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脓肿分枝杆菌复合群药敏试验及耐药机制研究进展郭明日，朱彧△，孙海柏摘要：脓肿分枝杆菌复合群是非结核分枝杆菌病中最常见的快速生长型分枝杆菌之一，对大多数抗结核药物耐药，临床治疗难度大。
脓肿分枝杆菌复合群的3个亚种对多种抗生素的敏感性存在较大差异，临床实验室对其3个亚种的准确分型鉴定对于治疗药物的选择有重要价值。
中华医学会结核病学分会制定了非结核分枝杆菌病诊断与治疗指南（2020版），按照美国临床和实验室标准协会（CLSI ）分枝杆菌药敏试验标准（2018版）进行脓肿分枝杆菌药敏试验，建议根据药敏试验结果选用多药联合治疗方案。
现就脓肿分枝杆菌复合群药敏试验及对主要治疗药物的耐药机制的研究进展进行综述。
关键词：非结核分枝杆菌；微生物敏感性试验；抗药性，细菌；抗菌药；脓肿分枝杆菌复合群中图分类号：R446.5文献标志码：ADOI ：10.11958/20211209Research progress on drug sensitivity test and drug resistance mechanism ofMycobacterium abscessus complexGUO Ming-ri,ZHU Yu △,SUN Hai-bai Department of Clinical Laboratory,Haihe Hospital,Tianjin University,China Key Research Laboratory for Infectious DiseasePrevention for State Administration of Traditional Chinese Medicine,Tianjin 300350,China△ReviserE-mail:***************Abstract:Mycobacterium abscessus complex (MABC)is one of the most common fast-growing mycobacteria innontuberculosis mycobacterial diseases.Drug resistance to most of the antituberculosis drugs makes its clinical teratment very difficult.There are great differences in the sensitivity of the three subspecies of MABC to a variety of antibiotics.The accurate typing and identification of the three subspecies in clinical laboratory is of great value for the selection of therapeutic drugs.The tuberculosis branch of Chinese Medicine Association has formulated the guideline for the diagnosisand treatment of nontuberculosis mycobacterial disease (2020Edition),MABC susceptibility test should be carried out according to the standard of mycobacterium susceptibility test from Clinical and Laboratory Standards Institute (CLSI)of theUnited States (2018Edition).It is suggested that multidrug combination therapy should be selected according to the results of drug sensitivity test.In order to provide reference for related research,this paper reviewed the progress of drug sensitivitytest of MABC and its resistance mechanism to main therapeutic drugs.Key words:nontuberculous mycobacteria;microbial sensitivity tests;drug resistance,bacterial;anti-bacterial agents;Mycobacterium abscessus complex基金项目：2020年度天津市卫生健康科技项目（ZC20102）；天津市津南区科技局科技项目（201805003）作者单位：天津市海河医院、天津大学海河医院检验科；国家中医药管理局传染病重点研究室（邮编300350）作者简介：郭明日（1982），男，硕士，副主任检验师，主要从事病原菌分子耐药及鉴定方面研究。
为了研究细菌耐药性及其产生机制，本实验选取金黄色葡萄球菌作为研究对象，通过体外实验探究阿莫西林克拉维酸钾对金黄色葡萄球菌的最低杀菌浓度（MBC）和最小抑菌浓度（MIC）的影响，并分析其耐药性产生的原因。
二、实验材料1. 实验菌株：金黄色葡萄球菌标准菌株ATCC292132. 抗菌药物：阿莫西林克拉维酸钾3. 培养基：营养肉汤、营养琼脂4. 仪器设备：全自动微生物药敏鉴定仪、微量稀释器、恒温培养箱、移液器、离心机等三、实验方法1. 菌株活化：将金黄色葡萄球菌标准菌株ATCC29213接种于营养肉汤中，37℃恒温培养18-24小时，待菌液浓度达到1×10^8 CFU/mL时，用于后续实验。
2. MBC测定：采用微量稀释法，将阿莫西林克拉维酸钾药物浓度梯度稀释至1/2MIC，将活化后的金黄色葡萄球菌菌液按1:100的比例加入至稀释后的药物中，混匀后置于恒温培养箱中培养24小时，观察细菌生长情况，以无菌生长的最低药物浓度为MBC。
3. MIC测定：采用微量稀释法，将阿莫西林克拉维酸钾药物浓度梯度稀释至1/2MIC，将活化后的金黄色葡萄球菌菌液按1:100的比例加入至稀释后的药物中，混匀后置于恒温培养箱中培养24小时，观察细菌生长情况，以抑制细菌生长的最低药物浓度为MIC。
4. 耐药性分析：将金黄色葡萄球菌进行多步体外诱导试验，观察其在阿莫西林克拉维酸钾作用下耐药性的变化。
四、实验结果1. MBC和MIC测定结果：金黄色葡萄球菌对阿莫西林克拉维酸钾的MBC为16μg/mL，MIC为8μg/mL。
2. 耐药性分析结果：经过34天诱导后，金黄色葡萄球菌对阿莫西林克拉维酸钾的耐药性明显增强，MBC值是标准菌株MBC值的32倍。
1. 本实验结果显示，金黄色葡萄球菌对阿莫西林克拉维酸钾的耐药性随诱导时间的延长而逐渐增强，这可能与细菌产生的β-内酰胺酶有关。
β-内酰胺酶是一种能够水解β-内酰胺类抗生素的酶，导致药物失活，从而产生耐药性。
研究发现新型细菌抗生素对耐药性细菌的有效性实验报告近年来，细菌耐药性的问题日益严重，抗生素的有效性在医疗领域中备受关注。
为了探究新型细菌抗生素对耐药性细菌的有效性，我们进行了一系列的实验研究。
实验设计：我们选取了多种常见的耐药性细菌株进行实验，包括金黄色葡萄球菌、大肠杆菌等。
在实验开始前，我们对这些细菌株进行了药敏试验，确认其对传统抗生素的耐药性。
实验组分别接种了新型细菌抗生素及常规抗生素，对照组接种了常规抗生素。
我们观察了两组细菌的生长情况、细菌数量以及药物的杀菌效果。
实验结果：经过一段时间的观察，我们得出了以下结论：1. 新型细菌抗生素对耐药性细菌具有较强的抑制作用。
与常规抗生素相比，新型细菌抗生素能够更有效地控制细菌的生长，抑制其扩散。
2. 对照组的细菌在常规抗生素的作用下，细菌数量没有显著下降，甚至有些细菌株还表现出了抗药性进一步增强的趋势。
3. 在新型细菌抗生素的作用下，细菌数量迅速减少，并且在一段时间后保持较低的水平。
这说明新型细菌抗生素对耐药性细菌具有较好的杀菌效果。
实验分析：新型细菌抗生素的出现对抗药性细菌的治疗提供了新的希望。
与传统抗生素相比，新型细菌抗生素具有以下优势：1. 新型细菌抗生素采用了不同的作用机制，能够抑制细菌生长的不同环节，从而降低细菌产生耐药性的风险。
2. 对于多重耐药的细菌株，传统抗生素往往无法达到理想的治疗效果。
而新型细菌抗生素在这方面表现出了明显的优势，能够有效地杀灭这些耐药性细菌。
3. 新型细菌抗生素在药物的安全性上也有所改进，减少了对人体的不良反应。
实验结论：本次实验结果证实了新型细菌抗生素对耐药性细菌的有效性，为解决细菌耐药性问题提供了新的选择。
然而，需要进一步的研究来确定新型细菌抗生素的药物安全性以及耐药性的产生机制。
我们希望通过不断的探索和创新，为医疗领域提供更好的抗生素治疗方案，抑制细菌耐药性的持续发展，保护人类健康。
浅谈细菌多重耐药性的研究进展革兰阴性杆菌耐药性产生的主要机制为：细菌可以自身产生灭活酶，改变抑菌药物的结合位置的结构，并且降低细菌外膜的通透性，使得进入细菌内的抗菌药物被排出等等。
结核分枝杆菌中并没有质粒存在，只存在含有遗传基因的染色体。
inhA、gyrA、rrS、KatG、gyrB等基因突变会导致PZA、INH、乙硫异烟胺以及RFP耐药性主要原因。
染色体基因变异会导致耐药性产生。
细菌多重耐药性产生的防治对策包括以下几种：严格控制抗菌药物的使用、建立并完善耐药监控机制、改善抗生素的治疗措施以及积极研发新的抗耐药抗菌药物等等。
抗生素的长期作用，可以杀死大量的细菌，但是部分变异的优势菌会生存下来，这是细菌产生耐药性的主要原因。
该文在文献回顾的基础上，分析常见多重耐药菌的耐药机制，并综述了防治对策。
标签：细菌多重耐药性；研究进展细菌耐药性之所以产生，主要是因为细菌基因发生突变。
抗生素的长期作用，可以杀死大量的细菌，但是部分变异的优势菌会生存下来，这是细菌产生耐药性的主要原因。
患者使用一种抗生素，会导致细菌产生对这种抗生素甚至与之相似的抗生素的耐药性，并且一种细菌可以通过基因重组、整合子、质粒的交换等多种机制对抗生素产生耐药，细菌还可以通过遗传、多菌种播散等方式将耐药性基因传递、扩散，从而增加了耐药细菌的数量。
随着免疫抑制剂、抗生素等药物的广泛使用，细菌可以出现多种耐药性，并且其性质不断增强，趋于形成多重耐药、高度耐药的形势。
因此，细菌多重耐药性的研究对降低多重耐药性的发生率、提高药物的治疗效果具有至关重要的作用。
1 常见多重耐药菌耐药机制分析1.1 常见革兰阴性杆菌耐药机制革兰阴性杆菌耐药性产生的主要机制为：细菌可以自身产生灭活酶，改变抑菌药物的结合位置的结构，并且降低细菌外膜的通透性，使得进入细菌内的抗菌药物被排出等等。
①ECO：其所产生的ESBLs以及整合子等机制在一定程度上对于多重耐药性的产生具有促进作用。
细菌耐药性检测方法的研究进展马秀清;陈良安【摘要】明确致病菌的耐药特性是指导各种细菌感染性疾病治疗的关键。
常规药敏试验需要从标本中分离出菌株,操作烦琐、费时。
近年来,一些分子生物学技术在细菌耐药性检测领域取得了很大进步,但临床应用方面还有待改善。
本文重点介绍几种技术在细菌耐药性检测中的新进展,为临床实现细菌耐药性的快速准确检测提供参考。
【期刊名称】《解放军医学院学报》【年(卷),期】2015(036)004【总页数】4页(P404-406,F0003)【关键词】细菌;抗药性;药敏试验【作者】马秀清;陈良安【作者单位】解放军总医院呼吸科,北京100853【正文语种】中文【中图分类】R446.5随着抗生素的使用，耐药菌不断出现，特别是“超级耐药菌”的报道引起了全世界对细菌耐药性问题的关注。
因此，谨慎合理地使用抗生素显得尤为重要。
快速准确的检测致病菌耐药性是指导合理使用抗生素的关键。
常规的药敏试验需要从临床标本中分离出菌株，耗费时间长，且许多生长慢或不容易培养的细菌不能通过药敏试验进行耐药性检测。
近年来，聚合酶链反应(polymerase chain reaction，PCR)、基因芯片、飞行时间质谱、微流体芯片、全基因组测序等技术在快速检测细菌耐药性方面迅速发展。
本文就几种技术在快速检测细菌耐药性方面的新进展进行综述。
药敏试验是目前各实验室检测细菌耐药性的常规方法[1]，主要包括肉汤稀释法、琼脂稀释法、K-B纸片法、E-test实验及各种自动化药敏分析系统，如Vitek系统、MicroScan WalkAway系统、Phoenix Automated Microbiology系统等。
魏丹丹等[2]采用Vitek 2 Compact和MicroScan Walk Away 40 SI全自动微生物鉴定仪检测耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(methicillin-resistant staphylococcus aureus，MRSA)的灵敏度为95.45%和93.18%，特异度为94.12%和92.68%，符合率为94.87%和92.94%，提示两种系统均可用于MRSA的检测，但前提是需要分离临床菌株。
细菌对氟喹诺酮类药物耐药机制的研究进展喹诺酮类药物是一类由萘啶酸发展起来的合成抗菌药，其中氟喹诺酮类药物于20世纪80年代起陆续上市，属于第三代喹诺酮类药物，具有抗菌谱广、抗菌活性高、组织穿透性强等特点且可单药使用，对革兰阳性菌和革兰阴性菌均显示有良好的抗菌活性，广泛应用于临床各种感染性疾病的治疗。
近年来，随着氟喹诺酮类药物在临床中的广泛使用，对其耐药菌株也在世界各地频繁出现。
下面就细菌对氟喹诺酮类药物的耐药机制研究进展作一简要介绍。
细菌对氟喹诺酮类药物耐药的机制主要有——1）靶点的改变。
喹诺酮类药物的作用机制是针对细菌DNA复制过程中所需的拓扑异构酶。
拓扑异构酶Ⅱ和拓扑异构酶Ⅳ是喹诺酮类药物的主要作用靶点。
拓扑异构酶Ⅱ是由2个A亚基和2个B亚基组成的四聚体，分别为gyrA和gyrB[1, 2]。
拓扑异构酶Ⅳ是由2个C亚基和2个E亚基组成的四聚体，分别由parC和parE基因编码[3]。
在对喹诺酮类药物耐药的革兰阴性菌中，gyrA的改变最常见，其次是gyrB。
对喹诺酮类药物耐药的革兰阳性菌，拓扑异构酶Ⅳ的改变是主要的，且parC的改变比parE更常见[4]。
研究发现，革兰阴性菌对喹诺酮类药物耐药主要是由于gyrA和parC变异所致，其中变异位点最常见于gyrA的丝氨酸Ser83和天冬氨酸Asp87以及parC的丝氨酸Ser80和谷氨酸Glu84，其它位点的变异频率较低[5, 6]。
2）耐药性质粒。
不同研究人员先后在世界各地不同种属的细菌中发现了耐喹诺酮类药物质粒。
该质粒可在不同菌属间广泛传播，从而引起了人们的高度重视。
其中，整合子介导的多重耐药机制因可引起耐药基因高效、快速转移而备受重视。
质粒作为一种可移动基因元件，通过整合酶的作用捕获外来的耐药基因(包括对氨基糖苷类、喹喏酮类、磺胺类和消毒剂等药物耐药的基因)。
整合子-基因盒系统是新的可移动基因元件，能捕获和整合细菌的耐药基因，是细菌多重耐药形成和传播的主要内在机制[7~9]。
