试验六双波长分光光度法

双波长分光光度法原理简介双波长分光光度法的原理基于比尔定律（Beer-Lambert Law）。

比尔定律是光学领域的基本定律之一，它描述了物质溶液中吸光度与物质浓度之间的关系。

根据比尔定律，物质溶液的吸光度（A）与溶液中物质的浓度（C）和光程（l）满足以下关系式：A=εCl其中，ε是吸光度系数，表示单位浓度和单位光程的条件下的吸光度增加量。

该系数与物质的特性有关，是确定物质吸光度的重要参数。

在双波长分光光度法中，我们选择两个不同的波长，通常称为“样品波长”和“参比波长”。

样品波长是测量目标化合物所吸收的波长，而参比波长是用来校正仪器和试剂的波长。

因为参比波长往往不受目标化合物吸收，所以我们会将其吸光度看作为零或非常小的数值。

A2/A1=(ε2Cl)/(ε1Cl)=(ε2/ε1)C其中，A1和A2分别是样品波长和参比波长下的吸光度，ε1和ε2分别是样品波长和参比波长下的吸光度系数，C是目标化合物的浓度。

由于吸光度系数是常数，所以A2/A1的比值与目标化合物的浓度成正比。

只要我们能够准确地测量出A2/A1的值，就可以通过比值的线性关系来定量分析样品中的目标化合物的浓度。

为了准确测量A2/A1的值，双波长分光光度法通常采用双光束分光光度计进行测量。

该仪器可以同时测量样品波长和参比波长下的光强，并计算出吸光度差异。

常见的双波长分光光度法的仪器还配备有自动校正功能，可以自动校正参比波长的吸光度为零或非常小的数值，以减小误差。

总结起来，双波长分光光度法通过比较样品波长和参比波长下的吸光度差异，利用比尔定律的原理来定量分析样品中的目标化合物的浓度。

该方法简单、快速、准确，并且可以广泛应用于化学、生物和医药研究中。

双波长分光度法原理
双波长分光度法是一种在化学和生物分析中常用的分析方法，它利用物质在不同波长下的吸收性质来定量分析。

其原理如下：
1. 波长选择：选择两个不同的波长，一般一个波长用于测定待测物质的吸光度，另一个波长则用作基准。

这两个波长的选择应保证待测物质在其中一个波长下的吸光度较大而在另一个波长下的吸光度较小。

2. 校正基准吸光度：在基准波长下测量样品吸光度，并用其作为基准吸光度。

这一步骤旨在消除样品中其他物质的干扰。

3. 测定待测物质吸光度：在测定波长下测量样品吸光度，其绝对值与待测物质的浓度成正比。

将所得吸光度减去基准吸光度，可以消除其他物质的干扰，使吸光度仅与待测物质有关。

4. 构建标准曲线：在一系列已知浓度的标准溶液中重复上述步骤，得到一系列吸光度值。

将这些吸光度值与其对应的标准溶液浓度绘制在坐标图上，通过拟合曲线可以建立标准曲线。

5. 样品浓度测定：根据待测样品的吸光度，利用标准曲线可以得到对应的浓度。

双波长分光光度法测定爱索尔感冒片中乙酰水杨酸的含量目的建立双波长分光光度法测定爱索尔感冒片中乙酰水杨酸的含量的测定方法。

方法样品操作及测定方法同重复性试验，平行操作5批样品，另按照中和滴定法测定，比较两种测定方法测定所得样品的百分标示量。

结果双波长法：99.2%，97.9%，98.5%，96.5%，98.2%；中和法：100.8%，98.7%，99.8%，97.1%，99.4%。

乙酰水杨酸在255nm的波长处有最大吸收，盐酸吗啉胍在250nm的波长附近为225nm波长的等吸收波长，经过精选，选择250.1nm波长为参比波长，225nm波长为测定波长。

乙酰水杨酸乙醇溶液放置3h基本稳定，其他成分的乙醇溶液均稳定。

结论采用双波长分光光度法测定爱索尔感冒片中乙酰水杨酸的含量，操作简单，所用试剂方便易得，通过两种试验方法的比较，效果较满意。

标签：双波长分光光度法；爱索尔感冒片；乙酰水杨酸；含量爱索尔感冒片是乙酰水杨酸和盐酸吗啉胍的复方制剂，原质量标准采用中和滴定法测定乙酰水杨酸含量，且操作繁琐，本文改用双波长分光光度法测定爱索尔感冒片中乙酰水杨酸的含量，取得较满意的效果。

1 仪器与试药岛津UV-2100型紫外分光光度计；乙酰水杨酸对照品、盐酸吗啉胍对照品（符合中国药典2005年版规定）；乙醇为分析纯；爱索尔感冒片为市售品。

2 实验条件的选择精密称取乙酰水杨酸对照品适量，用乙醇配制成10ug/ml的溶液，按处方量配制盐酸吗啉胍溶液及辅料溶液，在200nm～300nm的波长范围内绘制吸收曲线。

结果表明：乙酰水杨酸在255nm的波长处有最大吸收，盐酸吗啉胍在250nm 的波长附近为225nm波长的等吸收波长，经过精选，选择250.1nm波长为参比波长，225nm波长为测定波长。

乙酰水杨酸乙醇溶液放置3h基本稳定，其他成分的乙醇溶液均稳定。

3 标准曲线的制备精密称取乙酰水杨酸约25mg和盐酸吗啉胍10mg，同置50ml量瓶中，加乙醇适量，振摇使溶解，并稀释至刻度摇匀。

药物分析实验思考题参考答案实验一 甲硝唑片溶出度的测定-----------------------------------------------------------------------------------------------1 实验二 RP(Reverse Phase)-HPLC(High Performance Liquid Chromatography)测定醋酸地塞米松片的含量2 实验三 Gas Chromatography(GC,气相色谱法)测定维生素E软胶囊的含量-----------------------------------------2 实验四 永停滴定法测定磺胺嘧啶的含量-----------------------------------------------------------------------------------3 实验五 复方磺胺甲噁唑片的含量测定--------------------------------------------------------------------------------------4 实验六 阿司匹林Aspirin的红外光谱(IR, Infrared Spectroscopy)鉴别-------------------------------------------------4 实验七 薄层扫描法测定卷烟中尼古丁的含量-----------------------------------------------------------------------------5 实验八维生素B1注射液的含量测定------------------------------------------------------------------------------------------5 实验九 荧光分光光度法测定维生素B2片的含量-------------------------------------------------------------------------6 实验十AAS法龙牡壮骨颗粒中钙的含量--------------------------------------------------------------------------------------6实验一 甲硝唑片溶出度的测定1. 何为溶出度？哪些类型药物需做溶出度实验？溶出度：是指药物从片剂等固体制剂在规定溶剂中溶出的速度和程度。

一、实验目的1. 掌握双波长分光光度法的原理和应用；2. 学习使用紫外-可见分光光度计进行定量分析；3. 通过实验测定待测物质的含量。

二、实验原理双波长分光光度法是一种基于物质在特定波长处吸光度与浓度成正比关系的定量分析方法。

该方法通过选择两个特定波长，分别测定待测物质在这两个波长下的吸光度，从而消除共存物质对测定结果的干扰。

实验原理如下：A1 = ε1c1λ1A2 = ε2c2λ2式中，A1、A2分别为待测物质在波长λ1、λ2处的吸光度；ε1、ε2分别为待测物质在波长λ1、λ2处的摩尔吸光系数；c1、c2分别为待测物质在波长λ1、λ2处的浓度。

通过联立上述两个方程，可以消去ε1、ε2，得到待测物质的浓度：c = (A1λ2 - A2λ1) / (λ1λ2)三、实验仪器与试剂1. 仪器：紫外-可见分光光度计、移液管、容量瓶、锥形瓶、比色皿、洗耳球等；2. 试剂：待测物质标准溶液、参比溶液、溶剂等。

四、实验步骤1. 准备标准溶液：准确移取一定体积的待测物质标准溶液，加入适量的溶剂，定容至一定体积，配制成一系列浓度梯度的标准溶液；2. 配制参比溶液：准确移取一定体积的参比溶液，加入适量的溶剂，定容至一定体积；3. 测定吸光度：在紫外-可见分光光度计上，选择两个特定波长，分别测定标准溶液和参比溶液的吸光度；4. 数据处理：根据实验数据，绘制吸光度-浓度曲线，通过线性回归得到线性方程，代入待测样品的吸光度，计算待测样品的浓度。

五、实验结果与分析1. 标准曲线绘制：以标准溶液的浓度为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制吸光度-浓度曲线；2. 线性回归：对吸光度-浓度曲线进行线性回归，得到线性方程；3. 待测样品浓度计算：代入待测样品的吸光度，根据线性方程计算待测样品的浓度。

六、实验讨论1. 实验误差分析：实验误差主要来源于仪器误差、操作误差和试剂误差。

在实验过程中，应尽量减小误差，提高实验结果的准确性；2. 双波长选择：在双波长分光光度法中，选择合适的波长对消除共存物质干扰至关重要。

实验一 双波长分光光度法测定混合样品溶液中苯甲酸钠的含量一、目的1．熟悉双波长分光光度法测定二元混合物中待测组分含量的原理和方法。

．熟悉双波长分光光度法测定二元混合物中待测组分含量的原理和方法。

2．掌握选择测定波长（λ1）和参比波长（λ2）的方法。

）的方法。

二、原理混合样品溶液由苯酚和苯甲酸钠组成，在0.04mol/LHCl 溶液中测得其吸收光谱，苯甲酸钠的吸收峰在229nm 处，苯酚的吸收峰在210nm 处。

若测定苯甲酸钠，从光谱上可知干扰组分（苯酚）在229和251nm 处的吸光度相等，则处的吸光度相等，则ΔA ＝KC 苯甲酸钠 ΔA 仅与苯甲酸钠浓度成正比，而与苯酚浓度无关，从而测得苯甲酸钠的浓度。

三、仪器与试剂 紫外分光光度计紫外分光光度计 苯酚苯酚 苯甲酸钠苯甲酸钠 蒸馏水蒸馏水 盐酸盐酸 四、操作步骤及主要结果1．样品的制备．样品的制备（1）标准储备液的配制）标准储备液的配制精密称取苯甲酸钠0.1013g 和苯酚0.1115g ，分别用蒸馏水溶解，定量转移至500ml 容量瓶中，用蒸馏水稀释至刻度，摇匀，即得浓度为200μg/ml 的储备液，置于冰箱中保存。

的储备液，置于冰箱中保存。

（2）标准溶液的配制）标准溶液的配制分别吸取标准苯酚储备液5.00ml 和标准苯甲酸钠储备液5.00ml 至100ml 容量瓶中，用0.04mol/LHCl 溶液稀释至刻度，摇匀，即得浓度为10μg/ml 的标准溶液。

的标准溶液。

2．样品的测定．样品的测定 （1）波长组合的选择）波长组合的选择于可见－紫外分光光度计上分别测定苯酚和苯甲酸钠标准溶液的吸收光谱（检测波长200~320nm ），确定双波长法测定苯甲酸钠含量时的参比波长（λs=257.5nm ）和测定波长（λm=231.2nm ）。

（2）苯甲酸钠工作曲线的绘制）苯甲酸钠工作曲线的绘制配制不同浓度的l 苯甲酸钠/0.04MHCl 溶液。

以0.04mol/L HCl 溶液为参比溶液，测定系列浓度的苯甲酸钠/0.04M HCl 溶液在λm 和λs 处的吸光度差值（见表1），计算其回归方程Y=0.0652X+0.0311(R 2=0.999)。

双波长分光光度法建立在Lambert—beer定律基础上的单波长分光光度分析技术，应用极为广泛，但由于单波长法存在混浊试样对光的散射和比色杯背景吸收等难以克服的缺点，它在高精度测量中的应用受到一定的限制。

为了解决浑浊试样对分光光度测定的干扰问题，美国的B.Chance于1951年制成了用振动镜使两束不同波长的单色光交替通过待测溶液的双波长分光光度计（Double Wavelength Spectrophotometer）,从而奠定了双波长分光光度法的基础。

随着科学技术的发展，双波长分光光度分析技术已日臻完善，与先进的后分光技术相结合，在生化自动化分析中得到了广泛的应用并显示出了光明的发展前景。

1 双波长分光光度法的原理双波长分光光度法是在传统分光光度法的基础上发展起来的，它的理论基础是差吸光度和等吸收波长。

它与传统分光光度法的不同之处，在于它采用了两个不同的波长即测量波长（又叫主波长λp,Primary Wavelength）和参比波长（又叫次波长λs, SecondWavelength）同时测定一个样品溶液[1,2]，以克服单波长测定的缺点，提高了测定结果的精密度和准确度。

早期的双波长分光光度计在测定时，两束不同波长的单色光经斩光器（Chopper，一种用于双波长分光光度计中使光束按一定周期反射，遮断或通过的装置）处理后，以一定的时间间隔交替照射[1]比色杯，经待测溶液吸收后，再照到光电管上，产生两个不同的吸光度，再将这两个吸光度相减，就得到了差吸光度ΔA。

根据Lamber—Beer定律, 得：Aλp=ελpLC+Ap (1)A λs=ελsLC+As (2)式中Aλp 、 A λs—分别为待测溶液在主波长和次波长处的吸光度，ελp 、ελs—分别为待测溶液在主波长和次波长处的摩尔吸光系数L—光径C—待测溶液的浓度Ap 、As—分别为待测溶液在主波长和次波长处的散射或背景吸收当λp 、λs相差不太大时，由同一待测溶液产生的光散射吸光度和背景吸光度大致相等，即Ap＝A s，将（1）式－（2）式得：Aλp－A λs＝ΔA＝（ελp－ελs）LC （3）对于同一待测溶液来说，ελp－ελs是一常数K，在光径L不变的情况下，（3）式可简化为：ΔA＝KC （4）（4）式说明，待测溶液在λp与λs两个波长处测定的差吸光度ΔA与试样中待测物质的浓度C成正比。

一、实验目的1. 理解双波长分光光度法的原理及其在物质定量分析中的应用。

2. 掌握双波长分光光度计的使用方法。

3. 通过实验，学会利用双波长法测定溶液中特定物质的含量。

二、实验原理双波长分光光度法是在传统分光光度法的基础上发展起来的，其原理基于差吸光度和等吸收波长。

该方法利用两个不同波长的光同时照射同一吸收池的溶液，通过检测器检测两个波长下的吸光度，并计算两者的差值。

根据朗伯-比尔定律，差吸光度与被测物质的浓度成正比，从而可以测定溶液中特定物质的含量。

三、实验仪器与试剂1. 仪器：- 双波长分光光度计- 紫外-可见光分光光度计- 移液器- 容量瓶- 比色皿- 水浴锅- 待测溶液2. 试剂：- 标准溶液（已知浓度）- 待测溶液- 溶剂四、实验步骤1. 将待测溶液和标准溶液分别稀释至适当浓度。

2. 使用移液器将待测溶液和标准溶液分别转移至比色皿中。

3. 将比色皿放入双波长分光光度计的样品池中，设定合适的波长（测量波长和参比波长）。

4. 打开仪器，调整光路，使光束通过比色皿，检测两个波长下的吸光度。

5. 记录吸光度值，并计算差吸光度。

6. 以标准溶液的浓度为横坐标，差吸光度为纵坐标，绘制标准曲线。

7. 根据待测溶液的差吸光度值，从标准曲线上查得待测物质的浓度。

五、实验结果与分析1. 标准曲线绘制：根据实验数据，绘制标准曲线，计算相关系数R²，验证曲线的线性关系。

2. 待测物质含量测定：根据待测溶液的差吸光度值，从标准曲线上查得待测物质的浓度，并计算其相对误差。

六、实验讨论1. 双波长分光光度法具有以下优点：- 可以消除共存物质的干扰，提高测定结果的准确性和可靠性。

- 可以测定具有相似吸收峰的化合物，扩大了分光光度法的应用范围。

- 可以同时测定多个物质的含量，提高实验效率。

2. 影响双波长分光光度法测定结果的因素：- 仪器性能：仪器稳定性、波长准确性、吸光度测量精度等。

- 样品预处理：样品的浓度、pH值、溶剂等。

药分实验实验一：氯化钠的杂志检查1.药物中杂质检查的意义是什么药物中的杂质是影响药品质量的主要因素之一，药品的杂质是药品中不具治疗作用或对人体有危害或影响药品稳定性和疗效的物质，因此，杂质检测是控制药品质量的一项重要指标，以保证药品质量和临床用药安全有效。

2.药物中杂质的来源主要有哪些？什么的一般杂质？什么是特殊杂质？来源：（1）由生产过程中引入的（2）贮藏过程中产生的一般杂质：指在自然界中分布较广泛，在多种药物的生产和贮藏过程中容易引入的杂质。

特殊杂质：指某一个或某一类药物的生产或贮藏过程中引入的杂质3.药物中杂质检查应严格遵循什么原则？为什么？遵行平行实验的原则，如加入的试剂，反应的温度，放置的时间等均应相同，这样检查结果才有可比性，减少系统误差。

4.试计算出氯化钠中溴化物，硫酸盐，镁盐，钾盐，铁盐，重金属和砷盐的限量5.取某一药物0.5g进行金属检测，规定限量为百万分之十，应取多少ml标准铅溶液？6.某一药物砷盐限量为百万分之四，取标准砷溶液2ml做对照，问应取供试品多少克？实验二：药物中特殊杂志的检查1.简要说明以上杂志检查项目的原理和方法1)阿司匹林中水杨酸检查的原理：水杨酸在弱酸性环境中和FeCl3作用显紫色，而阿司匹林结构中无游离酚羟基，不能发生此反应。

方法为化学方法中的显色反应检查法：取一定量的被检杂质标准溶液和一定量供试品溶液，在相同条件下处理比较反应结果从而确定含量是否超过限量。

2)盐酸普鲁卡因中对氨基苯甲酸检查原理：盐酸普鲁卡因、对氨基苯甲酸在酸性条件下可与二甲氨基醛缩合而成色。

不同物质分配系数不同，在薄层色谱中可被分离，且斑点大小和浓度有关。

方法：本实验采取薄层色谱中的的杂质对照品法，根据杂质限量取供试品溶液和一定浓度的杂志对照片溶液，分别点样于薄层色谱板上，展开，斑点定位，供试品溶液除斑点外的其他斑点与相应的杂志对照片进行比较，若供试品杂质斑点颜色不深于对照品杂杂质斑点，则说明没有超过限量。

双波长分光光度法测定饲料中铁含量李咏梅;施鹏飞;李人宇【摘要】本实验利用铁(Ⅱ)-邻菲啰啉-灿烂黄三元络合物体系,建立双波长分光光度法测定饲料中铁含量结果表明,测量波长为493 nm,参比波长为379 nm.表观摩尔吸光系数为3.3×104 L/mol· cm,线性范围为0～1.2 μg/mL,方法检出限为13.8 μg/L(n=11).用该方法测定豆粕和玉米中铁含量,结果与国标法一致,相对标准偏差分别为0.57％和0.72％(n=5),回收率分别为97.6％和99.0％.【期刊名称】《中国饲料》【年(卷),期】2012(000)023【总页数】4页(P32-34,38)【关键词】三元络合物体系;双波长分光光度法;铁;饲料【作者】李咏梅;施鹏飞;李人宇【作者单位】淮海工学院化学工程学院;淮海工学院化学工程学院;连云港师范高等专科学校【正文语种】中文【中图分类】S816.17铁是动物的必需微量元素之一。

日粮中铁含量不足会引起动物生长受阻，血红蛋白合成不良，从而出现贫血症（张元跃，2002），而动物摄入过量铁则会发生铁中毒（杨顺江，1989）。

因此，准确测定饲料中铁含量具有重要意义。

二元络合物体系邻菲啰啉光度法是测定铁的传统方法，此法灵敏度较低，反应2 h后才能稳定可测，且选择性较差（王书华和董士元，1997）。

近年来，三元络合物体系光度法因具有灵敏度高、稳定性好、选择性好等优点应用日益增多（王爱荣等，2005）。

此外，双波长分光光度法因能提高准确度、灵敏度和选择性等分析性能而备受关注（陈孝进等，2012；毕韶丹等，2008）。

本实验利用铁（Ⅱ）-邻菲啰啉-灿烂黄三元络合物体系，建立双波长分光光度法测定饲料中铁含量。

1 材料与方法1.1 仪器与试剂 756CRT型紫外分光光度计（上海精密科学仪器有限公司），HH-2数显恒温水浴锅（国华电器有限公司），pHS-3C型酸度计（上海精密科学仪器有限公司），XS2马弗炉（宜兴市前锦炉业设备有限公司）。

中国酿造2008年第21期总第198期分析与检测双波长分光光度法测定高粱中的直链淀粉和支链淀粉范明顺，张崇玉*，张琴，李晓飞（贵州大学生命科学学院，贵州贵阳550025）摘要：直链淀粉和支链淀粉含量及其比例是高粱品质的重要指标。

高粱是酿酒的主要原料之一，高粱品质的检测具有十分重要的意义。

为此需要寻找一种快速、简便、准确测量高粱中直链淀粉、支链淀粉、淀粉含量的方法。

文中以GB7648-87为基础，研究出一种运用双波长测定高粱中直链淀粉和支链淀粉含量的新方法。

结果表明，新方法准确性高、重复性好、效率高，工作量小，适于批量分析。

关键词：直链淀粉；支链淀粉；双波长中图分类号：O657.3文献标识码：A文章编号：0254－5071（2008）21-0085-02Determination of amylose and amylopectin content in sorghum by dual wavelength methodFAN Mingshun,ZHANG Chongyu*,ZHANG Qin,LI Xiaofei(College of Life Sciences,Guizhou University,Guiyang550025,China）Abstract:The content and the proportion of amylose and amylopectin are important indexes of sorghum.Sorghum is major raw materials in brewing industry.Therefore,it is important to establish a rapid,simple and accurate method of determining the content and proportion of amylose and amy-lopectin in sorghum.An assaying method of amylose and amylopectin using dual wavelength was established according to GB7648-87in this paper. The results showed that the new method had a good repetition and could be applied for analyzing plentiful samples due to its accuracy and rapidness.. Key words:amylase;amylopectin;the dual wavelength高粱是酿酒工业的原料之一，在我国被广泛地应用于白酒生产。