食品中志贺氏菌检验

试题单
试题代码：1.1.1
试题名称：乳粉志贺氏菌检验
规定用时：240min
1、操作条件
（1）乳粉样品
（2）生物安全柜
（3）志贺氏菌检验培养基和试剂
（4）检验常用玻璃器皿
（5）检验设备
（6）常用耗材
（7）检验方法标准（GB/T 4789.5-2003）（8）志贺氏菌阳性平板、阳性生化管培养物
2、操作内容
（1）选择检验设备、培养基和稀释液
（2）检验乳粉中志贺氏菌
（3）对考场提供的阳性培养物进行检验操作（4）填写检验原始记录，对检验结果做出判定（5）实验后消毒处理
3、操作要求
（1）正确选择检验设备、培养基和以及试剂（2）按检验方法标准操作
a．无菌操作
b．样品制备
c．检验操作步骤
d．检验结果观察并作判断
（3）逐项填写实验记录
（4）做好实验后消毒处理工作
答题卷
试题代码：1.1.1
姓名：准考证号：1、选用设备和培养基试剂
2、实验记录表
食品检验工（三级）操作技能鉴定试题评分表与参考答案
考评员（签名）：考评日期。

中华人民共和国国家标准食品卫生微生物学检验沙门氏菌、志贺氏菌和致泻大肠中华人民共和国国家标准食品卫生微生物学检验沙门氏菌、志贺氏菌和致泻大肠埃希氏菌的肠杆菌科噬菌体检验方法Mic伪biological examination of food hygi叨ewe Examination of Salmonellae , Shigellae , and diarrhoea causative及cherich血coli妙means of thed泣agnostic typing phage set for enterobacteriaceae前言本标准对GB/T4789.31一1994袭食品卫生微生物学检验沙门氏菌、志贺氏菌和致泻大肠埃希氏菌肠杆菌科噬菌体检验方法》进行修订。

本标准与GB/T4789.31一19料相比主要修改如下：―按照GB/T1.1一2000对标准文本的格式和文字进行修改。

―规范原标准中的“设备和材料”。

本标准自实施之日起，GB/T4789.31一19944同时废止。

本标准由中华人民共和国卫生部提出并归口。

本标准起草单位：江西省卫生防疫站、中国疚病预防控制中心营养与食品安全所。

本标准主要起草人：何晓青、付萍、计融。

本标准于1994年首次发布，本次为第一次修订。

范围本标准规定了应用肠杆菌科噬菌体诊断法检验食品中沙门氏菌、志贺氏菌和致泻大肠埃希氏菌的基本要求、操作程序和结果判定本标准适用于各种食品、食物中毒的检验，也适用于食品从业人员的肠道沙门氏菌和志贺氏菌带菌检验．2、规范性引用文件下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。

凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。

凡是不注日期的引用文件，其墩新版本适用于本标准。

GB／T4789.4食品卫生微生物学检验沙门氏菌检验GB/T4789.5一2003食品卫生微生物学检验志贺氏菌检验GB/T4780.6食品卫生微生物学检验致泻大肠埃希氏菌检验GB/T4789.28一2003食品卫生微生物学检验染色法、培养基和试剂3、设备和材料3.1恒温培养箱：36℃士1℃。

食品微生物学检验志贺氏菌检验1、范围适用于食品中志贺氏菌的检验2、设备和材料2.1恒温培养箱：36℃±1℃2.2冰箱：2℃—5℃2.3厌氧培养装置：41.5℃±1℃2.4电子天平；2.5显微镜2.6均质器；2.7无菌吸管；2.8无菌均质杯；2.9无菌培养皿，直径90mm；2.10生化鉴定试剂盒；2.11比浊管及比浊管架；3、培养基和试剂3.1志贺氏菌增菌肉汤-新生霉素3.2麦康凯琼脂（MAC）3.3木糖赖氨酸脱氧胆酸盐琼脂（XLD）3.4志贺氏菌显色培养基3.5三糖铁琼脂3.6营养琼脂平面4、操作步骤4.1增菌以无菌操作取检样25g（mL），加入装有灭菌225mL志贺氏菌增菌肉汤的均质杯，用旋转刀片均质器以8000r/min~10000r/min均质，于41.5℃±1℃厌氧培养16h~20h。

4.2分离取增菌后的志贺氏菌液分别划线接种于XLD琼脂平板和MAC琼脂平板或志贺氏菌显色培养基平板上，于36℃±1℃培养20h~24h，观察各个平板上生长的菌落形态，若出现的菌落不典型或菌落较小不易观察，则继续培养至48h进行观察。

志贺氏菌在不同选择性琼脂平板上的菌落特征见表1.表1 志贺氏菌在不同选择性琼脂平板上的菌落特征4.3 初步生化试验(1)自选择性琼脂平板上分别挑取2个以上典型或可疑菌落，分别接种TSI.半固体和营养琼脂斜面各一管。

置36℃±1℃培养20h～24h，分别观察结果。

(2)凡是三糖铁琼脂中斜面产碱，底层产酸（发酵葡萄糖，不发酵乳糖，蔗糖）.不产气（福氏志贺氏菌6型可产生少量气体），不产硫化氢，半固体管中无动力的菌株，挑取其5.3.1中已培养的琼脂斜面上长的菌落，进行生化试验和血清学分型。

5、生化试验(1)生化试验（生化鉴定试剂盒）a.菌悬液的制备取一支盛有2ml无菌水的试管；用接种针挑取可疑菌落至无菌水中；仔细研磨，与标准浊度管比较，制成0.5个麦氏浊度的均匀菌悬液。

志贺氏菌检验志贺氏菌属于肠杆菌科，是一种革兰氏阴性菌，会引起肠道感染，引发肠炎，当人出现连续性腹泻、腹痛等症状的时候，就需要考虑是否感染志贺氏菌。

志贺氏菌的传播途径主要是食物和水，比如沙拉、土豆、金枪鱼、虾、奶制品等，在密闭以及不卫生的条件下志贺氏菌会迅速传播，而且经常出现在人员比较密集的地方，比如餐厅、食堂等地。

食源性志贺氏菌的传播主要是因为从事食品工作的人员感染了志贺氏菌，并且将其传播到食物上所引起的，另外，保存食物的温度不当，也可能引起志贺氏菌。

志贺氏菌检验是临床上检验肠道感染疾病的一个重要途径，在检测过程中常用的方法有以下几种。

一、生化鉴定法常规的生化鉴定方法是志贺氏菌检验过程中的常用方法，需要对细菌进行增殖培养、分离、生化试验、血清学检验等步骤来完成，步骤比较繁琐，而且耗时较长，每一次一般只能检验一个样品，但是检测的结果比较准确，检测稳定性较高，假阳性率低。

二、免疫学检验方法免疫学是检验志贺氏菌最快速、准确的方法，特异性较强，而且灵敏度很高，主要的免疫学检验方法有以下几种：第一，酶联免疫法。

这种方法的灵敏度很高，而且简单快速，检测过程比较稳定，可以进行自动化操作，是志贺氏菌检测过程中最快速的一种方法。

但是，使用酶联免疫法进行检验的时候，影响检测结果的因素较多，而且假阳性率高，所以还需要采用其他的方法进行配合检验。

第二，SPA协同凝集法。

这种方法是使用已知标准血清吸附到含Ａ蛋白的金黄色葡萄球菌表面之后，让金黄色葡萄球菌成为吸附抗体的载体，再根据吸附的结果来诊断是否感染志贺氏菌的一种方法。

三、分子生物学方法分子生物学是建立在很多其他的检测技术基础上的，敏感度高、检测快速，而且特意性高，是生物技术革命的一个重要产物，目前在志贺氏菌的检测过程中十分常见。

志贺氏菌的分子生物学检测方法有以下几种：第一，聚合酶链式反应法，比如常规PCR、多重PCR法、实时荧光PCR法和恒温荧光PCR法等。

以恒温实时荧光PCR法为例，这种方法的原理是利用环介导等温扩增反应为原理进行测量的方法，灵敏度很高，与传统的荧光测量方法相比，灵敏度高出2～5个数量级，而且测量十分迅速，荧光反应的时间较短，一般30-60分钟就可以完成荧光反应。

志贺氏菌检测标准志贺氏菌是一类常见的细菌，它造成了许多消化系统疾病。

为了确保消费者的安全，食品厂商和相关组织都需要进行志贺氏菌的检测。

本文将详细介绍有关志贺氏菌检测的标准，以确保消费者的健康和安全。

第一步骤：选择适当的样本检测开始前，需要选择适当的样本。

这可以是从环境，食品或水源中收集得到的，以确定是否存在志贺氏菌。

通常，人们从肉类，奶类以及其他易受污染的食品等选择样本进行检测。

选择适当的样本对于获得准确的结果非常重要。

第二步骤：采集样本在进行检测前，样本需要采集。

采集需采取规范化程序，以确保采集的样品实际上代表了被检测对象的状况。

采集过程需要避免污染样品，否则可能影响检测结果。

第三步骤：样本处理样品处理是保证测试数据准确性的关键，它可以消除干扰物质和旁边生物。

对于厨房和医疗设施，在处理志贺氏菌样品时应该采取严格的操作。

操作过程应精确规范，以保证样品不与其他样品的任何形式发生交叉污染。

第四步骤：实验室测试在实验室中进行测试是一种保证分析的准确性的方式。

志贺氏菌检测一般使用PCR或者培养方法进行。

不同的实验室可能采用不同的实验操作方法，因此测试数据包括实验的操作条件和环境条件等因素可能会有所不同。

第五步骤：分析测试结果在分析测试结果时，需要考虑到数据的相对稳定性和准确性问题。

分析的结果应包括相关的质量控制数据，以便能够确定测试是否正确进行。

正确的数据分析必须满足比如重复性，标准色谱的基本要求，因此必须引入知识和技术。

总之，通过以上五个步骤，我们可以实现对志贺氏菌的高效检测，并确保消费者的食品安全。

当然，我们在使用志贺氏菌检测标准时，需要时刻关注其技术竞争力和检测过程的规范化，这将为消费者提供一个安全的健康环境，成为维护人民健康的重要保障。

实验六食品中志贺氏菌的检验一、实验目的要求1、了解食品的质量与志贺氏菌检验的意义。

2、掌握志贺氏菌的生物学特性。

3、掌握志贺氏菌检验的生化试验的操作方法和结果的判断。

4、掌握志贺氏菌属血清学试方法。

5、掌握食品中志贺氏菌检验的方法和技术。

二、原理志贺氏菌属（Shigella）的细菌（通称痢疾杆菌），是细菌性痢疾的病原菌。

临床上能引起痢疾症状的病原生物很多，有志贺氏菌、沙门氏菌、变形杆菌、大肠杆菌等，还有阿米巴原虫、鞭毛虫、以及病毒等均可引起人类痢疾，其中以志贺氏菌引起的细菌性痢疾最为常见。

人类对痢疾杆菌有很高的易感性。

在幼儿可引起急性中毒性菌痢，死亡率甚高。

所以在食物和饮用水的卫生检验时，常以是否含有志贺氏作为指标。

志贺氏菌属细菌的形态与一般肠道杆菌无明显区别，为革兰氏阴性杆菌，长约2-3μ m ,宽0.5-0.7μ m 。

不形成芽胞，无荚膜，无鞭毛，不运动，有菌毛。

志贺氏菌属的主要鉴别特征为：无鞭毛，不运动，对各种糖的利用能力较差，并且在含糖的培养基内一般不产生气体。

志贺氏菌的进一步分群分型有赖于血清学试验。

三、试剂和仪器（一）最先准备的器材规格名称数量用途1、500ml广口瓶1个稀释样品2、500ml三角瓶1个制增菌液3、250ml三角瓶6个制培养基4、18×180mm试管8支制三糖铁培养基5、13×100mm试管40支制蛋白胨水等6、1ml移液管2支7、10ml移液管 2 支8、直径为90 mm平皿12套制SS、EMB平板9、250ml量筒1支（二）应灭菌的其它器材剪刀1把不锈钢汤匙1把称量纸适量（三）应准备的培养基和试剂培养基总量所用容器1.GN 增菌液225ml/瓶1瓶500ml三角瓶2.EMB培养基100ml/瓶1瓶250ml三角瓶3.SS琼脂100ml/瓶1瓶250ml三角瓶4.三糖铁斜面6ml/支6支15×150mm试管5.葡萄糖半固体培养费基4ml/支5支13×100mm试管6.蛋白胨水2ml/支5支13×100mm试管7.5%乳糖发酵管3ml/支5支13×100mm试管8.甘露醇发酵管3ml/支5支13×100mm试管9.棉子糖发酵管3ml/支5支13×100mm试管10.甘油发酵管3ml/支5支13×100mm试管11.兔血浆3ml/支1支13×100mm试管12.多价血清和26种因子血清四、实验内容样品处理→→选择性增菌→→选择性平板分离→→生化学试验→→血清学试验鉴别→→结果报告第一天样品处理和增菌培养（一）、样品处理无菌操作称取检样25g，加入装有225mLGN增菌液的500mL广口瓶内，固体食品用均质器以8000-10000r/min打碎1min，或用乳钵加灭菌砂磨碎，粉状食品用金属匙或玻璃棒研磨使其乳化。