克雷伯菌属(肺炎克雷伯菌)生物安全评估报告

肺炎克雷伯菌的生物危害评估报告一、细菌的传播与致病肺炎克雷伯菌广泛分布于自然界及人和动物的胃肠道内，是临床标本中常见的细菌，可引起典型的原发性肺炎，该菌在正常人鼻咽部的带菌率1%~6%，但在住院病人中可高达20%。

该菌是酒精中毒者、糖尿病人和慢性阻塞性肺部疾病患者并发肺部感染的潜在危险因素。

肺炎克雷伯菌也能引起各种肺外感染，包括肠炎和脑膜炎（婴儿）、泌尿道感染（儿童和成人）及败血症。

近十几年来由该菌引起的免疫低下患者感染和医院感染不断增加，已成为社区感染和医院感染的重要病原菌。

其对抗生素的耐药性也不断增强。

二、细菌的生物学特性肺炎克雷伯菌属于肠杆菌科克雷伯菌属，为革兰氏阴性杆菌，无鞭毛、无芽胞，但有明显的荚膜。

兼性厌氧，对营养的要求不高。

三、细菌的实验室检查及其它检查1.标本采集采自不同感染部位的各种标本，主要是痰标本。

2.分离培养将标本接种于血琼脂和或MAC选择性培养基，于37℃孵育过夜。

可分别形成较大的、凸起、灰白色粘液型的菌落以及MAC上红色（易扩散至周围的培养基中）、大而厚实、粘液型光亮的菌落。

这些相邻的菌落容易发生融合，用接种针沾取时常可挑出长丝状的细丝。

3.染色镜检可见革兰氏阴性杆菌，无芽胞，但在菌体外有明显的荚膜。

4.生化鉴定该菌氧化酶阴性，发酵葡萄糖产酸产气、动力阴性、吲哚阴性、鸟氨酸脱羧酶阴性、VP试验阳性、脲酶阳性。

5.生长试验该菌不能在5℃和10℃生长，但能41℃生长。

6.荚膜肿胀试验可利用特异性的抗血清进行荚膜肿胀试验以鉴别本菌属及类似菌属。

将待测菌接种于华-弗（Worfel-Ferguson）培养基上（有利于荚膜的产生），经35℃、18~24h培养后，取一滴培养物加于载玻片上，加墨汁一滴或美蓝液一滴，再加入抗血清1接种环，混合后加盖玻片，置显微镜油镜下观察。

在菌体周围出现较大的空白圈者为阳性。

该菌表现为阳性。

7.肠毒素测定对小儿肠炎患者除了要做菌种鉴定外，尚需做肠毒素测定以明确被检菌的致病力。

用尿道菌定位显色平板鉴定大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌的方法评估2200字摘要：在确保鉴定准确的基础上降低细菌鉴定的成本，且简便快捷。

方法：用VITEK-2全自动细菌鉴定仪及科玛嘉尿道菌定位显色培养基分别对350株革兰阴性杆菌进行鉴定。

结果：用尿道定位培养基加做靛基质、动力等简单生化反应鉴定大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌准确率高。

结论：此方法简便经济，值得推广和应用。

关键词：大肠埃希菌；肺炎克雷伯菌近年来，肺炎克雷伯菌和大肠埃希菌，是引起各种感染的重要致病菌，为了解这两种菌对抗菌药物的耐药性，对临床各类标本中分离出的大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌进行监测分析，为临床合理使用抗菌药物提供依据。

现报告如下。

1 资料与方法1.1 一般资料：实验菌均来源于安达医院住院患者的临床标本（中段尿、痰、胸腹水、分泌物等）、尿道定位显色平板（上海科玛嘉微生物技术有限公司）、血平板、麦康凯平板（上海科玛嘉微生物技术有限公司）、各种微量生化管（杭州天和微生物试剂有限公司）、GNi加细菌鉴定卡及VITEK-2全自动细菌鉴定仪（法国梅里埃生物公司）。

1.2 方法：标本接种：将临床标本严格按SOP文件处理后接种于血平板和麦康凯平板，放35℃需氧环境培养24 h；细菌分离：将平板上可疑致病菌按要求分离，放35℃需氧环境培养24 h；细菌鉴定：挑取纯培养菌落于0.45%盐水中，制成1个麦氏单位浓度细菌悬液，将细菌悬液冲填于GNi加细菌鉴定卡内，放入VITEK-2全自动细菌鉴定仪，次日读取鉴定结果。

将已知细菌接种于科玛嘉尿道菌定位培养基中，次日观察显色情况，并将结果分类。

将显色相同但细菌不同的细菌，进行生化试验，将结果分析后记录。

将实验结果归纳分析统计。

2 结果 2.1 实验菌在科玛嘉尿道菌定位培养基显色情况：见表1。

表1 实验菌在科玛嘉尿道菌定位培养基显色情况细菌名称毕业菌株数菌落颜色科玛嘉尿道定位培养基大肠埃希菌86红色/html/zongjie/红色/html/zongjie/肺炎克雷伯菌75 毕业红色毕业蓝色/产酸克雷伯菌3红色蓝色阴沟肠杆菌/html/zongjie/28红色透明毕业蓝色产气肠杆菌7 /红色/蓝色中间肠杆菌/3红色蓝色/html/zongjie/普通变形杆菌作文/7 作文/灰白色蓝色/潘尼变形杆菌1灰白色蓝色毕业弗劳地枸橼酸杆菌/html/zongjie/ 10 作文/红色作文/蓝色粘质沙雷菌1 /红色作文/蓝色/html/zongjie/鲍曼不动杆菌/2粉红色嗜麦芽窄食单胞菌3 作文/无色浅蓝色毕业嗜麦芽窄食单胞菌/15无色/html/zongjie/灰白色/洛菲不动杆菌/4 /html/zongjie/无色作文/灰白色/html/zongjie/醋酸钙不动杆菌14淡红色灰白色/奇异变形杆菌毕业6 毕业灰白色作文/灰白色铜绿假单胞菌/html/zongjie/34绿色灰白色毕业荧光假单胞菌1 /无色作文/灰白色鲍曼不动杆菌49 /粉红色灰白色作文/沙门菌属/1白色/威隆气单胞菌1 /html/zongjie/无色褐色科玛嘉尿道菌定位培养基接种大肠埃希菌均显红色，而其他实验菌均未显红色，正确率高达100%。

克雷伯菌属的鉴定1、标本要求：1.1 尽量用药前采集标本。

1.2 痰液：病人清晨咳痰于无菌、防漏小塑料盒内，切勿唾液送检。

1.3 尿液：病人留取12h尿液，送检。

1.4 粪便：病人留取粪便5 10g，送检。

1.5 脑脊液及其它无菌体液：用无菌瓶直接送检。

血标本不要冷冻。

1.6 不可接受的标本：干的拭子、蜡盒、未消毒容器、留取24h后的尿或痰、破裂的瓶子、标本泄漏、标本无标签。

2、仪器35℃孵箱、普通光学显微镜3、试剂羊血平皿、巧克力平皿、麦康凯平皿、葡萄糖蛋白胨水、葡萄糖酸盐培养管、氨基酸脱羧培养管、糖醇发酵管、VP试剂、湖南长沙天地人肠杆菌鉴定板。

4、试验方法及原理：4.1 甲基红试验方法：将待检菌接种于葡萄糖蛋白胨水中，孵育过夜，加甲基红试剂1～2滴，观察结果。

结果：红色为阳性，桔黄色为阴性。

4.2 吲哚（靛基质）试验方法：将待检菌接种于葡萄糖蛋白胨水中，孵育过夜（一般为24－48h），加靛基质（对位二甲基苯甲醛）试剂1～2滴，观察结果。

结果：两者液面接触处出现红色为阳性，无色为阴性。

4.3 氨基酸脱羧试验方法：取待检菌接种于氨基酸脱羧培养管和对照管中，封石腊油，35℃培养过夜，观察结果。

结果：培养管变紫色为阳性，黄色为阴性。

对照管应保持黄色。

注意点：（1）．培养管的pH值很重要。

（2）．加封石腊油造成厌氧环境。

因为在厌氧情况下氨基酸脱羧生成的胺才稳定。

（3）．对照管如不呈黄色，则氨基酸脱羧酶试验不能作出判定。

4.4 VP试验方法：将待检菌接种于葡萄糖蛋白胨水培养基中，于35℃培养24－48h后加入VP试剂甲液（6％α－奈酚酒精溶液）和乙液（40％KOH溶液），振摇，然后观察。

结果观察：在数分钟内出现红色为阳性，如无红色出现且于35℃4h后仍如故者即为阴性。

4.5 葡萄糖酸盐试验方法：大量接种待检菌于葡萄糖酸盐培养管中，35℃孵育过夜或至48h，加班氏试剂，水浴中煮沸 lOmin,观察结果。

表 2.细菌、放线菌、衣原体、支原体、立克次体、螺旋体分类名录
物质特指菌株或活菌培养物，应按UN2814的要求包装和空运，其他相关样本和B类的病原和相关样本均按UN3373的要求包装和空运；通过其他交通工具运输的可参照以上标准包装。

f因属甲类传染病，流行株按第二类管理，涉及大量活菌培养等工作可在BSL-2实验室进行；非流行株归第三类。

说明：
1.在保证安全的前提下，对临床和现场的未知样本的检测可在生物安全二级或以上防护级别的实验室进行。

涉及病原
菌分离培养的操作，应加强个体防护和环境保护。

但此项工作仅限于对样本中病原菌的初步分离鉴定。

一旦病原菌初步明确，应按病原微生物的危害类别将其转移至相应生物安全级别的实验室开展工作。

2.“大量”的病原菌制备，是指病原菌的体积或浓度，大大超过了常规检测所需要的量。

比如在大规模发酵、抗原和疫苗生产，病原菌进一步鉴定以及科研活动中，病原菌增殖和浓缩所需要处理的剂量。

3.本表未列之病原微生物和实验活动，由单位生物安全委员会负责危害程度评估，确定相应的生物安全防护级别。

如
4.。

实验室风险评估和控制一、检验职业感染的现状经血、呼吸道、粘膜传播疾病直接危害着检验工作者身体健康。

我国是HBV感染的高发区,约有1.3亿人携带HBV,HBV表面抗原(HBsAg)的携带率为8%-20%;自90年代以来HCV感染也呈上升趋势,其感染率为3%。

目前艾滋病感染在我国的流行已进入增长期。

在无偿献血人群中检出乙型肝炎、丙型肝炎、梅毒、艾滋病等病毒感染占有一定的比例。

经调查显示,针头和玻璃碎片是主要锐器致伤因子,经常接触针头者发生锐器伤的危险是不经常接触者的23倍。

多种传染病是通过血液传染的,而血液检验中的职业暴露大多数来自实验室工作人员在实验操作和标本采集过程中,意外被带病原体的血液污染破损的皮肤或被病原体感染的针头、血常规采血针、采血玻璃管、吸头等锐器刺破皮肤，呼吸道吸入气溶胶也是传播方式之一。

因此,检验人员面临着严峻的职业暴露危险。

1.传播途径检验人员感染疾病的一般传染途径有:（1）皮肤破损:带有HIV、HBV、HCV、梅毒等病原体的血液,长时间接触小伤口、溃疡、擦伤等破损皮肤,将会造成机体的感染。

（2）穿刺:由于针头、刀片等对皮肤的意外损伤,使带有病毒的全血、血清或血浆进入皮下或循环系统,造成感染。

这种针头意外损伤是职业性HBV和HIV感染最重要的原因。

带有HIV的针头意外穿刺皮肤后,HIV感染的可能性在0--0.9%之间,平均为0.4%。

而对于HBV,这个可能性在6%-30%之间,平均为18%。

有学者进行了相应的统计推算,每1000个艾滋病病人,每年会产生1例由于针头意外造成的职业性HIV感染;而每1000个乙肝患者,每年会产生45例类似职业性HBV感染。

由于HBV在人群中的感染率比HIV高得多,在一定人群中,每年产生的因针头意外造成的职业性HBV感染比HIV多得多。

（3）粘膜:由于试管未封闭、离心意外等造成的血液飞溅,带有病原体的血液与口腔、鼻腔黏膜或眼结膜等接触,可以造成感染。

肺炎克雷伯菌生物危害评估报告一、细菌的传播与致病肺炎克雷伯菌广泛分布于自然界及人和动物的胃肠道内，是临床标本中常见的细菌，可引起典型的原发性肺炎，该菌在正常人鼻咽部的带菌率1%~6%，但在住院病人中可高达20%。

该菌是酒精中毒者、糖尿病人和慢性阻塞性肺部疾病患者并发肺部感染的潜在危险因素。

肺炎克雷伯菌也能引起各种肺外感染，包括肠炎和脑膜炎（婴儿）、泌尿道感染（儿童和成人）及败血症。

近十几年来由该菌引起的免疫低下患者感染和医院感染不断增加，已成为社区感染和医院感染的重要病原菌。

其对抗生素的耐药性也不断增强。

二、细菌的生物学特性肺炎克雷伯菌属于肠杆菌科克雷伯菌属，为革兰氏阴性杆菌，无鞭毛、无芽胞，但有明显的荚膜。

兼性厌氧，对营养的要求不高。

三、细菌的实验室检查及其它检查1.标本采集采自不同感染部位的各种标本，主要是痰标本。

2.分离培养将标本接种于血琼脂和或MAC选择性培养基，于37℃孵育过夜。

可分别形成较大的、凸起、灰白色粘液型的菌落以及MAC上红色（易扩散至周围的培养基中）、大而厚实、粘液型光亮的菌落。

这些相邻的菌落容易发生融合，用接种针沾取时常可挑出长丝状的细丝。

3.染色镜检可见革兰氏阴性杆菌，无芽胞，但在菌体外有明显的荚膜。

4.生化鉴定该菌氧化酶阴性，发酵葡萄糖产酸产气、动力阴性、吲哚阴性、鸟氨酸脱羧酶阴性、VP试验阳性、脲酶阳性。

5.生长试验该菌不能在5℃和10℃生长，但能41℃生长。

6.荚膜肿胀试验可利用特异性的抗血清进行荚膜肿胀试验以鉴别本菌属及类似菌属。

将待测菌接种于华-弗（Worfel-Ferguson）培养基上（有利于荚膜的产生），经35℃、18~24h培养后，取一滴培养物加于载玻片上，加墨汁一滴或美蓝液一滴，再加入抗血清1接种环，混合后加盖玻片，置显微镜油镜下观察。

在菌体周围出现较大的空白圈者为阳性。

该菌表现为阳性。

7.肠毒素测定对小儿肠炎患者除了要做菌种鉴定外，尚需做肠毒素测定以明确被检菌的致病力。

可以明显提高畜禽体内T 细胞的含量,增强细胞免疫的效果。

3中草药的优势中草药不仅具有抗菌、抗感染、保健的作用,其中还包含有多种营养物质如蛋白质、氨基酸、糖类、维生素等各种微量元素以及大量的有机酸、植物碱、生物酶、挥发油等多种促进生长的活性物质。

相比抗生素等其他化学合成药物来说,中草药具有纯天然,无污染,毒副作用小以及机体内残留少的优点。

并且随着社会的发展,人们对食品的品质、无公害绿色环保的要求也越来越高。

所以在畜禽养殖方面,改用中草药代替化学药品是符合时代要求的。

同时,中草药还具有来源广泛、价格低廉的显著优势。

并且经过临床实践,中草药在治疗畜禽疾病方面也显现出了明显的治疗及预防效果。

4中草药在兽医临床应用上的展望随着全球对食品安全、绿色养殖、人类健康的话题日益关注,促使研究者们投入更多的精力来提出治疗畜禽类疾病的安全方案。

中草药具有来源广泛、价格低廉、成分天然、机体服用后副作用少、残留少的特点,其治疗疾病的前景越来越被科学家看好。

同时国家加大了中医药的研发力度,对中医药的发展也将投入更多的资金。

如何将现代科技与中草药的研究更加完美的结合,如何促进中草药在兽用药方面实现新的突破与进展,成为了中医药工作者以及兽医工作者所要面临的新挑战。

收稿日期:2016-01-25基金项目:浙江省病理生理学技术研究重点实验室人才引进基金资助项目(F01691134200);宁波大学科研基金项目(XKL14D2106;XYL14021)作者简介:朱彦华(1975-),女,黑龙江绥化人,主管检验技师,主要从事医学检验工作,(电话)138********(电子信箱)942852086@;通信作者,魏华,女,博士,主要从事人与动物病原生物学研究。

宁波大学医学院临床病理学科病理学与病原生物学实验室发现17只新生仔猪在出生2周内死亡,随机选取4只死亡仔猪进行解剖检查以及病原菌的分离与鉴定,在死亡仔猪器官中均分离到肺炎克雷伯氏菌,现将病原菌的分离检验过程报告如下。

XX院检验科细菌室实验活动风险评估报告一、概述依据WHO《实验室生物安全手册》（第三版2004），本实验室为BSL-2级生物安全实验室，仅为临床检验实验室，主要实验活动为向临床治疗活动提供所需数据的细菌、真菌培养及药敏试验等，不从事大量增殖培养实验。

二、拟操作生物因子的危害程度本实验室操作的病原微生物均属于第二类或第三类感染性物质，详见表1 病原微生物汇总表表1 病原微生物汇总表除此之外，其中常见检测的具有乙类传染的有伤寒和副伤寒沙门菌、志贺菌等能够引起人类或者动物疾病，但一般情况下对人、动物或者环境不构成严重危害，传播风险有限，实验室感染后很少引起严重疾病，并且实验室具备有效治疗和预防措施的微生物，属于第三类病原微生物;另外，具有甲类传染的鼠疫杆菌、霍乱弧菌以及炭疽芽胞杆菌、鼻疽伯克霍尔德菌、布鲁氏菌、粗球孢子菌等可能引起人类或者动物严重疾病，比较容易直接或者间接在人与人、动物与人、动物与动物间传播的微生物，属于第二类病原微生物，本实验室只检测这类病原微生物中的“霍乱弧菌”危害相对较小的病原微生物，对于“鼠疫杆菌”及其他细菌等，本实验室不作为常规检测项目，但为防止病人所送样本可能具有此类微生物，也作了相关防护措施。

本实验室常规不检测那些引起人类或者动物非常严重疾病的微生物，以及我国尚未发现或者已经宣布消灭的微生物等第一类微生物。

三、实验活动的危险性三.1实验活动是指实验室从事与临床相关的细菌，真菌培养、鉴定及药敏试验、教学培训、诊断等活动。

三.2实验活动的类型根据实验室流程，主要涉及的有样本采集运输、接收、处理、实验室检测（培养、鉴定、药敏）操作、锐器使用及生物安全柜等设备的使用、废弃物处理等。

实验操作包括标本接种，阅读平板、上机鉴定药敏试验、补充药敏试验、涂片检查、保留菌株等过程。

三.3实验活动风险识别1.操作风险1.1气溶胶产生风险主要来源于打开标本，打开平板，调菌液、灼烧接种环等实验活动，以及标本平板转运过程中可能发生的倒翻、容器破裂和样本洒溅等情况风险控制措施：所有标本接种过程均在可靠的处于正常运行的生物安全柜内操作，操作过程动作应轻柔。

2021第2期 103一 例 猪 肺 炎 克 雷 伯 氏 菌 病 的 诊 疗 报 告刘海林1，郭力伟2（1.新乡市动物疫病预防控制中心，河南 新乡 453003；2.河南农业职业学院洛阳分院，河南洛阳 471002） 中图分类号：S858.285.1 文献标志码：Ａ 文章编号：1002-1957(2021)02-0103-02收稿日期：2020-12-23作者简介：刘海林（1981-），男，河北滦县人，高级兽医师，硕士，主要从事兽医诊疗及实验室检测工作.E-mail：*********************每年冬季猪呼吸道疾病较天热季节会明显增多。

究其原因一方面是气温骤降、温差大，猪受寒后引起咳嗽等疾病；另一方面，猪场冬季封闭过严，空气不流通，有毒有害气体聚集过多，刺激呼吸道黏膜，破坏黏膜屏障，这时猪舍环境中的一些条件性致病菌便会侵入猪体发生呼吸系统疾病。

2019年冬季，新乡市一小型养猪场猪发生呼吸系统疾病，发病日龄主要集中在断奶后1周左右，常规治疗无效，一直有保育猪零星散发该病。

兽医通过临床观察、病理剖检、生化鉴定和PCR等多种方法，确诊猪场感染猪肺炎克雷伯氏菌病，现将具体诊疗情况报告如下。

1 发病情况及临床症状该猪场目前存栏200头，哺乳期仔猪、种猪和肥育商品猪一般不表现临床症状，只有保育猪发病严重，发病日龄主要集中在断奶后的1～2周。

发病初期猪有咳嗽或流鼻涕症状，体温达到40～41.5 ℃。

发病后猪采食量下降，病情严重猪绝食。

病程后期猪表现伸颈、张口呼吸，同时可见猪瞳孔放大，四肢末端、腹部和耳部皮肤出现发绀斑块。

使用磺胺类药物和中药制剂小柴胡注射液进行治疗，效果不明显。

2 病理变化病死猪鼻腔常见有黏液或气泡，解剖后发现病情严重猪的肺脏表面有大面积淤血和充血斑块，膈叶病变更为明显。

肺门淋巴结肿大、充血，多呈现暗紫色。

剪开气管和支气管发现有很多白色泡沫，一些支气管壁发现有充血现象，个别细支气管中可见红色出血性泡沫，主要与肺泡毛细血管出血有关。