赛默飞世尔高效液相色谱仪与兰博柱后衍生系统操作规程

高效液相色谱操作规程（配示差折光检测器RID）一、开机前准备1.检查桌面是否清洁、整齐。

2.检查设备是否清洁，连接管线是否正常，色谱柱是否需要更换。

3.检查电源线有无破损。

4.接通电源，检查插座上各插孔的指示灯是否显示正常。

5.准备好超声过的流动相和流路冲洗溶剂。

二、开机1.运行检查，打开仪器各部件开关，待机器自检，核实无异常。

2.打开电脑，并打开软件。

（连接仪器与电脑）3.设定柱温箱温度一般为30℃。

4.拧松脱气阀（大约1.5圈左右），设定purge程序约5min,停止后拧紧阀门。

5.执行自动进样器清洗的三个命令（灌注注射器/Prime Syrings、清洗缓冲环/Wash Buf fer Loop和清洗真外壁/Wash Needle Externally）,并将进样阀切换至lnject的状态进行平衡（WPS带T的型号才可进行样品盘温度设置）6.打开示差折光检测器，设定purge程序约5min，停止后用配置好的有机相水溶液平衡30min。

7.监测基线，待平衡后开始测样分析。

三、关机1.关闭仪器各部件上的电源开关,并关闭电脑。

2.拔掉机器电源插头四、安全及操作注意事项1.流动相冲洗用的水，必须是重蒸水或2次蒸馏水，并用微孔滤膜过滤，而且要定期更换，防止长细菌堵塞仪器管路。

建议每周至少更换两次。

2.按比例配置流动相于一个泵中，并在测样时只使用一个泵中的流动相。

3.流动相中有盐或酸时，在流动相冲洗前后一定要用水冲洗流路，防止柱效下降、堵塞或柱塌陷。

4.设置梯度时维持同一梯度浓度至结束。

5.示差折光检测器对温度敏感，维持室内在一定温度。

6.仪器长期不用时，应用甲醇冲洗各流路。

柱后衍生系统操作注意事项柱后衍生系统是用于色谱分离后进行检测和分析的一种操作工具，它可以在分析结果基础上对分离样品进行深入分析，为研究提供更加全面和详细的数据。

在柱后衍生系统的操作中，需要注意以下事项：1. 仪器的准备工作：在开始操作柱后衍生系统之前，需要对仪器进行准备工作，包括装载试剂、填充试剂耗材、设置检测参数等。

确保仪器处于正常状态，各项参数设置正确。

2. 样品的处理：为保证柱后衍生系统的准确性和可靠性，样品处理尤为重要。

需要对样品进行前处理，去除杂质、沉淀和胶体等杂质，以提高柱后衍生的检测精度和准确性。

3. 试剂的选择和添加：柱后衍生系统中所用的试剂涉及到分析结果的准确度和灵敏度。

选择试剂一定要根据具体需要来设置，对于不同的分析对象选择不同的试剂有助于提高检测结果的可靠性。

4. 柱后衍生系统的操作规范：柱后衍生系统操作一定要按照规范来进行，操作步骤、试剂添加顺序、检测参数等必须依据仪器手册来执行。

任何不符合规范的操作可能会导致检测结果失准，严重影响后续分析。

5. 仪器的维护和保养：定期进行仪器的维护和保养是延长柱后衍生系统寿命的关键。

当仪器使用过程中出现故障或报警提示，必须要及时检查和修复，以免出现更加严重的问题。

6. 操作人员的安全：柱后衍生系统在操作过程中可能会产生有害气体或化学物质，需要注意操作安全。

在操作前必须仔细阅读操作手册和安全手册，按照具体的操作程序来执行，避免对人员和环境的影响。

7. 数据的处理和分析：柱后衍生系统操作完成后，需要对数据进行处理和分析，得出具有意义的结论。

数据的处理和分析过程需要认真细致，不能草率处理，得出不准确的结论。

只有真正的分析得出了正确的结论才是有意义的。

在柱后衍生系统的操作中，这些注意事项是不被忽略的，必须全都遵循。

这样，才能够保证柱后衍生系统的实验精度和可靠性。

高效液相色谱法操作步骤
高效液相色谱法的操作步骤如下:
1. 过滤流动相并根据需要选择不同的滤膜。

溶剂必须为色谱纯，且溶剂及样品必须过膜（0.45μm）。

超声脱气30分钟以上。

2. 用流动相冲洗金属过滤器，然后将过滤器浸入储液罐的流动相中。

有一段时间没用或者换了新的流动相，需要先冲洗泵和进样阀。

3. 将储液罐放置在一定的高度，以避免由于搬运和其他操作人员的移动而造成不必要的跌落。

4. 然后按以下顺序依次启动高效液相色谱仪：泵→检测器→高效液相色谱软件→设置软件参数，如分析时间、检测波长、流速等。

5. 启动泵，运行5分钟，主要是为了排除系统中的气泡，结束后关闭所有排气阀。

6. 然后按照预先计划的速度，以固定的速率，如1mL/min左右，运行流动相，走基线，直到基线平稳。

7. 基线平稳后，在软件中设置样品的运行参数，如流速和分析时间等。

分析时间会因样品、流速、柱长等因素变化。

8. 设计走样方法。

9. 在进样和进样后操作的过程中，需要及时调整和监控各项参数。

高效液相色谱仪操作说明书一、引言高效液相色谱仪（HPLC）是一种广泛应用于化学、生物医药、环境监测等领域的分析仪器。

本操作说明书旨在帮助用户正确有效地操作HPLC仪器，以获得准确可靠的分析结果。

二、仪器概述1. 主要组成：HPLC仪器主要包括进样系统、色谱柱、流动相装置、检测器及数据分析系统等组成部分。

2. 基本原理：HPLC利用流动相在高压下通过色谱柱，样品分离后再由检测器进行检测和信号记录，通过数据分析系统生成分离效果图谱或定量结果。

三、操作步骤1. 准备工作a) 确保仪器电源已接通，并检查各部分连接是否牢固。

b) 打开相关软件并进行系统初始化。

c) 根据待分析样品的特性，选择适宜的色谱柱和流动相。

2. 进样系统操作a) 将待测样品通过合适的方法制备成溶液。

b) 打开进样系统的相关开关，将样品通过进样针注入进样口。

c) 调整进样量和进样速度，确保样品完全被进样器吸取。

3. 色谱柱操作a) 将色谱柱连接到系统中，并确保连接处密封良好。

b) 根据样品性质选择合适的流动相和梯度条件，设置柱温以提高分离效果。

c) 在柱前和柱后设置适当的减压阀，调节流量和压力，确保色谱柱正常运行。

4. 流动相装置操作a) 根据检测要求准备合适的流动相溶液。

b) 将流动相溶液通过流动相装置输送至色谱柱，确保流速和流量稳定。

5. 检测器操作a) 打开检测器并进行相关参数设置，如波长选择、灵敏度调节等。

b) 将流经色谱柱的样品原液通过检测器进行检测，并记录信号。

6. 数据分析与结果生成a) 使用相应的数据分析软件，导入检测到的信号数据。

b) 根据需求进行峰面积积分、峰高浓度定量等相关数据分析。

c) 生成分析图谱或报告，并保存结果。

四、故障排除在操作过程中，可能会遇到一些故障情况，以下列举一些常见故障及其排除方法：1. 柱堵塞：检查柱前和柱后的减压阀是否打开和调整流量。

2. 波峰异常：检查流动相和检测器参数设置是否正确。

3. 信号丢失：检查进样系统是否正常工作，检查柱连接是否存在泄漏。

高效液相色谱仪操作规程1开机先打开电脑，再依次接通2695分离单元、检测器和打印机的电源（注：在打开2424蒸发光散射检测器电源之前，先开启气体供应）。

接通2695分离单元后，约20秒仪器自检，约1分钟后，显示主屏幕，此时继续各部件的初始化，待主屏幕上主标题区出现“Idle”仪器自检通过，进入待命状态。

2溶剂管理系统的准备2.1流动相的脱气确认所有溶剂管路都充满溶剂，按[Menu/Status]，进入“Status（1）”屏幕，光标选“Degasser”按[Enter]显示选项屏幕，Mode为“on”。

2.2启动溶剂管理系统2.2.1干启动当溶剂的管路是干的或是需要更换溶剂时，在“Status（1）”屏幕下，按[Direct Function]，光标选中“Dry Prime”，按[Enter]，显示“Dry Prime”屏幕，按欲启动的溶剂管路的屏幕键，如[Open A]，光标选“Duration”，按数字键输入时间（一般为5分钟），按[Continue]，待限定时间结束后，重复操作，使实验所需的各溶剂管路均启动、排气并充满流动相。

2.2.2湿启动在“Status（1）”屏幕下，光标选“Composition”中欲使用的流动相，输入100%，按[Direct Function]，光标选“Wet prime”，按“Enter”，显示Wet prime”屏幕，输入流速和时间（5ml/min和5min）按[OK]。

待限定时间结束后，对每种流动相重复操作。

3样品管理系统的准备A管带黄色标记、B管带蓝色标记号、C管带红色标记、D管带绿色标记，绿色管为冲洗泵头用，白色管为冲洗进样器用，所用溶剂均为甲醇：水=50%（v/v）。

将样品瓶插到样品盘合适的位置，打开样品仓门，显示“Door is Open”屏幕，装入样品盘，按[Next]，直至所有样品盘装毕，关仓门。

4编辑分析方法及执行样品分析表4.1创建项目双击电脑桌面图标“Empower”，用户名输入“system”密码输入“manager”选中操作项目和色谱系统→确定。

高效液相色谱使用操作规程高效液相色谱法是60年代后期迅速发展起来的新型色谱分析技术，是分析、分离、纯化与制备物质的优良方法。

它具有应用范围广、分离效能高、分离速度快、分离时间短、分析灵敏度高和测定精度高等特点。

高效液相色谱仪，一般是由贮液槽、高压泵、梯度流洗装置、进样器、柱箱与柱、检测器、显示器以及数据处理系统等装置组成。

高效液相色谱法通常分为如下几种类型：液--固吸附色谱法、液--液分配色谱法、反相色谱、离子抑制色谱和离子对色谱、离子色谱法、离子交换色谱法、凝胶色谱法等。

高效液相色谱仪属于精密化验仪器，使用时必须严格遵守该仪器操作规程。

1、液相色谱仪必须安装在干燥、清洁、温度相对恒定、有固定台面的化验室内。

力避受热、受潮、受振动、受污染。

2、进入色谱仪室前，必须换脱鞋、穿上工作服。

3、严格按照如下规程进行操作：（1）先打开输液泵，通入纯流动相（甲醇）30分钟；换待测物所需流动相，继续通入30分钟。

（2）打开检测器，预热30分钟。

（3）打开微机，进入色谱工作站，查看基线。

（4）进样分析，平行2--3次，相邻两次误差控制在0。

5--1%，取平均值，记录原始化验结果，开化验报告单。

（5）关机时，先关检测器，再更换纯流动相冲洗柱子30分钟，最后关闭输液泵。

4、色谱柱使用注意事项：（1）新买到的柱子，都需用标准试验混合物，在标准试验色谱条件下进行检验，此数据将作为检定柱子性能变化的参数依据。

（2）色谱柱在任何情况下都不能碰撞、弯曲或强烈震动。

（3）当柱子和色谱仪连结时，配件（阀件、管路）一定要清洗干净，否则易出现无名峰。

（4）配制两种或两种以上洗脱液时，一定要先脱气，再使用，以免产生气泡，影响分析工作的正常进行。

（5）柱子与进样阀、检测器连接时，不要用力过大，以免压紧螺丝时折断。

以不漏液为宜，通常先用手拧紧，再以搬手旋紧1/4到1/3扣即可。

（6）由脂溶性溶剂（如己烷）换成水溶性溶剂（如甲醇）时，要用泵打入两性溶剂二氯甲烷或异丙醇过渡一下。

液相色谱仪操作规程液相色谱仪操作规程一、安全操作要求1. 液相色谱仪为高压设备，请严格按照操作规程进行操作，避免发生安全事故；2. 操作过程中，严禁将手指或其他物体放入色谱仪中，以免发生伤害；3. 操作人员需穿戴实验服装，并戴上防护眼镜和手套，以确保实验安全；4. 在操作设备之前，必须先了解设备的构造和使用方法，熟悉仪器的功能和原理，避免误操作。

二、仪器准备1. 检查色谱仪是否适宜工作，各部件是否接好；2. 检查色谱柱是否完好，废止已过期的色谱柱；3. 检查试剂、溶剂是否充足，必要时补充；4. 检查移液器、压力表、紫外可见光谱检测器等是否正常运行；5. 检查液氮容器是否充足，如不足应及时补充。

三、操作步骤1. 打开色谱仪电源，等待仪器启动，加载系统软件；2. 在样品管中加入待测样品，以确保测定结果准确；3. 打开移液器，吸取样品，然后将样品注入色谱柱；4. 打开液氮气源，调节液氮气流速，保持液氮温度稳定；5. 打开溶剂泵，调节流速，使溶剂流经色谱柱；6. 打开紫外可见光谱检测器，选择适当的检测波长；7. 调节检测器灵敏度，并记录基线数值；8. 记录样品在色谱图上的峰值时间和峰面积，并进行结果分析；9. 关闭液氮气源，停止溶剂泵；10. 关闭仪器电源，彻底停止运行。

四、仪器维护1. 每次使用后，清洗液相色谱仪的各部件，确保清洁；2. 经常检查仪器的运行状态，及时发现并排除故障；3. 定期更换色谱柱，以确保分析结果的准确性；4. 保持液相色谱仪所在环境的整洁和干燥，避免灰尘和异物对仪器造成损害；5. 仪器长期不使用时，须进行维护保养，包括清洗仪器、润滑部件等。

五、事故处理1. 如发生仪器故障或液氮泄漏等紧急情况，应立即停止操作，关闭电源，并及时报告相关人员；2. 如出现样品泄漏，应立即进行封堵，将有关人员撤离，采取相应的紧急处置措施。

六、操作记录和数据处理1. 所有操作过程和结果应记录在操作日志中，包括样品名称、浓度、样品编号、色谱柱使用情况等；2. 将数据导出并进行统计和分析，得出相应的结论和建议。

高效液相色谱柱的正确使用液相色谱操作规程色谱是一种分离分析手段，分离是核心，因此担负分离作用的色谱柱是色谱系统的心脏。

对色谱柱的要求是柱效高、选择性好，分析速度快等。

关于色谱柱的安装、维护、保色谱是一种分离分析手段，分离是核心，因此担负分离作用的色谱柱是色谱系统的心脏。

对色谱柱的要求是柱效高、选择性好，分析速度快等。

关于色谱柱的安装、维护、保存以及由色谱柱导致的这样那样的色谱故障也是一门学问。

高效液相色谱柱的正确使用包含：加装保护柱，过滤流动相和样品，净化样品，避免过高的柱压，注意温度和酸碱度，正确及时的冲洗等。

1.加装保护柱保护柱的作用是过滤掉来自流动相和样品的化学“拉圾”同时也可以有效除去流动相和样品中的不溶物。

尽管现在的色谱仪在流动相吸入口、进样阀后部以及在色谱柱的两端都装有1、2μm等不同孔径的滤器,但滤器只能除去不溶性颗粒而不能除去化学污染,因此,加装保护柱是必要的,特别是在分析中药、中成药等复杂混合物和生物样品时更是保护分析柱必不可少的措施。

保护柱填料应与分析柱一致,粒径可较分析柱大。

保护柱属消耗品,经过一定次数的样品分析(5～1次)后,出现柱压显著升高或峰形变坏或基线漂移时,应考虑更换保护柱。

2.过滤流动相和样品流动相通常由水或缓冲溶液与有机溶剂混合而成,原则上,所有经过色谱柱的流动相均应过滤,但在实际操作上应视具体情况而有所区别:当有机溶剂用色谱纯级,水用石英亚沸水或其它超纯水时,在能确保水和有机溶剂的质量且没有受到污染时,过滤并无更多实际意义。

当流动相中含有缓冲盐时,则过滤是必要的,如前所述,当缓冲溶液放置一段时间(视环境温度不同而异,夏季一般不超过48h,冬季一般不超过一周)后,在使用前还应重新过滤。

所配制的样品试液在注入流路系统前均要经.45μm(.22μm则更好)孔径滤膜过滤。

要注意区分水系和油系,二者不可混用,以防止滤膜溶解而造成污染。

装流动相的容器和色谱系统中的在线滤器要定期清洗和更换,以避免滤器因过载而起不到过滤作用。

高效液相色谱仪操作步骤1.准备工作：a.检查设备是否正常运转，所有零件是否安装和连接正确。

b.检查每个必需的溶液和试剂是否充足并且符合规定的质量标准。

c.检查色谱柱是否装配完好，并根据要进行的分析校准适当的流量和压力范围。

d.打开色谱软件，并设置所需的分析方法和参数。

e.开始预热色谱柱直到达到所需的温度。

2.样品制备：a.准备待检测样品的溶液或提取物，并进行必要的预处理步骤，例如固相萃取、浓缩、稀释或离心等。

b.将样品溶液通过0.22微米滤膜过滤，以去除杂质、微粒和可能堵塞色谱柱的颗粒。

3.样品进样：a.打开进样器，并选择合适的样品进样模式（如定量进样或自动进样）。

b.使用微量注射器或自动进样器将样品注入进样器，并确定进样量符合分析方法的要求。

4.色谱柱选择：a.根据样品特性和分析目的选择合适的色谱柱类型（如反相、离子交换、大小排阻等），尺寸（长度和内径）和填充材料等。

b.根据样品的pH值调节移动相的酸碱度，以满足分析要求和保护色谱柱。

5.色谱条件设置：a.设置流量速率，根据色谱柱的额定最大流速和样品的分离要求来确定。

一般来说，较高的流速可提高分离速度，但也会降低分离效果。

b.设置柱温，并确保温度稳定在所需的分析条件下。

c.设置检测器的参数，如波长、增益、灵敏度等，以适应待测试样品的检测需求。

6.分析运行：a.开始进样和运行色谱，确保流量和压力稳定。

b.监测色谱峰形的变化和信号强度，以评估分离速度和效果。

c.记录每个样品的保留时间和峰高（面积），并进行相应的数据处理和分析。

7.数据处理：a.使用色谱软件导出和处理分析数据，如生成色谱图、峰面积测定、峰高度测定、定量计算等。

b.根据实验目的和要求，对分析数据进行统计学分析、校正和解释。

c.对数据进行结果汇总、报告撰写和存档。

8.后期维护：a.定期检查和维护仪器，如清洁色谱柱、更换零件、校准仪器、更换溶液等，以确保仪器的正常运行和结果的准确性。

b.对废液和废品进行妥善处理，符合环境保护要求。

高效液相色谱仪操作规程1.目的规范高效液相色谱分析仪的使用和维护。

2.范围高效液相色谱的使用和维护。

3.系统组成本系统由2487检测器（2414检测器），1515输液泵（1525输液泵），717自动进样器及EMPOWER系统组成。

4.程序4.1 流动相和样液制备4.1.1 过滤溶剂溶剂在使用前一定要用0.45μm的过滤器过滤。

4.1.2 保持储液瓶的清洁普通的溶剂瓶作流动相储液器应不定期废弃瓶子。

应用HPLC级的水或溶剂清洗，不能在清洗过程中留下污迹。

4.1.3 保证溶剂的质量一定要用HPLC级的溶剂，水也应达到HPLC级，同样也要使用高纯度的缓冲液。

将流动相过滤、脱气后，用封口膜及时封好待用。

将待测的液体样品经0.45μm的水相滤膜过滤后，滤液备用。

4.2 开机按照检测器、柱温箱、自动采样器、泵、计算机的顺序，依次接通电源。

每次使用示差折光检测器进行样品分析时，需要提前打开，预热稳定。

4.3 高压输液泵的操作4.3.1 液相色谱系统泵的流速在0.1-10.0ml/min之间，要保持泵的良好操作性能，必须维护系统的清洁，保证溶剂和试剂的质量，流动相的过滤和流动相的脱气。

下面列出预防泵故障的注意事项：（1）用高质量的试剂和HPLC级溶剂；（2）过滤流动相和溶剂；（3）脱气；（4）工作时使用泵头的排水孔不停的用10%甲醇/水的混合溶剂冲洗柱塞杆；（5）不让水和腐蚀性溶剂滞留在泵中；（6）定期更换垫圈；（7）加润滑油。

处于良好操作状态的泵，应该使色谱图上的基线平稳，保留时间的重复性良好。

等度洗脱时压力波动小于±2%。

梯度洗脱时压力变化应是缓慢和平稳的。

4.3.2 常规准备工作包括：开通电源，溶剂脱气，泵头及溶剂管路除气泡及泵的启动。

4.3.3 接通系统电源，仪器各单元进行自检，数秒后通过，接受操作指令。

4.3.4 流动相脱气方式：超声波脱气10min。

4.3.5 系统中气泡的排除,泵启动时，调节所需要的通道流速为1ml/min，该通道调节为100%。

高效液相色谱仪操作规程1 溶剂输送泵操作1.1 安装后的准备1.1.1 在烧杯中装入大约100mL异丙醇，在烧杯中放入吸滤器，将一段SUS 管的一端连接在泵出口，而另一端放入烧杯中。

1.1.2 将排液管的一端连接到排液管接口上，另一端放入废液瓶中。

1.1.3 打开电源ON，显示初始屏幕。

1.1.4 逆时针方向转动排液阀180度，打开排液阀。

按purge键，泵开始运行，指示灯亮。

1.1.5 冲洗完毕后，按一次func键，进入流速设定状态，并且设定流速1mL/min。

1.1.6 将排液阀旋钮顺时针方向旋转到底，关闭排液阀。

1.1.7 按pump键，泵启动，指示灯亮。

大约3--5分钟后，再按pump键，泵停止运行，指示灯灭，完成操作准备。

1.2 运行的检查1.2.1 开始运行前务必确保：储液瓶中装有流动相，并且吸滤器已经放入储液瓶中。

排液管的另一端已经放入废液瓶中。

1.2.2 将排液阀旋钮逆时针方向旋转180度，打开排液阀。

1.2.3 按CE 键返回到初始屏幕。

按pump键，泵大约以1ml/min的流速运行（指示灯亮）。

1.2.4 观察流动相流出排液管大约10秒钟。

在此期间，流动相应连续流出并且无气泡出现。

1.2.5 再按pump或purge键，泵停止运行，指示灯灭。

1.3 上面两步完成后仪器进入工作状态。

2 紫外—可见检测器操作2.1 按下电源开关，打开仪器，将发生如下情况。

2.1.1 显示板上所用光点及指示灯亮。

自动检查内存，瞬间显示控制程序的版本号。

2.1.2 预热大约20sec，仪器的单色器找到其初始位置（大约1分钟）。

2.1.3 （使用氘灯的亮线（656nm）自检波长的准确性（大约10 sec）。

2.1.4 如果没有检查出错误，显示正确信息，几秒钟后，由初始屏幕代替原信息2.1.5 如果自检没有错误，屏幕显示正确，此时可以进行操作。

为初始状态，将显示初始屏幕。

2.2 设定测定波长2.2.1 按CE键。

高效液相色谱仪操作流程高效液相色谱仪（High Performance Liquid Chromatography，HPLC）是一种广泛应用于分离、检测和定量分析化合物的分析仪器。

本文将介绍HPLC的操作流程。

1. 仪器准备在进行HPLC分析前，首先需要对仪器进行准备。

确保仪器处于正常工作状态，检查各个部件的连接是否紧固，必要时更换液相色谱柱。

接下来，检查并设置流动相（溶剂）系统、进样系统和检测器等参数，并验证仪器的漏水性能。

2. 样品准备样品的准备对HPLC分析结果的准确性和可靠性至关重要。

首先，将待分析的样品溶解在适宜的溶剂中，并在必要时进行稀释。

确保样品中无杂质和悬浮物，并使用过滤器过滤掉可能的固体颗粒。

3. 进样进样是将样品引入HPLC系统的过程。

通常使用自动进样器或手动进样器。

使用自动进样器时，将样品放置到样品盒中，设置合适的进样量和进样速度。

使用手动进样器时，使用微量注射器将样品吸取并快速注射到进样口。

4. 色谱柱选择根据待分析的化合物性质和分析要求，选择合适的液相色谱柱。

色谱柱的选择包括柱材、柱内直径和柱长度等参数。

确保色谱柱的品质良好并处于适当的工作状态。

5. 流动相系统流动相系统用于将样品带入色谱柱并实现化合物的分离。

设置合适的流动相组成和流量，确保流动相的质量和稳定性。

调整流率以达到较好的分离效果，并避免柱干燥和色谱峰形变。

6. 检测器选择与设置根据分析需要选择合适的检测器。

常见的检测器包括紫外可见检测器、荧光检测器和电化学检测器等。

根据需要进行检测器的波长设置和信号增益调整，并确保检测器的灵敏度和稳定性。

7. 数据处理与结果解读HPLC分析生成的数据需要进行处理和解读。

通常使用色谱数据处理软件进行峰面积计算、色谱峰图绘制和质量分析等操作。

根据实验目的和分析要求，对分析结果进行解读和统计分析，并生成相关报告和图表。

总结：使用HPLC进行分析需要按照一定的操作流程进行操作，包括仪器准备、样品准备、进样、色谱柱选择、流动相系统设置、检测器选择与设置以及数据处理与结果解读等步骤。

高效液相色谱法操作规程与注意事项1.程序1.1.仪器及性能要求：所用的仪器为高效液相色谱仪，由泵系统，进样系统，色谱柱，检测器和色谱数据处理系统组成。

1.1.1.泵系统：HPLC泵系统通过高压力管和设备从溶剂瓶中吸取计量的流动相到柱子中。

现行的泵系统有一元或多元计算机控制的计量泵组成，这些泵可以按照梯度洗脱的要求改变流动相的比例或者是按等度洗脱的要求混合流动相。

1.1.2.进样系统：化合物被溶解在流动相或合适的溶剂中，可以通过手动进样器或定量环，或自动进样器转移到流动相中。

自动进样器由可存放进样瓶的卡盘组成，进样瓶的顶部有一个可以刺入的隔膜，进样针通过这个隔膜将样品转移到一个定量环中然后输送到色谱系统中。

1.1.3.色谱柱：最常用的色谱柱填充剂为化学键合硅胶。

反相色谱系统使用非极性填充剂，以十八烷基硅烷键合硅胶最为常用，辛基硅烷键合硅胶和其他类型的硅烷键合硅胶（如氰基键合硅胶和氨基键合硅胶）也有使用。

正相色谱系统使用极性填充剂，常用的填充剂有硅胶等。

离子交换色谱系统使用离子交换填充剂量；分子排阻色谱系统凝胶或系统高分子多孔微球等；对映异构体的分离通常使用手性柱。

除另有规定外，柱温为室温。

1.1.4.检测器：常用的检测器包括紫外分光检测器，示差折光检测器，二极管阵列检测器。

固定波长检测器在单一波长下运行，典型的波长是254nm，通过低压力的汞灯发射。

可变波长的检测器包含持续的能源，例如氘灯或高压力氙灯，通过单色器或干涉过滤器产生一定波长的单色光。

1.2.系统适用性试验1.2.1.为了确定最终运行系统的有效性，应当进行系统适用性试验。

整个系统可以用以下指标来评价：信噪比、理论塔板数，分离度，重复性，拖尾因子，其指标及计算方法应在相关分析方法中予以规定，如果没有专门的规定，按以下方法进行计算：信噪比：用于评价色谱系统检测微量物质的能力，美国药典的计算公式：S/N=2H/h，H为峰顶到基线的距离，h为基线中噪声峰最大值与最小值的差，该段基线需取≥5倍半峰高宽的距离，如果有可能，目标峰两侧取相等的距离（如图1）。

高效液相色谱操作规程第一部分：进样前准备工作1．溶剂LC的溶剂包括：自己的流动相，超纯水，体积比为1：1的流动相与超纯水的混合溶液。

例如，如果你的流动相是甲醇：水＝85：10，那么你需准备的溶剂如下：纯甲醇，超纯水，50％甲醇水混合液。

（以下以甲醇为流动相为例）1．1 过滤使用前，应将纯的甲醇（要求是色谱纯，最好是进口的色谱纯）用0.45µm的滤膜过滤。

50％的甲醇水溶液也用过滤过的甲醇和超纯水配。

注意：此不操作切不能省，尤其是国产色谱纯。

否则，很容易造成色谱柱的堵塞，造成柱压过高，从而使你的测定工作不能进行。

1．2脱气使用前所有的溶剂都要用超声清洗仪脱气15min.原因：液相色谱最重要的一点就是整个流路不能有气泡，否则会造成峰分离不好，响应不理想等后果。

而使用的溶剂或多或少都会融入空气，所以使用前必须脱气。

2．样品样品包括标样和实际样品。

所有样品的最后性状都应是透明的液体。

为避免堵塞，样品同样得用0.45µm的滤膜过滤。

第二部分:仪器使用1.将吸液头放进相应的流动相中.通常标有A的放入纯水中,B泵放进纯有机溶剂中.没有任何标记的吸液头放进50%的有机溶剂水混合液中.2.开仪器.开启顺序为:CTO-20A,SIL-20A,SPD-M20A,LC-20AT.等待几秒钟后,开电脑.3.点击工作站图标,如图: .之后出现界面4.点击出现界面5.点击OK.可听到蜂鸣一声,仪器连接正常,进入工作站.6.设置方法.点击界面中的高级须更改的参数主要有:点击数据采集------输入所需的LC停止时间------点击应用于所有的采集时间点击泵-----选择模式里的低压梯度-----设置泵A总流速,溶剂B浓度.点击柱温箱------设置柱温箱温度.点击自动排气------选择流动相A,流动相B.方法设置完成.另存方法文件到自己建立的文件夹里.保存完成后,点击下载(界面右上角).7.点击自动排气图标.出现排气界面.8.排气完成.点击仪器开关图标,泵开关图标,柱温箱开关图标.9.点击绘图.开始走基线.通常需走30分钟,视基线的好坏更改而定.基线不平,则需更长的分析时间.点击更该分析时间图标,输入所须的时间,点击确定.10.基线平衡之后,就可以进样.将样品放入样品架.如果是单次进样，就点击单次运行。

高效液相色谱仪操作步骤及注意事项汇总1. 过滤流动相，根据需要选择不同的滤膜。

2. 对抽滤后的流动相进行超声脱气10-20分钟。

3.打开HPLC工作站（包括计算机软件和色谱仪），连接好流动相管道，连接检测系统。

4进入HPLC控制界面主菜单，点击manual，进入手动菜单。

5. 有一段时间没用，或者换了新的流动相，需要先冲洗泵和进样阀。

冲洗泵，直接在泵的出水口，用针头抽取。

冲洗进样阀，需要在manual菜单下，先点击purge，再点击start，冲洗时速度不要超过10?ml/min。

6. 调节流量，初次使用新的流动相，可以先试一下压力，流速越大，压力越大，一般不要超过2000。

点击injure，选用合适的流速，点击on，走基线，观察基线的情况。

7. 设计走样方法。

点击file，选取select?users?and?methods，可以选取现有的各种走样方法。

若需建立一个新的方法，点击new?method。

选取需要的配件，包括进样阀，泵，检测器等，根据需要而不同。

选完后，点击protocol。

一个完整的走样方法需要包括：a.进样前的稳流，一般2-5分钟；b.基线归零；c.进样阀的loading-inject转换；d.走样时间，随不同的样品而不同。

8. 进样和进样后操作。

选定走样方法，点击start。

进样，所有的样品均需过滤。

方法走完后，点击postrun，可记录数据和做标记等。

全部样品走完后，再用上面的方法走一段基线，洗掉剩余物。

9．填写登记本，由负责人签字。

10．流动相均需色谱纯度，水用20m的去离子水。

脱气后的流动相要小心振动尽量不引起气泡。

11．柱子是非常脆弱的，第一次做的方法，先不要让液体过柱子。

12．所有过柱子的液体均需严格的过滤。

13．压力不能太大，最好不要超过2000 psi。

选择波长要从以下几个方面考虑：1. 检测波长要大于溶剂截止波长。

如果所选择的波长下溶剂有很强的吸收当然是不合适的。