植物组织中无机磷含量的测定

植物全磷的测定
植物全磷的测定是研究植物生长和健康状况的重要方法之一。

磷对植物的生长和发育起着关键的作用，因此了解植物组织中的总磷含量对于优化植物生长环境和施肥方案至关重要。

以下是植物全磷的测定方法：
常用的植物全磷测定方法：
1.酸溶法（酸浸法）：
●原理：植物样品通过酸溶解，使有机和无机磷转化为可溶性磷酸盐，然后使用酶法或分光光度法测定磷酸盐的含量。

●步骤：
●将植物样品研磨成粉末。

●用酸（通常是盐酸和过氧化氢的混合物）溶解植物组织，将磷酸盐释放出来。

●通过分析方法（如酶法或分光光度法）测定溶液中的总磷含量。

2.硫酸钠熔融法：
●原理：植物样品与硫酸钠一起熔融，将有机和无机磷转化为可溶性磷酸盐，再通过化学方法测定磷酸盐的含量。

●步骤：
●将植物样品与硫酸钠一起进行高温熔融。

●熔融后的物质中的磷转化为磷酸盐。

●使用化学方法（如分光光度法）测定磷酸盐的含量。

3.离子色谱法：
●原理：植物样品中的磷通过离子色谱仪分离和检测。

●步骤：
●提取植物样品中的磷。

●使用离子色谱仪分析样品，测定离子峰的面积或高度，从而计算磷的浓度。

4.原子吸收光谱法：
●原理：将植物样品中的磷转化为可测量的化合物，通过原子吸收光谱法分析。

●步骤：
●溶解植物样品。

●通过化学反应将磷转化为可测量的化合物。

●使用原子吸收光谱法分析样品中的磷含量。

选择合适的测定方法取决于实验室设备、预算和样品特性。

在进行测定之前，应确保样品的准备和处理过程不会导致磷含量的损失或变化。

植物磷的测定哎呀，你知道吗？植物磷的测定可太神奇啦！就像我们要知道自己的考试成绩才能知道学得好不好一样，测定植物里的磷，能让我们搞清楚植物“身体”咋样。

我们先来说说为啥要测定植物里的磷吧！你想想，如果植物是一个小朋友，磷就是它的营养“糖果”。

没有足够的“糖果”，这个小朋友就长不高、长不壮，还容易生病呢！所以，测定植物里的磷，不就是看看它有没有吃够“糖果”嘛！那怎么测呢？这可有好多办法呢！老师跟我们讲过，有一种叫比色法的。

这就好像我们在学校里比谁的画画得好看一样。

把植物弄碎了，加一些特别的东西，让磷变成一种有颜色的东西，然后和标准的颜色比一比，就能知道磷有多少啦。

还有一种叫分光光度法的，哎呀，这个名字可真难记！就像是给植物磷做一个超级厉害的“体检”，用特别的光一照，就能知道它的情况。

有一次上科学课，老师带着我们做实验测定植物磷。

“同学们，可要认真看，认真做哦！”老师一边准备器材一边说。

我们都瞪大眼睛，心里好奇极了。

“来，小明，帮我把这个试剂拿过来。

”老师指挥着。

小明赶紧跑过去，小心翼翼地拿着试剂。

“大家看，先把植物样本处理好。

”老师一步一步地操作着，我们在旁边跟着学，可紧张啦，生怕弄错了。

做完实验，我们都在等着结果，心里像揣了只小兔子，怦怦跳。

“哇，出来啦！”有同学喊着。

大家都围过去看，那感觉，就像发现了宝藏一样兴奋。

你说，植物磷的测定是不是特别有趣？它能让我们更了解植物的秘密，就像打开了一个神奇的宝箱！这不就是科学的魅力嘛，能让我们发现好多好多以前不知道的东西。

我觉得呀，植物磷的测定真的很重要，它能帮助农民伯伯种出更好的庄稼，也能让我们学到更多的知识。

以后我还要多学学这方面的东西，去探索更多的奥秘！。

二、植物全磷的测定（一）钒钼黄吸光光度法1、适用范围。

适合于含磷量较高的植物样品的测定(如籽粒样品)。

2、方法原理植物样品经浓H2SO4消煮使各种形态的磷转变成磷酸盐。

待测液中的正磷酸与偏钒酸和钼酸能生成黄色的三元杂多酸,其吸光度与磷浓度成正比,可在波长400～490nm处用吸光光度法测定。

磷浓度较高时选用较长的波长,较低时选用较短波长。

此法的优点是操作简便,可在室温下显色,黄色稳定,在HNO3、HClO4和H2SO4等介质中都适用,对酸度和显色剂浓度的要求也不十分严格,干扰物少,在可见光范围内灵敏度较低,适测范围广(约为1～20mg/L P),故广泛应用于含磷较高而且变幅较大的植物和肥料样品中磷的测定。

3、试剂（1）钒钼酸铵溶液:25.0g钼酸铵[(NH4)6Mo7O2·4H2O,分析纯]溶于400mL水中,必要时可适当加热,但温度不得超过60℃。

另将1.25g 偏钒酸铵(NH4VO3,分析纯)溶于300mL沸水中,冷却后加入250mL浓HNO3(分析纯)。

将钼酸铵溶液缓缓注入钒酸铵(溶液中,不断搅匀,最后加水稀释至1L,贮于棕色瓶中。

（2）NaOH溶液(c=6mol/L):24gNaOH溶于水, 稀释至100ml。

（3）二硝基酚指示剂(ρ=2g/L):0.2g2,6-二硝基酚或2,4-二硝基酚溶于100ml水中。

（4）磷标准溶液ρ[(P)=50mg/L]:0.2195g(干燥的KH2PO4(分析纯)溶于水,加入5ml浓HNO3,于1L容器瓶中定容。

4、主要仪器设备。

分光光度计。

5、分析步骤准确吸取定容,过滤或澄清后的消煮液5～20ml(V2,含P0.05～0.75mg)放入50ml容量瓶中,加2滴二硝基酚指示剂,滴加6mol/LNaOH中和至刚呈黄色,加入10.00ml钒钼酸铵试剂,用水定容(V3)。

15min后,用1cm光径的比色槽在波长440nm处进行测定,以空白溶液(空白溶液消煮液按上述步骤显色),调节仪器零点。

植物体内全氮、磷、钾的测定一、实验原理作物体中的氮、磷、钾通过硫酸和H2O2消化，使有机氮化物转化成铵态氮，各种形态磷化物转化成磷酸，N、P、K均转变成可测的离子态（氮转化为NH4+，磷转化为H3PO4，钾为K+）。

然后采用相应的方法分别测定。

磷的测定原理（钒钼黄比色法）：在酸性条件下，溶液中的磷酸根与偏钒酸盐和钼酸盐作用形成黄色的钒钼酸盐。

黄色深浅与溶液中磷浓度呈正比。

此法要求酸度0.04—1.6N（以0.5—1.0N最好）；测磷浓度范围0—20mg/kg，比色波长460—490nm，磷浓度低时选用较短的波长，反之可选较长的波长。

钾的测定原理（火焰光度法）：含钾溶液雾化后与可燃气体（如：汽化的汽油等）混合燃烧，其中的钾离子（基态）接受能量后，外层电子发生能级跃迁，呈激发态，由激发态变成基态过程中发射出特定波长的光线（称特征谱线）。

单色器或滤光片将其分离出来，由光电池或光电管将特征谱线具有的光能转变为电流。

用检流计测出光电流的强度。

光电流大小与溶液中钾的浓度呈正比，通过与标准溶液光电流强度的比较求出待测液中钾的浓度。

二、仪器与试剂仪器：分析天平（0.0001）、分光光度计、容量瓶（50ml）移液管（5、10、20ml）测P、K试剂：1．钒钼酸试剂：25.0克钼酸铵〔（NH4）2Mo7O2•4H2O〕溶于400ml水中，另取1.25克偏钒酸铵（NH4VO3）溶于300ml沸水中，冷却后加入250ml浓HNO3，冷却后，将钼酸铵溶液慢慢地混入偏钒酸铵溶液中，边混边搅拌，用水稀释至1升。

2．2，4—二硝基酚指示剂：0.25克2，4—二硝基酚溶于100ml乙醇中。

3．磷标准液：准确称取KH2PO4（1100C烘两小时）2.1968g溶于水，定容至1000ml，此为含磷500mg/L的磷标准液。

取上液准确稀释10倍得到磷为50 mg/L标准液，用于制作标准曲线。

三、测定步骤植物样品的消化：称取磨细干样品0.1—0.2克(精确到0.0001克)放入100毫升消煮管内,加浓H2SO45毫升,使样品和浓H2SO4混匀，放入消化炉上加热，文火微沸5分钟，取出消煮管，冷却，加30%H2O25滴，温度升至200度再煮，30分钟后取下冷却再加30% H2O25滴，温度升至300度继续消煮（不能超过320度），至消化液清亮透明为止。

植物有效磷含量的测定（游离态磷）1．试剂配制（1）配100 ml l0%(w/v)的高氯酸，取7.874 ml 72%的高氯酸溶液。

(高氯酸：分子量100.46，相对密度1.764)。

配800 ml 5%(w/v)的高氯酸，取31.494 ml 72%的高氯酸溶液。

（2）配制硫酸-钼酸铵溶液（溶液A）：即0.5N H2SO4中含有0.4%（w/v）的钼酸铵。

①溶解0.8g钼酸铵(NH4)6Mo7O24·4H2O于100ml水中。

②然后徐徐加入5 ml的浓H2SO4（98%）。

③充分混匀，冷却后加水至200 ml。

（3）配制10%(w/v)抗坏血酸溶液（溶液B）：溶解2 g抗坏血酸于水中，最后加水至20 ml中，贮于棕色瓶中，在4℃冰箱保存。

（4）工作溶液：按体积比6:1混合溶液A和溶液B。

注：工作溶液需要每天配制，配好后放置2小时后再使用。

2. 操作步骤（1）取0.5克鲜样用液氮研磨成粉末，在4℃放置(冰上或者冰箱)至样品冻融，加入1ml 10%(w/v)的高氯酸（PCA）研磨均匀。

（2）匀浆液用5%(w/v)的高氯酸（PCA）稀释10倍，于冰上放置30分钟。

（3）于4℃，10000 g离心10分钟，上清液用于有效磷含量的测定（钼蓝法）。

（4）取2 ml工作溶液与1 ml样品上清液混合，于40℃温育20分钟。

（5）反应液在冰上冷却后，于820 nm可见光波长下测定吸收值。

如样品浓度过高，应适当稀释，使其OD值落在标线的线性范围内。

3．磷标准曲线的制作（1）磷标准溶液配制（60 ppm P）：溶解0.230 g磷酸二氢铵（NH4H2PO4）于100 ml蒸馏水中，即得600 ppm P的磷标准溶液，再将600 ppm P的磷标准溶液用提取剂稀释10倍，得60 ppm P的磷标准溶液。

（2）标准曲线绘制：将60 ppm P的标准磷溶液用提取剂稀释，分别制成0.6、1.2、2.4、3.6、4.8和6 ppm P的标准系列溶液。

植物磷测定方法测定方法消解：称磨细烘干的植物样品0.1000~0.2000g，置于100mL的开氏瓶或消化管中，先用水湿润样品，然后加浓H2SO4 5mL，轻轻摇匀(最好放置过夜)，瓶口放一个漏斗，在消化炉上先低温缓缓加热，待浓硫酸分解冒白烟逐渐升高温度。

当溶液全部呈棕黑色时，从消化炉上取下开氏瓶，稍冷，逐滴加入300g·L-1 H2O2 10滴，并不断摇动，以利反应充分进行。

再加热至微沸10~20min，稍冷后再加入H2O2 5~10滴。

如此反复2~3次，直至消煮液呈无色或清亮色后，再加热5~10min，以除尽过剩的双氧水。

取出开氏瓶冷却，用少量水冲洗小漏斗，洗液洗入瓶中。

将消煮液用水定容至100mL，取过滤液(或取放置澄清的上清液)供N、P、K等元素的测定，消煮时应同时做空白试验以校正试剂误差。

钼锑储存液：用量筒量取浓硫酸153 mL加入400 mL的蒸馏水中，另称取10g钼酸铵、0.5g的酒石酸锑钾溶入其中，稀释到1000 mL的容量瓶中，蒸馏水定容，放到冰箱。

钼锑抗显色剂(现配)：称取1.5g的抗坏血酸加到100mL的钼锑储存液中。

100μg·mL-1P标准溶液：准确称取经105℃烘干2小时的KH2PO4 0.4390g，溶于水，移入1000mL容量瓶，加水约400mL，加浓硫酸5mL，用水定容。

低温保存备用。

2mol/L氢氧化钠：0.5mol/L硫酸溶液：标曲测定：分别吸取0、0.1、0.2、0.4、0.8、1、1.2mL磷标准液，放入50 mL容量瓶中，加蒸馏水稀释到30mL，加入1～2滴二硝基酚指示剂；用稀硫酸和稀氢氧化钠调节到微黄色，加入5 mL钼锑抗显色剂，摇匀，用蒸馏水定容到50 mL。

放置30 min，用1 cm比色皿测定试样分解液在700 nm处的吸光度，以试剂空白作为参比。

样品测定：取2ml过滤液于50ml容量瓶中，加水到30ml，加1滴2，4二硝基酚指示剂，用2mol/L氢氧化钠溶液调到黄色，然后用0.5mol/L硫酸溶液调到淡黄色，摇匀，加5ml 钼锑抗试剂，摇匀，用水稀释至刻度，摇匀。

植物磷的测定H2SO4-H2O2消煮（钒钼黄比色）法1.主要仪器：消化管，消煮炉，分光光度计2.试剂（1）浓H2SO4（2）300g/L H2O2（3）钒钼酸铵试剂：称（NH4）6MoO24•4H2O 12.5g溶于200ml水中，另将偏钒酸铵（NH4VO3）0.625g溶于沸水150ml中，冷却后，加入浓HNO3 125ml，冷却至室温，将钼酸铵溶液缓慢注入钒酸铵溶液，随时搅拌，用水稀释至500ml。

（4）6 mol/L NaOH 溶液：称NaOH 24g溶于水，稀释至100ml（5）2,6-二硝基酚指示剂：称2,6-二硝基酚0.25g溶于100ml水中，其变色范围是pH2.4(无色)- pH4.0（黄色），变色点是pH3.1。

（6）50μg/ml P 标准溶液：准确称取105℃烘干的KH2PO4 0.2195g 溶于水，移入1000ml的容量瓶中，加水至约400ml，加浓H2SO4 5ml，用水定容，低温保存以待备用。

3.操作步骤：称取磨细烘干的植物样品（过0.25-0.5mm筛），0.1-0.2g(万分位天平秤)，置于100ml的消化管中，先用蒸馏水润湿样品，加入5ml浓H2SO4，轻轻摇匀（放置过夜），瓶口放一弯颈漏斗，在消化炉上低温缓缓加热，待浓硫酸分解冒白烟逐渐升高温度。

当溶液全部呈棕黑色时，从消化炉上取下消化管，稍冷，逐滴加入10滴300g/L的H2O2，并不断摇动消化管，利于充分反应，再加热至微沸10-20min，稍冷再加入5-10滴H2O2，如此反复2-3次，直至消化液呈无色或清亮色后，再加热5-10min，以除尽过剩的双氧水，取出消化管冷却，用少量水冲洗小漏斗，洗液洗入瓶中，将消化液定容至100ml，取过滤液（放置澄清的上层清液），供测定。

消煮时同时做空白试验校正试剂误差。

溶液的黄色很稳定，其深浅与磷含量呈正比，用比色法测定磷含量，比色时可根据溶液磷的浓度选择波长400-490nm，磷的浓度高时选择的波长较长，酸度太高时显色不完全或不显色，太低时会生成其他物质或沉淀，正常室温变化范围内对黄色的强度无影响，黄色发生很快，最初的15min内会降低约1.3%，以后至少2h内很稳定，24h内无显著变化。

植物样全磷测定—钼锑抗比色法1、方法原理植物中的磷以有机态为主，用H2SO4-H2O2氧化剂消煮植物样品时，其中的有机物经脱水碳化、氧化分解，变成CO2和H2O,使磷素转化为磷酸盐，然后用钼锑抗比色法测定。

2、仪器设备（1）分光光度计（2）消煮管（3）半微量定氮蒸馏器（4）半微量滴定管3、试剂（1）H2O2[30%,分析纯]（2）浓硫酸[1.84g/cm3]（3）钼锑贮存溶液：浓硫酸153mL缓慢倒入约400mL蒸馏水中，同时搅拌。

放置冷却。

另称10g钼酸铵溶于60摄氏度的300mL蒸馏水中，冷却。

将配好的硫酸溶液缓缓倒入钼酸铵溶液中，同时搅拌。

随后加入酒石酸锑钾（5g/L）100mL。

避光贮存。

（4）钼锑抗显色剂：1.50g抗坏血酸加入到100mL钼锑贮存液中。

随配随用，有效期一天。

（5）二硝基酚指示剂：0.2g二硝基酚溶于100mL水中（6）磷标准贮存溶液：0.4390g磷酸二氢钾（105摄氏度烘干2h）溶于200mL蒸馏水中，加入5mL浓硫酸，转入1L容量瓶中定容。

此为磷标准贮存液（100mg/L）,可以长期贮存。

（7）磷标准液：取磷标准贮存液准确稀释20倍，即磷标准溶液（5mg/L）不宜久存。

4、操作步骤（1）H2SO4-H2O2消煮称取烘干磨碎植物样品0.15g置于消煮管中，加入8mL浓硫酸，浸泡一晚上。

于360摄氏度消煮1h，稍冷后加入10滴H2O2，消煮20min，稍冷，重复加入H2O2，直至溶液无色或清亮。

将消煮液洗入100ml容量瓶中，用水定容，摇匀，静置。

（2）吸取上一步消煮液10ml于50ml容量瓶中，加水稀释至30ml，加二硝基酚指示剂2滴，用氢氧化钠（2mol/L）和硫酸（0.5mol/L）调节pH至溶液刚成微黄色。

然后加入钼锑抗显色剂5ml，摇匀，用水定容。

放置30min后，在分光光度计用波长700nm比色，以空白溶液为参比液，读取吸收值，在工作曲线上查找出显色液的P值。

植物组织样品的采集制备及全氮、磷、钾的测定（基础方法）一植物组织样品的采集植物组织样品多用于诊断分析，采集植物组织样品首先要选定植株。

样株必须有充分的代表性，通常也象采集土样一样按照一定路线多点采集，组成平均样品。

组成每一平均样品的样株数目视作物种类、种植密度、株型大小、株龄或生育期以及要求的准确度而定。

从大田或试验区选择样株要注意群体密度，植株长相、植株长势、生育期的一致，过大或过小，遭受病虫害或机械损伤以及由于边际效应长势过强的植株都不应采用。

如果为了某一特定目的，例如缺素诊断而采样时，则应注意植株的典型性，并要同时在附近地块另行选取有对比意义的正常典型植株，使分析的结果能在相互比较的情况下，说明问题。

植株选定后还要决定取样的部位和组织器官，重要的原则是所选部位的组织器官要具有最大的指示意义，也就是说，植株在该生育期对该养分的丰欠最敏感的组织器官。

大田作物在生殖生长开始时期常采取主茎或主枝顶部新成熟的健壮叶或功能叶；幼嫩组织的养分组成变化很快，一般不宜采样。

苗期诊断则多采集整个地上部分。

大田作物开始结实后，营养体中的养分转化很快，不宜再做叶分析，故一般谷类作物在授粉后即不再采诊断用的样品。

如果为了研究施肥等措施对产品品质的影响，则当然要在成熟期采取茎秆、籽粒、果实、块茎、块根等样品，果树和林木多年生植物的营养诊断通常采用“叶分析”或不带叶柄的“叶片分析”，个别果树如葡萄、棉花则常做“叶柄分析”。

植物体内各种物质，特别是活动性成分如硝态氮、氨基态氮，还原糖等都处于不断的代谢变化之中，不仅在不同生育期的含量有很大的差别，并且在一日之间也有显著的周期性变化。

因此在分期采样时，取样时间应规定一致，通常以上午8—10时为宜，因为这时植物的生理活动已趋活跃，地下部分的根系吸收速率与地上部正趋于上升的光合作用强度接近动态平衡。

此时植物组织中的养料贮量最能反映根系养料吸收与植物同化需要的相对关系，因此最具有营养诊断的意义。

植株全氮、全磷、全钾的测定一、待测液的制备（H2SO4—H2O2消煮法）二、植株全氮的测定（H2SO4—H2O2消煮，蒸馏法）三、植株全磷的测定（H2SO4—H2O2消煮，钒钼黄比色法）四、植株全钾的测定（H2SO4—H2O2消煮，火焰光度法一、待测液的制备（H2SO4—H2O2消煮法）1 H2SO4—H2O2消煮原理植物样品在浓H2SO4溶液中，经过脱水、碳化、氧化等一系列的作用后，易分解的有机物则分解，然后再加入H2O2，H2O2在热的浓H2SO4溶液中会分解出新生态氧，具有强烈的氧化作用，可继续分解没被H2SO4破坏的有机物，使有机态氮全部转化为无机铵盐。

同时，样品中的有机磷也转化为无机磷酸盐，故可用同一消煮液分别测定N、P、K（植株中K以离子态存在）。

2 主要仪器：万分之一电子天平、0.5 mm筛、三角瓶（50ml）或消煮管、移液管（5、10ml）+吸耳球、弯颈小漏斗、消煮炉、吸管、漏斗、无磷钾滤纸、容量瓶（100ml）2 试剂：浓硫酸（GB T625）：化学纯、比重1.8430%H2O2（GB 6684）：阴凉处存放3 操作步骤称取烘干、磨细的植物样品(过0.5 mm筛)0.19g，置于50ml三角瓶（或消煮管）底部（勿将样品粘附在瓶颈上），加浓硫酸5mL，摇匀（最好放置过夜），瓶口盖一弯颈小漏斗，在电炉上先缓缓加热，待浓硫酸分解冒大量白烟时再升高温度（在消煮炉上先250℃消煮—温度稳定后计时，时间约30min，待浓硫酸分解冒大量白烟时再升高温度至400℃）。

消煮至溶液呈均匀的棕黑色时，取下三角瓶，稍冷后提起弯颈漏斗，滴加30%H2O210滴，并不断摇动三角瓶。

再加热(微沸)约7-10 min，取下，稍冷后重复滴加30%H2O25~10滴，再消煮。

如此反复进行3-5次，每次添加的H2O2应逐次减少，消煮至溶液呈无色或清亮后，再加热5-10min（以赶尽剩余的H2O2)，取下三角瓶冷却，用少量水冲洗漏斗，洗液流入三角瓶中。