仪器分析高效液相色谱PPT课件

广义地讲，除柱色谱外，薄层色谱（液—固色谱）和纸色谱（液—液 色谱）也属于LC。
狭义的LC指柱色谱。按分离机理，柱色谱法可分为液—固吸附色谱、 液—液分配色谱、键合相色谱、离子色谱等。
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6.1.1液—固吸附色谱法
液---固吸附色谱是以固体吸附剂作为固定相，吸附剂通常是些多 孔的固体颗粒物质（如硅胶、氧化铝等），在它们的表面存在吸附中 心。液固色谱实质是根据物质在固定相上的吸附作用不同来进行分离 的。 1．分离原理
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液液分配色谱
正相色谱法
1.极性固定相 聚乙二醇、氨基与腈基键合相 2.相对非极性流动相 正已烷、环已烷 3.极性调节剂 乙醇、四氢呋喃、三氯甲烷 4.分离中等极性和极性较强化合物. 酚类、胺类、羰基类及氨基酸类 5.组分流出顺序 极性小先洗出
(3)气相色谱一般都在较高温度下进行的，而高效液相色谱法则经常可 在室温条件下工作。P296
从色谱分析的发展来看，HPLC比GC更为有用、更具发展前途
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3.HPLC的特点
1、样品不必气化 2、分离温度低 3、选择性好 4、样品回收容易 5、分离效果好 塔板数达到104 ~105/m 6、采用高压输液泵，高效微粒固定相和高灵敏度检测器 7、仪器设备费用昂贵，操作严格。
是流动相尽可能不与固定相互溶，而且流动相与固定相的极性差别越 显著越好。
根据所使用的流动相和固定相的极性程度，将其分为正相分配色谱 和反相分配色谱。
如果采用流动相的极性小于固定相的极性，称为正相分配色谱， 它适用于极性化合物的分离。其流出顺序是极性小的先流出，极性大 的后流出。
如果采用流动相的极性大于固定相的极性，称为反相分配色谱，它 适用于非极性化合物的分离，其流出顺序与正相色谱恰好相反。
荧光检测器——10-11g。
经典LC
HPLC
柱之内径
1~5cm
~0.4cm
长度
50~100cm
15~50cm
填充材料粒度 150µm~200µm
4µm~10µm
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
使用压力
1~10atm
50~200atm
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分离时间
0. .5h~天
~10min
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2．高效液相色谱法与气相色谱法
（l）气相色谱法分析对象只限于分析气体和沸点较低的化合物，它们 仅占有机物总数的20％。对于占有机物总数近80％的那些高沸点、热稳定 性差、摩尔质量大的物质，目前主要采用高效液相色谱法进行分离和分析。
1.分离原理
液液分配色谱的分离原理基本与液液萃取相同，都是根据物质在两种互 不相溶的液体中溶解度的不同，具有不同的分配系数。所不同的是液液色谱 的分配是在柱中进行的，使这种分配平衡可反复多次进行，造成各组分的差 速迁移，提高了分离效率，从而能分离各种复杂组分。
2.固定相 为了更好解决固定液在载体上流失问题。产生了化学键合固定相。它是将各种
总之，高效液相色谱法是吸取了气相色谱与经典液相色谱优点，并 用现代化手段加以改进，因此得到迅猛的发展。目前高效液相色谱法已 被广泛应用于分析对生物学和医药上有重大意义的大分子物质，例如蛋 白质、核酸、氨基酸、多糖类、植物色素、高聚物、染料及药物等物质 的分离和分析。
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§6.1 HPLC的主要类型及选择
1．高效液相色谱法与经典液相色谱法
高效液相色谱法比起经典液相色谱法的最大优点在于高速、高效、高 灵敏度、高自动化。
高速：HPLC采用高压输液设备，流速大增加， 例:分离苯的羟基化合物，7个组分只
分析速度极快，只需数分钟；而经典方法靠重 需1min就可完成。对氨基酸分离，用
力加料，完成一次分析需时数小时。
经 典 色 谱 法 ， 柱 长 约 170cm ， 柱 径
高效：填充物颗粒极细且规则，固定相涂渍均 0.9cm，流动相速度为30cm3·h-1，需
匀、传质阻力小，因而柱效很高。可以在数分 用20多小时才能分离出20种氨基酸；
钟内完成数百种物质的分离。
而用高效液相色谱法，只需lh之内即
高灵敏度：检测器灵敏度极高：UV——10-9g, 可完成。
不同有机基团通过化学反应键合到载体表面的一种方法。它代替了固定液的机械涂 渍，因此它的产生对液相色谱法迅速发展起着重大作用，可以认为它的出现是液相 色谱法的一个重大突破。最常用的强极性固定液β,β′---氧二丙睛，中等极性的聚乙 二醇，非极性的角鲨烷等。
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3．流动相 在液液色谱中为了避免固定液的流失，对流动相的一个基本要求
3.流动相
把吸附色谱中流动相称作洗脱剂。在吸附色谱中对极性大的试样往 往采用极性强的洗脱剂；对极性弱的试样宜用极性弱的洗脱剂。洗脱 剂的极性强弱可用溶剂强度参数（ε0）来衡量。ε0越大，表示洗脱剂 的极性越强。
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6.1.2液---液分配色谱法
在液---液色谱中，流动相和固定相都是液体，它能适用于各种样品类型的 分离和分析，无论是极性的和非极性的，水溶性和油溶性的，离子型的和非 离子型的化合物。
当流动相通过固定相（吸附剂）时，吸附剂表面的活性中心就要 吸附流动相分子。同时，当试样分子（X）被流动相带入柱内，只要 它们在固定相有一定程度的保留就要取代数目相当的已被吸附的流动 相溶剂，于是，在固定相表面发生竞争吸附:
X + nSad 达平衡时,有
=
Xad
+
nS
Kad
[Xad][S]n [X][Sad]n
(2)气相色谱采用流动相是惰性气体，它对组分没有亲和力，即不产生 相互作用力，仅起运载作用。而高效液相色谱法中流动相可选用不同极性 的液体，选择余地大，它对组分可产生一定亲和力，并参与固定相对组分 作用的剧烈竞争。因此，流动相对分离起很大作用，相当于增加了一个控 制和改进分离条件的参数，这为选择最佳分离条件提供了极大方便。
其中Kad为吸附平衡常数，值大表示组分在吸附剂上保留强，难于洗 脱。Kad值小,则保留值弱，易于洗脱。试样中各组分据此得以分离。
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2.固定相 液---固吸附色谱所用固定相多是一些吸附活性强弱不等的吸附
剂，如硅胶、氧化铝、聚酸胶等。由于硅胶的优点较多，如线性容 量较高，机械性能好，不溶胀，与大多数试样不发生化学反应等， 因此，以硅胶用得最多。