志贺氏菌检测

志贺氏菌胶体金法-概述说明以及解释1.引言1.1 概述概述志贺氏菌胶体金法是一种用于检测志贺氏菌感染的生物学方法。

志贺氏菌是一种能够引起胃肠道感染的细菌，其中一种亚型称为志贺氏菌O157：H7是引起人类食物中毒的主要菌株之一。

志贺氏菌胶体金法基于金标记技术，通过与志贺氏菌特异性抗原的结合来实现对志贺氏菌的检测和定量分析。

志贺氏菌胶体金法的原理是利用胶体金颗粒与志贺氏菌特异性抗原之间的亲和性作用。

金颗粒具有良好的生物相容性和稳定性，其颗粒表面可以通过化学修饰等方法引入志贺氏菌的特异性抗原，使得金颗粒能够与志贺氏菌特异结合。

当志贺氏菌存在于样本中时，与其特异性抗原结合的金颗粒会出现红色或其他可见颜色的沉淀，从而实现志贺氏菌的检测。

志贺氏菌胶体金法在医学、食品安全和环境监测等领域具有广泛的应用前景。

在医学领域，该方法可以快速、准确地检测出志贺氏菌感染，为临床诊断提供重要依据。

在食品安全领域，志贺氏菌胶体金法可以用于检测和监测食品中的志贺氏菌污染，保障公众健康。

在环境监测领域，该方法可以用于水源、土壤等环境中志贺氏菌的快速检测，以指导环境卫生管理。

然而，志贺氏菌胶体金法也存在一些局限性。

首先，该方法对志贺氏菌的特异性抗原要求较高，若抗原选择不当或存在交叉反应，则可能导致误诊。

其次，该方法需要专业的实验操作和设备支持，对操作人员的技术要求较高。

此外，该方法目前还没有得到广泛推广和应用，需要进一步的研究和验证。

总而言之，志贺氏菌胶体金法是一种有潜力的志贺氏菌检测方法，其原理基于金颗粒与志贺氏菌特异性抗原的结合。

该方法在医学、食品安全和环境监测等领域具有广泛的应用前景，但同时也存在一些局限性。

进一步的研究和验证将有助于进一步完善和推广该方法。

1.2 文章结构文章结构部分的内容可以包括以下内容：文章的结构是指整篇文章的组织方式和各个部分之间的逻辑关系。

一个良好的文章结构能够使读者更好地理解整个文章的内容，提高文章的可读性和逻辑性。

从业人员健康体检沙门氏菌、志贺氏菌检测操作程序(讨论稿)(总6页) -本页仅作为预览文档封面，使用时请删除本页-从业人员健康体检沙门氏菌、志贺氏菌检测操作程序一、目的本程序用于对从业人员健康体检进行沙门氏菌、志贺氏菌检测等致病菌检测的方法，以规范操作程序，保证检测数据的有效性。

二、适用范围：本方法适用于从人体粪便中沙沙门氏菌、志贺氏菌的分离、鉴定及保存的梯相关操作。

三、生物安全要求标本及相应的致病菌操作必须在BSL-2生物安全实验室的生物安全柜中进行。

四、试剂及仪器设备试剂采便盒、Cary-Blair运送培养基、亚硒酸增菌液（SF）、改良亚硒酸盐磺绿增菌肉汤（SBG）、沙门志贺培养液、木糖-赖氨酸-脱氧胆酸琼脂（XLD）、麦康凯琼脂、沙门显色培养基、结晶紫沙门培养基（YS）、三糖铁（TSI）、动力-吲哚-尿素培养基（MIU）、沙门氏菌属诊断血清、志贺氏菌属诊断血清、API20E生化试剂条、磁珠菌种保存管仪器设备恒温培养箱、微生物鉴定仪五、采样方法标本应为新鲜的或转移至Cary-Blair运送培养基的粪便或肛拭子，最优标本是转移到Cary-Blair运送培养基的粪便拭子。

肛拭子不是最佳标本，仅在病人无粪便标本时采用。

粪便标本：应采集自然排出的新鲜粪便，取稀水样、粘血样、脓血样，黏液样部分。

盛于清洁、干燥、无吸水性的无菌容器，避免混入尿液、水和其他物质。

肛拭标本：若无法获得粪便（如排便困难或婴幼儿），也可以采用肛拭子，即无菌棉拭子用生理盐水湿润后，插入肛门内4-5cm处〈儿童约2-3cm），同一方向轻轻旋转2-3周。

以目测能见到粪便为准。

插入Cary-Blair运送培养基。

标本采集后立即送至实验室进行检测，若室温保存，不能超过1h；如不能立即送检，应放入Cary-Blair运送培养基中冷藏条件下24小时内送检。

六、检验程序七、操作步骤分别标记一个XLD平板（或YS平板、麦康凯平板）和1管9ml改良亚硒酸盐磺绿增菌肉汤（SBG）（或SF增菌液或沙门志贺培养液）。

志贺氏菌属诊断血清学试验操作程序1.目的制定标准化的志贺氏菌属诊断血清操作程序，指导对志贺氏菌属的检测2.原理用志贺氏菌属的代表菌株制成灭活菌抗原分别或混合免疫家兔所得的血清，经吸收出去非特异性凝集素后制成，通过凝集试验原理诊断各型志贺氏菌。

3.试剂及实验设备3.1志贺氏菌属诊断血清：宁波天润生物药业有限公司生产的规格为22种的志贺氏菌属诊断血清3.2试剂保存：2~8°C避光保存，防止冻结，在有效期内使用。

3.3实验设备：玻片、吸样枪、接种环、水浴箱、玻璃管、血平板、营养琼脂、电热高温接种灭菌器。

4.程序步骤4.1将诊断血清于冰箱取出后平衡至室温。

4.2选择符合志贺氏菌属培养特性，并经初步生化检测符合志贺菌属生物特性的疑似菌落。

4.3菌群分析将经18~24h血平板上纯培养的待检菌，分别用志贺氏菌属4种多价血清做玻片凝集试验，凝集阳性时，再分别用群多价血清做玻片凝集试验，群多价血清凝集阳性时，再分别与相应的单价血清做玻片凝集试验，最终确定其血清分型。

如果志贺氏菌属4种多价血清做玻片凝集试验均为阴性，可能有以下3种可能性：①K抗原的存在，处理方法：取待检菌的纯菌落于生理盐水中制成浓度约2麦氏单位的菌悬液，置于100°C水浴中煮沸30min，泠却至室温后再用诊断血清进行玻片凝集试验；②非典型菌落，处理方法：通过在营养琼脂平板上的传代让其恢复抗原性，再用诊断血清进行玻片凝集试验；③诊断血清型以外的可送市或省CDC检测。

4.4玻片凝集试验法取18~24h血平板上纯培养的待检菌，用生理盐水制成2麦氏单位的菌悬液，取诊断血清20μL于洁净玻片上，然后取20μL待检菌悬液与血清混匀，轻轻摇动玻片，1min内呈现明显凝集者为阳性，呈均匀浑浊者为阴性，每次凝集试验均应以生理盐水作为阴性对照试验。

若与福氏志贺氏菌单价血清呈现凝集可参照福氏志贺氏菌诊断抗原表（见附表）及生化特性做菌型诊断。

5.质量控制志贺氏菌属4种多价血清选择福氏志贺氏菌属为阳性对照株；选择大肠埃希菌ATCC25922为阴性对照菌株。

志贺氏菌的检验（国标法）一、增菌称取检样25g ,加入装有225mLGN增菌液的500mL广口瓶内，固体食品用均质器以8000-10000r/min打碎lmin ,或用乳钵加灭菌砂磨碎，粉状食品用金属匙或玻璃棒研磨使其乳化，于36℃培育6〜8h。

培育时间视细菌生长状况而定，当培育液消失稍微混浊时即应中止培育。

二、分别和初步生化试验取增菌液1环，划线接种于HE琼脂平板或SS琼脂平板1个；另取1环划线接种于麦康凯琼脂平板和伊红美蓝琼脂平板各1个，于36工培育18~24h e志贺氏菌在这些培育基上呈现无色透亮不发酵乳糖的菌落。

挑取平板上的可疑菌落，接种三糖铁琼脂和葡萄糖半固体各1管。

一般应多挑几个菌落，以防遗漏，经36℃培育18~24h ,分别观看结果。

下述培育物可以弃去：a.在三糖铁琼脂斜面上呈扩散生长的培育物；b.在18~24h内发酵乳糖、蔗糖的培育物;C.不分解葡萄糖和只生长在半固体表面的培育物；d.产气的培育物；e.有动力的培育物；f.产生硫化氢的培育物。

凡是乳糖、蔗糖不发酵，葡萄糖产酸不产气（福氏志贺氏菌6型可产生少量气体），无动力的菌株，可做血清学分型和进一步的生化试验。

三、血清学分型挑取三糖铁琼脂上的培育物，做玻片凝集试验。

先用4种志贺氏菌多价血清检查，假如由于K抗原的存在而不消失凝集，应将菌液煮沸后再检查；假如呈现凝集，则用Al、A2、B群多价和D群血清分别试验。

如系B群福氏志贺氏菌，则用群和型因子血清分别检查。

福氏志贺氏菌各型和亚型的型和群抗原见表10可先用群因子血清检查，再依据群因子血清消失凝集的结果，依次选用型因子血清检查。

4种志贺氏菌多价血清不凝集的菌株，可用鲍氏多价1、2、3分别检查，并进一步用1~15各型因子血清检查。

假如鲍氏多价血清不凝集，可用痢疾志贺氏菌3~12型多价血清及各型因子血清检查。

四、进一步的生化试验在做血清学分型的同时，应做进一步的生化试验，即：葡萄糖镀西蒙氏柠檬酸盐赖氨酸和鸟氨酸脱竣酶pH7.2尿素KCN生长水杨昔和七叶昔的分解除宋内氏菌和鲍氏13型为乌氨酸阳性外，志贺氏菌属的培育物均为阴性结果。

志贺氏菌检测志贺氏菌检测1 设备和材料除微生物实验室常规灭菌及培养设备外，其他设备和材料如下：恒温培养箱：36℃±1℃；冰箱：2℃～5℃；膜过滤系统；厌氧培养装置：℃±1℃；电子天平：感量0.1g；显微镜：10×～100×；均质器；振荡器；无菌吸管：1ml（具刻度）、10ml（具刻度）或微量移液器及吸头；无菌均质杯或无菌均质袋：容量500ml；无菌培养皿：直径90mm；pH计或pH比色管或精密pH试纸；全自动微生物生化鉴定系统。

2 培养基和试剂志贺氏菌增菌肉汤-新生霉素：见附录中1。

麦康凯（MAC）琼脂：见附录中2。

木糖赖氨酸脱氧胆酸盐（XLD）琼脂：见附录中3。

三糖铁（TSI）琼脂：见附录中4。

营养琼脂斜面：见附录中5。

半固体琼脂：见附录中6。

葡萄糖铵培养基：见附录中7。

尿素琼脂：见附录中8。

β-半乳糖苷酶培养基：见附录中9。

氨基酸脱羧酶试验培养基：见附录中10。

糖发酵管：见附录中11。

西蒙氏柠檬酸盐培养基：见附录中12。

粘液酸盐培养基：见附录中13。

蛋白胨水、靛基质试剂：见附录中14。

志贺氏菌属诊断血清。

生化鉴定试剂盒。

4 操作步骤增菌以无菌操作取检样25g（ml），加入装有灭菌225ml志贺氏菌增菌肉汤的均质杯，用旋转刀片式均质器以8000r/min～10000r/min均质；或加入装有225ml 志贺氏菌增菌肉汤的均质袋中，用拍击式均质器连续均质1min～2min，液体样品振荡混匀即可。

于℃±１℃，厌氧培养16h～20h。

分离取增菌后的志贺氏增菌液分别划线接种于XLD琼脂平板和MAC琼脂平板或志贺氏菌显色培养基平板上，于36℃±1℃培养20h～24h，观察各个平板上生长的菌落形态。

宋内氏志贺氏菌的单个菌落直径大于其他志贺氏菌。

若出现的菌落不典型或菌落较小不易观察，则继续培养至48h再进行观察。

志贺氏菌在不同选择性琼脂平板上的菌落特征见表1。

志贺氏菌检验志贺氏菌属于肠杆菌科，是一种革兰氏阴性菌，会引起肠道感染，引发肠炎，当人出现连续性腹泻、腹痛等症状的时候，就需要考虑是否感染志贺氏菌。

志贺氏菌的传播途径主要是食物和水，比如沙拉、土豆、金枪鱼、虾、奶制品等，在密闭以及不卫生的条件下志贺氏菌会迅速传播，而且经常出现在人员比较密集的地方，比如餐厅、食堂等地。

食源性志贺氏菌的传播主要是因为从事食品工作的人员感染了志贺氏菌，并且将其传播到食物上所引起的，另外，保存食物的温度不当，也可能引起志贺氏菌。

志贺氏菌检验是临床上检验肠道感染疾病的一个重要途径，在检测过程中常用的方法有以下几种。

一、生化鉴定法常规的生化鉴定方法是志贺氏菌检验过程中的常用方法，需要对细菌进行增殖培养、分离、生化试验、血清学检验等步骤来完成，步骤比较繁琐，而且耗时较长，每一次一般只能检验一个样品，但是检测的结果比较准确，检测稳定性较高，假阳性率低。

二、免疫学检验方法免疫学是检验志贺氏菌最快速、准确的方法，特异性较强，而且灵敏度很高，主要的免疫学检验方法有以下几种：第一，酶联免疫法。

这种方法的灵敏度很高，而且简单快速，检测过程比较稳定，可以进行自动化操作，是志贺氏菌检测过程中最快速的一种方法。

但是，使用酶联免疫法进行检验的时候，影响检测结果的因素较多，而且假阳性率高，所以还需要采用其他的方法进行配合检验。

第二，SPA协同凝集法。

这种方法是使用已知标准血清吸附到含Ａ蛋白的金黄色葡萄球菌表面之后，让金黄色葡萄球菌成为吸附抗体的载体，再根据吸附的结果来诊断是否感染志贺氏菌的一种方法。

三、分子生物学方法分子生物学是建立在很多其他的检测技术基础上的，敏感度高、检测快速，而且特意性高，是生物技术革命的一个重要产物，目前在志贺氏菌的检测过程中十分常见。

志贺氏菌的分子生物学检测方法有以下几种：第一，聚合酶链式反应法，比如常规PCR、多重PCR法、实时荧光PCR法和恒温荧光PCR法等。

以恒温实时荧光PCR法为例，这种方法的原理是利用环介导等温扩增反应为原理进行测量的方法，灵敏度很高，与传统的荧光测量方法相比，灵敏度高出2～5个数量级，而且测量十分迅速，荧光反应的时间较短，一般30-60分钟就可以完成荧光反应。

志贺氏菌检测标准志贺氏菌是一类常见的细菌，它造成了许多消化系统疾病。

为了确保消费者的安全，食品厂商和相关组织都需要进行志贺氏菌的检测。

本文将详细介绍有关志贺氏菌检测的标准，以确保消费者的健康和安全。

第一步骤：选择适当的样本检测开始前，需要选择适当的样本。

这可以是从环境，食品或水源中收集得到的，以确定是否存在志贺氏菌。

通常，人们从肉类，奶类以及其他易受污染的食品等选择样本进行检测。

选择适当的样本对于获得准确的结果非常重要。

第二步骤：采集样本在进行检测前，样本需要采集。

采集需采取规范化程序，以确保采集的样品实际上代表了被检测对象的状况。

采集过程需要避免污染样品，否则可能影响检测结果。

第三步骤：样本处理样品处理是保证测试数据准确性的关键，它可以消除干扰物质和旁边生物。

对于厨房和医疗设施，在处理志贺氏菌样品时应该采取严格的操作。

操作过程应精确规范，以保证样品不与其他样品的任何形式发生交叉污染。

第四步骤：实验室测试在实验室中进行测试是一种保证分析的准确性的方式。

志贺氏菌检测一般使用PCR或者培养方法进行。

不同的实验室可能采用不同的实验操作方法，因此测试数据包括实验的操作条件和环境条件等因素可能会有所不同。

第五步骤：分析测试结果在分析测试结果时，需要考虑到数据的相对稳定性和准确性问题。

分析的结果应包括相关的质量控制数据，以便能够确定测试是否正确进行。

正确的数据分析必须满足比如重复性，标准色谱的基本要求，因此必须引入知识和技术。

总之，通过以上五个步骤，我们可以实现对志贺氏菌的高效检测，并确保消费者的食品安全。

当然，我们在使用志贺氏菌检测标准时，需要时刻关注其技术竞争力和检测过程的规范化，这将为消费者提供一个安全的健康环境，成为维护人民健康的重要保障。