和豆科假蓝靛Indigoferatinctoria L.的叶或茎叶经加工制得的干燥粉末或团块，收载于《中国药典》2005版一部［1］，具有清热解毒、凉血消肿、散结止痛、消斑化瘀之功效，主要用于温毒发斑、血热吐吜、胸痛咳血、口疮、痄腮、喉痹、小儿惊痫等症［2］.青黛的主要活性成分是靛蓝(indigo)与靛玉红(indirubin)［3］.前人的研究主要集中在青黛中靛玉红的清热凉血、抗菌消炎［4-5］、抑制肿瘤细胞［6-7］等生物活性方面.迄今为止，关于青黛中靛玉红抗氧化作用的研究尚未见报道.笔者利用超声波辅助乙酸乙酯提取青黛中靛玉红，研究提取物对羟基自由基亚的清除作用及对油脂氧化的抑制作用，以期为青黛的进一步开发提供实验依据.1.1 仪器、试剂与材料仪器:723可见分光光度计(日本岛津);KQ250-E型超声波清洗器(郑州长城科工贸有限公司);K-201B-Ⅱ旋转蒸发器(郑州长城科工贸有限公司);SHB-Ⅲ循环水式多用真空泵(郑州长城科工贸有限公司);Gzx-9070MBE数显鼓风干燥箱(上海博迅实业有限公司医疗设备厂);电子天平;恒温槽.试剂:盐酸、石油醚、乙酸乙酯、无水乙醇、95%乙醇、氢氧化钠、硫酸亚铁、过氧化氢、水杨酸、亚硝酸钠、柠檬酸、对氨基苯磺酸、盐酸萘乙二胺、三羟基甲基氨基甲烷、邻苯三酚、氯仿三氯甲烷、冰醋酸、碘化钾、淀粉等，均为分析纯. 材料:植物油(购买于吉首市超市)、青黛(购于吉首市中草药店).1.2 试验方法1.2.1 青黛中靛玉红的提取及分离 (1)青黛超声预处理.准确称取青黛成药10.0 g，置于250 mL的烧杯中，取24%盐酸溶液50 mL，分5次加入并不断搅拌至没有气泡产生，将烧杯封口，置于80℃的超声发生器中超声50 min后取出烧杯静置10 min，减压抽滤，然后用90℃左右热水50 mL，分5次洗涤滤渣并置于80℃的烘箱中干燥后保存.(2)石油醚回流脱脂.将上一步得到的干燥的滤渣用10倍量的石油醚于80℃超声回流50 min，静置10 min冷却至室温，减压抽滤，用10 mL石油醚分2次洗涤滤渣，于80℃烘箱中干燥后保存.(3)乙酸乙酯回流提取.将上一步得到的干燥的滤渣用10倍量的乙酸乙酯在80℃超声回流50 min，静置10 min，冷却至室温，减压抽滤，取20 mL乙酸乙酯分4次洗涤滤渣，弃去滤渣，滤液保存于一棕色试剂瓶中.初提取液用旋转蒸发仪减压浓缩，温度为75℃，浓缩液置于步骤(3)的棕色试剂瓶中，于旋转蒸发仪进一步减压浓缩至蒸干，温度为75℃，蒸干的残渣加入95%乙醇50 mL和1%NaOH 100 mL，搅拌均匀，静置24 h，减压抽滤，滤液于旋转蒸发仪减压回收乙醇，温度为70℃;滤渣于80℃烘箱干燥渣后保存，滤渣即为靛玉红粉末.1.2.2 提取物中靛玉红含量的测定以靛玉红为标准品，用紫外分光光度计在540 nm处测定吸光度，绘制靛玉红浓度-吸光值标准曲线.将提取得到的靛玉红粉末置于烧杯中并放在80℃水浴超声50 min，同时取20mL乙酸乙酯分4次加入其中，溶解时烧杯封口，冷却至室温，转入100 mL的容量瓶中，用乙醇稀释至刻度定容，摇匀，放置1 0 min，用乙醇为试剂空白，用紫外分光光度计在540 nm处测定此溶液的吸光值，由回归方程计算靛玉红含量.1.2.3 靛玉红对羟基自由基的清除参照Fenton反应［8］建立羟基自由基生成模型，在15 mL比色管中依次加入2 mmol/L FeSO4溶液3 mL，2 mmol/LH2O2溶液3 mL，摇匀后，加入6 mmol/L水杨酸溶液3 mL，立即摇匀，于37℃水浴中恒温15 min后取出，然后分别加入浓度为72.65 mg/L的提取液0.5，1.0，1.5，2.0，2.5，3.0，3.5 mL，最后加入蒸馏水补充体积至15 mL.继续在37℃水浴恒温15 min，在波长5 10 nm处以空白液为参比测定其吸光度Ax及本底吸光度Ax0.以蒸馏水代替提取液，按以上方法实验，在37℃下恒温15 min后测其吸光度A0.以同浓度抗坏血酸、柠檬酸做对比，比较3种物质的清除羟基自由基能力.每组测定重复3次，按下式据算羟基自由基的清除率:其中:A0为空白对照液吸光值;Ax为待测样品液吸光度;Ax0为本底吸光度.1.2.4 靛玉红对油脂氧化的抑制作用采用国际上通用的烘箱强化贮存法［9］使之发生氧化酸败变质，并利用碘量法［10］测定过氧化值.通过烘箱强化贮存法使油脂发生氧化，加入靛玉红考察其对油脂氧化作用的抑制:称取20 g油脂，加入2 mL纯化液，搅拌均匀后，放入烘箱中强化保存，间隔1 h交换在烘箱中的位置并取1 mL待测样品，参照标准曲线方法分别测定585 nm 处的吸光度.然后计算油脂过氧化值(POV)及原花青素对油脂的保护率η，以抗坏血酸、柠檬酸做对比，比较3种物质的抗氧化能力.油脂过氧化值(POV)和保护率η的计算公式分别为其中:W表示油脂质量(kg);POV初为未对油脂进行强化氧化时的过氧化值，mmol/kg;POV末1为添加靛玉红的油脂强化氧化后的过氧化值，mmol/kg;POV 末2为未添加靛玉红的油脂强化氧化后的过氧化值，mmol/ kg.2.1 青黛靛玉红含量测定及提取率在实验确定的最佳条件下青黛中靛玉红提取率为0.12%.在540 nm处吸光值与靛玉红的浓度有良好的线性关系，回归方程为A=0.012c+0.008 2，R2=0.998 1.亚硝酸盐测定的回归方程A=0.396 9c+0.040 3，R2=0.996 9，亚硝酸盐在0.0～0.2 mg/L之间有良好的线性关系.碘量M(μmol)与吸光度A在0.0～0.96 μmol间有良好的线性关系，回归方程为M=4.015 3A+0.003 9，R2=0.998 6.2.2 青黛靛玉红对羟基自由基(·OH)的清除2.2.1 靛玉红浓度对羟基自由基(·OH)清除效果的影响按照实验方法，对一系列不同浓度的靛玉红提取液、抗坏血酸溶液及柠檬酸溶液进行实验，考察各自对羟基自由基的清除效果，并进行比较，结果如图1所示.图1结果表明，在浓度2.4～17 mg/L范围内，随着靛玉红提取液质量浓度的增大，靛玉红对羟自由基清除效果逐渐增大，在实验浓度为1 6.95 mg/L时，清除率为15.4%，但清除效果不及抗坏血酸、柠檬酸.总体而言，对羟自由基清除率的排序从大到小为柠檬酸，抗坏血酸，靛玉红提取液;在浓度2.4～17 mg/L范围内三者清除率均与浓度剂量呈正相关.2.2.2 温度对靛玉红清除羟基自由基效果的影响以浓度均为9.68 mg/L的靛玉红提取物、抗坏血酸及柠檬酸，考察不同温度对清除羟基自由基效果的影响，结果如图2所示.图2结果表明，同一浓度不同温度下的清除率有很大的不同.温度较低时，对羟基自由基的清除率较小;随着温度升高，对羟基自由基的清除率逐渐增大，但当温度升高到一定程度后，其清除率有下降的趋势.在37℃时抗坏血酸及柠檬酸的对羟基自由基清除率最大;但靛玉红提取液在42℃时对羟基自由基清除率最大(13.71%).原因可能是靛玉红的耐高温性较强，在较高温度下才发生自身氧化，因此在较高温度下仍可以清除羟基自由基.2.3靛玉红对油脂的抗氧化性研究2.3.1 靛玉红浓度对油脂的抗氧化性效果的影响按照实验方法，40℃条件下，将植物油在烘箱强制保温一定时间，对一系列不同浓度的靛玉红提取液、抗坏血酸溶液及柠檬酸溶液进行实验，考察其对植物油的保护效果，结果如图3所示.图3结果表明，在浓度2.4～17 mg/L范围内，靛玉红对植物油的保护率较柠檬酸、抗坏血酸的大，其对油脂的抗氧化作用十分的明显.随着靛玉红质量浓度的增大，保护率逐渐增大，在实验浓度为1 6.95 mg/L时，清除率为55.77%，由此可得出靛玉红对植物油氧化的抑制效果很好.总体而言，对植物油氧化的抑制作用排序从大到小为青黛靛玉红提取液，抗坏血酸，柠檬酸;在浓度2.4～17 mg/L范围内三者对油脂的保护率均与浓度剂量呈正相关.2.3.2温度对靛玉红抗氧化性效果的影响以浓度均为9.68 mg/L的靛玉红提取物、抗坏血酸及柠檬酸，考察不同温度对植物油的保护效果，结果如图4所示.图4结果表明，同一浓度不同温度靛玉红对植物油的保护率影响很明显.同时表明，温度较低时，靛玉红对植物油的保护率较小;随着温度升高，靛玉红对植物油的保护率迅速增大，但当温度升高到一定程度后，其保护率几乎不变.而对于抗坏血酸及柠檬酸，在42℃时均对植物油保护率最大;随后二者有下降的趋势.原因可能是靛玉红的耐高温性较强，在较高温度下才发生自身氧化，因此在较高温度下仍可以保护植物油.以乙酸乙酯为提取剂，料液比为1∶10(g/mL)，40 W的超声功率超声50 min的条件下，青黛中靛玉红提取率为0.12%.靛玉红提取液对·OH有一定的清除作用，且清除效果与其浓度有剂量效应关系，能很好抑制油脂的氧化作用，在浓度2.4～17 mg/L范围内，它对植物油的保护率在15.77%～55.77%，大于Vc及柠檬酸.青黛中的靛玉红具有良好的抗氧化能力，作为一种新的天然、保健的绿色食品抗氧化剂，具有良好的开发前景.【相关文献】［1］中华人民共和国国家药典委员会.中国药典［S］.一部.北京:化学工业出版社，2005:138. ［2］赫微微，温红珠，李佳，等.靛玉红对溃疡性结肠炎小鼠CD4CD25Treg细胞Foxp3表达的影响［J］.上海中医药杂志，2011，12:82-84.［3］谢友良，何百寅，李远彬，等.青黛药材中的靛蓝和靛玉红含量的同时测定［J］.中药新药与临床药理，2011，22(4): 452-455.［4］李东，武彦舒，王灿，等.青黛镇痛、抗炎药效学研究［J］.中国实验方剂学杂志，2011，17(13):137-140.［5］农志新，兰日程.普济消毒饮合青黛治疗流行性腮腺炎疗效观察［J］.广西中医学院学报，2010，13(2):15-17.［6］吴琦玮，葛忠良，高月，等.靛玉红对肿瘤细胞抑制作用的研究及相关机制探讨［J］.天津中医药，2008，25(1):55-58.［7］刘雅波，陶文沂.18种青黛7-氮杂靛玉红对6种肿瘤细胞增殖的影响［J］.天然产物研究与开发，2010，22:899-906.［8］陈莉华，左林艳，唐玉坚.微波辅助乙醇提取姜辣素及其对油脂的抗氧化性研究［J］.食品科学，2011，32(04):69-73.［9］张俊生，陈莉华，张文龙.湘西节节草总黄酮的超声波提取及抗氧化研究［J］.食品科学，2011，32(16):71-75.［10］邓斌，王存嫦，徐安武.微波辅助提取花生壳黄酮类化合物及其抗氧化性研究［J］.中国油脂，2009，34(3):54-57.。

大青叶中靛玉红的提取分离工艺研究
1 大青叶中靛玉红的提取分离工艺研究
大青叶（Himalayan blue poppy）是一种重要的药用植物，其中包含大量有益的化学成分，其中以靛玉红（Indigotin）最为珍贵。

因此，提取和分离大青叶中的靛玉红成分（Indigotin）是一项研究
重点。

根据技术原理，大青叶中靛玉红的提取与分离工艺可分为三大类：
一、化学工艺：
主要采用氯仿、硫酸、溴、氨水等，对大青叶中的靛玉红进行提取与分离。

具体操作方法为：将大青叶中的靛玉红放入容器，加入以上化学试剂，通过煮沸、搅拌、蒸馏等手段分离靛玉红。

该工艺易于操作，但因化学试剂的残留容易污染环境，并且成本较高。

二、物理工艺：
采用超声破碎、低温分离、稀释分离等技术，对大青叶中的靛玉红进行提取分离。

超声破碎是对原料的颗粒破碎，使其表面积增大，增强提取效率。

低温分离采用蒸馏技术，通过蒸汽热能，使溶于油的靛玉红溶解，并将油滴逐步分离出来。

稀释分离则是采用逆渗性膜稀释分离技术，将大青叶中的靛玉红以乳化液的形式提取出来，并分离出乳液中的有效成分。

三、抽提工艺：
采用抽提工艺，利用溶剂（如乙醇）对大青叶中的靛玉红进行抽提，通过连续抽提法，或分别抽提法，最后在蒸发器中将其蒸发即可。

将溶剂从抽提出的靛玉红中蒸发掉，得到纯的靛玉红。

总的来说，大青叶中靛玉红的提取分离工艺，可根据不同的需要，采用化学工艺、物理工艺和抽提工艺，而它们的共同特点是安全、高效、可控。

·93·安徽卫生职业技术学院学报 2020年19卷第6期复方板蓝根制剂中靛玉红提取工艺的研究张前珍1 李懂琴1 陈国良2【中图分类号】　R284 【文献标识码】　Ａ 【文章编号】　1671-8054（2020）06-0093-03【摘 要】 目的：根据板蓝根和大青叶中有效成分靛玉红的性质，选择不同的溶媒和提取方法，优化其提取工艺的最佳条件。

方法：分别用水和乙醇为溶媒，用正交试验设计法，采取乙醇回流、水提醇沉等提取方法，以靛玉红含量为指标，考察不同的实验方法和条件对靛玉红的影响，优选最佳的提取工艺条件。

结果：水煎煮提取的最佳条件：D3 B2 A3 C1，即加8倍量的水提取2次，每次2 h，提取温度为100℃。

乙醇回流提取的最佳条件是A3 B2 D2 C2，即加7倍量80%乙醇回流提取2次，每次80 min。

结论：乙醇回流法提取板蓝根和大青叶中有效成分靛玉红是水煎煮法提取靛玉红的97倍。

【关键词】　板蓝根　大青叶　靛玉红　提取工艺　正交试验板蓝根和大青叶是中药复方板蓝根制剂主要成分，是我国传统的中药。

板蓝根为十字花科植物菘蓝的干燥根，其主要化学成分为靛玉红和靛蓝等，有清热解毒、凉血利咽功能，用于瘟毒发斑、疗腮、喉痹、烂喉丹府、大头瘟疫、丹毒、痈肿等症，板蓝根的主要化学成分为靛玉红和靛蓝等，临床上常用于病毒性及细菌性感染疾病[1]。

大青叶为十字花科菘蓝的叶，其主要化学成分为有机酸、靛蓝、靛玉红、菘蓝苷、色胺酮等化合物[2]。

现代药理研究表明具有抗菌、抗癌、抗病毒、增强免疫调节作用[3]。

目前，复方板蓝根制剂有颗粒剂、冲剂、糖浆剂、片剂、口服液等，对板蓝根和大青叶中有效成分靛玉红的提取，传统的提取方法是水煎煮醇沉，其有效成分损失过大，为了最大限度提取有效成分，本实验分别采用水和乙醇为溶媒，用正交试验设计法，以确定合理的提取工艺路线和最佳提取条件，靛玉红为指标进行比对，为复方板蓝根制剂的生产提供科学依据。

中药青黛抗白血病成分——靛玉红的合成
陈迪华;李荣芳;叶鸿盘
【期刊名称】《中草药》
【年(卷),期】1979(0)3
【摘要】靛玉红是中药青黛的抗白血病有效成分。

我们用靛蓝和合成靛蓝的中间体吲哚酚钾盐溶液为原料,经两步反应得到了成品,总收率以靛蓝计算为50%,经熔点、元素分析、紫外光谱、红外光谱和质谱等测定证实,合成品和从青黛中提取品靛玉红一致。

合成靛玉红对W256癌肉瘤的活性及临床初步试用对慢性粒细胞型白血病的疗效与天然品相似。

【总页数】4页(P7-9)
【关键词】靛玉红;天然品;抗白血病
【作者】陈迪华;李荣芳;叶鸿盘
【作者单位】中国医学科学院药物研究所;成都中医学院;北京市染料厂
【正文语种】中文
【中图分类】R283;R284
【相关文献】
1.青黛中提取靛玉红等有效成分最佳工艺的研究 [J], 王景文;袁雪海
2.银屑病外用制剂青黛油的制备及有效成分靛玉红含量测定 [J], 王倩;张亚敏;郑其乐;徐小妹;林文津;孙凤灵;徐榕青
3.HPLC法同时测定青黛有效成分靛蓝和靛玉红的含量 [J], 刘泽玉;苏柘僮;高亚男;
杨明
4.靛玉红治疗慢性粒细胞白血病疗效原理的研究 VI.靛玉红对无细胞体系DNA合成的抑制作用 [J], 张镭
5.靛玉红治疗慢性粒细胞白血病疗效原理的研究Ⅱ、靛玉红在体外对动物肿瘤细胞和正常增殖细胞核酸与蛋白质合成代谢的影响 [J], 吴冠芸
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靛玉红微型胶囊的试制
汪国华;张文惠
【期刊名称】《中国药业》
【年(卷),期】1999(8)3
【摘要】靛玉红(indirubin)是中药青黛、大青叶、马兰的主要有效成分,现可人工合成.本品具有凉血解毒、降低幼稚细胞的作用.主要用于慢性粒细胞白血病,属我国自己找到的新类型抗癌药物.由于其水溶性与脂溶性均低,口服吸收受到限制,因而临床生效较慢,我们利用靛玉红极细粉制成微型胶囊.提高药品分散度,将其作为制备散剂、胶囊剂的原料,可望改善其吸收性能.
【总页数】1页(P41)
【作者】汪国华;张文惠
【作者单位】江西中医学院330006
【正文语种】中文
【中图分类】R977
【相关文献】
1.HPLC法同时测定复方青黛胶囊中靛蓝、靛玉红的含量 [J], 杨海燕;张成;王卫锋
2.HPLC法同时测定升血小板胶囊中丹皮酚、靛玉红的含量 [J], 李玥瑛;李广生;张清波;仲昭庆;笔雪艳
3.高效液相色谱法测定升血小板胶囊中靛玉红的含量 [J], 魏于杰;刘进丰;宋春丽
4.荆条叶挥发油微型胶囊片试制及临床观察 [J],
5.HPLC-ELSD同时测定银迪清胶囊中靛蓝和靛玉红含量 [J], 殷玥;姜珍
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靛玉红肟甲醚的合成及构效关系的研究
杜军;边泓竹
【期刊名称】《泸州医学院学报》
【年(卷),期】1999(022)005
【摘要】目的：研究靛玉红肟甲醚的合成及构效关系。

方法：用靛玉红、ＮＨ２ＯＨ．ＨＣＬ、ＣＨ３Ｉ在乙醇中直接合成靛玉红肟甲醚并得到其晶体；用ＦＴ－ＩＲ１７０ＳＸ光谱法、ＪＥＤＬ－ＪＮＭ－ＦＸ９０Ｑ，ＨＮＭＲ光谱法、ＣａｒｌｏＥｒｂａ１１Ｃ６元素分析法、ＣＡＤ４衍射法是靛玉红肟甲醚分子结构和晶体结构；用美兰试验测抗白血病活性。

结果：测定出靛玉红肟甲醚的分子结构和晶体结构。

并得出靛玉红肟甲醚的抗白血病活性优于靛玉红。

结论：肟甲醚结构〉Ｃ＝Ｎ－ＯＣＨ３对靛玉红类药物抗白血病活性有重要作用。

对寻找这类新药有重要意义。

【总页数】3页(P379-381)
【作者】杜军;边泓竹
【作者单位】泸州医学院化学教研室;泸州医学院化学教研室
【正文语种】中文
【中图分类】R914.5
【相关文献】
1.靛玉红肟甲醚结构及性质的研究 [J], 田发安;李春敏;龚考才
2.复合固定相色谱离析靛玉红肟与合成前体靛玉红的应用 [J], 刘可;龚考才;陈碧琼;
杜曦;杜军
3.靛玉红肟及其金属配合物靛玉红肟—Cu（II）的合成 [J], 李春敏;吴守玉
4.靛玉红类衍生物的三维定量构效关系研究 [J], 陈华妮;兰翠玲;张金磊
5.苯乙酮肟醚类化合物的合成及基于定量构效关系研究的分子设计 [J], 陈亮;姚建华;袁莉萍;曹瑾;黄迎;谢微;倪长春;沈宙;栗秀丽;张一宾
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