试验六双波长分光光度法

药物分析实验思考题参考答案实验一 甲硝唑片溶出度的测定-----------------------------------------------------------------------------------------------1 实验二 RP(Reverse Phase)-HPLC(High Performance Liquid Chromatography)测定醋酸地塞米松片的含量2 实验三 Gas Chromatography(GC,气相色谱法)测定维生素E软胶囊的含量-----------------------------------------2 实验四 永停滴定法测定磺胺嘧啶的含量-----------------------------------------------------------------------------------3 实验五 复方磺胺甲噁唑片的含量测定--------------------------------------------------------------------------------------4 实验六 阿司匹林Aspirin的红外光谱(IR, Infrared Spectroscopy)鉴别-------------------------------------------------4 实验七 薄层扫描法测定卷烟中尼古丁的含量-----------------------------------------------------------------------------5 实验八维生素B1注射液的含量测定------------------------------------------------------------------------------------------5 实验九 荧光分光光度法测定维生素B2片的含量-------------------------------------------------------------------------6 实验十AAS法龙牡壮骨颗粒中钙的含量--------------------------------------------------------------------------------------6实验一 甲硝唑片溶出度的测定1. 何为溶出度？哪些类型药物需做溶出度实验？溶出度：是指药物从片剂等固体制剂在规定溶剂中溶出的速度和程度。

一、实验目的1. 了解双波长分光光度法的基本原理和操作步骤。

2. 掌握双波长分光光度法测定溶液浓度的方法。

3. 熟悉实验仪器的使用和操作。

二、实验原理双波长分光光度法是一种基于物质对特定波长光吸收特性的分析方法。

其原理是在单位时间内，有两条不同波长的光束交替照射待测溶液，通过检测器测出两个波长下溶液的吸光度，并计算吸光度差值，从而确定待测物质的浓度。

该方法的优点是：1. 克服了单波长法易受溶液混浊和背景吸收等干扰的缺点。

2. 提高了测定结果的精密度和准确度。

三、实验仪器与试剂1. 实验仪器：双波长分光光度计、比色皿、移液管、吸管、烧杯、蒸馏水、待测溶液等。

2. 实验试剂：待测溶液（已知浓度）、标准溶液（已知浓度）、参比溶液、试剂等。

四、实验步骤1. 将待测溶液、标准溶液和参比溶液分别倒入比色皿中。

2. 将比色皿放入双波长分光光度计中，设定测量波长和参比波长。

3. 打开仪器，预热10分钟。

4. 分别测定待测溶液、标准溶液和参比溶液在测量波长和参比波长下的吸光度。

5. 计算吸光度差值（ΔA = A测 - A参）。

6. 以标准溶液的浓度为横坐标，吸光度差值为纵坐标，绘制标准曲线。

7. 根据待测溶液的吸光度差值，从标准曲线上查得待测溶液的浓度。

五、实验结果与分析1. 标准曲线绘制：根据实验数据，绘制标准曲线，如图所示。

2. 待测溶液浓度测定：根据待测溶液的吸光度差值，从标准曲线上查得待测溶液的浓度为0.05 mg/L。

六、实验讨论1. 实验过程中，应注意保持仪器和比色皿的清洁，避免污染。

2. 实验数据应准确记录，减少误差。

3. 标准曲线绘制时应尽量使标准溶液的浓度范围与待测溶液的浓度相近，以提高测定结果的准确度。

4. 双波长分光光度法在实际应用中，应注意选择合适的测量波长和参比波长，以克服干扰因素的影响。

七、实验总结本实验通过双波长分光光度法测定了待测溶液的浓度，结果表明该方法具有操作简便、准确度高、抗干扰能力强等优点。

实验一 双波长分光光度法测定混合样品溶液中苯甲酸钠的含量一、目的1．熟悉双波长分光光度法测定二元混合物中待测组分含量的原理和方法。

．熟悉双波长分光光度法测定二元混合物中待测组分含量的原理和方法。

2．掌握选择测定波长（λ1）和参比波长（λ2）的方法。

）的方法。

二、原理混合样品溶液由苯酚和苯甲酸钠组成，在0.04mol/LHCl 溶液中测得其吸收光谱，苯甲酸钠的吸收峰在229nm 处，苯酚的吸收峰在210nm 处。

若测定苯甲酸钠，从光谱上可知干扰组分（苯酚）在229和251nm 处的吸光度相等，则处的吸光度相等，则ΔA ＝KC 苯甲酸钠 ΔA 仅与苯甲酸钠浓度成正比，而与苯酚浓度无关，从而测得苯甲酸钠的浓度。

三、仪器与试剂 紫外分光光度计紫外分光光度计 苯酚苯酚 苯甲酸钠苯甲酸钠 蒸馏水蒸馏水 盐酸盐酸 四、操作步骤及主要结果1．样品的制备．样品的制备（1）标准储备液的配制）标准储备液的配制精密称取苯甲酸钠0.1013g 和苯酚0.1115g ，分别用蒸馏水溶解，定量转移至500ml 容量瓶中，用蒸馏水稀释至刻度，摇匀，即得浓度为200μg/ml 的储备液，置于冰箱中保存。

的储备液，置于冰箱中保存。

（2）标准溶液的配制）标准溶液的配制分别吸取标准苯酚储备液5.00ml 和标准苯甲酸钠储备液5.00ml 至100ml 容量瓶中，用0.04mol/LHCl 溶液稀释至刻度，摇匀，即得浓度为10μg/ml 的标准溶液。

的标准溶液。

2．样品的测定．样品的测定 （1）波长组合的选择）波长组合的选择于可见－紫外分光光度计上分别测定苯酚和苯甲酸钠标准溶液的吸收光谱（检测波长200~320nm ），确定双波长法测定苯甲酸钠含量时的参比波长（λs=257.5nm ）和测定波长（λm=231.2nm ）。

（2）苯甲酸钠工作曲线的绘制）苯甲酸钠工作曲线的绘制配制不同浓度的l 苯甲酸钠/0.04MHCl 溶液。

以0.04mol/L HCl 溶液为参比溶液，测定系列浓度的苯甲酸钠/0.04M HCl 溶液在λm 和λs 处的吸光度差值（见表1），计算其回归方程Y=0.0652X+0.0311(R 2=0.999)。

药分实验实验一：氯化钠的杂志检查1.药物中杂质检查的意义是什么药物中的杂质是影响药品质量的主要因素之一，药品的杂质是药品中不具治疗作用或对人体有危害或影响药品稳定性和疗效的物质，因此，杂质检测是控制药品质量的一项重要指标，以保证药品质量和临床用药安全有效。

2.药物中杂质的来源主要有哪些？什么的一般杂质？什么是特殊杂质？来源：（1）由生产过程中引入的（2）贮藏过程中产生的一般杂质：指在自然界中分布较广泛，在多种药物的生产和贮藏过程中容易引入的杂质。

特殊杂质：指某一个或某一类药物的生产或贮藏过程中引入的杂质3.药物中杂质检查应严格遵循什么原则？为什么？遵行平行实验的原则，如加入的试剂，反应的温度，放置的时间等均应相同，这样检查结果才有可比性，减少系统误差。

4.试计算出氯化钠中溴化物，硫酸盐，镁盐，钾盐，铁盐，重金属和砷盐的限量5.取某一药物0.5g进行金属检测，规定限量为百万分之十，应取多少ml标准铅溶液？6.某一药物砷盐限量为百万分之四，取标准砷溶液2ml做对照，问应取供试品多少克？实验二：药物中特殊杂志的检查1.简要说明以上杂志检查项目的原理和方法1)阿司匹林中水杨酸检查的原理：水杨酸在弱酸性环境中和FeCl3作用显紫色，而阿司匹林结构中无游离酚羟基，不能发生此反应。

方法为化学方法中的显色反应检查法：取一定量的被检杂质标准溶液和一定量供试品溶液，在相同条件下处理比较反应结果从而确定含量是否超过限量。

2)盐酸普鲁卡因中对氨基苯甲酸检查原理：盐酸普鲁卡因、对氨基苯甲酸在酸性条件下可与二甲氨基醛缩合而成色。

不同物质分配系数不同，在薄层色谱中可被分离，且斑点大小和浓度有关。

方法：本实验采取薄层色谱中的的杂质对照品法，根据杂质限量取供试品溶液和一定浓度的杂志对照片溶液，分别点样于薄层色谱板上，展开，斑点定位，供试品溶液除斑点外的其他斑点与相应的杂志对照片进行比较，若供试品杂质斑点颜色不深于对照品杂杂质斑点，则说明没有超过限量。

双波长分光光度法建立在Lambert—beer定律基础上的单波长分光光度分析技术，应用极为广泛，但由于单波长法存在混浊试样对光的散射和比色杯背景吸收等难以克服的缺点，它在高精度测量中的应用受到一定的限制。

为了解决浑浊试样对分光光度测定的干扰问题，美国的B.Chance于1951年制成了用振动镜使两束不同波长的单色光交替通过待测溶液的双波长分光光度计（Double Wavelength Spectrophotometer）,从而奠定了双波长分光光度法的基础。

随着科学技术的发展，双波长分光光度分析技术已日臻完善，与先进的后分光技术相结合，在生化自动化分析中得到了广泛的应用并显示出了光明的发展前景。

1 双波长分光光度法的原理双波长分光光度法是在传统分光光度法的基础上发展起来的，它的理论基础是差吸光度和等吸收波长。

它与传统分光光度法的不同之处，在于它采用了两个不同的波长即测量波长（又叫主波长λp,Primary Wavelength）和参比波长（又叫次波长λs, SecondWavelength）同时测定一个样品溶液[1,2]，以克服单波长测定的缺点，提高了测定结果的精密度和准确度。

早期的双波长分光光度计在测定时，两束不同波长的单色光经斩光器（Chopper，一种用于双波长分光光度计中使光束按一定周期反射，遮断或通过的装置）处理后，以一定的时间间隔交替照射[1]比色杯，经待测溶液吸收后，再照到光电管上，产生两个不同的吸光度，再将这两个吸光度相减，就得到了差吸光度ΔA。

根据Lamber—Beer定律, 得：Aλp=ελpLC+Ap (1)A λs=ελsLC+As (2)式中Aλp 、 A λs—分别为待测溶液在主波长和次波长处的吸光度，ελp 、ελs—分别为待测溶液在主波长和次波长处的摩尔吸光系数L—光径C—待测溶液的浓度Ap 、As—分别为待测溶液在主波长和次波长处的散射或背景吸收当λp 、λs相差不太大时，由同一待测溶液产生的光散射吸光度和背景吸光度大致相等，即Ap＝A s，将（1）式－（2）式得：Aλp－A λs＝ΔA＝（ελp－ελs）LC （3）对于同一待测溶液来说，ελp－ελs是一常数K，在光径L不变的情况下，（3）式可简化为：ΔA＝KC （4）（4）式说明，待测溶液在λp与λs两个波长处测定的差吸光度ΔA与试样中待测物质的浓度C成正比。

一、实验目的1. 理解双波长分光光度法的原理及其在物质定量分析中的应用。

2. 掌握双波长分光光度计的使用方法。

3. 通过实验，学会利用双波长法测定溶液中特定物质的含量。

二、实验原理双波长分光光度法是在传统分光光度法的基础上发展起来的，其原理基于差吸光度和等吸收波长。

该方法利用两个不同波长的光同时照射同一吸收池的溶液，通过检测器检测两个波长下的吸光度，并计算两者的差值。

根据朗伯-比尔定律，差吸光度与被测物质的浓度成正比，从而可以测定溶液中特定物质的含量。

三、实验仪器与试剂1. 仪器：- 双波长分光光度计- 紫外-可见光分光光度计- 移液器- 容量瓶- 比色皿- 水浴锅- 待测溶液2. 试剂：- 标准溶液（已知浓度）- 待测溶液- 溶剂四、实验步骤1. 将待测溶液和标准溶液分别稀释至适当浓度。

2. 使用移液器将待测溶液和标准溶液分别转移至比色皿中。

3. 将比色皿放入双波长分光光度计的样品池中，设定合适的波长（测量波长和参比波长）。

4. 打开仪器，调整光路，使光束通过比色皿，检测两个波长下的吸光度。

5. 记录吸光度值，并计算差吸光度。

6. 以标准溶液的浓度为横坐标，差吸光度为纵坐标，绘制标准曲线。

7. 根据待测溶液的差吸光度值，从标准曲线上查得待测物质的浓度。

五、实验结果与分析1. 标准曲线绘制：根据实验数据，绘制标准曲线，计算相关系数R²，验证曲线的线性关系。

2. 待测物质含量测定：根据待测溶液的差吸光度值，从标准曲线上查得待测物质的浓度，并计算其相对误差。

六、实验讨论1. 双波长分光光度法具有以下优点：- 可以消除共存物质的干扰，提高测定结果的准确性和可靠性。

- 可以测定具有相似吸收峰的化合物，扩大了分光光度法的应用范围。

- 可以同时测定多个物质的含量，提高实验效率。

2. 影响双波长分光光度法测定结果的因素：- 仪器性能：仪器稳定性、波长准确性、吸光度测量精度等。

- 样品预处理：样品的浓度、pH值、溶剂等。

双波长分光光度
双波长分光光度法是一种用于测定物质浓度的光谱分析方法。

它利用两个不同波长的单色光交替照射同一吸收池的溶液，然后通过检测器和电子控制系统计算出这两个波长下吸收度的差值△A，与被测定物质的浓度成正比。

双波长分光光度法的关键在于正确选择两个波长，以确保被测组分的吸光度足够大，同时干扰组分和背景在两个波长下的吸光度相同（DA=0）。

通常，将长波长λ1选在待测组分的最大吸收波长处，而短波长λ2选在干扰组分等吸收波长处。

该方法的特点是消除了干扰组分对测定结果的影响，提高了测定的准确度和灵敏度，因此在生物、医学、环境监测、食品分析等领域得到了广泛应用。