食源性阪崎肠杆菌病诊断要点

附件食品微生物之檢驗方法－阪崎腸桿菌之檢驗1 適用範圍〆本方法適用於一般食品及奶粉中阪崎腸桿菌之檢驗。

2 檢驗方法〆2.1 工作環境〆工作平台須寬敞、潔淨、光線良好，操作平台光度為100呎燭光以上，密閉室內換氣良好，儘可能沒有灰塵及流動空氣。

每15分鐘落菌數不得超過15 CFU／培養皿。

2.2 器具及材料〆2.2.1 乾熱滅菌器。

2.2.2 高壓滅菌釜。

2.2.3 攪拌均質器（Blender）或鐵胃（Stomacher）〆適用於無菌操作者。

2.2.4 天平〆可稱量到2000 g者，靈敏度為0.1 g々可稱量到120 g者，靈敏度為1 mg。

2.2.5 冰箱〆能維持5 ±3℃者。

2.2.6 吸管或吸管尖〆已滅菌，1 mL吸管應有0.01 mL之刻度々5 mL及10 mL吸管應有0.1 mL之刻度。

2.2.7 吸管輔助器（Pipette aid）或微量分注器。

2.2.8 稀釋瓶〆160 mL，玻璃、聚乙烯（polyethylene）、鐵弗龍（Teflon）或其他能耐121℃濕熱滅菌20分鐘以上之塑膠材質，附螺旋蓋。

2.2.9 培養皿〆已滅菌，內徑約9 cm，深度約15 mm，底皿之內外面應平坦，無氣泡、刮傷或其他缺點。

2.2.10 增菌用容器〆附螺旋蓋之125 mL、250 mL、2 L三角錐瓶或廣口瓶々玻璃、聚乙烯、鐵弗龍或其他能耐121℃濕熱滅菌20分鐘以上之塑膠材質。

2.2.11 pH測定儀。

2.2.12 培養箱〆能維持內部溫度在±1℃以內者。

2.2.13 溫度計〆量測溫度範圍1～55℃，最小刻度0.1℃。

2.2.14 水浴〆加蓋，具水流循環系統，能維持水溫溫差在±0.2℃以內者。

2.2.15 接種針及接種環（直徑約3 mm）〆鎳鉻合金、鉑銥或鉻線材質，或可拋棄式者。

2.2.16 曲玻棒〆可滅菌者，直徑3～4 mm，塗抹區域45～55 mm。

2.2.17 試管〆10 ×100 mm，13 ×100 mm，13 ×120 mm，15 ×150 mm，16 ×150 mm試管，或其他適用者。

婴幼儿健康的“敌人”-食品中阪崎肠杆菌的检测方法阪崎肠杆菌阪崎肠杆菌是广泛存在于环境中的一种微生物，可以感染婴幼儿并对他们的健康造成严重威胁，阪崎肠杆菌耐热、耐干燥、对渗透压有较强的忍耐力，可长时间生存在干燥的环境中。

阪崎肠杆菌最喜欢袭击1岁以下的婴儿，如果你在冲调、存放奶粉时操作不当，它就可以趁虚而入，婴儿的胃酸PH值比成人高，可以存活在他们的肠道中，并且婴儿血脑屏障未发育完全，阪崎肠杆菌可以轻易进入他们的脑部引发脑膜炎，由阪崎肠杆菌引起的新生儿脑膜炎、菌血症等严重疾病，死亡率高达20-50％。

世界卫生组织建议，您应当使用不低于70℃的热水冲调婴儿配方奶粉，并在2小时内尽快喂哺，如果需要预先冲调，冲调后应快速冷却并且存放在不超过5℃的冰箱内，还要在冲调后24小时内饮用，喂哺前必须重新加热，那些早产、体重低或免疫力低的高风险婴儿，可以使用商业无菌的液态婴儿配方奶，你记住了吗？食品中阪崎肠杆菌的检测方法1 设备和材料除微生物实验室常规灭菌及培养设备外，其它设备和材料如下：1.1 恒温培养箱：25℃±1℃，36℃±1℃，44℃±0.5℃1.2 冰箱：2℃-5℃1.3恒温水浴箱：44℃±0.5℃1.4天平：感量0.1g1.5 均质器1.6 无菌吸管：1mL（具0.01mL刻度）、10mL（具0.1mL刻度）1.7 无菌锥形瓶：容量100mL、250mL、2 000mL1.8 无菌培养皿：直径90mm1.9 pH计或精密pH试纸2 培养基和试剂2.1 缓冲蛋白胨水2.2 改良月桂基硫酸盐胰蛋白胨肉汤-万古霉素2.3 阪崎肠杆菌显色培养基2.4 胰蛋白胨大豆琼脂（TSA）2.5 API 20E生化鉴定试剂盒2.6 氧化酶试剂3 操作步骤3.1 前增菌和增菌取样前，应消毒检样包装的开启处。

以无菌操作，称取检样100g（mL）加至预热到44℃装有900mL灭菌缓冲蛋白胨水的2 000mL锥形瓶中，缓缓振摇使样品充分溶解，36℃±1℃培养18h±2h。

卫生部办公厅关于印发《婴幼儿阪崎肠杆菌感染诊疗指南》和《婴幼儿阪崎肠杆菌感染宣教要点》的通知文章属性•【制定机关】卫生部(已撤销)•【公布日期】2008.09.30•【文号】卫发明电[2008]130号•【施行日期】2008.09.30•【效力等级】部门规范性文件•【时效性】现行有效•【主题分类】妇幼健康正文卫生部办公厅关于印发《婴幼儿阪崎肠杆菌感染诊疗指南》和《婴幼儿阪崎肠杆菌感染宣教要点》的通知（卫发明电[2008]130号）各省、自治区、直辖市卫生厅局，新疆生产建设兵团卫生局：为做好婴幼儿阪崎肠杆菌感染的诊疗工作，保证婴幼儿身体健康，我部会同中华医学会组织制定了《婴幼儿阪崎肠杆菌感染诊疗指南》和《婴幼儿阪崎肠杆菌感染宣教要点》。

现印发你们，供你们对医务人员进行相关培训和医疗机构参考使用。

附件：1.婴幼儿阪崎肠杆菌感染诊疗指南2.婴幼儿阪崎肠杆菌感染宣教要点卫生部办公厅二〇〇八年九月三十日附件1婴幼儿阪崎肠杆菌感染诊疗指南一、病原学和流行病学阪崎肠杆菌（Bntorobater sakazakii）属肠杆菌科肠杆菌属，革兰染色阴性杆菌。

阪崎肠杆菌在自然界分布广泛，繁殖迅速，但不耐热，可通过巴斯德消毒法杀灭。

阪崎肠杆菌属条件致病菌，在一般情况下，不对人体健康产生危害，但对于免疫力低下者和婴幼儿、新生儿，尤其是早产儿、低体重儿可以致病。

感染来源主要是受阪崎肠杆菌污染的奶粉，人与人之间无传染性。

二、临床表现多数患儿临床症状轻微且不典型，易被忽略。

严重者可引起坏死性小肠结肠炎、败血症、脑膜炎等。

（一）全身症状：发热，新生儿可表现为体温不升、精神萎靡、拒乳、黄疸加重，面色发灰、皮肤发花甚至出现休克。

（二）消化系统症状：可有呕吐、腹胀、腹泻、粘液血便，肠鸣音减弱甚至消失，严重时可发生肠穿孔和腹膜炎。

（三）神经系统症状：烦躁、哭声尖直、嗜睡甚至昏迷，可出现凝视、惊厥，查体可有头围增大、颅缝裂开、前囟张力增高、脑膜刺激征阳性。

阪崎肠杆菌检测标准1. 引言阪崎肠杆菌（Hafnia alvei）是一种革兰氏阴性菌，属于肠杆菌科。

它在自然环境中广泛存在，也可以在人和动物的消化道内找到。

阪崎肠杆菌可以对人类和动物造成感染，引起各种疾病，如泌尿系统感染、呼吸道感染和胃肠道感染等。

为确保食品和饮用水的安全，阪崎肠杆菌的检测标准十分重要。

2. 检测方法2.1 阪崎肠杆菌的培养方法阪崎肠杆菌可以在一般细菌培养基上生长，常用的培养基包括MacConkey琼脂培养基和Eosin Methylene Blue（EMB）琼脂培养基。

培养时一般在37°C下孵育24-48小时。

2.2 阪崎肠杆菌的生化检测阪崎肠杆菌可以通过一系列的生化反应进行检测和鉴定。

常用的生化试验包括氧化/发酵葡萄糖试验（O/F试验）和酮糖酸盐（Voges-Proskauer）试验等。

2.3 阪崎肠杆菌的PCR检测PCR（聚合酶链式反应）是一种常用的分子生物学方法，可以快速、准确地检测阪崎肠杆菌。

通过特定的引物在PCR反应中扩增阪崎肠杆菌的DNA片段，然后通过凝胶电泳进行检测和鉴定。

3. 检测标准3.1 食品中阪崎肠杆菌的检测标准根据国家食品安全标准，食品中阪崎肠杆菌的检测标准如下： - 生肉制品：阪崎肠杆菌在每克样品中不得超过10 CFU； - 加工食品：阪崎肠杆菌在每克样品中不得超过100 CFU； - 饮用水：阪崎肠杆菌在每100毫升样品中不得检出。

3.2 环境中阪崎肠杆菌的检测标准根据环境保护标准，阪崎肠杆菌的检测标准如下： - 水质：阪崎肠杆菌在每升水样中不得超过100 CFU； - 空气：阪崎肠杆菌在每立方米空气中不得超过100 CFU； - 土壤：阪崎肠杆菌在每克土壤样品中不得超过1000 CFU。

4. 检测流程4.1 样品采集从食品、饮用水或环境样品中采集足够数量的样品。

使用无菌容器收集，并确保样品处于最佳的保存条件。

4.2 样品处理将采集的样品经过适当的处理，在无菌条件下进行前处理，如制备悬浮液或稀释样品。

婴幼儿食品中阪崎克罗诺杆菌的快速检测李莉; 陈泽辉【期刊名称】《《中国卫生标准管理》》【年(卷),期】2019(010)018【总页数】4页(P4-7)【关键词】阪崎克罗诺杆菌; Lamp; 婴儿配方奶粉; 快速检测; 特异性; 灵敏度【作者】李莉; 陈泽辉【作者单位】厦门市疾病预防控制中心业务质量管理科福建厦门361021; 厦门市疾病预防控制中心检验科福建厦门361021【正文语种】中文【中图分类】R155阪崎克罗诺杆菌，又称阪崎肠杆菌，多寄生于人和动物的肠道中，为食源性致病菌，多来源于婴幼儿食品。

阪崎克罗诺杆菌有鞭毛，兼性厌氧，属于革兰氏阴性无芽孢杆菌[1]。

婴幼儿感染后容易造成新生儿脑膜炎、坏死性结肠炎和败血症等，对尚未发育完全的神经系统造成影响，严重者可导致死亡[2]。

近年来，阪崎克罗诺杆菌感染的发生率呈上升趋势，因而快速检测阪崎肠杆菌，并制定相应的防控方案在公共卫生领域十分重要[3]。

1 材料与方法1.1 材料1.1.1 实验用菌株本研究用到的菌株见表1。

1.1.2 样品与试剂本研究检测采用的样品婴幼儿奶粉，来源于厦门市各超市。

万古霉素试剂：北京陆桥技术股份有限公司。

阪崎肠杆菌核酸快速检测试剂盒：广东环凯微生物科技有限公司。

1.2 主要仪器设备BSC-1500IIA2-X型生物安全柜：济南鑫贝西生物技术有限公司；GNP-9160型、GNP-9080型隔水式恒温培养箱：上海精宏实验设备有限公司；HV-25型高压灭菌器：日本平山制作所株式会社；Pico7500 2415型台式高速离心机：厦门联仪通医疗设备有限公司；EPPENDDO-RF型恒温金属浴：厦门宝能科技有限公司；IKA MS3型漩涡混合仪：福州齐力特实验设备有限公司；BCD-218S DA型海尔冰箱：青岛海尔股份有限公司。

1.3 方法1.3.1 传统分离鉴定应用GB 4789.40-2010方法，取100 mg样品，加到高压灭菌过的，44℃的装有900 mL缓冲蛋白胨水的锥形瓶中，混匀。

长春阪崎肠杆菌科鉴定流程
阪崎肠杆菌属于肠杆菌科中的一种常见细菌，其主要存在于人和动物的肠道中。

该细菌可引起多种疾病，如腹泻、肺炎、败血症等。

因此，在医学诊断和食品安全监管方面，对阪崎肠杆菌的鉴定十分重要。

下面是长春阪崎肠杆菌科鉴定的流程：
1.搜集样本
对于可能污染阪崎肠杆菌的样品，如肉类、蔬菜、水果、动物粪便等，进行采集，并妥善保存。

2.培养
将样品进行培养，常用的培养基为MacConkey培养基或兰伯特培养基。

在37摄氏度下，进行18-24小时的培养，以使菌落生长到足
够数量。

3.鉴定
（1）形态特征：观察菌落的形态，如颜色、形状、大小等，再
观察细菌的形态、大小和运动性等。

（2）生化特性：采用一系列生化试验，如氧化酶试验、卡氏试验、甲烷酸盐发酵试验等，以区分阪崎肠杆菌和其他肠杆菌。

（3）免疫学鉴定：采用免疫学方法，如酶联免疫吸附试验(ELISA)、荧光抗体法等，检测阪崎肠杆菌的抗原。

以上是长春阪崎肠杆菌科鉴定的流程。

在鉴定过程中，需要严格控制卫生条件，避免交叉污染。

鉴定结果的准确性将影响到后续的治
疗和防控措施。

常见食源性疾病的诊断要点附录1 重要微生物性食源性疾病的诊断要点附录1-1 食源性非伤寒沙门氏菌病诊断要点1 流行病学特点1.1 发病季节：一年四季均有发生，夏、秋季节（5～10 月）高发。

1.2 发病原因：经口食入非伤寒沙门氏菌污染的食品。

1.3 致病食品：主要为沙门氏菌污染的的畜肉类、禽肉、蛋类、奶类及其制品以及蔬菜水果等。

1.4 易感人群：普遍易感。

2 临床表现2.1 潜伏期：一般为 6 h～48 h。

偶尔长达 4 d。

2.2 主要症状及体征2.2.1 胃肠炎型：最常见。

主要症状为：恶心、呕吐、腹泻、腹痛、发热等，急性腹泻以黄色或黄绿色水样便为主，有恶臭。

症状可因病情轻重而反应不同。

重者可引起痉挛、脱水、休克甚至死亡，多见于老人、婴儿和体弱者。

病程一般为 3 d～7 d。

2.2.2 败血症型：多见于儿童、慢性疾病及免疫力低下者。

症状严重，有高热、寒战、厌食和贫血等。

败血症因沙门氏菌侵入血循环引起，可导致多种器官的炎症，如脑膜炎、骨髓炎、胆囊炎、心内膜炎等。

3 实验室检验3.1 从可疑食物中检出与患者粪便或肛拭子中血清型别相同的沙门氏菌。

3.2 从可疑食物中检出沙门氏菌。

3.3 从患者呕吐物或粪便或肛拭子中检出沙门氏菌。

3.4 必要时可测定沙门氏菌分离株与病人血清的凝集效价，恢复期比初期有所升高（一般约升高 4 倍）。

3.5 沙门氏菌检验按照 GB 4789.4 进行。

4 诊断4.1 符合本标准的流行病学特点与临床表现，由可疑食物中检出与患者呕吐物或粪便或肛拭子中血清型别相同的沙门氏菌，可确诊。

4.2 符合本标准的流行病学特点与临床表现，从几个患者呕吐物或粪便或肛拭子中检出血清型别相同的沙门氏菌，即使无可疑食品或未从可疑食物中检出沙门氏菌，也可确诊。

4.3 符合本标准的流行病学特点与临床表现，从可疑食物中检出沙门氏菌，而患者呕吐物或粪便或肛拭子未检出沙门氏菌，则不可确诊。

附录1-2 食源性致泻大肠埃希菌病诊断要点1 流行病学特点1.1 发病季节：本病多发生在 3 月～9 月。

阪崎肠杆菌科菌种鉴定细菌成分一、引言阪崎肠杆菌科（Sakazakii Enterobacteriaceae）是一种常见的细菌科，包含多种致病性菌种。

其中的阪崎肠杆菌（Cronobacter sakazakii）是一种已知的人类致病菌，能引起新生儿脑膜炎、败血症、肺炎等严重感染。

因此，对于阪崎肠杆菌科菌种鉴定的准确性和全面性要求极高。

二、样品采集与处理1. 采集样品：从食品、环境等来源中采集样品，如奶粉、水源等。

2. 处理样品：将样品进行预处理，如加入缓冲液等，以保证后续操作的可靠性和准确性。

三、培养基选择与制备1. 培养基选择：常用的培养基有Luria-Bertani（LB）、营养琼脂（NA）、大肠杆菌选择性培养基MacConkey（MAC）等。

2. 培养基制备：按照标准配方制备培养基，并进行灭菌处理。

四、细胞分离与纯化1. 细胞分离：将样品接种到培养基中，进行静置或摇床培养，使菌落生长。

2. 细胞纯化：通过不同的方法，如差速离心、磁珠分离等，将目标细菌分离纯化。

五、生化鉴定1. 氧化酶试验：检测细菌是否具有氧化酶活性。

2. 婴儿食品模拟液培养：将细菌接种到婴儿食品模拟液中进行培养，观察是否能够生长。

3. 阳性和阴性反应检测：通过添加不同的试剂观察细菌是否产生阳性或阴性反应。

六、分子生物学鉴定1. PCR扩增：使用特异性引物对目标基因进行PCR扩增。

2. 16S rRNA序列分析：对PCR扩增得到的16S rRNA序列进行测序和比对，并与数据库中的已知序列进行比较。

七、质谱鉴定1. MALDI-TOF MS技术：利用MALDI-TOF MS技术对目标菌株进行质谱分析，并与数据库中的已知质谱图谱进行比对。

八、总结阪崎肠杆菌科菌种鉴定需要综合应用多种方法，包括样品采集与处理、培养基选择与制备、细胞分离与纯化、生化鉴定、分子生物学鉴定和质谱鉴定等。

在实际操作中，需要根据具体情况选择合适的方法，并注意操作规范和安全性。