下载文档原格式
柠檬酸发酵过程中黑曲霉α-葡萄糖苷酶和糖化酶变化的研究杨赢;王德培;高年发【期刊名称】《中国酿造》【年(卷),期】2013(032)001【摘要】以目前柠檬酸生产菌为出发菌株,进行N+入诱变得到一株柠檬酸高产菌株黑曲霉LD20,将其在500m3发酵罐上进行发酵,分别对发酵过程中α-葡萄糖苷酶、糖化酶、总糖、总酸、还原糖、葡萄糖和pH进行了跟踪测定,结果表明糖化酶GA在20h达到最高酶活895.16U/mL,α-葡萄糖苷酶TGA在24h达到最高酶活322.52U/mL,在整个发酵过程中GA的平均酶活力是TGA的2.9倍,说明在柠檬酸发酵过程中,发酵液的糖化作用主要依赖于GA;在柠檬酸发酵后期TGA比GA对酸有更强的耐受性,主要起到转苷作用,将发酵液中的还原糖转化为非发酵性的糖类,从而生成不能被黑曲霉所利用的残糖.【总页数】3页(P22-24)【作者】杨赢;王德培;高年发【作者单位】天津科技大学生物工程学院,天津300457;天津科技大学生物工程学院,天津300457;工业微生物教育部重点实验室,天津300457;天津科技大学生物工程学院,天津300457;工业微生物教育部重点实验室,天津300457【正文语种】中文【中图分类】TQ921【相关文献】1.航天诱变黑曲霉ZM-8菌株固态发酵产β-葡萄糖苷酶的研究 [J], 刘星斌;张宗舟;蔺海明;马旭光2.柠檬酸高浓度发酵过程中糖化酶活性对柠檬酸发酵的影响 [J], 赵祥颖;乔君;马钦元;刘建军;田延军;范宜晓;赵晨3.低能N+注入选育黑曲霉β-葡萄糖苷酶高产菌株及其发酵优化研究 [J], 刁金山;王丽;陈振;刘会;聂光军;郑之明4.黑曲霉产β-葡萄糖苷酶发酵条件的研究 [J], 赵子高;吕世峰;杨付伟;闫振丽;王林凤5.黑曲霉液体发酵制备β-葡萄糖苷酶的研究 [J], 刘敏;欧阳嘉;勇强;余世袁因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
β-葡聚糖酶活力测定方法• 1 原理•β-葡聚糖酶(EC.3.2.1.6)水解1，3（4）-β-D-葡聚糖苷键，放出还原糖基团与3，5-二硝基水杨酸(DNS试剂)发生显色反应，其颜色的深浅与还原糖的含量成正比关系，在540nm测其光的吸收值，查标准曲线（以葡萄糖计），可得到还原糖的量，据此计算β-葡聚糖酶的活力。
• 2 仪器和设备• 2.1 分析天平：精度0.0001g• 2.2 恒温水浴：精度±0.2℃• 2.3 计时表• 2.4 分光光度计• 2.5 沸水浴器• 2.6 振荡混合器• 2.7 pH计: 精度0.01pH单位• 3 试剂和溶液• 3.1 0.1M乙酸－乙酸钠缓冲溶液（pH5.0）•溶液A:量取冰醋酸6ml，定容至1000ml，制成0.1M醋酸溶液。
•溶液B:称取8.2g醋酸钠，溶解定容至1000ml，制成0.1M醋酸钠溶液。
•使用时以A:B =3:7的比例混合，低温冷藏备用。
• 3.2 1%的β—葡聚糖溶液的配制•准确称取0.25gβ—葡聚糖放入100ml锥形瓶中，加2ml无水乙醇摇匀到无可见颗粒。
加20ml无离子水混合15分钟，盖紧塞子在沸水中煮5分钟，放置室温自然冷却，或用自来水流水降温。
将已冷却到室温的底物溶液倾入一只25ml容量瓶中，加入2.5ml1M醋酸缓冲液（pH5.0），并用无离子水定容到25ml。
• 3.3 3,5—二硝基水杨酸（DNS）溶液•溶液A:称分析纯的NaOH 104g溶于1300ml水中,加入30g分析纯3,5－二硝基水杨酸。
•溶液B:称分析纯酒石酸钾钠910g，溶于2500ml水中，再称取25g重蒸苯酚和25g无水亚硫酸钠加入酒石酸钾钠溶液。
•将A、B溶液混合，加入1200ml水，定容5000ml，贮存于棕色瓶中，暗处放置一星期后过滤使用。
• 3.4 0.1%苯甲酸• 0.1g苯甲酸加入大约80ml无离子水中溶解，用无离子水定容至100ml。
pNPG法测定纤维素酶系中β—葡萄糖苷酶
姚卫蓉;丁霄霖
【期刊名称】《微生物学通报》
【年(卷),期】1998(025)003
【摘要】本文报道快速测定β－葡萄糖苷酶活力的方法，此法对ｐＮＰＧ为底物，利用β－葡萄糖苷酶将其分解成ｐＮＰ及葡萄糖，而ｐＮＰ在碱性条件下显色的原理定酶活，通过对各测定条件的研究，确定了测定方法。
【总页数】2页(P982-983)
【作者】姚卫蓉;丁霄霖
【作者单位】无锡轻工大学食品学院60#;无锡轻工大学食品学院60#
【正文语种】中文
【中图分类】Q55
【相关文献】
1.pNPG法测定纤维素酶系中β-葡萄糖苷酶 [J], 李春江;邢淑梅;孙蕾
2.β-葡萄糖苷酶产生菌的筛选及其所产纤维素酶酶系组成分析 [J], 赵林果;周潭澈;孟鹏
3.超声辅助纤维素酶解提取大叶驼蹄瓣总黄酮工艺优化及其抑制α-葡萄糖苷酶活
性研究 [J], 杨晓绒; 张相锋; 焦子伟
4.一种测定粗纤维素酶中β-葡萄糖苷酶酶活方法的建立 [J], 李旭晖;朱明军;郭启
军
5.纤维素酶液中β-葡萄糖苷酶的分离纯化 [J], 宋娜娜;宋向阳;连之娜;勇强;余世袁
因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
安徽农业大学学报,1998,25(3):304-309Journal of A nhui A gricultural U niversity黑曲霉Β-葡萄糖苷酶的活力测定和酶学性质Ξ李 平 宛晓春丁霄霖 陶文沂(安徽农业大学轻工学院,合肥230036)(无锡轻工大学)摘 要 以P-N PG为底物,通过底物浓度、反应温度、反应时间、反应pH的考察,确定了黑曲霉Β-葡萄糖苷酶酶活的最佳测定条件;并对该酶的pH稳定性、热稳定性、米氏常数等进行了研究。
关键词 黑曲霉 Β-葡萄糖苷酶 测定条件 性质分类号 T S20113Β-葡萄糖苷酶能将水果、蔬菜、茶叶等中的风味前体物质Β-糖苷[1]水解为具有浓郁天然风味的香气物质,以改良因加工、贮藏等因素造成对食品感官性状——风味的影响;同时还能协助纤维素酶将纤维素水解为葡萄糖[2],具有重要的理论和实用价值。
Β-葡萄糖苷酶的测定方法很多,概括起来主要有电化法、荧光法、分光光度法等。
电化法由Gu ilbau lt和K ram er[3]设计,以扁桃苷为底物,根据所产生的氢化物,用与自发(内)电解池相联结的一对银—铂电极来测定其葡萄糖苷酶活性;Rob in son[4]使用4-甲基伞形酮的Β-D葡萄糖苷作为底物,经Β-葡萄糖苷酶作用,专一地分解为具有强烈荧光的4-甲基伞形酮,此荧光法灵敏度高且快速;分光光度法[5]可用水杨苷为底物,将水杨苷裂解为水杨醇和Β-D葡萄糖,然后对所产生的葡萄糖进行比色测定;也可用熊果苷(Β-D-葡萄苷-对苯二酚)作为底物,对产生的葡萄糖可用碘量法加以测定;另外还可用对-硝基苯基-Β-D-葡糖苷(P-N PG)为底物,对产生的对—硝基苯进行比色测定。
本试验采用P-N PG为底物的比色测定法,该法简单、快速、灵敏度高[6],且所需仪器常见。
1 材料与方法111 材料菌种:黑曲霉,来源于无锡轻工大学。
培养基:斜面保藏培养基,PDA;发酵培养基,麸皮3%,(N H4)2SO4012%,另加适量无机盐溶液。
第26卷第2期2007年3月 食品与生物技术学报Journal of Food Science and Biotechnology V o l.26 N o.2M ar. 2007 文章编号:1673-1689(2007)02-0107-08 收稿日期:2006-12-29.作者简介:李华(1959-),男,重庆梁平人,教授,博导,主要从事分子生物学及葡萄与葡萄酒方面研究.Email :putj@β-葡萄糖苷酶活性测定方法的研究进展李华, 高丽(西北农林科技大学葡萄酒学院,陕西杨凌712100)摘 要:介绍了葡萄和葡萄酒中β-葡萄糖苷酶的研究概况,理化性质、酶活测定方法,以及不同来源的酶活检测的研究概况,并且经过分析提出以对硝基苯基β-D -葡萄糖苷(pN PG )为底物检测葡萄浆果中的β-葡萄糖苷酶酶活的关键影响因素:粗酶液的制备、酶最适反应温度、最佳反应时间、缓冲液类型和pH 及最佳吸收波长。
关键词:葡萄;β-葡萄糖苷酶;活性中图分类号:Q 55文献标识码:AResearch Advance on Methods of determining β-Glucosidase ActivityLi Hua , GAO Li(Colleg e of Enolo gy ,N o rthwest Univ ersity of A g riculture &Fo restry ,Yangling 712100,China )Abstract :Aro ma is one o f the impor tant factors that determining the character and quality o f w ine.β-g lucosidase is a kind of key enzy me w hich releasing aroma precurso rs.In this manuscript ,the prog re sses of the chemical pro perties ,determination methods ,and the source o f β-g lucosidase w ere review ed.On the o ther hand ,the key facto rs that involv e in the β-gluco sidasedetermination method w ith p -Nitrophenyl -β-D -gluco py ranoside as substrate as follow :tem perature ,reactio n tim e ,buffe r type ,pH and abso rb w avelength.Key words :g rape ;β-glucosidase ;activities 典型的葡萄酒风味主要源于葡萄中的挥发性化合物,然而葡萄浆果中存在着游离态和结合态两大类呈香物质。
序处理方法与比色法一致。
在此基础之上精密称取1.5g 剂量淀粉，在250.0ml 标准容积容量瓶中定容，制备浓度分别为0g/l 、 0.075g/l 、0.15g/l 、0.3g/l 、0.45g/l 、0.6g/l 、0.9g/l 标准溶液，吸取1.0ml 剂量淀粉溶液加入装有的5.0ml 剂量稀释碘液以及0.5ml 剂量盐酸溶液试管内，充分混合均匀，以稀释碘液以及盐酸溶液为空白对照，对吸光度进行测定，并形成标准曲线。
精密称取10.0ml 剂量可溶性淀粉溶液(溶液浓度为4.0g/l)、5.0ml 剂量磷酸缓冲溶液以及10.0ml 无菌水溶液，置入150.0ml 标准容积三角瓶内，充分混合均匀后在60.0℃水浴条件条件下维持8.0min 。
自加入1.0ml 剂量经稀释待测酶液开始计时，充分混合反应，维持10.0min 。
吸取1.0ml 剂量反应液加入含5.0ml 稀释碘液以及0.5ml 验算溶液试管内，充分混合均匀，在660.0nm 检测波长条件下对吸光度进行测定。
定义测定酶样浓度为c ，反应过程中加入待测定酶液量的为v ，反应时间为t ，则淀粉酶活力X 可以用如下式(2)所示方式进行计算：(2)2 结果与分析2.1 反应时间2.1.1 比色法除前期准备工作以外，固体曲浸出液制备耗时为120.0min ， 成品曲液化力会对液化时间产生直接影响。
以高温曲为例，按照式(1)计算所得液化力。
30g/g *hX t＝一般情况下，高温曲液化力检验合格标准在0.2g/g*h ～ 0.6g/g*h 范围内。
液化力位于底限的情况下，反应时间为150.0min ，液化力位于高限的情况下，反应时间为50.0min 。
假定前期准备阶段以及液化期间反应液制备耗时为30.0min ，则合格曲液化力检测时间在200.0～300.0min 范围内，导致部分液化力偏低不合格曲产生，造成检测耗时较长。
2.1.2 分光光度法除前期准备工作以外，大曲粉浸提前准备工作耗时为15.0min ，淀粉溶液配置等相关准备工作可以与酶液提取同期进行。
测定葡萄糖氧化酶活力的一种简便方法
周建芹;陈韶华;王剑文
【期刊名称】《实验技术与管理》
【年(卷),期】2008(025)012
【摘要】利用靛蓝胭脂红褪色分光光度法测定葡萄糖氧化酶催化葡萄糖溶液产生
的过氧化氢浓度,经过标准曲线转换得到葡萄糖氧化酶的活力.研究了缓冲液pH值、水浴温度、靛蓝胭脂红用量等对葡萄糖氧化酶活力测定的影响.结果表明:利用靛蓝
胭脂红褪色分光光度法测定葡萄糖氧化酶活力时,缓冲液最佳pH值为4、最佳水浴温度为100℃、靛蓝胭脂红最佳用量为1.3 mL.此方法的重现性较好,反应系统较稳定.
【总页数】3页(P58-60)
【作者】周建芹;陈韶华;王剑文
【作者单位】苏州大学,医学部药学院,江苏,苏州,215123;苏州大学,医学部实验中心,江苏,苏州,215123;苏州大学,医学部药学院,江苏,苏州,215123
【正文语种】中文
【中图分类】R331
【相关文献】
1.一种检测葡萄糖氧化酶活力的新方法 [J], 任婷月;周万里;张利群;毕春元;李敬龙
2.黑曲霉ZM-8菌株菌丝体中葡萄糖氧化酶活力测定 [J], 马建忠;刘金鸽;王永刚;
火文
3.小檗碱和黄芩苷对葡萄糖氧化酶法测定葡萄糖含量干扰作用研究 [J], 涂秀英;李瑛;魏学鑫;于梅;徐国良;章常华
4.葡萄糖氧化酶法用于测定糖尿病患者口服葡萄糖耐量试验的研究 [J], 左晓红;王文
5.一种检测葡萄糖氧化酶活力的新方法 [J], 惠瑶瑶; 郑斐; 王倩楠; 安贤惠
因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
