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无机磷的测定钼蓝法原理
钼蓝法是一种常用于测定无机磷含量的方法，其原理如下：
1. 总磷转化为无机磷：样品中的总磷可以通过一系列化学反应转化为无机磷。
这些化学反应通常包括酸消解、氢氧化钠沉淀、盐酸回溶等步骤。
2. 磷酸与钼酸的反应：转化后的无机磷酸溶液与酸性钼酸反应生成磷酸钼酸盐。
这个反应会导致溶液颜色由无色变为淡黄色。
3. 颜色的测定：钼酸盐与磷酸盐形成的黄色化合物可以通过测定其吸光度来间接测定样品中无机磷的含量。
具体测定方法通常是使用分光光度计测量在700 nm波长处的吸光度。
通过比较待测样品的吸光度与标准曲线上的标准品吸光度的关系，可以确定出待测样品中无机磷的含量。
需要注意的是，钼蓝法是一种相对定性的测定方法，对于磷酸盐的混合物不太适用。
在测定时，需要注意样品的处理方法和反应条件的控制，以保证准确测定无机磷的含量。
实验四发酵过程中无机磷的测定一、实验目的了解发酵过程中无机磷的作用，掌握定磷法的原理和操作技术。
二、实验原理酵母能使蔗糖和葡萄糖发酵产生乙醇和二氧化碳。
此过程与无机磷将糖磷酸化有关。
本实验利用无机磷与钼酸形成的磷钼酸配位化合物能被还原剂α-1,2,4-氨基萘酚磺酸钠还原成钼蓝来测定发酵前后反应混合物中无机磷的含量，用于了解、掌握发酵过程中无机磷的消耗。
三、实验仪器、试剂和材料（1）仪器：试管(1.5cm×15cm)、刻度吸管（0.5mL、1mL、5 mL）、三角瓶（50Ml）、恒温水浴、研钵、721型分光光度计、滤纸。
（2）试剂：①蔗糖。
②5%三氯乙酸。
③3mol/硫酸-2.5%钼酸铵液（等体积混合）④磷酸盐溶液⑤磷酸盐标准溶液⑥α-1,2,4-氨基萘酚磺酸溶液（3）材料：干酵母四、实验步骤(一)、酵母菌的发酵过程取2g干酵母和1g蔗糖放入干净且干燥的研钵粉末，向里加入10mL蒸馏水，10mL磷酸盐溶液搅拌均匀，把悬液转到三角瓶中（三角瓶不能太小）并不断搅拌，迅速从中取出0.5mL加入到已经盛有3.5mL的三氯乙胺的具塞试管(提前准备)中，将盛有悬液和三氯乙胺的具塞试管混匀静置，过滤得滤液，将滤液置于1号试管中，记为1号试剂。
同时在取出0.5mL悬液后迅速将三角瓶放入37℃水浴锅中，并不断搅拌，每隔20min取样0.5mL仍放入已装有3.5mL的三氯乙酸中，混匀静置，过滤分别得不同滤液，依次放入2、3、4号试管中，记为2、3、4号试剂。
(二)、标准曲线的制作取六支具塞试管，分别编号0-5号，按下表依次加入试剂（磷酸盐标准溶液中磷含量50微克/ml）在600纳米用分光光度计测量1-5号的A值并计算1-5号试管中无机磷的的含量。
(三)、样品中无机磷的测定取五支具塞试管，编号1-5号，按下表依次加入试剂以5号试管为参比，在600nm条件下测量1-4号试管的A值。
五、实验数据（一）、制作标准曲线中每支试管中无机磷的含量及A值：绘制标准曲线：（二）、样品无机磷测定结果：六、结果分析与讨论(1)、温度对发酵过程中的影响，超过适应温度范围后，随温度的升高酶很快失活，进而影响无机磷的利用。
第１５卷 第４期 四 川 轻 化 工 学 院 学 报 Ｖｏｌ．１５ Ｎｏ．４ ＪＯＵＲＮＡＬ ＯＦ ＳＩＣＨＵＡＮ ＩＮＳＴＩＴＵＴＥ ＯＦ ２００２年１２月 ＬＩＧＨＴ ＩＮＤＵＳＴＲＹ ＡＮＤ ＣＨＥＭＩＣＡＬ ＴＥＣＨＮＯＬＯＧＹ Ｄｅｃ．２００２ 文章编号：１００８－４３８Ｘ（２００２）０４－００４２－０５ 饲料中总磷、无机磷和有机磷的含量测定袁东，封雪松，付大友，袁基刚（四川轻化工学院材料与化学工程系，四川 自贡 ６４３０３３） 摘 要：采用磷钼钒分光光度法研究了饲料中的总磷、无机磷、有机磷的含量。
在酸性条件下，磷酸与钼酸铵［（ＮＨ４）２ＭｏＯ４］和钒酸铵（ＮＨ４ＶＯ３）混合试剂形成黄色络合物，其最大吸收波长为ε３．４３×１０３ Ｌ・ｍｏｌ－１・ｃｍ－１，回收率为９７．０％￣１０１．５％，结果令人满意。
３７４ｎｍ，摩尔吸光系数= 关键词：分光光度法；总磷；无机磷；有机磷 中图分类号：Ｏ６５ 文献标识码：Ａ 前言 在饲料的矿物质元素中，磷的含量是饲料的基本营养学指标。
磷的缺乏会引起幼龄动物患佝偻症，成年动物患软骨症，同时还会出现食欲不良，产奶量降低，全身虚弱，母畜发情异常，屡配不孕等症状，但如果用之过量，常常又会破坏畜禽生长的正常代谢过程及必要的生产过程［１］。
因此，快速而准确地测定饲料中的磷含量具有重要意义。
动物体内的磷主要来自饲料，但植物性饲料中的磷相当一部分是以有机磷的形式存在，不能被动物充分利用。
因此，在配合饲料中必须补充足够的无机磷。
在加工饲料中，如添加多磷酸化合物，则无机磷的含量增加［２］。
因此，作为评价饲料品质的分析技术，不仅要求测定总磷含量，而且要求对不同化学形态或存在形态的磷分别进行定量。
但目前通用的常规化验指标都是测总磷，并不能确定其中有机磷的含量，对于饲料中有机磷的测定还未见报道。
磷的测定方法已有许多研究，如气相色谱法、导数极谱法、ｘ－荧光光谱法［３～５］、原子吸收法［６］、液相色谱分离电感耦合等离子体质谱法［７］、电位滴定法、速差动力学比例方程分光光度法［８］等，但这些方法多数需要特定的仪器设备，测定方法较繁琐，应用还不广泛［９］。
土壤有机磷测定方法土壤全磷含量约10～1000 g/kg，与土层、质地、发育、利用方式与强度等有关。
土壤磷分为无机磷和有机磷两大部分，根据我国土壤普查资料，一般耕作土壤中，有机磷含量约占全磷量的25%～56%。
土壤有机磷测定，是指土壤有机磷是土壤全磷的重要组成部分，主要是植素、核酸等含磷有机物中的磷。
通常采用间接测定法，主要有烧灼法和浸提法。
烧灼法是用高温（550°C）或低温（250°C）烧灼，使有机磷矿化，然后用酸溶解，酸液中的磷来自有机磷和无机磷两部分；未经灼烧的土壤用同浓度酸浸提，酸液中的磷只来源于无机部分；两者相减即为土壤有机磷的含量。
浸提法先用硫酸再用氢氧化钠浸提出酸溶及碱溶有机和无机磷，减去其中无机磷从而得到有机磷含量。
两种方法均使用钼锑抗比色法测定溶液中的磷。
烧灼法的主要缺点是在烧灼过程中可能改变矿物态磷的溶解度，尤其是在高度风化的土壤中测定结果偏高；而且有机磷含量高时，高温可使部分磷挥发从而引入误差。
浸提法克服了烧灼法不适用于高度风化的热带土壤的缺点，其优点是将总有机磷进一步区分为酸溶性有机磷和碱溶性有机磷，二者的和即为土壤有机磷总量；缺点是浸提不易完全而且有机磷可能水解。
一、方法原理土壤经550℃灼烧，使有机磷化合物转化为无机态磷，然后与未经灼烧的同一土样，分别用0.2mol/L(1/2H2SO4)溶液浸提后测定磷量，所得结果的差值即为有机磷。
二、主要仪器高温电炉、烘箱、分光光度计。
三、试剂0.2mol/L(1/2H2SO4)溶液。
取浓H2SO46ml溶解于1000ml水中，标定。
四、操作步骤称取通过60目的风干土样品1.000g置于15ml瓷坩埚中，在550℃高温电炉内灼烧1h，取出冷却，用0.2mol/L(1/2H2SO4)溶液100ml将土样洗入200ml容量瓶中。
另外称取 1.000g同一土壤样品，放置在另一个200ml容量瓶中，加入0.2mol/L(1/2H2SO4)溶液100ml。
石灰性土壤无机磷分级的测定河北省地矿中心实验室 有机有机分析分析分析室室 （参考参考蒋柏藩蒋柏藩蒋柏藩等的等的等的资料资料资料整理整理整理））1范围本方法适用于石灰性土壤中Ca2-P、Ca8-P、Al-P、Fe-P、O-P、Ca10-P 无机磷的6级分级测定。
2原理土壤中不同形态的磷被适当的提取剂震荡提取，采用钼锑抗比色法测定提取液，吸光度与磷的含量成正比，与标准系列比较定量。
3试剂3.1 NaHCO 3溶液（pH=7.5）:称取21.0g NaHCO 3溶于990mL 水中，用1：1HCl 调节pH=7.5，用水稀释至1L ，塑料瓶中保存（不宜久放）。
3.2 HN 4AC 溶液（pH=4.2）:量取29.5mL 冰醋酸于800mL 水中，用氨水调节pH=4.2，用水稀释至1L 保存。
3.4 HN 4F 溶液（pH=8.2）: 称取18.5g HN 4F 溶于990mL 水中，用4mol/L HN 4OH 调节pH=8.2，用水稀释至1L ，塑料瓶中保存。
3.5 NaOH-Na 2CO 3溶液: 称取5.3g 无水Na 2CO 3和4.0gNaOH 溶于800mL 水中，用水稀释至1L ，塑料瓶中保存。
3.6 柠檬酸钠溶液：称取88.2g 柠檬酸三钠（Na 3C 6H 5O 7•2H 2O ）溶于900mL 热水中，用水稀释至1L 。
3.7 NaOH 溶液: 称取20g NaOH 溶于800mL 水中，用水稀释至1L ，塑料瓶中保存。
3.8 H2SO4溶液: 15mL浓H2SO4、溶于约800mL水中，稀释至1升。
3.9饱和NaCl溶液：400gNaCl溶于1升水中，待溶液呈饱和后使用。
3.10 H3B03溶液：49g硼酸溶于900mL热水中，冷却后稀释至1升。
3.11三酸混合液：H2SO4:HCIO4:HNO3以1:2:7的体积比混合。
3.12连二亚硫酸钠(保险粉Na2S2O4) 密封避光、防潮保存。
无机磷检测作业指导书1.试剂及其配制1.1硫酸溶液：c（H2SO4）=6.0mol/L在搅拌下将300mL硫酸（H2SO4,ρ=1.84g/mL）缓缓加到600mL水。
1.2钼酸铵溶液溶解28g钼酸铵【（NH4）6Mo7O24·4H2O】于200mL 水中。
溶液变混浊时，应重配。
1.3酒石酸锑钾溶液溶解6g酒石酸锑钾（C4H4KO7Sb·1/2H2O）于200mL水中，贮于聚乙烯瓶中。
溶液变混浊时，应重配。
1.4混合溶液搅拌下将45mL钼酸铵溶液加到200mL硫酸溶液中，加入5mL酒石酸锑钾溶液，混匀。
贮于棕色玻璃瓶中。
溶液变混浊时，应重配。
1.5抗坏血酸溶液溶解20g抗坏血酸（C6H8O6）于200mL水中，盛于棕色试剂瓶或聚乙烯瓶。
在4℃避光保存，可稳定1个月。
1.6磷酸盐标准贮备液称取1.011g硝酸钾（预先在110℃烘1h，置于干燥器中冷却至室温）用少量蒸馏水溶解后，转移至1000ml容量瓶中，稀释至标线，加1.0ml三氯甲烷，混匀，浓度为140.0mg/L，有效期半年。
1.7磷酸盐标准使用液吸取1.0ml标准贮备液于100ml容量瓶中，稀释至标线，混匀，浓度1.40mg/L。
2.绘制工作曲线2.1量取磷酸盐标准使用溶液0，0.50，1.00，2.00，3.00，4.00mL于50mL具塞量筒中，加水至50mL标线，混匀。
各浓度依次为0，0.030，0.060，0.120，0.180，0.240mg/L。
2.2各加1.0mL混合溶液，1.0mL抗坏血酸溶液，混匀。
显色5min后，注入5cm测定池中，以蒸馏水作参比，于882nm波长处测定其吸光值Ai。
其中零浓度为标准空白吸光值Ao。
2.3以吸光值（Ai—Ao）为纵坐标，相应的磷酸盐浓度（mg/L）为横坐标，绘制标准曲线。
3.水样测定量取50mL经0.45um微孔滤膜过滤的水样至具塞量筒中，按绘制工作曲线步骤测定吸光值Aw。
1. 掌握米吐尔直接显色法检测血清无机磷的原理和方法。
2. 熟悉实验操作流程，提高实验技能。
3. 了解血清无机磷的临床意义。
二、实验原理血清无机磷检测采用米吐尔直接显色法，该法基于磷在酸性溶液中与钼酸铵反应生成磷酸钼酸络合物，再被N-甲基-对氨基苯酚硫酸盐（米吐尔）还原生成蓝色复合物。
通过比色法测定蓝色复合物的吸光度，进而计算出血清无机磷的含量。
三、实验材料1. 试剂：（1）钼酸铵溶液：在50ml去离子水中加浓H2SO4 3.3ml，再加钼酸铵0.2克溶解后加吐温-80 5ml，最后加去离子水至100ml。
（2）N-甲基-对氨基苯酚硫酸盐（米吐尔）溶液：称取对甲氨基酚硫酸盐2克溶于80ml去离子水中，加无水硫酸钠5克；最后加去离子水至100ml。
（3）显色应用液：取1液10ml，2液1.1ml混合即可应用。
（4）磷标准液：无机磷标准贮存液（1ml含1mgP）称取无水磷酸二氢钾（KH2PO4）4.39克用去离子溶解后移入1L容量瓶中，并稀释至刻度，再加氯仿2ml防腐，置冰箱中保存。
2. 仪器：（1）离心机（2）分光光度计（3）移液器（4）试管（5）比色皿3. 样品：待测血清1. 标准曲线的绘制：（1）取6支试管，编号1-6。
（2）分别加入0、0.1、0.2、0.3、0.4、0.5ml磷标准液，用去离子水定容至1ml。
（3）各管加入显色应用液1ml，混匀，室温放置10分钟。
（4）用分光光度计在660nm波长下测定各管吸光度。
（5）以磷浓度为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制标准曲线。
2. 样品测定：（1）取6支试管，编号1-6。
（2）分别加入0、0.1、0.2、0.3、0.4、0.5ml待测血清，用去离子水定容至1ml。
（3）各管加入显色应用液1ml，混匀，室温放置10分钟。
（4）用分光光度计在660nm波长下测定各管吸光度。
（5）根据标准曲线，计算样品中无机磷含量。
五、实验结果1. 标准曲线：以磷浓度为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制标准曲线，计算相关系数R²。
无机磷（紫外直接法）测定标准操作程序1.摘要适用于定量测定人血清样本中无机磷的含量，作临床辅助诊断用。
2.适用范围程序适用于AU5811自动生化分析仪检测脑脊液及尿蛋白的浓度。
3.职责使用AU5811自动生化分析仪进行测定无机磷浓度的工作人员要严格按照本SOP程序进行,室负责人监督管理；本SOP的改动，可由任一使用本SOP的工作人员提出，并报经生化室负责人、科主任签字批准生效。
4.检测方法上海科华生物工程股份有限公司生产的无机磷测定试剂盒采用的是紫外直接法。
5.原理无机磷＋钼酸铵＋硫酸还原磷酸钼酸络合物络合物的生成，引起在波长340nm处吸光度的上升，吸光度的变化与无机磷含量成正比。
6.仪器AU5811自动生化分析仪7.试剂7.1试剂来源：上海科华生物工程股份有限公司提供7.2试剂瓶内主要成分：硫酸≥220mmol/L，钼酸铵≥1.00mmol/L，表面活性剂适量。
7.3试剂稳定性：试剂避光保存于2-8℃，若无污染，可稳定至失效期，本试剂有效期为12个月。
试剂不可冰冻。
7.4试剂准备：试剂为即用式。
8.标准品和质量控制8.1校准程序：使用科华公司提供的标准品对自动分析仪进行校准。
按照公司标准品使用要求，并以9g/L氯化钠溶液或去离子水为空白，经校准测定，仪器自动对标准品响应量通过合适的数学模型绘制校准曲线。
8.2质控品：罗氏公司提供的生化复合定值质控血清做为室内质控品。
每日在测定前做一次质控，加试剂后做一次质控。
该质控品为干粉包装，在2-8℃冰箱可稳定到失效期，使用前用5ml去离子水复溶，待质控物充分溶解（大约30分钟）后使用。
8.3质控数据管理：按程序对检验后的质控后结果进行转换，及时质控数据进行分析处理，如出现失控值，应及时分析失控原因，并填写好相关失控记录。
8.4质控判断规则：按《Westgard多规则质控方法测定标准操作程序》8.5室间质评：分别参加河北省临检中心室间质评，对回报的室间质评结果按《室间质量评价程序》进行处理。
