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Endotoxin Removal Solution Catalog Number E4274Product DescriptionEndotoxins are lipopolysaccharides (LPS), a major component of the Gram-negative bacterial cell wall, and are commonly found as contaminants in plasmid DNA preparations from E. coli. Endotoxins are large, negatively charged molecules that co-purify with DNA on ion exchange and size exclusion columns and in CsCl banding. Endotoxins are extremely potent stimulators of the mammalian immune system and are toxic to primary cells and to animals. The endotoxin toxicity is an obstacle to in vitro and in vivo transfection experiments.Non-ionic detergents, traditionally used for separation of integral membrane proteins,1 can be utilized for removal of endotoxins from DNA solutions by phase separation.2The solubility behavior of a detergent in a dilute, aqueous solution at physiological salt and pH conditions is strongly dependent upon the temperature of the solution. At low temperatures, the detergent forms a clear, micellar solution, but above the cloud point temperature, the micelles form larger, turbid aggregates and ultimately fuse to form a separate phase. The lower phase is detergent-enriched and the detergent-depleted upper phase contains detergent at a concentration slightly above the critical micellar concentration (CMC). Amphiphilic and hydrophobic molecules associated with the micelles of the detergent will aggregate within the detergent-enriched phase, while the soluble, hydrophilic molecules will remain in the detergent-depleted upper phase.Extraction of endotoxin contaminated DNA solutions with the appropriate non-ionic detergent will separate the hydrophilic DNA from the amphiphilic endotoxin. The amphiphilic endotoxin will associate with the lower phase, while the DNA will remain in the upper, detergent-depleted phase.2Reagents and equipment required, but not provided • Water, Molecular Biology Reagent, Catalog Number W4502• E-TOXATE® Water, Catalog Number 2107, or Tris-EDTA (TE) buffer 100×, Catalog NumberT9285• DNA solution (0.5 ml), ~ 1 mg/ml in E-TOXATE®Water or TE buffer• 3 M sodium acetate solution, pH 7.5.• 2-Propanol, Catalog Number I9516, or Ethanol, 190 proof, Catalog Number E7148; 200 proof, CatalogNumber E7023• 70% Ethanol• E-TOXATE®reagents Kits, Catalog Numbers 210A1, 210B1 or 210C1• Ice bucket• Heat block or incubator at 37 °C• Microcentrifuge at room temperature• 1.5 or 2 ml sterile microcentrifuge tubes• Endotoxin-free pipet tips (40-200 µl, 200-1000 µl) Precautions and DisclaimerThis product is for R&D use only, not for drug, household, or other uses. Please consult the Material Safety Data Sheet for information regarding hazards and safe handling practices.StorageStore at room temperature.Note: Removal of endotoxins from DNA preparations can be performed either during the final stage of DNApreparation, or during an earlier stage.Procedures for Endotoxin RemovalDuring the final stage of DNA preparationNote: The procedure described below was performed on plasmid DNA produced in E. coli DH5α cells.• Losses of up to 50% of the DNA are expected. • Use of a DNA concentration above therecommended 1 mg/ml reduces the efficiency ofthe procedure.1. Pipette 500 µl of the DNA solution into a sterilemicrocentrifuge tube.2. Add 50 µl of the 3 M sodium acetate solution to theDNA sample.3. Incubate on ice for 5 minutes.4. Add 100 µl of cold Endotoxin Removal Solution.5. Mix thoroughly and incubate on ice for 10 minutes.The solution should be light blue and clear.6. Incubate the tube at 37 °C for 20 to 30 minutes oruntil the phases separate.7. Spin for 5 minutes at 3000 x g in themicrocentrifuge. The upper phase is colorless and clear, while the lower phase is blue.8. Carefully transfer the upper phase containing theDNA to a clean microcentrifuge tube.9. Repeat steps 4 through 8 twice.10. Add 0.6× volume of 2-propanol. Mix by inversion atroom temperature and centrifuge at 15,000 x g for30 minutes at 4 °C. Alternatively, add2.5× volumes of ethanol. Incubate overnight at –20°C or 20 minutes at –70 °C and centrifuge at15,000 x g for 30 minutes at 4 °C.11. Carefully remove the supernatant12. Wash the DNA pellet twice with cold 70% ethanol.Remove the supernatant.13. Air-dry the pellet.14. Suspend the DNA in 100 µl of endotoxin free wateror TE buffer.15. Determine DNA concentration and endotoxin levelsusing endotoxin assay reagents and compare tothe starting material. During an earlier stage of DNA preparationThis procedure is based on the alkaline lysis of E. coli DH5α cells.3 The endotoxins are removed immediately after alkaline cell lysis, neutralization, and a clarification step. The resulting high salt solution is suitable for the endotoxin removal step. It is performed under “endotoxin free” conditions. The plasticware used is either sterile and disposable, or NaOH-treated. The buffers are prepared with endotoxin free water.1. Add the Endotoxin Removal Solution (0.2× volume)to the cold, crude DNA solution.2. Incubate on ice and mix occasionally by inversionto obtain a homogenous, clear blue solution3. Incubate at 37 °C for 20 to 30 minutes until thephase separation is obvious.4. Spin for 5 minutes at low speed (3000 x g) at roomtemperature.5. Transfer the upper aqueous phase to an endotoxinfree container.6. Proceed with the DNA purification by any method.Use endotoxin-free buffers and containers. References1. Bordier, C., J. Biol. Chem., 256, 1604-1607, (1981).2. Cotten, M. et al., Gene Therapy, 1, 239-246,(1994).3. Sambrook et al., Molecular Cloning, a LaboratoryManual, 2nd Ed. p. 1.38RK,PHC 09/05-1Sigma brand products are sold through Sigma-Aldrich, Inc.Sigma-Aldrich, Inc. warrants that its products conform to the information contained in this and other Sigma-Aldrich publications. Purchaser must determine the suitability of the product(s) for their particular use. Additional terms and conditions may apply. Please see reverse side ofthe invoice or packing slip.。
呕吐毒素行业检测标准
呕吐毒素是一种有毒物质，主要存在于谷物、豆类等食品中。
其行业检测标准主要是为了确保食品安全，防止对人体健康的影响。
以下是一些可能的检测标准：
1.检测方法：常用的检测方法包括高效液相色谱法、气相色谱法、液相质谱联用技术等。
2.检测限：检测限是指在一定的实验条件下，能够被准确检测出的最低浓度。
呕吐毒素的检测限通常为0.1ppb。
3.检测范围：呕吐毒素的检测范围应覆盖所有可能含有该毒素的食品。
4.检测结果的判定：如果检测结果超过了规定的安全限值，那么食品就被认为是含有呕吐毒素的，不能被食用。
5.样品的保存和处理：在进行检测之前，样品需要被正确地保存和处理，以避免呕吐毒素的降解或挥发。
6.设备和人员的资质：进行呕吐毒素检测的设备和人员必须具备相应的资质，以保证检测结果的准确性。
7.定期的质量控制：为了保证检测结果的准确性，应定期进行质量控制，包括设备的校准、人员的培训等。
以上是呕吐毒素行业检测标准的一些基本内容，具体的标准可能会根据不同的国家和地区，以及食品安全标准的要求有所不同。
（本试剂盒仅供体外研究使用，不用于临床诊断！）QuicKey-人C反应蛋白(CRP)酶联免疫吸附测定试剂盒使用说明书QuicKey Human CRP( C-Reactive Protein) ELISA Kit产品货号：E-TSEL-H000796T/48T/24T使用前请仔细阅读说明书。
如果有任何问题，请通过以下方式联系我们：销售部电话************，************技术部电话************QQ客服800110755具体保质期请见试剂盒外包装标签。
联系时请提供产品批号(见试剂盒标签)，以便我们更高效地为您服务。
QuicKey系列与传统ELISA试剂盒相比，在实验时间节省至少1小时的同时，获得更加灵敏和精确的实验结果。
Elabscience 自主开发的新技术，旨在帮助客户以更为高效的方式进行科学研究。
用途该试剂盒用于体外定量检测人血清、血浆中CRP 浓度。
其它相关生物液体请咨询技术支持。
灵敏度、检测范围、特异性和重复性●灵敏度：0.23ng/mL。
●检测范围：0.39-25ng/mL。
●特异性：可检测样本中的人CRP ,且与其它类似物无明显交叉反应。
●重复性：板内，板间变异系数均<10%。
背景介绍C-反应蛋白(CRP)是动物演化史中古老又高度保守的“pentraxin”蛋白家族的一员，该蛋白家族还包括所有淀粉样蛋白沉积的组成部分：血清淀粉样蛋白P组分(SAP)。
在人类和其他动物物种中，CRP是一种主要的急性期血浆蛋白，在感染或组织损伤时，其血清浓度迅速并显著升高。
CRP主要用作炎症指标。
除了肝功能衰竭，很少有已知的因素影响CRP的产生。
干扰素α抑制肝细胞中CRP的产生，这可以解释为何在病毒感染中发现的CRP相对于细菌感染中的水平相对较低。
测量和记录CRP的值在确定疾病进展或治疗效果过程中是非常有价值的。
ELISA、免疫比浊、浊度测定、免疫快速扩散、视觉凝集等都是CRP的检测方法。
呕吐毒素快速检测试纸条使用说明书【产品简介】脱氧雪腐镰刀菌烯醇（deoxynivalenol）又称呕吐毒素（Vomitoxin），本产品为呕吐毒素胶体金快速检测卡，用于定性检测谷物样品中呕吐残留，整个检测过程只需要5分钟，检测卡灵敏度为250ng/ml（2 50ppb）。
谷物样品的检测限为1μg/ml（1ppm）。
【检测原理】基于竞争法胶体金免疫层析技术，检测液中如果含有呕吐毒素，其浓度又高于检测试纸的灵敏度，则会与试纸卡上的抗体结合形成复合物，使应该在试纸上出现的红色T线不显色，结果判为阳性。
反之为阴性。
【适用范围】快速筛查粮食或饲料中呕吐毒素是否超标以及食物中毒发生后快速筛查中毒因子是否为呕吐毒素。
【包装组成】●呕吐毒素胶体金法检测卡（40份）●一次性塑料滴管（40支）●塑料一次性手套（5只）●使用说明书（1份）【样品处理】1.取5g以上有代表性的粉碎后的谷物样品（过20目筛），准确称取0.5g均匀粉碎试样，加入到配套的15 ml离心管中。
2．向离心管中准确加入纯净水和乙酸乙酯各2mL，将瓶塞盖紧密封，用力振荡5分钟，4000rpm离心1分钟（备注：如实验室没有大离心机设备，可以用小离心管取1.5ml上清液，用小离心机离心）。
3．用吸管取0.6mL上清液到小玻璃杯中，吹干滤液，然后用0.3ml体积稀释液复溶杯底固体。
此溶解液即为检测液.4．取出试纸，开封后平放在桌面，用滴管向试纸孔缓慢而准确地逐滴加入3滴检测液。
5．5~10分钟判断结果，半小时后的结果判读无效。
【结果判断】阴性（－）：C、T线均显色。
表示样品中不含有待检测物质或其浓度低于检测限。
阳性（＋）：检测T线不显色，则表示样品中待检测物质浓度高于检测限。
无效：质控C线未显色，表明操作过程不正确或试纸条已失效。
【贮存条件及有效期】2-30℃，密封干燥，检测卡保存时间18个月，乙酸乙酯为易挥发性有机溶剂，保存为12个月。
真菌毒素胶体金检测试纸基于抗原抗体的免疫原理，利用纳米胶体金层析技术，在真菌毒素的现场检测时具有以下优势：1) 单个样品即可检测，无需仪器设备，特别适合现场检测；2) 灵敏度高: 免疫层析法可检出量可达ng级，ELISA法最低检出量可达pg级，并可定量测定。
AgraQuant® 呕吐毒素检测试剂盒0.25/5.0产品编号:COKAQ4000/COKAQ4048ROMER国际贸易（北京）有限公司电话: 010-8571 1914传真:010-8571 1944网站:如果您需要更多信息，请联系：ROMER国际贸易（北京）有限公司技术市场部北京市朝阳区东四环中路41号嘉泰国际大厦1413-1416 邮编: 100025电话：+86 10 85711914传真：+86 10 85711944官方网站: Email: officechina@AgraQuant®呕吐毒素检测试剂盒0.25/5.0©2014 by Romer Labs Singapore Pte Ltd.PI_COKAQ4000/COKAQ4048_IHU_CN_v04Page 3 of 11操作简介:吸取200 µL 酶联偶合物至稀释孔加入100 µL 标准品或样品提取液至稀释孔充分混合后移取100 µL至有抗体包被的微孔里，室温下放置15分钟用去离子水或蒸馏水完成5次清洗拍干微孔板吸取100 µL 底物至每个微孔中，室温下放置5分钟吸取100 µL终止液至每个微孔板用酶标仪在450nm滤镜及示差滤镜630nm下读取结果©2014 by Romer Labs Singapore Pte Ltd.PI_COKAQ4000/COKAQ4048_IHU_CN_v04Page 4 of 11样品制备 /萃取1.获取具有代表性的样品，使用Romer 系列II 型研磨机研磨，使至少95%的研磨样品能够通过20目筛网，彻底混合并对样品进行二次取样。
2. 称取20g 研磨样品于干净并可密封的广口瓶中。
3.加入100mL 蒸馏水并密封广口瓶。
注意：样品与提取溶液比例应为1：5（w:v ）。
4. 振荡或均质3分钟。
5. 静置样品，用Whatman #1滤纸过滤提取上清液，收集滤液。
国标饲料中呕吐毒素的测定解释说明1. 引言1.1 概述本文旨在对国标饲料中呕吐毒素的测定方法进行解释和说明。
呕吐毒素是一类在饲料中常见的有害物质，对饲料以及食用动物的健康具有严重影响。
因此，准确测定饲料中呕吐毒素的含量非常重要，可以帮助农业生产者采取相应措施保障畜禽养殖的健康与安全。
1.2 文章结构本文分为五个主要部分：引言、饲料中呕吐毒素的测定、测定结果解读和分析、实验室内呕吐毒素测定步骤和注意事项介绍、结论与未来展望。
在引言部分，我们将提供背景信息和文章结构，并明确本文的目的。
1.3 目的本文旨在解释和说明国标所规定的饲料中呕吐毒素的测定方法。
首先，我们将介绍呕吐毒素的定义、特点以及其对于饲料和动物健康可能造成的影响。
其次，我们将详细介绍不同的呕吐毒素测定方法，并讨论其优缺点和适用范围。
接着，我们将解释常见呕吐毒素测试指标与标准之间的关系，并探讨测定结果与质量控制的相关性。
最后，我们将介绍在实验室内进行呕吐毒素测定的步骤和注意事项。
通过本文的阐述，读者可以全面了解国标规定的饲料中呕吐毒素的测定方法，并对结果进行正确解读和分析。
以上是对“1. 引言”部分内容的详细清晰撰写。
2. 饲料中呕吐毒素的测定2.1 呕吐毒素的定义和特点呕吐毒素是一类由细菌或真菌产生的有害化合物，可以存在于不合格或受污染的饲料中。
呕吐毒素具有强烈的毒性，能够对动物的消化系统造成损害，并导致呕吐、腹泻等严重症状。
其化学结构多样，常见的包括玉米赤霉烯酮、黄曲霉素等。
因此，准确测定饲料中呕吐毒素含量对于保证动物健康和饲养业发展至关重要。
2.2 呕吐毒素对饲料及动物健康的影响在饲料中存在过高的呕吐毒素含量会导致多种问题。
首先，它会直接危害动物消化系统，引起胃肠道疾病如胃溃疡、肠道出血等症状。
其次，高水平的呕吐毒素摄入还会降低动物对营养物质的利用效率，从而影响生长发育和繁殖能力。
此外，呕吐毒素还可能对动物的免疫系统和抗氧化能力造成损害，增加感染和疾病的风险。
ELISA kit for quantitative detection of deoxynivalenol一、概要呕吐毒素(V omitoxin)，是一种单端孢霉烯族毒素，主要由禾谷镰刀菌和粉红镰刀菌产生，化学名称为脱氧腐镰刀菌烯醇(deoxynivalenol，DON)，容易存在于各种谷物类粮食及加工产品中，污染水平一般为mg/kg（ppm）级。
DON具有很强的细胞毒性。
人误食DON含量高的食物后，容易导致急性中毒头昏、腹胀、恶心、呕吐，以及白细胞缺乏症。
目前通常应用酶联免疫吸附测定法（ELISA）对谷物（小米、玉米、大麦等）及其制品（蛋糕、饼干、面包等）中的DON含量进行快速、定量检测。
二、原理本试剂盒是利用间接酶联免疫吸附微孔模式进行检测，灵敏度可达12.5 µg/kg（ppb）。
样品或标准品中游离的呕吐毒素与包被在微孔中的抗原竞争结合游离单克隆抗体上的结合位点，形成抗原抗体结合物，经洗板洗去多余的抗体与呕吐毒素后，加入酶标记的二抗与单克隆抗体结合，经再次洗板后加入显色剂与反应底物，其与酶标物作用而成蓝色，加入反应停止液后颜色由蓝色转变为黄色，黄色越深则表明呕吐毒素越少，用酶标仪在450 nm处测定光吸收值可准确定量检测样品中的呕吐毒素污染水平。
三、试剂盒构成1、反应板支架…………………………………………………………………………1块2、呕吐毒素抗原包被反应板………………………………………………………….36孔3、呕吐毒素标准品溶液（0 ppb，12.5 ppb，25 ppb，50 ppb，100 ppb，200 ppb）…1套4、呕吐毒素单克隆抗体………………………………………………………1瓶5、稀释液……………………………………………………………………1瓶6、酶标二抗溶液………………………………………………………………1瓶7、显色剂溶液………………………………………………………………………1瓶8、反应底物溶液………………………………………………………………1瓶9、终止液………………………………………………………………………………1瓶10、浓缩洗涤液（20 X）………………………………………………………1瓶四、注意事项1、试剂盒请置放于2-8℃条件下保存，使用过程中不要让微孔干燥，使用后立即将试剂放回至2-8℃条件下冷藏。
ROMER 国际贸易北京有限公司编号：COKAQ4000_N O V 09呕吐毒素是B 型单端孢霉烯族化合物，由镰刀菌产生，特别是Fusarium graminearum. 这种霉菌毒素主要产生在谷物中，例如小麦，大麦，燕麦，黑麦和玉米中。
呕吐毒素具有非常高的毒性，1ppm 以上对猪有潜在的危害。
由受呕吐毒素污染的小麦做成的宠物食品具有急性毒性。
呕吐毒素是一种免疫抑制剂，可以引起肾的疾病。
当人类食用了受呕吐毒素污染的谷物后也同样会产生呕吐症状。
美国食品药品监督管理局(FDA)对呕吐毒素限量的法案规定如下： （1）人类食用的成品小麦产品：1ppm ； （2）猪和其他动物饲料中原料的谷物及谷类副产品：5ppm ； 猪饲料：1ppm ； 其他动物饲料：2ppm ； （3）食用牛、4个月以上的饲育牛及肉鸡的饲料原料中的谷物及谷类副产品：10ppm ；食用牛、4个月以上的饲育牛及肉鸡的饲料：5ppm 。
AgraQuant ®呕吐毒素检测试剂盒应用固相直接竞争酶联免疫吸附原理，用去离子水或蒸馏水从研磨样品中提取呕吐毒素。
样品提取液或呕吐毒素标准品与酶-呕吐毒素偶合物混匀后加入到抗体包被的微孔中，样品中的呕吐毒素或呕吐毒素标准品与酶-呕吐毒素偶合物中的呕吐毒素竞争结合微孔中的特异抗体。
经过洗板去除未参加抗原-抗体反应的的呕吐毒素，当酶的底物被加入到微孔中，颜色变为蓝色，且颜色深浅与样品中或标准品中呕吐毒素含量成反比。
加入反应终止液终止反应后，反应液颜色应由蓝色转为黄色。
在450nm(OD450)滤镜及630 nm 示差滤镜下使用酶标仪对微孔板进行吸光度值测量。
利用标准品的吸光度值对标准品浓度制作标准曲线，将样品的吸光度值与标准品的吸光度值进行比较以进行结果的判读。
AgraQuant ® 呕吐毒素检测试剂盒操作方法0.25/5 ppmDeoxynivalenol （Vomixin ）呕吐毒素 Assay Principles 检测原理1.试剂盒在不使用时，需放置在2-8℃(35-46℉)保存，并确保在有效期之前使用。
专利名称：呕吐毒素检测胶体金速测卡和试剂盒以及对呕吐毒素进行检测的方法
专利类型：发明专利
发明人：蔡军,欧静堃,李慧,何景,傅洋,罗荣,陈飞
申请号：CN201611204029.7
申请日：20161223
公开号：CN108241061A
公开日：
20180703
专利内容由知识产权出版社提供
摘要：本发明涉及生物检测领域，公开了呕吐毒素检测胶体金速测卡和试剂盒以及对呕吐毒素进行检测的方法，具体的，公开了用于呕吐毒素检测的胶体金速测卡，该胶体金速测卡包括依次排列在底板上的加样区、结合物区、观测区和吸水区；还公开了对呕吐毒素进行检测的方法，所述方法包括：对待测样品进行前处理，得到呕吐毒素提取物，并使用所述胶体金速测卡对所述呕吐毒素提取物进行检测以及结果分析。
同时公开了一种检测呕吐毒素用试剂盒，其特征在于，该试剂盒包括所述胶体金速测卡、装有纯净水的小瓶。
本发明的胶体金速测卡，能够快速有效的提高检测的灵敏度、特异性和精准度。
申请人：中粮集团有限公司,中粮营养健康研究院有限公司
地址：100020 北京市朝阳区朝阳门南大街8号中粮福临门大厦
国籍：CN
代理机构：北京润平知识产权代理有限公司
更多信息请下载全文后查看。
ROMER 国际贸易北京有限公司编号：COKAQ4000_N O V 09呕吐毒素是B 型单端孢霉烯族化合物，由镰刀菌产生，特别是Fusarium graminearum. 这种霉菌毒素主要产生在谷物中，例如小麦，大麦，燕麦，黑麦和玉米中。
呕吐毒素具有非常高的毒性，1ppm 以上对猪有潜在的危害。
由受呕吐毒素污染的小麦做成的宠物食品具有急性毒性。
呕吐毒素是一种免疫抑制剂，可以引起肾的疾病。
当人类食用了受呕吐毒素污染的谷物后也同样会产生呕吐症状。
美国食品药品监督管理局(FDA)对呕吐毒素限量的法案规定如下： （1）人类食用的成品小麦产品：1ppm ； （2）猪和其他动物饲料中原料的谷物及谷类副产品：5ppm ； 猪饲料：1ppm ； 其他动物饲料：2ppm ； （3）食用牛、4个月以上的饲育牛及肉鸡的饲料原料中的谷物及谷类副产品：10ppm ；食用牛、4个月以上的饲育牛及肉鸡的饲料：5ppm 。
AgraQuant ®呕吐毒素检测试剂盒应用固相直接竞争酶联免疫吸附原理，用去离子水或蒸馏水从研磨样品中提取呕吐毒素。
样品提取液或呕吐毒素标准品与酶-呕吐毒素偶合物混匀后加入到抗体包被的微孔中，样品中的呕吐毒素或呕吐毒素标准品与酶-呕吐毒素偶合物中的呕吐毒素竞争结合微孔中的特异抗体。
经过洗板去除未参加抗原-抗体反应的的呕吐毒素，当酶的底物被加入到微孔中，颜色变为蓝色，且颜色深浅与样品中或标准品中呕吐毒素含量成反比。
加入反应终止液终止反应后，反应液颜色应由蓝色转为黄色。
在450nm(OD450)滤镜及630 nm 示差滤镜下使用酶标仪对微孔板进行吸光度值测量。
利用标准品的吸光度值对标准品浓度制作标准曲线，将样品的吸光度值与标准品的吸光度值进行比较以进行结果的判读。
AgraQuant ® 呕吐毒素检测试剂盒操作方法0.25/5 ppmDeoxynivalenol （Vomixin ）呕吐毒素 Assay Principles 检测原理1.试剂盒在不使用时，需放置在2-8℃(35-46℉)保存，并确保在有效期之前使用。
2.严格遵守操作说明书中指示的操作时间，否则将导致不精确的实验结果。
3.反应终止液中含酸，避免直接接触皮肤及眼睛。
若不小心溅到，应及时用水冲洗。
4.对每一个样品均需使用干净的移液枪吸头及玻璃器皿以避免产生交叉污染。
样品或标准品中均可能含有毒素污染，在实验中应当自始至终穿戴橡胶手套、安全眼镜及实验外套。
5.检测完后需对所有材料、容器及设备作适当处理。
将浓缩洗液瓶（W ash Solution Concentrate）中全部液体转移至500mL的塑料瓶中，加入475mL的蒸馏水/去离子水，混合均匀。
样品的准备/萃取1．获取具有代表性的样品，使用Romer 系列II型研磨机研磨，使至少75%的研磨样品能够通过20目筛网，彻底混合并对样品进行二次取样。
2．称取20g 研磨样品于干净并可密封的广口瓶中。
3．加入100mL蒸馏水或去离子水萃取溶液并密封广口瓶。
注意：样品与萃取溶液比例应为1：5（w:v）。
4．振荡或均质混合3分钟。
5．静置样品，用W hatman #1滤纸过滤萃取上清液，收集待检滤液。
注意：应保证样品萃取液的pH值为6-8。
pH值过高或过低均会影响检测结果，应在检测前用NaOH或HCl对样品萃取过滤液予以调整。
6．用去离子水或蒸馏水稀释样品萃取液1:4。
例如：加入1mL萃取液到3mL去离子水或蒸馏水中。
待检。
备注：也可称取20g研磨样品到适当的容器内，加入400mL蒸馏水或去离子水, 振荡或均质混合3分钟，用Whatman #1滤纸过滤萃取上清液,收集滤液待检,无需进一步稀释。
检测步骤：注意：在使用前，所有试剂及试剂盒内的材料必须恢复至室温18-30℃ (64-86℉)。
建议若使用8道移液枪进行操作，在一次试验中样品及标准品的总量不超过48个(6个检测条); 建议若使用单道移液枪进行操作，在任何一次实验中样品及标准品的总量不要超过16个（2个检测条）。
1．将适量的标记颜色的稀释孔条放入微孔板架上，稀释条孔的数目需使每个标准品（0, 0.25,1.0,2.0 & 5.0ppm）或样品能够对应一个稀释孔。
2．将等量的有抗体包被的微孔条放入微孔板架上，未使用的有抗体包被的微孔条需放回装有干燥剂的原铝箔袋内并密封保存。
3．按照240 µL/孔或2 mL/条的体积计算所需的酶联偶合物用量。
从绿色瓶盖的瓶中量取所需用量的酶联偶合物至一个酶联偶合物试剂槽中（如多道移液器所用的试剂槽）。
使用8道移液枪移取200µL酶联偶合物至每个蓝色的稀释孔中。
ROMER国际贸易北京有限公司4．使用单道移液枪，移取100µL标准品和样品至已装有200µL酶联偶合物的稀释孔中。
每当移取一个标准品或样品时，单道移液枪必需更换上新吸头。
注意确保最后将吸头中的液体排空。
使用换有全新吸头的8道移液枪，反复吸送三至五次，对孔中液体进行充分混合后，快速移取每个稀释孔中的液体各100µL至相应的有抗体包被的微孔中。
室温下放置15分钟。
注意不要摇动微孔板，以免引起孔与孔之间的污染。
5．将孔中的液体甩入水槽中，用清洗溶液冲洗每个孔，然后将微孔中的水甩入水槽中。
如此方式反复冲洗5次。
注意在冲洗过程中不要将微孔条从微孔板架上取下，每条微孔条带应被固定在微孔板架上。
6．冲洗完毕后，将几张吸水纸巾放置在平整的桌面上，使微孔板倒置扣击纸面，以尽可能地将残留的水分排出。
用干布或纸巾擦干微孔板底反面的水珠。
7．按照120 µL/孔或1 mL/条的体积计算所需的底物用量。
从蓝色瓶盖的瓶内，量取所需用量的底物至一个底物试剂槽中（例如适用于8道移液枪的试剂槽中），使用8道移液枪移取100µL底物至每个微孔中，室温下放置5分钟。
8．按照120 µL/孔或1 mL/条的体积计算所需的终止液用量。
从红色瓶盖的瓶中量取所需用量的终止液至一个终止液试剂槽中（例如适用于8道移液枪的试剂槽中），使用8道移液枪依序（顺序与加入底物的顺序相同）向每个微孔中加入100µL终止液终止反应。
颜色应由蓝变黄。
9．用酶标仪在450nm滤镜及示差滤镜630nm下读取结果，记录每个微孔的吸光度OD值。
注意在读取数据前，微孔中应没有气泡，否则将影响分析结果。
另需注意：酶联偶合物与标准品或样品的比例应保持2：1，但是酶联偶合物与样品量可以减少，例如使用100µL酶联偶合物，50µL样品或标准品。
不能将任何未使用的或用剩的试剂倒回原装瓶中。
检验过程中应分清样品与标准品的位置。
且在整个检验过程中，任何时候都不允许摇动微孔板以混合孔内液体。
直接用标准液的吸光度值或者用相对于0ppm标准品的吸光度值的百分数建立5个标准品的标准曲线。
由于各标准品中的呕吐毒素含量已知，则未知样品呕吐毒素的浓度即可通过此标准曲线获得。
结果也可通过Romer Log/Logit软件计算得出。
如果我们使用Log/Logit 软件计算结果，其标准曲线的线性相关系数（r^2）不得低于0.985，并且若标准品0ppm的吸光度值低于0.5，即表示试剂已变质，请勿继续使用；若试剂盒仍处于保质期内，请及时与供应商联系。
若样品所含呕吐毒素浓度高于标准品的最高浓度（>5ppm），则需将萃取过滤的溶液再次用蒸馏水或去离子水稀释至试剂盒检测范围0.25-5ppm内，重新检测以得到精确的结果。
在最后的结果计算中，注意要将稀释倍数算入。
对于大豆类样品，需要使用特殊的计算软件计算，请联系技术人员索取该计算软件。
检测限（Limit of Detection）： 0.2 ppm定量限（Limit of Quantitation）： 0.25 ppm定量范围（Range of Quantitation）：0.25-5ppm（对于超过5ppm的样品，应将其稀释在定量范围内再做检测）ROMER国际贸易北京有限公司96孔（12 X 8）抗体包被的微孔板（铝箔袋封装）96孔（12 X 8）稀释微孔板（标记颜色）五瓶呕吐毒素标准品，各1.5mL (0, 0.25, 1.0, 2.0 & 5.0ppm)1瓶25mL 呕吐毒素酶联偶合物（绿色瓶盖）1瓶15mL 底物溶液（蓝色瓶盖）1瓶15mL 反应终止液（红色瓶盖）1瓶25mL 20倍浓缩的清洗液（蓝色瓶盖）1.萃取过程EQMMS2010: Romer Series II 研磨机或同类替代产品EQOLE1025: 搅拌机或密封罐，或同类替代产品250ml 带塞子的锥形瓶EQOLE1010: 天平,400gEQOLE1050: 量筒100mL去离子水或蒸馏水过滤用的容器W hatman# 1 滤纸或同类替代产品过滤漏斗2.检测过程100µL-200 µL的8道移液枪与50-200µL的单道移液枪及吸头EQOLE1300: 定时器COKAD1150: 冲洗瓶吸水纸巾试剂槽3个（8道移液器用）EQOLE1409：带450nm及630nm滤光片的酶标仪（经GIPSA批准的酶标仪：Awareness Technology 公司制造的Stat Fax® 303+ 或同类替代产品）ROMER国际贸易北京有限公司。
