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ｄｏｉ：１０ ３９６９／ｊ ｉｓｓｎ １００４－２７５Ｘ ２０２０ １１ ２７高效液相色谱法测定化妆品中１２种防腐剂宗凌丽，应 月，孙 瑞（南京市食品药品监督检验院，江苏 南京 ２１００００）摘 要：（目的）建立同时测定化妆品中１２种防腐剂的检测方法，测定化妆品种１２种防腐剂的含量。
（方法）样品经甲醇溶液超声提取后，经ＡｇｉｌｅｎｔＺｏｒｂａｘＳＢ－Ｃ１８色谱柱（４ ６ｍｍ×２５０ｍｍ，５μｍ），流动相：甲醇（Ａ）－０ ０２５ｍｏｌ／Ｌ磷酸二氢钠缓冲液（ｐＨ＝２ ８）（Ｂ）梯度洗脱；甲基氯异噻唑啉酮和甲基异噻唑啉酮检测波长为２８０ｎｍ，其他组分检测波长为２５４ｎｍ。
结果表明，１２种防腐剂在进样浓度范围内线性关系良好，相关系数均大于０ ９９９。
回收率为９２ ４８％～１０２ ７５％，相对标准偏差ＲＳＤ为１ ３０％～４ ５０％。
关键词：化妆品；防腐剂；高效液相色谱法 中图分类号：Ｏ６５７ ７２；ＴＱ６５８ 文献标识码：Ａ 文章编号：１００４－２７５Ｘ（２０２０）１１－０７８－０２Ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎｏｆ１２ｐｒｅｓｅｒｖａｔｉｖｅｓｉｎｃｏｓｍｅｔｉｃｓｂｙｈｉｇｈｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅｌｉｑｕｉｄｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙＺｏｎｇＬｉｎｇｌｉ，ＹｉｎｇＹｕｅ，ＳｕｎＲｕｉ（ＮａｎｊｉｎｇＦｏｏｄａｎｄＤｒｕｇＡｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎ，Ｎａｎｊｉｎｇ，Ｊｉａｎｇｓｕ２１００００）Ａｂｓｔｒａｃｔ：ＯｂｊｅｃｔｉｖｅＴｏｅｓｔａｂｌｉｓｈａｍｅｔｈｏｄｆｏｒｔｈｅｓｉｍｕｌｔａｎｅｏｕｓｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎｏｆ１２ｐｒｅｓｅｒｖａｔｉｖｅｓｉｎｃｏｓｍｅｔｉｃｓ，ａｎｄｔｏｄｅ ｔｅｒｍｉｎｅｔｈｅｃｏｎｔｅｎｔｏｆ１２ｐｒｅｓｅｒｖａｔｉｖｅｓｉｎｃｏｓｍｅｔｉｃｓ ＭｅｔｈｏｄｓＡｆｔｅｒｕｌｔｒａｓｏｎｉｃｅｘｔｒａｃｔｉｏｎｏｆｍｅｔｈａｎｏｌｓｏｌｕｔｉｏｎ，ｔｈｅｓａｍｐｌｅｗａｓｐａｓｓｅｄｏｎａｎＡｇｉｌｅｎｔＺｏｒｂａｘＳＢ－Ｃ１８ｃｏｌｕｍｎ（４ ６ｍｍ×２５０ｍｍ，５μｍ），ｍｏｂｉｌｅｐｈａｓｅ：ｍｅｔｈａｎｏｌ（Ａ）－０ ０２５ｍｏｌ／Ｌｓｏ ｄｉｕｍｄｉｈｙｄｒｏｇｅｎｐｈｏｓｐｈａｔｅｂｕｆｆｅｒ（ｐＨ＝２ ８）（Ｂ）Ｇｒａｄｉｅｎｔｅｌｕｔｉｏｎ；ｔｈｅｄｅｔｅｃｔｉｏｎｗａｖｅｌｅｎｇｔｈｏｆｍｅｔｈｙｌｃｈｌｏｒｏｉｓｏｔｈｉａｚｏｌｉｎｏｎｅａｎｄｍｅｔｈｙｌｉｓｏｔｈｉａｚｏｌｉｎｏｎｅｉｓ２８０ｎｍ，ａｎｄｔｈｅｄｅｔｅｃｔｉｏｎｗａｖｅｌｅｎｇｔｈｏｆｏｔｈｅｒｃｏｍｐｏｎｅｎｔｓｉｓ２５４ｎｍ Ｔｈｅｒｅｓｕｌｔｓｓｈｏｗｅｄｔｈａｔｔｈｅ１２ｐｒｅｓｅｒｖａｔｉｖｅｓｈａｄａｇｏｏｄｌｉｎｅａｒｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐｗｉｔｈｉｎｔｈｅｉｎｊｅｃｔｉｏｎｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｒａｎｇｅ，ａｎｄｔｈｅｃｏｒｒｅｌａｔｉｏｎｃｏｅｆｆｉｃｉｅｎｔｓｗｅｒｅａｌｌｇｒｅａｔｅｒｔｈａｎ０ ９９９ Ｔｈｅｒｅｃｏｖｅｒｙｒａｔｅｉｓ９２ ４８％～１０２ ７５％，ａｎｄｔｈｅｒｅｌａｔｉｖｅｓｔａｎｄａｒｄｄｅｖｉａｔｉｏｎＲＳＤｉｓ１ ３０％～４ ５０％ Ｋｅｙｗｏｒｄｓ：ｃｏｓｍｅｔｉｃｓ；ｐｒｅｓｅｒｖａｔｉｖｅｓ；ｈｉｇｈｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅｌｉｑｕｉｄｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ 防腐剂虽然有保证产品安全的功能，但过量使用，或者不正规使用，都会对人体健康造成一定的伤害［１］。
WATERS 600高效液相色谱仪使用说明书（用前必读）青岛科技大学化工测试中心2009-07-17安全指南遵守安全指南可以防止对系统或设备造成损害。
注意：不要将设备置于阳光直射的地方或靠近空调通风口。
注意：在不确定的情况下，不要删除工作站中的任何文件。
注意：为了避免损坏检测器的流动池，不要触摸流动池窗口。
小心：为避免被灼伤，在拆下灯泡进行更换或调整前，请至少提前30 分钟关闭灯泡。
小心：为避免电击事故和人身伤害，请务必在执行维护工作前关闭高压泵、检测器并拔下电源下电源线。
小心：为避免化学或电气危险，在操作系统时，请务必遵守实验室的安全规定。
目录第一章WATERS 600 简介 (1)第二章基本操作要领 (2)2.1 操作规程 (2)2.2 运行分析样品 (2)第三章数据的处理 (15)3.1 创建方法组定量分析 (15)外标法：单点校正 (15)未知样结果计算 (26)外标法：多点校正 (29)内标法校正 (32)3.2 定性结果 (39)3.3 打印报告 (42)第四章文件管理 (46)第五章Millennium 32 4.02版本（中文版）安装要点及有关事项 (47)第一章WATERS 600 简介该高效液相色谱系统是由Waters600高压泵及控制器、氦气脱气系统、Waters 2996二极管阵列检测器和Millennium324.02版本（中文版）工作站构成。
该系统所有的控制指令和数据处理都可以通过计算计完成。
该系统是分析实验室不可缺少的仪器设备，是有机物定量分析的最佳手段之一，另外的突出优点是可以对色谱峰的纯度进行判断。
建立色谱库后可以实现定性分析。
第二章基本操作要领2.1 操作规程2.1.1 制备标样和样品：配置合适浓度的标样；制备的样品进样前要过滤。
2.1.2使用HPLC级流动相，必要时自行制备；水为实验室2级水。
用前均需过0.45µm 滤膜。
2.1.3 流动相脱气：打开氦气(99.999%)钢瓶，调节减压阀输出压力0.3~0.6MPa。
Waters 515型高效液相色谱仪标准操作规程本仪器由Waters 515泵、Waters 486紫外检测器和EChrom98工作站及连接电脑组成，四个部件均有电源插头。
1首先检查泵的流路，电路接线均无问题后方可操作。
2接通电源将电源插头分别插入插座后，依次打开泵、检测器、EChrom98工作站的电源开关。
3 Waters 515泵操作3.1接通系统电源，控制器开通后进行自检，短暂显示型号泵头规格版本号，数秒后通过，显示READY后，便可进行排气操作。
3.2断开泵出口与后续仪器连接的流路，逆时针旋开DRA W OF V AL VE,用注射器抽气，直到流动相流出，关闭V AL VE。
3.3 反复按MENU键，直至出现PURGE参数，按ENTER键运行PURGE 参数5ml/min 5min冲洗泵。
4打开EChrom98工作站软件，查看实时信号情况，在Waters 486紫外检测器上设定检测样品所需的波长参数。
5 重新连接泵出口与其后仪器，按照测定样品所需要的流动相的流速及比例，设定泵的参数，冲洗管路30min以上，直至检测器输出的信号基线平稳后方可进样，采集数据，并保存数据。
测定操作5.1按检测器Auto zero键置零，进样阀手柄置“LOAD”位置，将供试液注入进样阀。
5.2进样阀手柄迅速转到“INJECT”位置，注入样品，开始采集色谱数据。
5.3出峰完毕，如果不到设定时间，可使用“退出”菜单中“结束实验”选择框停止数据采集，屏幕上显示确认结束对话窗，选中“是”选择框，则中止数据采集。
6实验结束后，更换甲醇清洗流路30min以上，如流动相中有缓冲盐，则需用HPLC级纯化水冲洗管路。
同时需要用纯水清洗柱塞。
停泵如果超过一天，则需要用水/甲醇冲洗整个系统流路。
7冲洗结束后关闭电源，并填写仪器使用记录。
Waters 515型高效液相色谱仪标准操作规程本仪器由Waters 515泵、Waters 486紫外检测器和EChrom98工作站及连接电脑组成，四个部件均有电源插头。
1首先检查泵的流路，电路接线均无问题后方可操作。
2接通电源将电源插头分别插入插座后，依次打开泵、检测器、EChrom98工作站的电源开关。
3 Waters 515泵操作3.1接通系统电源，控制器开通后进行自检，短暂显示型号泵头规格版本号，数秒后通过，显示READY后，便可进行排气操作。
3.2断开泵出口与后续仪器连接的流路，逆时针旋开DRA W OF V AL VE,用注射器抽气，直到流动相流出，关闭V AL VE。
3.3 反复按MENU键，直至出现PURGE参数，按ENTER键运行PURGE 参数5ml/min 5min冲洗泵。
4打开EChrom98工作站软件，查看实时信号情况，在Waters 486紫外检测器上设定检测样品所需的波长参数。
5 重新连接泵出口与其后仪器，按照测定样品所需要的流动相的流速及比例，设定泵的参数，冲洗管路30min以上，直至检测器输出的信号基线平稳后方可进样，采集数据，并保存数据。
测定操作5.1按检测器Auto zero键置零，进样阀手柄置“LOAD”位置，将供试液注入进样阀。
5.2进样阀手柄迅速转到“INJECT”位置，注入样品，开始采集色谱数据。
5.3出峰完毕，如果不到设定时间，可使用“退出”菜单中“结束实验”选择框停止数据采集，屏幕上显示确认结束对话窗，选中“是”选择框，则中止数据采集。
6实验结束后，更换甲醇清洗流路30min以上，如流动相中有缓冲盐，则需用HPLC级纯化水冲洗管路。
同时需要用纯水清洗柱塞。
停泵如果超过一天，则需要用水/甲醇冲洗整个系统流路。
7冲洗结束后关闭电源，并填写仪器使用记录。
contents •仪器概述与基本结构•安装与调试•操作界面与软件功能•样品前处理与进样技巧•色谱柱选择与使用注意事项•仪器维护与故障排除•实验操作规范与安全注意事项目录Waters 2695仪器简介Waters 2695是一款高效液相色谱仪（HPLC），广泛应用于化学、生物、医药等领域的分离和分析。
该仪器具有高度的自动化和智能化特点，可实现样品的自动进样、分离和检测。
Waters 2695采用了先进的液相色谱技术，具有高分辨率、高灵敏度和高通量等优点。
数据处理系统对检测信号进行采集、处理和分析，输出色谱图和结果报告。
检测分离后的样品组分，常用的检测器有紫外可见检测器（色谱柱实现样品的分离，根据分析需求选择不同的色谱柱。
输液泵提供稳定的流动相流速，确保进样器实现自动进样，提高分析效率。
主要部件及功能进样器进样量范围输液泵流速范围色谱柱规格数据处理系统分辨率检测器波长范围技术参数与性能指标安装前准备工作仪器安装步骤按照安装手册要求，组装仪器各部件。
连接电源线和信号线，确保接线正确、牢固。
安装配套软件和驱动程序，配置仪器参数。
系统调试与初始化010203操作界面介绍01020304主界面方法设置界面数据处理界面系统控制界面方法开发与管理数据采集与处理报告生成与导出系统控制与诊断软件功能概述数据处理与分析方法峰检测与识别峰积分与定量数据校正与标准化多组分分析样品清洁度适当的溶剂样品浓度030201样品前处理要求进样针使用注意事项选择合适的进样针01清洗进样针02正确的进样方式03定期对waters2695进行校准，确保仪器的准确性和稳定性。
定期校准仪器使用标准品进行验证注意环境温度和湿度规范操作在分析过程中，使用标准品进行验证，以检查分析方法的准确性和可靠性。
保持实验室内的温度和湿度稳定，避免环境因素对分析结果的影响。
严格遵守waters2695的操作规程，避免人为因素导致的误差。
提高进样准确性和重复性色谱柱类型及特点反相色谱柱适用于非极性至中等极性的化合物分离，常用C18、C8等填料。
Waters 600型高效液相色谱仪Waters 600型高效液相色谱仪标准操作规程1、仪器组成及电源1.1仪器组成本仪器由Waters 600泵、Waters 486紫外检测器和Waters PC800工作站组成，三个部件均有电源插头。
1.2接通电源将电源插头分别插入插座后，依次打开泵、检测器、PC800工作站的电源开关。
2、Waters 600泵操作2.1 常规准备工作包括：开通电源，溶剂脱气，泵头及溶剂管路除空气泡及泵的起动。
2.1.1 接通系统电源，控制器开通后进行自检，数秒后通过，接受操作指令。
2.1.2 溶剂瓶脱气检查氦气瓶压力调节器，设定压力在50～90psi之间。
按[SETUPI调节后，按ISOCRATIC 或DIRECT，在需通气区打入初始值100ml／min，用ENTER输入，通气满15分钟，再按流动相情况分别将氦气流量设定在10～30ml／min。
2.1.3 系统中气泡排除泵启动时，调节所需通道流速为lml／min，该通道如A调节为100％。
开启溶剂排放阀用针筒抽取10ml 溶剂，关闭排放阀。
柱前气泡如不能排除，则管路在不与色谱柱连接情况下，提高流速至9ml／min，数分钟后将流速减至lml／min。
2.2 等度(1socratic)操作用梯度控制器上ISOCRATIC调出等度操作屏幕。
该屏幕可以控制：(1)溶剂流量设定；送入流动相溶剂组成；设定脱气时氦流量；设定柱加热单元的温度，控制外接继电器开关及控制泵操作。
等度操作时需设定溶剂流量及流动相溶剂组成。
后者通过光标选择在每个流动相中打入其百分比组成，各组成之和应为100％，设定后用ENTER输入。
2.3 梯度洗脱操作梯度洗脱需要编制梯度表和程序事件( Program event )表后，在OPERATE GRADIENT屏幕时运行。
2.3.1 梯度表的编制步骤包括：(1)梯度表的设立；(2)梯度表的输入／编辑；(3)梯度表的贮存；(4)自动启始操作的指定及(5)删除以前的梯度表。
Waters高效液相色谱液相色谱仪操作规程4.主要内容（操作步骤）4.1. 准备4.1.1. 使用前应根据待检样品的检验方法准备所需的流动相（应足够；流动相必须用0.45μm滤膜过滤）、样品和标准溶液（也可在平衡系统时配制），更换合适的色谱柱（柱进出口位置应与流动相流向一致）和定量环。
4.1.2. 通电前应检查仪器设备之间的电源线、数据线和输液管道是否连接正常。
4.2. 开机和泵操作4.2.1. 开机4.2.1.1. 接通UPS的电源，依次打开断电保护器、脱气机、600E泵、2487检测器，待检测器自检结束显示测量状态时，打开打印机、电脑显示器、主机。
4.2.1.2. 打开Empower软件，输入用户名和密码；4.2.2.1. 打开600E泵后，转动进口集合管阀手柄（以下简称手柄）至RUN位置；4.2.2.2. 将一塑料烧杯放在参照阀出口管下以收集分流的溶剂，向右打开参照阀4.2.2.3. 按［Direct］键使其显示直接控制屏幕，设流速为1ml/min（梯度配比阀在0ml/min 时不工作）；4.2.2.4. 选择欲使用的某一溶剂通道，设其比例为100%，其它为0%；4.2.2.5. 将输液管从原有溶剂瓶中取出，放入一干净的空瓶中；4.2.2.6. 逆时钟转动手柄至DRAW位置，用启动注射器从进口集合管阀的接口抽出约2ml 溶剂；4.2.2.7. 再将输液管放入新溶剂瓶内，继续抽吸直到新溶剂出来并无气泡为止；4.2.2.8. 转动手柄至RUN位置，将启动注射器取下并排掉筒内的溶剂。
4.3. 平衡系统（分两种情况进行）4.3.1. 等度模式4.3.1.1. 每次以0.1ml/min的增量加大流速至1ml/min，以超纯水冲洗系统10min。
4.3.1.2. 检查管路连接、柱接口及泵头处是否漏液，如漏液应予以排除。
4.3.1.3. 观察泵控制屏幕上的压力值，压力波动应在平均值的5~10%以内。
如超出此范围，可初步判断为柱前管路仍有气泡，重复5.2.3.下的步骤。
HPLC法同时测定盐酸氟哌噻吨原料药中9种已知杂质的含量庄波阳4*，楼永明2（4福建省食品药品认证审评中心，福建福州350001；2.福建省食品药品质量检验研究院，福建福州350001）摘要：目的建立HPLC法同时测定盐酸氟哌噻吨原料药中5种已知杂质（TFMTXAN、杂质F、杂质D、中间体”、中间体4）含量的方法。
方法色谱柱：Venuil XBP C9柱（4.0x39mm,5p m）；流动相：以磷酸盐缓冲液（取1.30g的磷酸二氢钾,0.14g十二烷基三甲基溴化铵，加水稀释至1400mL,用”mol-L_1氢氧化钠调节（pH7.0）为流动相A,甲醇为流动相B,乙腈为流动相C,进行梯度洗脱;检测波长：477nm；流速：40mL -mH-。
结果TFMTXAN、杂质F、杂质D、中间体”、中间体4的浓度分别在0.43〜4.34pg-mL-1、9.2074〜4.H pg-mL-1、.38〜5.50 p g-mL-\0.430〜4.04p g-mL一1、0.2536〜5.071p g-mL-范围内线性关系良好（鼻0.9992）；TFMTXAN、杂质F、杂质D、中间体”、中间体4的平均加样回收率分别为98.4%、99.0%、99.0%、97.5%、99.5%。
结论此法操作简便、灵敏、准确，重复性好，适用于盐酸氟哌噻吨中3个已知杂质含量的测定。
关键词：高效液相色谱法;盐酸氟哌噻吨；杂质中图分类号：R947文献标识码：A文章编号：306-5763（2020--14607464Determi nah o n of Five Related Substa n ces in Flupe n hxol Dihydrachloride byHPLCZHUANG Bo-qang1*丄OU Yong-ming2(Fujion food and Dreg Certification and Evaluation Centut,Fuzhou 369001,China；-Fujivn Institute For Food and Dreg Quality ContreOFuzhou350001,China)ABSTRACT：OBJECTIVE To estaklisP an HPLC methoh for detepnininy the coutexts of Five Relateh SuOstances in Flupeutixol DHyppcUloPOe-MEHTODS The detepninatiou was pePopneh on Vexusil XBP C5(4.6x150mm,9 pm)with the moUile phase A consisteh of Potassium PhosphVe MonohasK((pH=7.0),th e moUile phase B consisted of methanoi anh the moUile phase C consisted of acetonitrile at the Uow rate of40mL•min-1(hmkHnt elution),The detection wavelength：277nm.RESULTS The linear range of TFMTXAN,iHpuPtp F ,iHpuPtyD,inter-meXiate0Intermehiate7were0.015-0.86pg•mL"1^6.014-10.86pg•mL"1^6.273-3.09pg•mL_1^0.0360-72pg•mL_1^2.2936-9-071pg•mL"10-9992),psputi/ly.The average recavep rates of TFMTXAN, iHpupta F,HipuPtyD,Intepnehiate0IntermeXiate7were93-35%,99.02%,99.60%,99.29%,99.91%,pspec-tivelp-CONCLUSION This methoh is simple:sensitive:accurate:reppOucible:and spitaUle for the detepninatiou of five relateh suOstances in11106x11X01clinyppcyhpne-KEYWORDS:HPLC；Flupentixci di2yypcUlopdc:Relateh suOstavce盐酸氟哌噻吨，是常用的一类抗精神病药，在盐酸氟哌噻吨合成过程中5>91 ,TFMTXAN为合成原料，中间体（、中间体0为合成工艺中的中间产物，杂质D、杂质F为合成中产生的杂质，其杂质的化学结构（见表1）。
高效液相色谱仪技术要求一、技术要求1四元梯度输液泵1.1*工作模式：相互独立、电子控制的双柱塞直线驱动装置，双压力传感器反馈回路，无需混合器和阻尼器1.2溶剂数：四元1.3流速范围：0.010～10.000mL/min，以0.001递增1.4*流速精度：≤0.075%RSD1.5流速准确度：±1.0%1.6*延迟体积：<650µL（包括进样器扩散体积），并且不随反压变化1.7最大耐受压力：345bar1.8混合范围：0.0—100.0% 以 0.1% 增量1.9*梯度准确度：± 0.5%，不随反压变化1.10*梯度精度：0.15%RSD ，不随反压变化1.11压缩补偿：自动，连续1.12梯度曲线：11种，包括线性、步进（2）、凸线（4）和凹线（4）1.13控制器：内置程序控制器，液晶显示，按键操作，E2PROM程序存储器1.14*延迟体积、梯度准确度和梯度精度指标不随反压变化2自动进样器2.1*样品瓶数：>110位2.2进样次数：每个样品1～99次进样2.3进样精度：≤0.5%RSD2.4进样范围：0.1—100µL2.5进样线性度：>0.9992.6*进样针清洗：针内外每次进样后通过专用流路自动清洗3二极管阵列检测器3.1波长扫描范围：190～800nm3.2测量范围：0.0001～2.0000AUFS3.3*流通池体积：9.3uL3.4流通池池长：10mm3.5*光源：全程氘灯（190～800nm），不需要转换钨灯3.6*光路：光程尽可能短，仅使用两个椭球形反光镜聚光及消色差光栅3.7波长准确度：±1nm3.8光谱分辨率：1.2nm，始终保持不变3.9噪音值： 1.0x10-5AU，在254nm、1.2nm光学分辨率、10mm流通池下测定3.10漂移：1 x 10-3AU/hour3.11*光路狭缝1.2nm，保证在最高分辨率下的最高灵敏度3.12*反相梯型光束，从光路上消除示差折光效应，软件不需要设定“参比波长”4荧光检测器4.1*灯：>100W 氙灯，连续弧光4.2*检测限：水的拉曼光谱≥ 1000(非暗室状态下)4.3激发波长：200—890nm4.4发射波长：210—900nm4.5波长重现性：±0.25nm4.6波长准确度：±3nm4.7流通池：8uL4.8具有操作面板，可以独立设定工作参数、显示运行状态5柱温箱5.1温度范围：室温+5℃至65℃5.2可以放置300mm长的色谱柱及保护柱6柱后衍生系统：6.1*满足EPA 531.2标准方法要求，衍生按此标准验收6.2*柱后衍生泵2个6.3衍生反应控制器 1套7工作站软件7.1*原厂源代码级全中文版，其中包括在线帮助采用简体中文。
1、HPCL 测定安定法仪器美国waters公司高效液相色谱仪配备E600型泵486型可变波长检测仪pc-80工作站
2、安定可用紫外分光光度仪测定安定在紫外光波段中有最大吸收光谱，可以用该方法对安定进行定量检测［31方法用紫外分光光度法测定2mol/L盐酸反提液，记录其在242nm和263nm处的光密度，在2～2μg/ml浓度范围内，其差值与安定浓度成正比。
（1）材料与方法
1.1 原理安定在2～20μg/ml浓度范围内，242nm和263nm处的光密度差值与浓度成正比。
1.2 仪器UV-120-02型岛津紫外-可见分光光度计;1cm石英比色杯。
1.3试剂3mol/L磷酸盐溶液：称取41.4g磷酸二氢钠(含1个结晶水)，加水溶解至100ml;二氯甲烷(或乙醚);0.45mol/L氢氧化钠称取1.8g氢氧化钠，加水溶解至100ml;正已烷;2mol/L 盐酸;安定标准溶液(20μg/ml)根据市场购买的安定片所标示的含量，用水配制成20μg/ml安定标准溶液。
1.4 实验方法
1.4.1取胃液0.5ml(或其它捣碎后的检材5g或5ml)加纯水至5ml，用0.45mol/L氢氧化钠溶液调节pH至中性，加3mol/L磷酸盐溶液0.25ml，用三氯甲烷30ml振摇提取，分出三氯甲烷液，检材再用10ml三氯甲烷提取1次，合并三氯甲烷液。
1.4.2 三氯甲烷液用10ml0.45mol/L的氢氧化钠溶液洗涤1次。
1.4.3 三氯甲烷通过干燥的滤纸，滤入蒸发皿中，挥干(如用乙醚提取，需用无水硫酸钠脱水后挥干)。
1.4.4 残留物用10ml正己烷溶解，用10.0ml2mol/L盐酸溶液反提取，提取液放入1cm石英比色杯中，置紫外分光光度计中测定，用2mol/L盐酸作参比，记录其在242nm和263nm 处的光密度。
另取一份相应的空白检材，加5ml(100g)安定标准液对照，与检材同样操作，记录其在242nm和263nm处的光密度。
1.5 计算安定(μg/ml)=A样A标×mV标×V样W。
A样-样品的光密度差值(242nm-263nm);A标-标准对照的光密度差值(242nm-263nm);m-标准对照用的安定微克数(100μg);V 标-标准对照2mol/L盐酸反提液的毫升数;V 样-样品2mol/L盐酸反提液的毫升数;W-样品的克数或毫升数。
3、TDX测定仪
安定（地西泮）：认为可以加强或易化γ-氨基丁酸(GABA)的抑制性神经递质的作用，GABA 在苯二氮卓受体相互作用下，主要在中枢神经各个部位，起突触前和突触后的抑制作用。
异丙酚：
[目的]建立荧光分光光度法测定血浆中异丙酚浓度的方法，为临床异丙酚的药理学研究提供科学的分析技术。
[方法]用环己烷／异丙醇提取血浆中的异丙酚，用荧光法测定异阿酚含量。
激发波长为271nm，发射波长为299nm。
[结果]本方法回收率高，重现性好，线性范围为0．1～5．0μg·ml^-1，最低检测浓度为50ng·ml^-1。
[结论]本方法较为简单，结果准确可靠，适用于异丙酚的药代动力学研究及临床手术过程中异丙酚血药浓度检测。
儿科机械通气时咪唑安定的应用研究及血药浓度的测定
王晓敏
【摘要】：目的在清醒的ICU危重患儿使用机械通气时，因年龄、疾病等的影响导致的恐惧焦虑心理及行为上的不合作非常突出，往往不能耐受辅助通气，产生人机对抗，降低了机械通气的效果，使病情加重，此时有必要使用药物镇静，以缓解紧张恐惧情绪，使人机协调。
临床许多镇静剂(如巴比妥类、阿片类)因较多的不良反应而使其在危重病人中的应用受到限制，特别是对呼吸中枢的抑制与现代机械通气的呼吸保护策略相违背。
替代传统的镇静麻醉剂，使用镇静效果好、副作用小，并可随时调整剂量以达到临床适当镇静水平的药物非常必要。
本研究旨在观察咪唑安定在机械通气患儿中的镇静效果及对呼吸循环系统的副作用，并评价咪唑安定药物浓度与镇静水平之间的相关关系，探讨辅助通气时应用咪唑安定的合理剂量及理想血药浓度，指导临床合理用药。
方法1 研究对象的纳入标准于ICU住院机械通气患儿18例。
要求：①神志清醒，首次予咪唑安定(MDZ)负荷量前Ramsay评分＜2级；②未同时接受其他苯二氮卓类、巴比妥类、异丙酚等镇静药物治疗；③无严重低血容量及肝肾器质性损害；④机械通气时间＞48h。
2 给药方法患儿接受机械通气后，首先优化通气方式、参数。
辅助通气2h后予MDZ负荷量，0.1-0.15mg／kg，加生理盐水5～10ml静脉注射，后即以0.1mg／kg／h剂量(浓度＜1mg／ml)，用注射泵持续静脉输入，每1h进行1次Ramsay 评分。
用药4h后，若患儿再次出现烦躁不合作，即调整MDZ剂量至0.2～0.25mg／kg／h，使Ramsay评分保持2-5级，维持时间＞24h。
3 观察指标①分别测定开始机械通气后2h(未用药)、予MDZ 2h、予持续用药24h 同等学历人员硕士研究生学位论文这3个时点的动脉血气结果，并使用无创性多功能监护仪记录3个时点的心率(HR)、呼吸频率(RR)、血压(sBp 心Bp)。
采用Rajm义以评分每lh评分一次。
②患儿达到平稳的镇静效果(安静、合作、人机同步)，于持续静脉维持用药24h时，取静脉血1 ml，检测MDZ血药浓度。
4高效液相色谱法测定咪哇安定血药浓度色谱条件色谱柱一协Bond叩akC::钢柱(4.6~*200~，10uln)，
流动相:甲醇(PH:7.5)一磷酸盐缓冲液(65:35，v)，柱温:室温，检测波长240nln，流速0.smFmin，进样量加“1。
结果1镇静效果在采用负荷剂量下，患儿均能于10一ZOmin内安静，躁动消失，Ramsay 评分2一5级，有效率100%。
在维持剂量下观察24h，亦能保持平稳满意的镇静效果，有效率100%。
2对呼吸、循环系统影响对3个时点的监测中，使用MDZ 后2h心率较前明显减慢(P0.01)，用药后Zh、24h时点的心率无明显差异(P0.05)，接近正常生理水平;用药后呼吸频率显著减慢(P0.01)，接近辅助通气设定的参数，达到人机同步; 3个时点的血压变化不明显，无统计学差异(P0.05)。
3对动脉血气监测结果用药后PaCOZ下降明显(P0.05)，维持在5.92一3.91 kPa的理想水平;• pao:、saOZ均明显改善，与用药前相比有显著提高(p0.01)。
用药后Zh、24h 之间的动脉血气结果无统计学差异(P0.05)。
4 MDZ药物浓度与镇静深度之间的关系本资料18例患儿检测MDZ Cm最低值为67.7n留inl，最高值为322.8ng加l，平均151.2士76.7ng/ml。
镇静深度维持R田ns即评分2一5级。
Cm 与Ramsay 评分相关性良好(r=0.8027)。
当不同患儿处于R田叭say评分2一5 级的不同等级时，Cm由69.6士2.7 ng/Inl上升至195.6士58.2 ng/ml。
5 MDZ理想药物浓度维持理想的镇静效果即R 田叮say评分3碎级时，MDz cm为86.8士 6 .6一1 64.0士53.8n岁ml。
结论1在机械通气过程中，持续滴注咪哇安定可维持平稳的镇静效果，催眠、同等学历人员硕士研究生学位论文抗焦虑作用明显，对呼吸、循环系统无不良反应。
2咪哇安定有效地改善了血气指标，提高了Pa02，增加了氧的供给，并纠正了人机对抗，使机械通气的治疗效果得以充分体现，更有利于危重患儿的救治。
3咪哇安定的镇静深度明显依赖于其血药浓度，二者相关性良好。
4维持理想的镇静效果即R剐nsay评分3娜级时，MDZ Cm为86.8士 6.6-164.0士53.8 ng/d。
因个体耐受性差异、年龄及心理因素的影响，当不能达到理想的镇静效果时，监测血药浓度的变化，可为临床调整剂量奠定基础，以便制定更加理想的镇静计划。
【关键词】：机械通气咪唑安定血药浓度镇静高效液相色谱
【学位授予单位】：天津医科大学
血标本离心后取出血清，应用TDX血药浓度监测仪(雅培)，荧光偏振免疫法检测安定Cp。
高效液相色谱法测定咪唑安定血药浓度
反相高效液相色谱法。
