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柱前衍生高效液相色谱法测定四氢噻唑_2_硫酮_4_羧酸的光学纯度

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不同反应时间取样进行 HPLC分析 , 0. 21 g甲苯作内标物 ,产品与内标物峰面积之比对时间作图 , 发现反应 2 h以上 ,这个比例不再改变 。所以反应时间定为 2 h。
3 结果与讨论
3. 1 二极管阵列紫外检测器和在线旋光检测仪对 TTCA 衍生物检测 在流动相为正己烷 ∶乙醇 ( 93 ∶7, V /V ) 、柱温为 35℃的 HPLC 条件下 , DNB 2Leucine手性柱对 TTCA
第 4期
余 荔等 :柱前衍生高效液相色谱法测定四氢噻唑 222硫酮 242羧酸的光学纯度
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定不同温度下 TTCA 衍生物在 DNB 2Leucine拆分情况 ,结果如图 3所示 。温度对 TTCA 衍生物在手性固 定相上的分离具有一定的影响 。随着温度的降低 ,溶质在固定相和流动相之间传质速度变慢 ,两对映体 保留时间延长 ,分离因子 α也增大 。但是温度低时 ,保留时间较长 ,不适合于分析 。所以 ,确定实验温 度为 35℃。
1. 56 1. 49 1. 44 1. 37 1. 28 1. 15
正己烷 ∶异丙醇 Hexane∶isop ropanol
95 ∶5 90∶10 85∶15
13. 160 6. 651 3. 794
14. 776 7. 462 4. 220
1. 122 1. 123 1. 112
1. 32 1. 24 1. 09
衍生物对映体的拆分能达到基线分离 。用二极管阵列紫外检测器进行检测时 ,两个对映体峰的相关度 (0. 9998)很高 ,说明这两个峰可能是一对对映体峰 (如图 1) 。在线旋光检测仪的检测结果证实这两个 峰是对映体峰 (如图 2) 。
图 1 二极管阵列检测器对 TTCA衍生物的检测结果 Fig. 1 Chromatogram of 22thiothizaolidine242carboxylic acid ( TTCA ) derivative detected by photo2diode array de tec to r
关键词 高效液相色谱 ,柱前衍生化 ,手性固定相 ,四氢噻唑 222硫酮 242羧酸 ,光学纯度
1 引 言
(R ) 2四氢噻唑 222硫酮 242羧酸 ( (R ) 222thiothiazolidine242carboxylic acid, (R ) 2TTCA )是一种较新的手 性拆分试剂 ,可用于拆分氨基酸酯 、氨基醇 、苯乙胺等外消旋体 [1 ] ,它还是作为检查尿样中二氧化硫含 量的标准试剂 [ 2 ] 。目前采用的反相色谱法只能检测出 TTCA 的含量 [ 3, 4 ] ,不能拆分 TTCA 消旋体得到单 一对映体 ,也不能检测出 (R ) 2TTCA 的光学纯度 。但作为手性拆分试剂 ,仅知道其旋光度值而不了解其 光学纯度 ,不仅影响高光学纯度 (R ) 2TTCA 合成的优化研究 ,也直接妨碍其应用 。目前有关用手性色谱 柱直接拆分 TTCA 消旋体尚未见报道 。本研究前期工作曾尝试用 OD 2H、W helk2O1、DMB、DNB 2Leucine、 DNB 2PG等手性柱对 TTCA 消旋体进行直接拆分 ,没有获得成功 。所以本实验采用柱前衍生化法 。虽 然用手性试剂衍生样品通常能加强手性柱的对映体的分离能力 ,但是要求手性衍生化试剂有足够的光 学纯度 (纯度 > 99% ) ,且应避免在衍生化过程中外消旋化 。而用非手性试剂衍生化并通过手性固定相 分离 ,因无需光学纯试剂 ,应用范围较广 ,已受到关注并得到应用 [ 5 ] 。
2006208230收稿 ; 2006211215接受 本文系四川省科技厅应用基础研究基金资助项目 (No. 04JY029208323) 3 E2mail: hangsong@ vip. sina. com
5 46
分析化学
第 35卷
乙酸乙酯测定 tM 。 2. 2. 2 样品衍生化处理 用苯胺将 TTCA 衍生化 [ 7 ] 。称取 0. 164 g ( 1 mmo l) TTCA 溶于 20 mL 二氯甲 烷中 ,加入缩合剂 EEDQ (22ethoxy212ethoxycarbonyl21, 22dihydroquinoline) 0. 494 g ( 2 mmol) ,待溶解后 , 再加入衍生化试剂苯胺 0. 091 mL (1 mmol) ,温度控制在 30℃。反应结束后 ,依次用 2 mol/L HCl和水 洗 ,干燥 徐 旭 杨 丹 陈宇静
(四川大学制药与生物工程系 ,成都 610065)
摘 要 用苯胺对四氢噻唑 222硫酮 242羧酸 ( TTCA)进行柱前衍生 ,将其衍生物在手性固定相上拆分 ,通过二 极管阵列紫外检测器和在线旋光检测仪对其衍生物进行检测 ,建立了一种拆分 TTCA 消旋体 、测定 TTCA 光 学纯度的新方法 。以正己烷和乙醇或异丙醇为流动相 ,在 DNB 2Leucine手性固定相上对 TTCA 衍生物进行了 拆分 ,并考察了流动相组成和柱温对其衍生物分离的影响 ,获得较优分析条件 ,分离因子大于 1. 2。非手性试 剂苯胺柱前衍生化法测定 (R ) 2TTCA 的光学纯度与旋光度方法比较 ,结果一致 ,相对偏差小于 1. 34%。
10次 ,相对标准偏差 (RSD )为 1. 12%。
表 2 旋光法与 HPLC法测定的 TTCA 光学纯度比较 Table 2 Comparison of TTCA enantiomeric purity determ ined by polarimeter and HPLC
样品编号 Samp le No.
3. 4 线性关系 、检出限及精密度
用 TTCA 衍生物消旋体和 (R ) 2TTCA 衍生物配制一系列标准液 。 TTCA 衍生物的浓度在 12. 5～300
mg /L 范围内 ,即 TTCA 的浓度在 8. 6 ～207 mg /L 范围内 ,标准曲线有良好的线性 。标准曲线分别为
Y(R, S) = 0. 3506X (R, S) + 0. 1403和 YR = 0. 3033XR + 0. 0647 ( Y为 TTCA 衍生物峰面积 , ×10 - 3 mAU s; X 为 TTCA 的浓度 , mg /L ) ,相关系数分别为 0. 9993和 0. 9995。 TTCA 的检出限为 39 μg /L。连续平行测定
2 实验部分
2. 1 仪器与试剂 LC220AT型高效液相色谱仪 、SPD 2M20A 检测器 (日本岛津公司 ) ; OR 22090在线旋光检测仪 (日本
JASCO 公司 ) ; Class VP色谱工作站 、HCT2360型柱温箱 (天津恒奥科技发展有限公司 ) ; Autopol IV 型旋 光仪 (美国 RUDOLPH 公司 ) 。正己烷 、乙醇 、异丙醇 ,在使用前都经过干燥和精馏处理 ,符合色谱使用 条件 。 (R ) 2TTCA 和 (R, S ) 2TTCA ,由本实验室制备 [ 6 ] 。其余试剂为分析纯 。 2. 2 实验方法 2. 2. 1 色谱条件 色谱柱 : DNB 2Leucine 250 mm ×4. 6 mm i. d. ( 5μm、10 nm , 美国 Regis Technologies 公司 ) 。所用 流 动 相 均 经 0. 45 μm 滤 膜 过 滤 并 超 声 脱 气 后 使 用 。本 研 究 中 流 动 相 的 流 速 均 为 1. 5 mL /m in;检测波长 247 nm。测定的样品用甲醇溶解 ,样品溶液浓度为 1 g /L ,进样量为 2 μg /次 ,用
和乙醇对分离的影响 。使用 DNB 2Leucine测定不同流动相极性下 TTCA 衍生物 ,其中柱温为 35℃的结
果列于表 1。由于乙醇的极性比异丙醇大 ,所以添加量
应较小 ;随着流动相极性的增大 ,对映体保留时间减小 , 分离因子 α和分离度 R 都减小 ; 流动相极性的微小变
化 ,对于对映体保留时间有较大的影响 。乙醇做流动相
本研究采用廉价易得的非手性试剂苯胺对 TTCA 进行柱前衍生化 ,然后在常用的手性柱上进行拆 分 。通过二极管阵列紫外检测器和在线旋光检测仪对 TTCA 2苯胺衍生物进行检测 ,确定了两个单一对 映体的保留时间 。并结合旋光度测定 ,确定该柱前衍生化法的可靠性和准确性 。非手性试剂苯胺柱前 衍生化法为准确测定 TTCA 光学纯度提供了一种可行的方法 。
第 35卷
分析化学 ( FENX I HUAXUE) 研究简报
第 4期
2007年 4月
Chinese Journal of Analytical Chem istry
545～548
柱前衍生高效液相色谱法测定 四氢噻唑 222硫酮 242羧酸的光学纯度
V /V
Capacity factor for the first2eluted enantiomer
Capacity factor for the second2eluted enantiomer
Separation factor
95 ∶5
10. 576
13. 034
1. 232
94 ∶6
8. 368
10. 071
1. 204
正己烷 ∶乙醇 H exane∶e thano l
93 ∶7 92 ∶8 90∶10
6. 929 5. 569 4. 352
8. 229 6. 549 5. 110
1. 188 1. 176 1. 174
88∶12
3. 332
3. 881
1. 165
分离度 R R e so lu tion
极性调节剂时 ,分离因子和分离度比异丙醇高 。实验表
明 ,当正己烷和乙醇的比例为 93 ∶7 (V /V )时 ,出峰时间
较短 ,分离因子和分离度较大 。
3. 3 温度对分离的影响 当流动 相 为 正 己 烷 ∶乙 醇 = 93 ∶7 (V /V ) 和 正 己

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柱前衍生化高效液相色谱法测定L-半胱氨酸原料中光学杂质

柱前衍生化高效液相色谱法测定L-半胱氨酸原料中光学杂质

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Ａ ｓｒｃ ： ｊｃｉｅ Ｔ ｓ ｂｉ Ｐ Ｃ ｍ ｔｏ ｏ ｂｎｎ ｉ ｒ —ｃｌｍ ｅｉ ｔ ａ ｏ ｏ ｅｅｍ ｎｎ ｈ ｅ ｔ ｉ ｍｅ ｉ ｐ ｒ ｙ ｏ ｂ ｔ ｔ Ｏｂ ｅｔ ｏ ｅｔ ｌ ｈ ａ Ｈ Ｌ ｅｈ ｄ ｃ ｍ ｉ ｇ ｗ ｔ ｐ ｅ ｏｕ ｎ ｄ ｒ ａ ｚ ｔ ｎ ｆ ｄ ｔ ｉ ｇ ｔｅ ｄ ｘ ｏ ｏ ｒ ｍ ｕ ｔ ｆ ａ ｖ ａ ｓ ｉ ｈ ｖｉ ｉ ｒ ｒ ｉ ｒｓ ｉ
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柱前衍生_高效液相色谱快速测定皮革和头发水解液中的氨基酸

柱前衍生_高效液相色谱快速测定皮革和头发水解液中的氨基酸

1 2 2 2 2
Abstract Ob jec tive : T o deve lo p a fast H PLC m ethod for deter m ining 17 comm on am ino acids in hydro ly sate o f leather and ha ir . M ethods : Am in o acids w ere separated on D ionex A ccla i m C18 ( 4 . 6 mm
-1
150 mm, 5 m ) co lu mn
w ith in 32 m in using 140 mm o l L sod ium acetate buffer so lution at pH 4 . 45 and 4 . 95 for grad ien t elution w ith acetonitrile- w ater( 60 40 , v /v ) and UV for detection after derivatization w ith A ccQ T ag derivatization reagen. t Re sults : The RSDs( n = 5) of retention t i m e and peak area of all am in o ac id sw ere less than 1 . 1 % and 5 . 0% , respec t iv e ly. T he li m it of detect io n( S /N = 3) w as in th e range o f 2 . 92- 4 . 51 pm o,l the linear range w as in the range o f - 1 - 1 2 2 . 5- 500 m o l L ( 1 . 25- 250 m o l L for cystine) w ith R 0 . 998 . T he spiked recovery of leather and ha ir w ere in the range of 80 . 1 % - 102 . 3 % and 85 . 3% - 103 . 2 % , respect iv ely. Conclusion: T he m ain advantages of the m ethod are si m p lified for the preparatio n o f m ob ile phase , cost sav in g , h ig h speed and less m atrix in terfer ence . It can be used for am ino acids deter m in ation in hydro ly sate of leather and ha ir effective ly . K ey w ord s : a m ino ac id s ; H PLC; pre- co lum n derivatizatio n ; leather ; hair 随着现代皮革工业的发展, 皮革化工材料及制 革理论都不断向现代化迈进 , 由于生皮的主要组成 是蛋白质, 整个制革过程离不开对蛋白质的研究, 氨 基酸是构成蛋白质的基本单元 , 因此分析氨基酸可 对蛋白质与皮化材料的相互作用作深入研究 , 从而 可推动现代皮革工业的快速发展。而毛发是提取各 种天然氨基酸的原料, 因此对皮革与毛发中氨基酸
柱前衍生高效液相色谱法测定灵芝孢子粉中氨基酸的含量

柱前衍生高效液相色谱法测定灵芝孢子粉中氨基酸的含量

柱前衍生高效液相色谱法测定灵芝孢子粉中氨基酸的含量殷娇阳1，阎　姝2，田书霞2摘要　目的：建立用于测定灵芝孢子粉中氨基酸含量的柱前衍生化高效液相色谱方法。

方法：采用邻苯二甲醛（OPA）和9-氯甲酸芴甲酯（FMOC）联用对灵芝孢子粉中的氨基酸进行衍生，色谱条件为：Advance Bio AAA（100 mm×4.6 mm，2.7 μm）色谱柱，流动相A为0.01 mol/L磷酸氢二钠和0.01 mol/L硼酸钠溶液，pH值为8.2±0.1，流动相B为甲醇︰乙腈︰水（45︰45︰10）。

流速：0.8 mL/min，柱温：45 ℃，进样量：10 μL，检测波长：338 nm和262 nm。

结果：灵芝孢子粉中检测的17种氨基酸在60 min内分离良好；在一定范围内线性关系良好(r≥0.999，n=6)；加样回收率为95.42%~99.38%，实验方法的精密度、重复性和稳定性的相对标准偏差（RSD）均小于3.0%。

结论：经方法学验证显示，本研究所建立的实验方法适用于灵芝孢子粉中17种氨基酸的含量测定。

关键词：灵芝孢子粉；高效液相色谱法；氨基酸；衍生化中图分类号：R282 文献标识码：A 文章编号：1007-6948(2021)02-0182-07doi：10.3969/j.issn.1007-6948.2021.02.004Assay of Amino Acids in Ganoderma Lucidum Spore Powder by Pre-column Derivatization HPLC YIN Jiao-yang, YAN Shu, TIAN Shu-xia School of Pharmacy, Tianjin Medical University, Tianjin (300070), China Abstract: Objective　To establish a pre-column derivatization-high performance liquid chromatography method for the determination of amino acids in ganoderma lucidum spore powder.　Methods　The amino acids in ganoderma lucidum spore powder were derivatized with o-phthalaldehyde (OPA) and 9-fluorenylmethoxycarbonyl chloride(FMOC). The chromatographic conditions were Advance Bio AAA (100 mm×4.6 mm, 2.7μm) column, and Mobile phase A was 0.01 mol/L disodium hydrogen phosphate and 0.01 mol/L sodium borate solution (pH: 8.2±0.1). Mobile phase B was methanol: acetonitrile: water (45:45:10), flow rate was 0.8 mL/min, the column temperature was 45 ℃, the injection volume was 10 μL and the detection wavelength was fixed at 338 nm and 262 nm.　Results　17 amino acids in Ganoderma lucidum spore powder were separated satisfactorily in 60 minutes. All the components exhibited good linear correlation in the given concentration range (r≥0.999, n=6). The recovery rate of the sample was between 95.42% and 99.38%. The RSD of the precision, repeatability and stability of the experimental method were all less than 3.0%.　Conclusion　The methodological verification shows that the established experimental method is suitable for the determination of 17 amino acids in ganoderma spore powder.Key words: Ganoderma lucidum spore powder; HPLC; amino acid; derivatization灵芝为多孔菌科真菌赤芝或紫芝的干燥子实体，灵芝药用在我国已有几千年的历史，被历代医药家视为滋补强壮、扶正固本的神奇珍品[1]。

柱前衍生法同时测定复方牛磺酸滴眼液中的3种成分

柱前衍生法同时测定复方牛磺酸滴眼液中的3种成分

柱前衍生法同时测定复方牛磺酸滴眼液中的3种成分刘永成;杨杨;王常禹【期刊名称】《中国药品标准》【年(卷),期】2018(019)002【摘要】目的:建立同时测定复方牛磺酸滴眼液中三种功效成分牛磺酸、氨基已酸、门冬氨酸的含量的方法.方法:以2,4-二硝基氟苯为衍生化试剂,采用柱前衍生-反相高效液相色谱法测定.色谱柱为C18柱,以0.05mol·L-1乙酸铵溶液-乙腈(850∶ 150)为流动相A,以乙腈-水(500∶ 500)为流动相B,梯度洗脱,柱温40℃;流速为1.0 mL·min-1,检测波长360 nm.结果:复方牛磺酸滴眼液中三种功效成分牛磺酸、氨基己酸、门冬氨酸可有效分离,门冬氨酸在0.000 3～0.3 mg·mL-1、牛磺酸在0.002～2.03 mg·mL-1、氨基己酸在0.002～2.0 mg·mL-1范围内线性良好.门冬氨酸、牛磺酸、氨基己酸平均回收率分别为100.8％(RSD=2.3％,n=9)、97.8％(RSD=1.6％,n=9)、99.3％(RSD=1.9％,n=9).测定样品5批,检测结果分别为门冬氨酸102.8％、103.1％、102.1％、102.4％、103.4％,牛磺酸102.1％、99.8％、102.6％、104.3％、103.1％,氨基己酸98.8％、99.4％、98.9％、104.2％、105.5％.结论:所建方法简便、重复性好,可用于复方牛磺酸滴眼液中三种功效成分牛磺酸、氨基己酸、门冬氨酸的含量测定.【总页数】6页(P135-140)【作者】刘永成;杨杨;王常禹【作者单位】黑龙江省食品药品检验检测所,哈尔滨150088;黑龙江省食品药品检验检测所,哈尔滨150088;黑龙江省食品药品检验检测所,哈尔滨150088【正文语种】中文【中图分类】R921.2【相关文献】1.柱前衍生化HPLC法同时测定复方甘草酸苷胶囊中甘氨酸和蛋氨酸的含量 [J], 靳颖华;张卫东;齐平2.柱前衍生化-高效液相色谱法测定复方牛磺酸滴眼液中牛磺酸与氨基己酸含量 [J], 汪玲;王莉艳;吴文耀3.柱前衍生化HPLC法同时测定注射用复方甘草酸苷中盐酸半胱氨酸和甘氨酸的含量 [J], 曹玲;张云楚4.柱前衍生HPLC/FLD-APCI/MS法同时测定藏药悬钩木中6种三萜酸类成分的含量 [J], 马志良; 赛桑杰; 多杰5.柱前在线衍生–高效液相色谱法同时测定复方丹参胶囊中19种氨基酸 [J], 许有诚;赵庄;李丹凤因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。