双波长紫外分光光度法ppt课件

检流计、数字显示、微机进行仪器自动控制
和结果处理
记录装置
二、分光光度计的类型
（一）单光束分光光度计
光源 单色器
参比 样品
检测器
显示器
• 只有一条光路，通过变换参比池和样品池的位 置，使它们分别置于光路来进行测定
国产751型、752型、721型、722型、UV-1100 型、英国SP-500型
E2a ca E2b
(3) 图计算法----两组分吸收光谱完全重叠--混合样品测定 (3)图中，a,b 吸收光谱双向重迭，互相干扰，在最大波长处互相
吸收。处理方法如下：
解线性方程组 过程：
（三）示差分光光度法（示差法）
普通分光光度法一般只适于测定微量组分，当待测组分含量 较高时，将产生较大的误差。需采用示差法。
第三节 紫外-可见分光光度计
依据朗伯-比尔定律，测定待测液吸光度A的仪器。（选择不同波
长单色光λ、浓度） 分光光度计外观 分光光度原理图:
0.575
光源
单色器
吸收池
检测器 信号处理及显示
信号处理 显示器
单色器
分光光度计外观
吸收池 检测器
光源
721型可见分光光度计
一、主要部件
1. 光源 在整个紫外光区或可见光谱区可以发射连续光
浓度C及液层厚度L的乘积成正比。
注意! 适用范围
①入射光为单色光，适用于可见、红外、紫外光。 ②均匀、无散射溶液、固体、气体。 ③吸光度A具有加和性。Aa+b+c= Aa &光系数
A=k c L
k = A /c L
1、摩尔吸光系数或Em： 在一定λ下，c=1mol/L，L=1cm时的吸光度。单位：L/(mol.cm)

2和K1分别为在λ2和 λ1处的放大系数；组分A和B 在λ2和 λ1处的吸光度分别为
A B A B A 、 A 和 A 、 A 2 1 1，则 2
S＝K2 A2＋K2 A2－K1 A1－K1 A1
调节仪器中的信号放大 器，使干扰组分B在波长λ2 和λ1处的信号相等，由此得 系数倍率K为：
第二节 双波长和三波长分光光度法 一．双波长分光光度法的原理
双波长分光光度法是在传统的单波长分光度法的基础上发 展起来的。单波长分光光度法要求式样本身透明，不能有混 浊，如果是试样溶液在测量过程中逐渐产生浑浊便无法正确 测定。对于吸收峰相互重叠的组分或背景很深的试样分析， 也很难得到准确的结果。 双波长分光光度法的建立，在一定程度上克服了单波长 法的局限性，扩展了分光光度法的应用范围，在选择性、灵 敏度和测量精密度等方面都比单波长法有进一步的改善和提 高。
二． 三波长分光光度法的原理和应用
1．基本原理
如图所示，在任一吸 收曲线上，可以在任意选 择的三个波长处测量吸光 度。根据三角形和三角形 相似，可推导出在上述三 个波长处测量的吸收度具 有下列函数关系： 三波长法原理图
式中，m和n分别表示(2 -1)和(3 -2)的数值。1、2和3 分别为待测物在三波长处的摩尔吸光系数；C为待测物的摩尔浓 度；b为光程。方程中的系数 可预先求得，A值 与待测物浓度成正比，因而可通过曲线求出样品中待测组分的 含量。 从上图可知，如选择的三个波长相应于吸收曲线上三点处 于一条直线上，则测得的A值为零。因此，当干扰组分的吸收 光谱为一直线（如浑浊产生的干扰），则在任选的三个波长处 测定，测得的值与干扰物浓度无关，如果干扰物为一吸收曲线， 只要在曲线上找到处在一条直线上的三点，在此三点相应的波 长处测定，由于干扰物在此三波长处的值为零，故测得的只与 待测组分的浓度有关。

光源透镜吸收池光栅光电二极管阵列检测器tu1800spc紫外可见分光光度计285新型分光光度计展示光度计photolabspektral适亍多种形状吸收池dr2700型便携式分光光度计便携性295分光光度法测量条件的选择1检测波长的选择丌易有其它物质干扰的较高的和宽的吸收峰处的波长302溶剂的选择及处理方法选择原则
分子能级的能量(各种能级能量总和)
或能量间隔各异，因此不同物质将
选择性地吸收不同波长或能量的外来
辐射，这是UV-Vis定性分析的基础。
（P164-166:电子跃迁的种类）
第二章 紫外可见分光光度法在食品检测中的应用
7
（2）定性分析方法：
♥与标准品、标准谱图对比
♥对比吸收光谱特征数据
♥对比吸收度的比值
第二章 紫外可见分光光度法在食品检
测中的应用
1
第二章 紫外-可见分光光度法
在食品检测中的应用
第二章 紫外可见分光光度法在食品检测中的应用
2
精品资料
你怎么称呼老师？
如果老师最后没有总结一节课的重点的难点，你是
否会认为老师的教学方法需要改进？
你所经历的课堂，是讲座式还是讨论式？
教师的教鞭
“不怕太阳晒，也不怕那风雨狂，只怕先生骂我笨，
该法只有在测定浓度范围内遵守L-B定律，
且cx与cs大致相当时，才可得到准确结果。
第二章 紫外可见分光光度法在食品检测中的应用
18
b. 多组分定量方法
由于吸光度具有加和性，因此可以在同一试样中
测定多个组份。
设试样中有两组份X 和Y，将其显色后，分别绘
制吸收曲线，会出现如图所示的三种情况：
第二章 紫外可见分光光度法在食品检测中的应用

/moban
3、朗伯-比尔定律 比吸光系数
比吸光系数是指百分含量为1%， l为1cm时的 吸光度值，用 E
1% 1cm表示。
0.1M r E
1% 1cm
/moban
3、朗伯-比尔定律
四 偏离朗伯-比耳定律的因素
（1）入射光为非单色光
（2）溶液的不均性。
实际样品的混浊，加入的保护胶体，蒸 馏水中的微生物，存在散射以及共振发射等， 均可吸光质点的吸光特性变化大。 （3）光程的不一致性。 光源不是点光源，比色皿光径长度不一 致，光学元件的缺陷引起的多次反射等，均造 成光径不一致，从而与定律偏离。
/moban
4、紫外-可见分光光度计
一
主要部件的性能与作用
基本结构:
光源→单色器→吸收池→检测器→信号显示系统 样品
/moban
4、紫外-可见分光光度计 1 光源
在紫外可见分光光度计中，常用的光源有 两类：热辐射光源和气体放电光源 热辐射光源用于可见光区，如钨灯和卤钨 灯；气体放电光源用于紫外光区，如氢灯和 氘灯。
pH值
3、朗伯-比尔定律 一 吸光度和透光度
设入射光强度为I0，吸收光强度为Ia,透射光 强度为 It，反射光强度为Ir，则 I 0= I a+ I t+ I r
由于反射光强度很弱，其影响很小，上式可简化 为：
I 0= I a+ I t
/moban
3、朗伯-比尔定律
吸光度: 为透光度倒数的对数，用A表示， 即 A=lg1/T=ห้องสมุดไป่ตู้gI0/It
生物化学，医学卫生，临床检验，食品卫生，药品
检验，农业化学等领域的生产。
恳请各位老师批评指正
/moban

将样品在276nm和322nm波长处的得的吸收度计算得的ΔA，代入标 准曲线，求得样品中阿司匹林的浓度。
②样品测定：取阿司匹林肠溶片20片，精密称定，研细。精密称取约 相当于阿司匹林50mg置于50mL容量瓶中，加乙醇适量，振摇使溶解 并定容，摇匀，滤过。精密量取续滤液2mL置25mL容量瓶中，加乙 醇至刻度，摇匀。分别在276nm、322nm波长处测定吸收度，用回 归方程计算阿司匹林的含量。
含量计算
阿司匹林制剂在体外的含量测定
——双波长紫பைடு நூலகம்分光光度法
原料
阿司匹林肠溶片
原理
采用双波长紫外分光法（测定波长为276nm和322nm），测定了阿 司匹林肠溶片的含量，可消除附加产物水杨酸的干扰。
方法
①标准曲线的绘制：精密称取阿司匹林对照品适量，加乙醇溶解使成 1000μg/mL的溶液。精密吸取1.0、1.5、2.0、2.5和3.0mL，分置于 25mL容量瓶中，加乙醇至刻度，分别制成40，60，80，100和 120μg/mL的对照品溶液，以乙醇为空白，分别在276nm、322nm波； 长处测定吸收度，以浓度C和ΔA进行线性回归得出方程式。

比色分析中有时也用透光度做单位，根据透 光度的负对数－IogT=吸光度，透光率为100% 时，吸光度=－Iog1=0，而透光率为1%时，吸 光度=－Iog0.01=2，二者间呈对数指数关系。
当然，只有溶液的浓度和吸光度之间成直线
紫外分光光度法的原理
正比关系时才能进行比色分析，如果溶液的吸 光度与浓度不成正比（不符合郎伯-比尔定律）， 则不能使用比色分析。有时，溶液的浓度只在 一定范围内和显色成直线正比关系，而浓度超 过一定限度时，失去正比关系，则不能一概地 用比色结果换算，通常都要研究测定方法中什 么浓度范围内二者成直线正比关系；或者绘制 一系列浓度和吸光度之间的标准曲线，发现浓 度增加到一定限度，标准曲线发生弯曲、变折， 说明超过该浓度时，要对溶液进行稀释才能用 来比色分析。
一. 比色分析的原理：光是一种电磁波，它 的波长用nm或Ǻ为单位，人的眼睛所能感觉到 的光波长约400～760 nm，这之间的光波称为可 见光。短于400 nm的叫紫外线，短于200nm的 叫远紫外线，再短的就是X射线和γ射线了。长 于760nm的叫红外线，红外线可长达5mm，再 长的就是无线电波了。
1.单一物质测定：先测定溶质的吸收光谱，一 般用最大吸收波长进行比色。常用方法有2种。 （1）标准曲线法：用标准液制作一系列标准管 的标准曲线，样品测定结果查标准曲线求知。
紫外分光光度法的原理
咖啡因样品用紫外光谱定性和定量，上：标准 品；下：样品
紫外分光光度法的原理
（二）吸光系数：郎伯-比尔定律中的K称为吸 光系数。因比色杯的直径用cm为单位，因此K 的单位决定于浓度c用什么单位，如c以mol/L为 单位时K称为摩尔吸光系数，用Emol或εmol表示； 如果物质的分子量未知，浓度可用%为单位，K 称为百分吸光系数，用E%表示。