细菌药敏试验及耐药机制研究进展

脓肿分枝杆菌复合群药敏试验及耐药机制研究进展郭明日，朱彧△，孙海柏摘要：脓肿分枝杆菌复合群是非结核分枝杆菌病中最常见的快速生长型分枝杆菌之一，对大多数抗结核药物耐药，临床治疗难度大。

脓肿分枝杆菌复合群的3个亚种对多种抗生素的敏感性存在较大差异，临床实验室对其3个亚种的准确分型鉴定对于治疗药物的选择有重要价值。

中华医学会结核病学分会制定了非结核分枝杆菌病诊断与治疗指南（2020版），按照美国临床和实验室标准协会（CLSI ）分枝杆菌药敏试验标准（2018版）进行脓肿分枝杆菌药敏试验，建议根据药敏试验结果选用多药联合治疗方案。

现就脓肿分枝杆菌复合群药敏试验及对主要治疗药物的耐药机制的研究进展进行综述。

关键词：非结核分枝杆菌；微生物敏感性试验；抗药性，细菌；抗菌药；脓肿分枝杆菌复合群中图分类号：R446.5文献标志码：ADOI ：10.11958/20211209Research progress on drug sensitivity test and drug resistance mechanism ofMycobacterium abscessus complexGUO Ming-ri,ZHU Yu △,SUN Hai-bai Department of Clinical Laboratory,Haihe Hospital,Tianjin University,China Key Research Laboratory for Infectious DiseasePrevention for State Administration of Traditional Chinese Medicine,Tianjin 300350,China△ReviserE-mail:***************Abstract:Mycobacterium abscessus complex (MABC)is one of the most common fast-growing mycobacteria innontuberculosis mycobacterial diseases.Drug resistance to most of the antituberculosis drugs makes its clinical teratment very difficult.There are great differences in the sensitivity of the three subspecies of MABC to a variety of antibiotics.The accurate typing and identification of the three subspecies in clinical laboratory is of great value for the selection of therapeutic drugs.The tuberculosis branch of Chinese Medicine Association has formulated the guideline for the diagnosisand treatment of nontuberculosis mycobacterial disease (2020Edition),MABC susceptibility test should be carried out according to the standard of mycobacterium susceptibility test from Clinical and Laboratory Standards Institute (CLSI)of theUnited States (2018Edition).It is suggested that multidrug combination therapy should be selected according to the results of drug sensitivity test.In order to provide reference for related research,this paper reviewed the progress of drug sensitivitytest of MABC and its resistance mechanism to main therapeutic drugs.Key words:nontuberculous mycobacteria;microbial sensitivity tests;drug resistance,bacterial;anti-bacterial agents;Mycobacterium abscessus complex基金项目：2020年度天津市卫生健康科技项目（ZC20102）；天津市津南区科技局科技项目（201805003）作者单位：天津市海河医院、天津大学海河医院检验科；国家中医药管理局传染病重点研究室（邮编300350）作者简介：郭明日（1982），男，硕士，副主任检验师，主要从事病原菌分子耐药及鉴定方面研究。

细菌耐药性检测方法的研究进展马秀清;陈良安【摘要】明确致病菌的耐药特性是指导各种细菌感染性疾病治疗的关键。

常规药敏试验需要从标本中分离出菌株,操作烦琐、费时。

近年来,一些分子生物学技术在细菌耐药性检测领域取得了很大进步,但临床应用方面还有待改善。

本文重点介绍几种技术在细菌耐药性检测中的新进展,为临床实现细菌耐药性的快速准确检测提供参考。

【期刊名称】《解放军医学院学报》【年(卷),期】2015(036)004【总页数】4页(P404-406,F0003)【关键词】细菌;抗药性;药敏试验【作者】马秀清;陈良安【作者单位】解放军总医院呼吸科,北京100853【正文语种】中文【中图分类】R446.5随着抗生素的使用，耐药菌不断出现，特别是“超级耐药菌”的报道引起了全世界对细菌耐药性问题的关注。

因此，谨慎合理地使用抗生素显得尤为重要。

快速准确的检测致病菌耐药性是指导合理使用抗生素的关键。

常规的药敏试验需要从临床标本中分离出菌株，耗费时间长，且许多生长慢或不容易培养的细菌不能通过药敏试验进行耐药性检测。

近年来，聚合酶链反应(polymerase chain reaction，PCR)、基因芯片、飞行时间质谱、微流体芯片、全基因组测序等技术在快速检测细菌耐药性方面迅速发展。

本文就几种技术在快速检测细菌耐药性方面的新进展进行综述。

药敏试验是目前各实验室检测细菌耐药性的常规方法[1]，主要包括肉汤稀释法、琼脂稀释法、K-B纸片法、E-test实验及各种自动化药敏分析系统，如Vitek系统、MicroScan WalkAway系统、Phoenix Automated Microbiology系统等。

魏丹丹等[2]采用Vitek 2 Compact和MicroScan Walk Away 40 SI全自动微生物鉴定仪检测耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(methicillin-resistant staphylococcus aureus，MRSA)的灵敏度为95.45%和93.18%，特异度为94.12%和92.68%，符合率为94.87%和92.94%，提示两种系统均可用于MRSA的检测，但前提是需要分离临床菌株。

抗菌药物敏感性实验与细节耐药性监测来源：查验医学在线2009-4-15 南网编辑2010-7-6一、需氧菌及兼性厌氧菌的药物敏感实验(一)纸片琼脂扩散法纸片琼脂扩散法又称Kirby-Bauer实验，是操作最简易、利用最普遍的抗菌药物敏感性实验。

1．实验原理将含有定量抗菌药物的纸片贴在已接种测试菌的琼脂平板上。

纸片中所含的药物吸收琼脂中的水分溶解后不断向纸片周围区域扩散形成递减的梯度浓度。

在纸片周围抑菌浓度范围内测试菌的生长被抑制，从而形成透明的抑菌圈。

抑菌圈的大小反映测试菌对测定药物的敏感程度，并与该药对测试菌的最低抑菌浓度(MIC)呈负相关关系，即抑菌圈越大，MIC越小。

2．培育基和抗菌药物纸片(1)培育基：水解酪蛋白(Mueller-Hin-ton，MH)培育基是CLSI/NCCLS采用的兼性厌氧菌和需氧菌药敏实验标准培育基，pH值为～，对那些营养要求高的细菌如流感嗜血杆菌、淋病奈瑟菌、链球菌等需加入补充物质。

琼脂厚度为4mm。

配制琼脂平板当天利用或置塑料密封袋中4℃保留，利用前应将平板置35℃孵育箱孵育，使其表面干燥。

(2)抗菌药物纸片：选择直径为6.35mm，吸水量为20ul的专用药敏纸片用逐片加样或浸泡方式使每片含量达到规定所示。

含药纸片密封贮存2～8℃或-20℃无霜冷冻箱内保留，β-内酰胺类药敏纸片应冷冻贮存，且不超过l周。

利用前将贮存容器移至室温平衡l～2h，避免开启贮存容器时产生冷凝水。

3．细菌接种细菌接种采用直接菌落或细菌液体生长方式。

用麦氏比浊标准的菌液浓度。

校正浓度后的菌液应在15min内接种完毕。

接种步骤如下：①用无菌棉拭子蘸取菌液，在管内壁将多余菌液旋转挤去后，在琼脂表面均匀涂片接种3次，每次旋转60°，最后沿平板内缘涂抹1周；②平板置室温下干燥3～5min，用纸片分离器或无菌镊将含药纸片紧贴于琼脂表面；③置35℃孵育箱孵育16～18h后阅读结果，对甲氧西林和万古霉素药敏感实验结果应孵育24h。

细菌药敏试验报告试验目的：本次试验旨在了解不同细菌对不同抗生素的敏感性情况，为制定治疗方案提供参考。

试验原理：通过对不同品种的细菌进行耐药性测试，可以确定其对各类抗生素的敏感性情况。

常用的药敏试验方法包括扩散法、碟扩散法、荧光染色法等。

本次试验采用了碟扩散法，将抗生素置于小型圆形纸片上，贴于培养基表面，观察形成的菌落周围的抑制圆来判断细菌对该抗生素的敏感性情况。

试验过程：1.准备工作：制备不同浓度的抗生素和培养基。

2.取样：将不同类型的细菌分别提取复制，并用增殖培养基培养。

3.打药敏试验：将抗生素置于小型圆形纸片上，贴于培养基表面。

4.观察结果：观察形成的菌落周围的抑制圆来判断该细菌对该抗生素的敏感性。

试验结果：根据本次试验结果，不同类型的细菌对不同抗生素的敏感性情况如下：菌种青霉素红霉素头孢菌素氯霉素大环内酯金黄色葡萄球菌敏感中度敏感抗性抗性中度敏感肺炎链球菌敏感中度敏感中度敏感抗性中度敏感大肠杆菌中度敏感抗性抗性敏感中度敏感沙门氏菌中度敏感抗性抗性敏感中度敏感结论：根据上述结果，我们可以得出以下结论：1.在治疗金黄色葡萄球菌时，不推荐使用头孢菌素或氯霉素，应优先考虑青霉素或红霉素。

2.肺炎链球菌对头孢菌素和氯霉素的反应不如青霉素，建议优先使用青霉素。

3.大肠杆菌和沙门氏菌对许多常见抗生素耐药，建议在治疗时注意综合考虑，选择适当的治疗方案。

提示：为保证试验结果准确可靠，建议在试验过程中注意以下事项：1.使用无菌器皿和工具，以免污染培养基和细菌样本。

2.制备完善、严格控制抗生素的浓度，避免因药效差致使结果不准确。

3.在选择抗生素和制定治疗方案时，应根据不同的病原菌和临床情况综合考虑。

药敏试验耐药实验报告1. 引言药敏试验耐药实验是一种重要的药物敏感性检测方法，用于评估细菌对药物的耐药性。

在这个实验中，我们通过药物与细菌的相互作用，确定细菌对不同药物的感受性，从而为临床合理使用抗生素提供参考。

2. 实验设计2.1 实验材料- 不同种类的细菌培养物- 不同种类的抗生素药物- 维生素和蛋白胨培养基- 培养皿和排线器- 实验室培养箱、离心机、显微镜等实验设备2.2 实验步骤1. 选择待测细菌进行预培养；2. 制备不同稀释浓度的抗生素药物溶液；3. 制备含有维生素和蛋白胨的培养基；4. 在培养皿中接种不同稀释浓度的抗生素溶液和细菌培养物，分别标记；5. 培养皿置于培养箱中以适宜的温度孵育；6. 观察培养皿中细菌生长情况，并记录结果；7. 使用排线器在耐药圈周围绘制抗生素浓度的梯度图；8. 根据抗生素浓度的梯度图分析耐药性的形成。

3. 实验结果通过药敏试验，我们观察到不同细菌对抗生素药物的感受性存在差异。

在培养皿中，对于某些细菌，抗生素溶液抑制了其生长，形成明显的抑菌区，而对于其他细菌，抗生素溶液的影响较小，细菌能够生长并形成耐药圈。

据分析，耐药圈的大小与抗生素的浓度成正比。

当抗生素浓度较高时，耐药圈较小；而当抗生素浓度较低时，耐药圈较大。

这一结果表明，细菌通过适应环境选择抗生素的浓度和类型达到耐药性。

4. 结论1. 细菌对抗生素的耐药性与抗生素的浓度和类型有关；2. 对某些细菌而言，抗生素溶液能够抑制其生长并形成明显的抑菌区；3. 耐药圈的大小与抗生素浓度成正比；4. 药物敏感性检测可为临床合理使用抗生素提供参考。

5. 讨论与展望本实验利用药物敏感性检测方法评估了细菌对抗生素的耐药性，结果表明细菌的耐药性与抗生素的浓度和类型有关，这为合理选用抗生素提供了理论依据。

然而，本实验只考虑了细菌的耐药性，未考虑其他因素如表面结构或基因突变等对细菌耐药性的影响。

未来的研究可以将这些因素纳入考虑，将药物敏感性检测方法与其他手段相结合，深入探究细菌耐药性形成的机制。

病原菌的多重抗药性和耐药性的研究随着人们健康意识的提高，医疗技术的不断发展，许多人能够通过药物来控制或治愈多种疾病。

然而，目前全球面临着一项极其严重的挑战：病原菌的多重抗药性和耐药性的不断加剧。

据估计，每年因多重抗药性病原菌感染而死亡的人数约为70万人，这个数字可能会不断增加。

因此，病原菌的多重抗药性和耐药性一直是生物医学界研究的热点之一。

如何定义病原菌的多重抗药性和耐药性？病原菌的多重抗药性通常是指细菌对两种或以上不同类别的抗生素产生抗药性，例如药敏试验所处最高浓度的抗生素均不能抑制其生长。

而耐药性则是指病原菌对某一种或几种抗生素产生抗药性，即在药敏试验中高浓度抗生素也不能抑制其生长。

理解这两个概念很重要，因为研究多重抗药性和耐药性的机制与发展，可以更好地理解和预测未来可能出现的抗生素和病原菌的相互作用，以及更加有效地开发抗生素。

为什么会出现病原菌的多重抗药性和耐药性？病原菌对抗生素的耐药性和多重抗药性是因为它们能够快速地发生突变，或者通过水平基因转移等机制获得新的抗性基因或DNA片段。

例如，许多细菌可以通过共享“耐药基因质”，以快速适应多种环境和药物压力。

而病毒和真菌也会发展耐药性，因为它们拥有不同于细菌的生存策略。

例如，它们可以通过繁殖大量个体来保证在遇到抗衡自己的环境压力时能够继续存在。

如何研究病原菌的多重抗药性和耐药性？病原菌的多重抗药性和耐药性研究需要多个学科的协同作用。

生物化学、细菌学、基因组学、药理学、临床医学和流行病学方面的专家都需要参与其中。

研究方法包括：药敏试验、PCR、基因测序、功能分离、蛋白质组学等。

这些方法可以帮助科学家了解病原菌耐药性的机制，如何预测未来的流行病，以及如何对抗耐药菌难题。

如何应对病原菌的多重抗药性和耐药性？预防和治疗是减少病原菌的多重抗药性和耐药性的基本方法。

预防病原菌感染的关键在于采取高效卫生监管措施，包括饮用安全的水、消毒设备和清洁工作。

预防感染还包括使用药物时的合理用药和大规模使用抗菌药物。

研究发现新型细菌抗生素对耐药性细菌的有效性实验报告近年来，细菌耐药性的问题日益严重，抗生素的有效性在医疗领域中备受关注。

为了探究新型细菌抗生素对耐药性细菌的有效性，我们进行了一系列的实验研究。

实验设计：我们选取了多种常见的耐药性细菌株进行实验，包括金黄色葡萄球菌、大肠杆菌等。

在实验开始前，我们对这些细菌株进行了药敏试验，确认其对传统抗生素的耐药性。

实验组分别接种了新型细菌抗生素及常规抗生素，对照组接种了常规抗生素。

我们观察了两组细菌的生长情况、细菌数量以及药物的杀菌效果。

实验结果：经过一段时间的观察，我们得出了以下结论：1. 新型细菌抗生素对耐药性细菌具有较强的抑制作用。

与常规抗生素相比，新型细菌抗生素能够更有效地控制细菌的生长，抑制其扩散。

2. 对照组的细菌在常规抗生素的作用下，细菌数量没有显著下降，甚至有些细菌株还表现出了抗药性进一步增强的趋势。

3. 在新型细菌抗生素的作用下，细菌数量迅速减少，并且在一段时间后保持较低的水平。

这说明新型细菌抗生素对耐药性细菌具有较好的杀菌效果。

实验分析：新型细菌抗生素的出现对抗药性细菌的治疗提供了新的希望。

与传统抗生素相比，新型细菌抗生素具有以下优势：1. 新型细菌抗生素采用了不同的作用机制，能够抑制细菌生长的不同环节，从而降低细菌产生耐药性的风险。

2. 对于多重耐药的细菌株，传统抗生素往往无法达到理想的治疗效果。

而新型细菌抗生素在这方面表现出了明显的优势，能够有效地杀灭这些耐药性细菌。

3. 新型细菌抗生素在药物的安全性上也有所改进，减少了对人体的不良反应。

实验结论：本次实验结果证实了新型细菌抗生素对耐药性细菌的有效性，为解决细菌耐药性问题提供了新的选择。

然而，需要进一步的研究来确定新型细菌抗生素的药物安全性以及耐药性的产生机制。

我们希望通过不断的探索和创新，为医疗领域提供更好的抗生素治疗方案，抑制细菌耐药性的持续发展，保护人类健康。