双波长分光光度法测定ppt课件
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双波长分光光度法测定爱索尔感冒片中乙酰水杨酸的含量目的建立双波长分光光度法测定爱索尔感冒片中乙酰水杨酸的含量的测定方法。
方法样品操作及测定方法同重复性试验,平行操作5批样品,另按照中和滴定法测定,比较两种测定方法测定所得样品的百分标示量。
结果双波长法:99.2%,97.9%,98.5%,96.5%,98.2%;中和法:100.8%,98.7%,99.8%,97.1%,99.4%。
乙酰水杨酸在255nm的波长处有最大吸收,盐酸吗啉胍在250nm的波长附近为225nm波长的等吸收波长,经过精选,选择250.1nm波长为参比波长,225nm波长为测定波长。
乙酰水杨酸乙醇溶液放置3h基本稳定,其他成分的乙醇溶液均稳定。
结论采用双波长分光光度法测定爱索尔感冒片中乙酰水杨酸的含量,操作简单,所用试剂方便易得,通过两种试验方法的比较,效果较满意。
标签:双波长分光光度法;爱索尔感冒片;乙酰水杨酸;含量爱索尔感冒片是乙酰水杨酸和盐酸吗啉胍的复方制剂,原质量标准采用中和滴定法测定乙酰水杨酸含量,且操作繁琐,本文改用双波长分光光度法测定爱索尔感冒片中乙酰水杨酸的含量,取得较满意的效果。
1 仪器与试药岛津UV-2100型紫外分光光度计;乙酰水杨酸对照品、盐酸吗啉胍对照品(符合中国药典2005年版规定);乙醇为分析纯;爱索尔感冒片为市售品。
2 实验条件的选择精密称取乙酰水杨酸对照品适量,用乙醇配制成10ug/ml的溶液,按处方量配制盐酸吗啉胍溶液及辅料溶液,在200nm~300nm的波长范围内绘制吸收曲线。
结果表明:乙酰水杨酸在255nm的波长处有最大吸收,盐酸吗啉胍在250nm 的波长附近为225nm波长的等吸收波长,经过精选,选择250.1nm波长为参比波长,225nm波长为测定波长。
乙酰水杨酸乙醇溶液放置3h基本稳定,其他成分的乙醇溶液均稳定。
3 标准曲线的制备精密称取乙酰水杨酸约25mg和盐酸吗啉胍10mg,同置50ml量瓶中,加乙醇适量,振摇使溶解,并稀释至刻度摇匀。
双波长分光光度法建立在Lambert—beer定律基础上的单波长分光光度分析技术,应用极为广泛,但由于单波长法存在混浊试样对光的散射和比色杯背景吸收等难以克服的缺点,它在高精度测量中的应用受到一定的限制。
为了解决浑浊试样对分光光度测定的干扰问题,美国的B.Chance于1951年制成了用振动镜使两束不同波长的单色光交替通过待测溶液的双波长分光光度计(Double Wavelength Spectrophotometer),从而奠定了双波长分光光度法的基础。
随着科学技术的发展,双波长分光光度分析技术已日臻完善,与先进的后分光技术相结合,在生化自动化分析中得到了广泛的应用并显示出了光明的发展前景。
1 双波长分光光度法的原理双波长分光光度法是在传统分光光度法的基础上发展起来的,它的理论基础是差吸光度和等吸收波长。
它与传统分光光度法的不同之处,在于它采用了两个不同的波长即测量波长(又叫主波长λp,Primary Wavelength)和参比波长(又叫次波长λs, SecondWavelength)同时测定一个样品溶液[1,2],以克服单波长测定的缺点,提高了测定结果的精密度和准确度。
早期的双波长分光光度计在测定时,两束不同波长的单色光经斩光器(Chopper,一种用于双波长分光光度计中使光束按一定周期反射,遮断或通过的装置)处理后,以一定的时间间隔交替照射[1]比色杯,经待测溶液吸收后,再照到光电管上,产生两个不同的吸光度,再将这两个吸光度相减,就得到了差吸光度ΔA。
根据Lamber—Beer定律, 得:Aλp=ελpLC+Ap (1)A λs=ελsLC+As (2)式中Aλp 、 A λs—分别为待测溶液在主波长和次波长处的吸光度,ελp 、ελs—分别为待测溶液在主波长和次波长处的摩尔吸光系数L—光径C—待测溶液的浓度Ap 、As—分别为待测溶液在主波长和次波长处的散射或背景吸收当λp 、λs相差不太大时,由同一待测溶液产生的光散射吸光度和背景吸光度大致相等,即Ap=A s,将(1)式-(2)式得:Aλp-A λs=ΔA=(ελp-ελs)LC (3)对于同一待测溶液来说,ελp-ελs是一常数K,在光径L不变的情况下,(3)式可简化为:ΔA=KC (4)(4)式说明,待测溶液在λp与λs两个波长处测定的差吸光度ΔA与试样中待测物质的浓度C成正比。
双波长分光光度法的基本原理及应用应用分光光度法对共存组分进行不分离定量测定时,通常采用的方法有双波长法,三波长法,导数光谱法、差谱分析法及多组分分析法等方法,其快速,简便的优点使这些方法在实用分析中得到越来越广泛的应用。
其中以双波长法的应用为最多,该法的准确度和精密度要高于其它方法,是对共存组分不分离定量测定的有效方法之一。
实用中的双波长法主要采用等吸收波长法和系数倍增法两种分析方法,下面就其基本原理和应用作以介绍:一、等吸收波长法1、基本原理图 1是同一组分三个不同浓度供试液的吸收光谱图,经典分光光度法的定量测定通常是在被测组分的最大吸收波长处进行测定,根据兰伯一比耳定律,其吸光度值与被测组分的浓度 C 成正比,即:依(3式测定被测组分 a ,则可完全消除 b 组分的干扰,达到共存组分不分离进行定量测定的目的。
2、影响因素(1测定波长和组合波长的选择应使被测组分的△A 值尽可能大,以增加测定的灵敏度和精确度。
(2测定波长和组合波长应尽可能选择在光谱曲线斜率变化较小的波长处,以减小波长变化对测定结果的影响。
(3干扰组分等吸收波长(组合波长的选择必须精确,只有其△A 值等于零时才能完全消除干扰,否则会引入测定误差。
为此,在实用分析中,都是先配制一个干扰组分b 的供试液,在仪器上准确找出等吸收波长 ,然后再对样品进行测定。
3 应用实例等吸收波长法的一个典型应用实例为收载于《中华人民共和国药典》中的抗菌消炎药复方磺胺甲噁唑片的含量测定。
复方磺胺甲噁唑片中含有磺胺甲噁唑(SMZ 和甲氧苄(TMP 两个成分,其吸收光谱见图 3。
当测定 SMZ 时,选择其最大吸收波长 257nm 为测定波长,可以在干扰组分 TMP 的光谱曲线上 304nm 附近找到等吸收波长为组合波长消除其干扰;当测定 TMP 时,选择 239nm 为测定波长,可以在干扰组分 SMZ 的光谱曲线上 295nm 附近找到等吸收波长为组合波长消除其干扰,分别对 SMZ 和 TMP 进行含量测定。