植物组织中无机磷含量测定

植物全磷的测定
植物全磷的测定是研究植物生长和健康状况的重要方法之一。

磷对植物的生长和发育起着关键的作用，因此了解植物组织中的总磷含量对于优化植物生长环境和施肥方案至关重要。

以下是植物全磷的测定方法：
常用的植物全磷测定方法：
1.酸溶法（酸浸法）：
●原理：植物样品通过酸溶解，使有机和无机磷转化为可溶性磷酸盐，然后使用酶法或分光光度法测定磷酸盐的含量。

●步骤：
●将植物样品研磨成粉末。

●用酸（通常是盐酸和过氧化氢的混合物）溶解植物组织，将磷酸盐释放出来。

●通过分析方法（如酶法或分光光度法）测定溶液中的总磷含量。

2.硫酸钠熔融法：
●原理：植物样品与硫酸钠一起熔融，将有机和无机磷转化为可溶性磷酸盐，再通过化学方法测定磷酸盐的含量。

●步骤：
●将植物样品与硫酸钠一起进行高温熔融。

●熔融后的物质中的磷转化为磷酸盐。

●使用化学方法（如分光光度法）测定磷酸盐的含量。

3.离子色谱法：
●原理：植物样品中的磷通过离子色谱仪分离和检测。

●步骤：
●提取植物样品中的磷。

●使用离子色谱仪分析样品，测定离子峰的面积或高度，从而计算磷的浓度。

4.原子吸收光谱法：
●原理：将植物样品中的磷转化为可测量的化合物，通过原子吸收光谱法分析。

●步骤：
●溶解植物样品。

●通过化学反应将磷转化为可测量的化合物。

●使用原子吸收光谱法分析样品中的磷含量。

选择合适的测定方法取决于实验室设备、预算和样品特性。

在进行测定之前，应确保样品的准备和处理过程不会导致磷含量的损失或变化。

植物体内全氮、磷、钾的测定一、实验原理作物体中的氮、磷、钾通过硫酸和H2O2消化，使有机氮化物转化成铵态氮，各种形态磷化物转化成磷酸，N、P、K均转变成可测的离子态（氮转化为NH4+，磷转化为H3PO4，钾为K+）。

然后采用相应的方法分别测定。

磷的测定原理（钒钼黄比色法）：在酸性条件下，溶液中的磷酸根与偏钒酸盐和钼酸盐作用形成黄色的钒钼酸盐。

黄色深浅与溶液中磷浓度呈正比。

此法要求酸度0.04—1.6N（以0.5—1.0N最好）；测磷浓度范围0—20mg/kg，比色波长460—490nm，磷浓度低时选用较短的波长，反之可选较长的波长。

钾的测定原理（火焰光度法）：含钾溶液雾化后与可燃气体（如：汽化的汽油等）混合燃烧，其中的钾离子（基态）接受能量后，外层电子发生能级跃迁，呈激发态，由激发态变成基态过程中发射出特定波长的光线（称特征谱线）。

单色器或滤光片将其分离出来，由光电池或光电管将特征谱线具有的光能转变为电流。

用检流计测出光电流的强度。

光电流大小与溶液中钾的浓度呈正比，通过与标准溶液光电流强度的比较求出待测液中钾的浓度。

二、仪器与试剂仪器：分析天平（0.0001）、分光光度计、容量瓶（50ml）移液管（5、10、20ml）测P、K试剂：1．钒钼酸试剂：25.0克钼酸铵〔（NH4）2Mo7O2•4H2O〕溶于400ml水中，另取1.25克偏钒酸铵（NH4VO3）溶于300ml沸水中，冷却后加入250ml浓HNO3，冷却后，将钼酸铵溶液慢慢地混入偏钒酸铵溶液中，边混边搅拌，用水稀释至1升。

2．2，4—二硝基酚指示剂：0.25克2，4—二硝基酚溶于100ml乙醇中。

3．磷标准液：准确称取KH2PO4（1100C烘两小时）2.1968g溶于水，定容至1000ml，此为含磷500mg/L的磷标准液。

取上液准确稀释10倍得到磷为50 mg/L标准液，用于制作标准曲线。

三、测定步骤植物样品的消化：称取磨细干样品0.1—0.2克(精确到0.0001克)放入100毫升消煮管内,加浓H2SO45毫升,使样品和浓H2SO4混匀，放入消化炉上加热，文火微沸5分钟，取出消煮管，冷却，加30%H2O25滴，温度升至200度再煮，30分钟后取下冷却再加30% H2O25滴，温度升至300度继续消煮（不能超过320度），至消化液清亮透明为止。

植物与土壤中全磷的测定植物体中的磷主要来自于土壤，土壤中磷的含量与土壤质地和有机质含量也有一定的关系，粘土含磷多于沙性土，有机质丰富的含磷量也较多，土壤全磷含量（以P 2O 5表示）一般为0.1%～0.15%，高的可达0.25%，低的只有0.05%。

作物体内磷的含量为0.1%～1.0%。

1方法原理 通过氧化剂H 2SO 4— HClO 4或Na 2CO 3高温熔融，将植物及土壤中的有机磷和无机磷均转化为正磷酸，与钼酸铵发生络合反应，形成磷钼酸杂多酸，锑与磷钼酸反应生成磷锑钼三元杂多酸，此酸在室温下（15～60℃）可被抗坏血酸迅速还原为蓝色络合物，在700nm 下有特征吸收峰。

2仪器设备分光光度计；调温电炉；消化管（或电阻炉、坩埚）；容量瓶等3试剂3.1 浓硫酸 比重1.843.2 70～72%HClO43.3 2，6-二硝基酚或2，4-二硝基酚指示剂溶液，溶解0.25克二硝基酚于100ml 水中，变色点约为3，酸性时无色，碱性时为黄色。

3.4 4M NaOH ：16克NaOH 溶于100ml 水中3.5 2M （1/2 H 2SO 4）： 吸6ml H 2SO 4，加入80ml 水中，边加边搅拌冷却，加水至100ml3.6 钼锑抗试剂：称取酒石酸锑钾0.5克溶于100ml 水中制成0.5%溶液 另取钼酸铵10克溶于450ml 水中，徐徐加入153ml 浓硫酸边加边搅拌，再将0.5%酒石酸锑钾溶液100ml 加入到钼酸铵溶液中，最后加入至1升，充分摇匀贮于棕色瓶中，临用前，称取1.5克VC 溶于100ml 钼锑抗混合液中，此液的H 2SO 4为5.5M ，钼酸铵为1%，酒石酸锑钾为0.05%，抗坏血酸为1.5%。

溶液有效期24小时。

3.7 磷标准溶液 准确称取在105℃烘箱中烘干的分析纯磷酸二氢钾0.2195克，溶解于40ml 水中加浓硫酸5ml 转入100ml 容量瓶中,加水到刻度,此溶液为500ppm 标液.吸取上述标液2ml 定容到200ml 即为5ppm 标液。

实验报告课程名称：土壤学实验指导老师：倪吾钟成绩：__________________ 实验名称：植物全氮、全磷、全钾含量的测定 同组学生XX ：余慧珍一、实验目的和要求二、实验内容和原理 三、实验材料与试剂四、实验器材与仪器五、操作方法和实验步骤六、实验数据记录和处理 七、实验结果与分析八、讨论、心得一、 实验目的和要求1. 掌握植物样品消煮液制备方法；2. 掌握植物全氮、磷、钾的测定与结果分析。

二、 实验内容和原理1. 植物样品消煮——H 2SO 4-H 2O 2消煮法在浓H 2SO 4溶液中，植物样品经过脱水、碳化、氧化等作用后，易分解的有机物则分解。

再加入H 2O 2 ，H 2O 2在热浓H 2SO 4溶液中会分解出新生态氧，具有强烈的氧化作用，可继续分解没被H 2SO 4破坏的有机物，使有机态氮全部转化为无机铵盐。

同时，样品中的有机磷也转化为无机磷酸盐，植株中K 以离子态存在。

故可用同一消煮液分别测定N 、P 、K 。

2. 植株全氮的测定——靛酚蓝比色法经消煮待测液中氮主要以铵态氮存在，被测物浸提剂中的NH 4+，在强碱性介质中与次氯酸盐和苯酚反应，生成水溶性染料靛酚蓝，其深浅与溶液中的NH 4+－N 含量呈正比，线性X 围为0.05-0.5mg/l 之间。

3. 植株全磷的测定——钒钼黄比色法经消煮待测液中磷主要以磷酸盐存在，在酸性条件下，正磷酸能与偏钒酸和钼酸发生反应，形成黄色的三元杂多酸—钒钼磷酸[1]。

溶液黄色稳定，黄色的深浅与磷的含量成正相关。

4.植株全钾的测定——火焰光度计法消煮待测液中难容硅酸盐分解，从而使矿物态钾转化为可溶性钾。

待测液中钾主要以钾离子形式存在，用酸溶解稀释后即可用火焰光度计测定。

三、实验器材与仪器样品：三叶草，取于东七教学楼南侧，研磨过18目筛备用；试剂：浓硫酸、300g/l H2O2、6mol/l NaOH溶液、0.2%二硝基酚指示剂、酚溶液、次氯酸钠溶液、铵标准溶液（准确称量0.3142g经105℃干燥2h的氯化铵（NH4Cl），用少量水溶解，移100mL 容量瓶中，用吸收液稀释至刻度。

植物样全磷测定—钼锑抗比色法1、方法原理植物中的磷以有机态为主，用H2SO4-H2O2氧化剂消煮植物样品时，其中的有机物经脱水碳化、氧化分解，变成CO2和H2O,使磷素转化为磷酸盐，然后用钼锑抗比色法测定。

2、仪器设备（1）分光光度计（2）消煮管（3）半微量定氮蒸馏器（4）半微量滴定管3、试剂（1）H2O2[30%,分析纯]（2）浓硫酸[1.84g/cm3]（3）钼锑贮存溶液：浓硫酸153mL缓慢倒入约400mL蒸馏水中，同时搅拌。

放置冷却。

另称10g钼酸铵溶于60摄氏度的300mL蒸馏水中，冷却。

将配好的硫酸溶液缓缓倒入钼酸铵溶液中，同时搅拌。

随后加入酒石酸锑钾（5g/L）100mL。

避光贮存。

（4）钼锑抗显色剂：1.50g抗坏血酸加入到100mL钼锑贮存液中。

随配随用，有效期一天。

（5）二硝基酚指示剂：0.2g二硝基酚溶于100mL水中（6）磷标准贮存溶液：0.4390g磷酸二氢钾（105摄氏度烘干2h）溶于200mL蒸馏水中，加入5mL浓硫酸，转入1L容量瓶中定容。

此为磷标准贮存液（100mg/L）,可以长期贮存。

（7）磷标准液：取磷标准贮存液准确稀释20倍，即磷标准溶液（5mg/L）不宜久存。

4、操作步骤（1）H2SO4-H2O2消煮称取烘干磨碎植物样品0.15g置于消煮管中，加入8mL浓硫酸，浸泡一晚上。

于360摄氏度消煮1h，稍冷后加入10滴H2O2，消煮20min，稍冷，重复加入H2O2，直至溶液无色或清亮。

将消煮液洗入100ml容量瓶中，用水定容，摇匀，静置。

（2）吸取上一步消煮液10ml于50ml容量瓶中，加水稀释至30ml，加二硝基酚指示剂2滴，用氢氧化钠（2mol/L）和硫酸（0.5mol/L）调节pH至溶液刚成微黄色。

然后加入钼锑抗显色剂5ml，摇匀，用水定容。

放置30min后，在分光光度计用波长700nm比色，以空白溶液为参比液，读取吸收值，在工作曲线上查找出显色液的P值。

测定植物样品活性无机磷酸盐1. 取样：称量样品鲜重，干重或冷冻后的重量（每个EP管取10-20mg根或茎）2.提取：向含有新鲜或冰冻样品EP管加入500纯水，85℃温育45min (干燥或粉末状样品需离心)3.Pi含量测定：储备液配置：1. 仲钼酸铵溶液配置：-将0.44g仲钼酸铵溶于97.3mL纯水-接入2.66ML（36N）浓硫酸定容至100Ml.所配溶液避光可存放几个月。

2.10%维生素C溶液配置-将1个维生素C钠盐溶于10mL纯水-该溶液需现配现用步骤在EP管中混合以下溶液（新制备的样品解离液可加入600μL仲钼酸铵溶液，100μL10%维生素C溶液及纯水）和纯水）-600μL仲钼酸铵溶液-100μL10%维生素C溶液-300μL基本溶液1样品为根：200μL纯水加+100μL提取后溶液2样品为茎：250μL纯水+50μL提取后溶液3 样品溶液已制备好：直接加50和100μL体积即可42温育1h后测820nm吸光度pho2, a Phosphate Overaccumulator, Is Caused by aNonsense Mutation in a MicroRNA399 Target Gene1[W]We recently demonstrated that microRNA399 (miR399) controls inorganic phosphate (Pi) homeostasis by regulating theexpression of UBC24 encoding a ubiquitin-conjugating E2 enzyme in Arabidopsis (Arabidopsis thaliana). Transgenic plantsoverexpressing miR399 accumulated excessive Pi in the shoots and displayed Pi toxic symptoms. In this study, we revealedthat a previously identified Pi overaccumulator, pho2, is caused by a single nucleotide mutation resulting in early terminationwithin the UBC24 gene. The level of full-length UBC24 mRNA was reduced and no UBC24 protein was detected in the pho2mutant, whereas up-regulation of miR399 by Pi deficiency was not affected. Several characteristics of Pi toxicity in the pho2mutant were similar to those in the miR399-overexpressing and UBC24 T-DNA knockout plants: both Piuptake andtranslocation of Pi from roots to shoots increased and Pi remobilization within leaves was impaired. These phenotypes of thepho2 mutation could be rescued by introduction of a wild-type copy of UBC24. Kinetic analyses revealed that greater Pi uptakein the pho2 and miR399-overexpressing plants is due to increased Vmax. The transcript level of most PHT1 Pi transporter genesas not significantly altered, except PHT1;8 whose expression was enhanced in Pi-sufficient roots of pho2 and miR399-overexpressing compared with wild-type plants. In addition, changes in the expression of several organelle-specific Pitransporters were noticed, which may be associated with the redistribution of intracellular Pi under excess Pi. Furthermore,miR399 and UBC24 were colocalized in the vascular cylinder. This observation not only provides important insight into theinteraction between miR399 and UBC24 mRNA, but also supports their systemic function in Pi translocation andremobilization.PHO2, MicroRNA399, and PHR1 Define aPhosphate-Signaling Pathway in Plants1[W][OA]Inorganic phosphate (Pi)-signaling pathways in plants are still largely unknown. The Arabidopsis (Arabidopsis thaliana) pho2mutant overaccumulates Pi in leaves in Pi-replete conditions. Micrografting revealed that a pho2 root genotype is sufficient toyield leaf Pi accumulation. In pho2 mutants, Pi does not repress a set of Pi starvation-induced genes, including AtIPS1, AT4, andPi transporters Pht1;8 and Pht1;9. Map-based cloning identified PHO2 as At2g33770, an unusual E2 conjugase gene. It wasrecently shown that Pi deprivation induces mature microRNA (miRNA [miR399]) and that overexpression of miR399 inPi-replete conditions represses E2 conjugase expression and leads to high leaf Pi concentrations, thus phenocopying pho2. Weshow here that miR399 primary transcripts are also strongly induced by low Pi and rapidly repressed after addition of Pi.PHO2 transcripts change reciprocally to miR399 transcripts in Pi-deprived plants and in miR399 overexpressers. However,responses after Pi readdition and in b-glucuronidase reporter lines suggest that PHO2 expression is also regulated by Pi in amanner unrelated to miR399-mediated transcript cleavage. Expression of miR399 was strongly reduced in Pi-deprivedArabidopsis phr1 mutants, and a subset of Pi-responsive genes repressed in Pi-deprived phr1 mutants was up-regulated inPi-replete pho2 mutants. This places miR399 and PHO2 in a branch of the Pi-signaling network downstream of PHR1. Finally,putative PHO2 orthologs containing five miR399-binding sites in their 5#-untranslated regions were identified in other higherplants, and Pi-dependent miR399 expression was demonstrated in rice (Oryza sativa), suggesting a conserved regulatorymechanism.。

磷钼蓝⽐⾊法测定植物组织中磷的含量检测原理在⼀定的酸度和钼酸铵浓度下，溶液中的磷与钼酸铵作⽤⽣成黄⾊的磷钼酸，其反应如下：(NH4)2MoO4+2HCl→H2MoO4+2NH4ClH3PO4+12H2MoO4→H3［P(Mo3O10)4］+12H2O⽣成的磷钼酸，在⼀定量的氯化亚锡作⽤下，使部分钼(六价钼)被还原，形成蓝⾊的复杂化合物—磷钼蓝。

在⼀定含磷浓度范围内，溶液蓝⾊的深浅与磷含量成正⽐。

根据蓝⾊的深浅与标准⾊阶相⽐较，即可求出磷的含量。

测定步骤制备标准⾊阶和供试液中磷含量的测定，可同时在⽐⾊盘中，按下表顺序进⾏。

磷测定步骤操作步骤⽤量单位标准⾊阶浓度(mg/L)供试液⽤量（滴）0.5124812制备显⾊⽤准系列取混合标准液浓度2mg/L滴124000416mg/L滴000123滴3203211．加2.1%钼酸铵盐酸液滴11111112．搅匀由低⾄⾼浓度逐⽳搅匀3．加0.1%氯化亚锡溶液滴11111114．搅匀由低⾄⾼浓度逐⽳搅匀5．⽐⾊读数5～15分钟内与标准⾊阶⽐较记下读数6．计算结果⽆机磷(mg/L)=读数*稀释倍数注意事项0.1%氯化亚锡在临⽤前由2%氯化亚锡⽢油贮备液稀释制备当天有效，每次少配。

3—2.5植物组织中钾的测定(四苯硼钠⽐浊法)溶液中的钾离⼦与四苯硼钠Na［B(C6H5)4］作⽤，⽣成难溶的四苯硼钾⽩⾊沉淀，使溶液呈现浑浊、其反应如下：K++Na[B(C6H5)4]→K[B(C6H5)4]↓+Na+在⼀定含钾浓度范围内，其混浊度与钾含量成正⽐，根据混浊程度与标准钾的浊度相⽐较，即可求出钾的含量。

测定步骤制备标准⽐浊系列与供试液中钾的测定，可同时在⼩试管(19×70毫⽶)中，按下表顺序进⾏。

有效钾测定步骤操作步骤⽤量单位标准浊度系列浓度(mg/L)供试液⽤量（滴）510204060801．制备⽐浊⽤标准系列取混合标准液浓度20mg/L滴2480004160mg/L滴000234加蒸馏⽔滴6406542．加3％EDTA碱性溶液滴1111111 3．加37％甲醛滴1111111 4．搅匀逐管搅匀5．加2％四苯硼钠溶液滴22222226．搅匀逐管搅匀7．⽐浊读数5～15分钟内与标准浊度系列⽐浊8．计算结果有效钾(mg/L)=读数值*稀释倍数注意事项试液中产⽣⼲扰作⽤的离⼦，主要有铵离⼦及其它⼀些三价、⼆价⾦属离⼦(如钙、镁、铁、铝等)须加⼊EDTA⼆钠盐及甲醛来掩蔽，以消除⼲扰。

植物组织样品的采集制备及全氮、磷、钾的测定（基础方法）一植物组织样品的采集植物组织样品多用于诊断分析，采集植物组织样品首先要选定植株。

样株必须有充分的代表性，通常也象采集土样一样按照一定路线多点采集，组成平均样品。

组成每一平均样品的样株数目视作物种类、种植密度、株型大小、株龄或生育期以及要求的准确度而定。

从大田或试验区选择样株要注意群体密度，植株长相、植株长势、生育期的一致，过大或过小，遭受病虫害或机械损伤以及由于边际效应长势过强的植株都不应采用。

如果为了某一特定目的，例如缺素诊断而采样时，则应注意植株的典型性，并要同时在附近地块另行选取有对比意义的正常典型植株，使分析的结果能在相互比较的情况下，说明问题。

植株选定后还要决定取样的部位和组织器官，重要的原则是所选部位的组织器官要具有最大的指示意义，也就是说，植株在该生育期对该养分的丰欠最敏感的组织器官。

大田作物在生殖生长开始时期常采取主茎或主枝顶部新成熟的健壮叶或功能叶；幼嫩组织的养分组成变化很快，一般不宜采样。

苗期诊断则多采集整个地上部分。

大田作物开始结实后，营养体中的养分转化很快，不宜再做叶分析，故一般谷类作物在授粉后即不再采诊断用的样品。

如果为了研究施肥等措施对产品品质的影响，则当然要在成熟期采取茎秆、籽粒、果实、块茎、块根等样品，果树和林木多年生植物的营养诊断通常采用“叶分析”或不带叶柄的“叶片分析”，个别果树如葡萄、棉花则常做“叶柄分析”。

植物体内各种物质，特别是活动性成分如硝态氮、氨基态氮，还原糖等都处于不断的代谢变化之中，不仅在不同生育期的含量有很大的差别，并且在一日之间也有显著的周期性变化。

因此在分期采样时，取样时间应规定一致，通常以上午8—10时为宜，因为这时植物的生理活动已趋活跃，地下部分的根系吸收速率与地上部正趋于上升的光合作用强度接近动态平衡。

此时植物组织中的养料贮量最能反映根系养料吸收与植物同化需要的相对关系，因此最具有营养诊断的意义。

二、植物全磷的测定（一）钒钼黄吸光光度法1、适用范围。

适合于含磷量较高的植物样品的测定(如籽粒样品)。

2、方法原理植物样品经浓H2SO4消煮使各种形态的磷转变成磷酸盐。

待测液中的正磷酸与偏钒酸和钼酸能生成黄色的三元杂多酸,其吸光度与磷浓度成正比,可在波长400～490nm处用吸光光度法测定。

磷浓度较高时选用较长的波长,较低时选用较短波长。

此法的优点是操作简便,可在室温下显色,黄色稳定,在HNO3、HClO4和H2SO4等介质中都适用,对酸度和显色剂浓度的要求也不十分严格,干扰物少,在可见光范围内灵敏度较低,适测范围广(约为1～20mg/L P),故广泛应用于含磷较高而且变幅较大的植物和肥料样品中磷的测定。

3、试剂（1）钒钼酸铵溶液:25.0g钼酸铵[(NH4)6Mo7O2·4H2O,分析纯]溶于400mL水中,必要时可适当加热,但温度不得超过60℃。

另将1.25g 偏钒酸铵(NH4VO3,分析纯)溶于300mL沸水中,冷却后加入250mL浓HNO3(分析纯)。

将钼酸铵溶液缓缓注入钒酸铵(溶液中,不断搅匀,最后加水稀释至1L,贮于棕色瓶中。

（2）NaOH溶液(c=6mol/L):24gNaOH溶于水, 稀释至100ml。

（3）二硝基酚指示剂(ρ=2g/L):0.2g2,6-二硝基酚或2,4-二硝基酚溶于100ml水中。

（4）磷标准溶液ρ[(P)=50mg/L]:0.2195g(干燥的KH2PO4(分析纯)溶于水,加入5ml浓HNO3,于1L容器瓶中定容。

4、主要仪器设备。

分光光度计。

5、分析步骤准确吸取定容,过滤或澄清后的消煮液5～20ml(V2,含P0.05～0.75mg)放入50ml容量瓶中,加2滴二硝基酚指示剂,滴加6mol/LNaOH中和至刚呈黄色,加入10.00ml钒钼酸铵试剂,用水定容(V3)。

15min后,用1cm光径的比色槽在波长440nm处进行测定,以空白溶液(空白溶液消煮液按上述步骤显色),调节仪器零点。

实验三植物组织中磷的测定一、实验目的作物根系自土壤中吸收的无机磷大部分在作物体内迅速转化为有机磷，而其余部分仍以水溶性状态留在体内，这部分水溶性磷的含量大体上能反映土壤磷素供应状况，故可作为检定作物磷素营养水平的指标。

二、实验原理在酸性条件下，作物组织液中的无机磷与钼酸形成磷钼酸，在氯化亚锡还原的条件下，产生蓝色的磷钼蓝，蓝色的深浅与含磷量成正比。

三、试剂配制1、盐酸—钼酸铵溶液称取钼酸铵1.5g溶于约30ml温水中，冷却后，缓缓加入浓硫酸30ml，边加边搅拌，最后用蒸馏水稀释至100ml，贮于棕色瓶中。

2、2.5%氯化亚锡—甘油溶液称取氯化亚锡2.5g，加浓硫酸10ml，待溶解后再加化学纯甘油90ml，混匀，贮于棕色瓶中，放黑暗处，一般可存放半年左右。

3、磷标准溶液称取0.2194g磷酸二氢钾溶解于400ml蒸馏水中，加入7N硫酸溶液25ml（将4.9ml浓硫酸缓缓加入20ml蒸馏水中），混匀，用蒸馏水定容至1000ml，即为50ppm的标准磷溶液。

制备标准色阶时，稀释成5ppm 的磷标准溶液即可。

4、系列标准色阶与作物组织测定的同时，于15ml比色管中，按下表用量比例，配制系列标准溶液。

选取有代表性的植株，取基部混合叶鞘组织剪成长约1mm的碎屑，混匀，称0.25g放入比色管中，加入盐酸—钼酸铵溶液1.5ml塞紧，上下用力摇动30次（约2分钟），立即加水6ml，摇匀并加入氯化亚锡—甘油1滴，5分钟后与同时配制的标准色阶比色，记下测得的ppm数。

五、结果计算植物无机磷含量（ppm）=测得的磷ppm数×30若采用植株汁液测定，则：植物无机磷含量（ppm）=测得的磷ppm数×V1/V2V1—显色溶液的ml数V2—所取汁液ml数（以20滴/ml计）。