高效液相色谱柱后衍生(pickering)测定氨基甲酸酯类农药

表1乙腈-水为流动相的梯度洗脱程序时间/min流量/mL ·min -1乙腈/%水/%0189218.001505018.10189220.001892摘要采用高效液相色谱-柱后衍生荧光光谱法测定蔬菜和水果中涕灭威亚砜、涕灭威砜、3-羟基克百威、灭多威等6种N-甲基氨基甲酸酯类农药。

样品经乙腈提取,以水和乙腈为流动相梯度洗脱。

结果表明,6种农药的分离效果良好,在0.05~2.00mg/L 范围内线性关系良好,相关系数>0.995,变异系数RSD 为2.3%~8.8%,加标回收率为77.1%~82.3%,此法可用于蔬菜和水果中氨基甲酸酯类农药残留检测。

关键词高效液相色谱;柱后衍生;氨基甲酸酯农药;蔬菜;水果中图分类号O657.7+2;S481+.8文献标识码A 文章编号1007-5739(2018)14-0121-01高效液相色谱-柱后衍生荧光光谱法测定蔬菜和水果中6种N-甲基氨基甲酸酯类农药魏良胜(安徽省池州市农产品质量安全监测中心,安徽池州247100)氨基甲酸酯类农药是20世纪50年代推广应用的有机合成杀虫剂,具有选择性强、高效、广谱、对人畜低毒、易分解和残留少的特点,常用于蔬菜和水果病虫害的防治,但氨基甲酸酯类农药具有致突变、致畸、致癌作用,因而建立一种简单快速的检测氨基甲酸酯类农药的检测方法尤为重要。

目前,检测氨基甲酸酯类农药的方法主要有气相色谱法[1-2]、气质联用法[3]、液质联用法[4]及高效液相色谱-柱后衍生法[5]。

由于氨基甲酸酯类农药热稳定性差,气相色谱法适用性不强;液质联用仪器价格及维护成本昂贵,对操作人员素质要求较高,限制了该法在基层实验室的使用;而液相色谱-柱后衍生法方法简单,方法灵敏度较高,应用较为普遍。

本文研究了采用固相萃取柱净化样品,液相色谱-柱后衍生荧光法测定蔬果中6种N-甲基氨基甲酸酯类农药的分析方法。

1材料与方法1.1仪器与试剂Alliance 高效液相色谱超高效液相色谱仪配2475荧光检测器,美国WATERS 公司生产;氮吹仪(Organomation N-EVAP-111);Best-S30FV 纯水机;电子天平TD20001,余姚市金诺天平仪器有限公司生产;Multiquck3(匈牙利博朗);IKA-T25均质器,艾卡(广州)仪器设备有限公司生产;IKA RV-8旋转蒸发仪,艾卡(广州)仪器设备有限公司生产;一次性注射器、0.22μm 水相滤膜、固相萃取柱,均由上海安谱实验科技股份有限公司生产。

高效液相色谱柱后衍生法测定谷物中9种氨基甲酸酯类农药及3种代谢物残留量Ξ于文莲　王　超　储晓刚　(中国进出口商检研究所食检中心　北京　100025)提　要　研究了用W aters Carbam ate分析系统柱后衍生化荧光检测器测定谷物中氨基甲酸酯类农药残留量的方法。

用W aters Carbam ate A nalysis Co lum n对9种农药和3种代谢产物进行分离,碱液水解,O PA柱后衍生,有很好的选择性、重现性和灵敏度,最低检出限为5Λg kg。

关键词　高效液相色谱法,柱后衍生化,谷物,氨基甲酸酯类农药分类号　O658 TQ451　前言氨基甲酸酯类农药属于高效、广谱类杀虫剂,许多国家对此类农药在食品中的残留量都制定了严格的限量规定[1]。

近年来国外报道了许多用液相色谱柱后衍生法同时测定此类农残的方法[2～4]。

国内虽也有报道[5],但测定的品种有限,而且灵敏度和重现性均不理想。

为此,本文采用O PA柱后衍生法测定了谷物中9种氨基甲酸酯类农药及3种代谢物的残留量,获得了满意的分离效果和极高的灵敏度,用于粮谷中氨基甲酸酯类农药残留量的测定,结果令人满意。

本法的建立是基于此类农药均带有甲胺基团(—N HCH3),先经过色谱柱分离,进入柱后反应装置,碱液水解产生甲胺的特性,甲胺在反应管中与O PA反应生成一种强荧光物质12(22羟乙基)硫基2 22甲基异吲哚,用荧光检测器进行检测。

2　实验部分柱后反应荧光检测系统如图1所示。

211　仪器与试剂仪器　W aters Carbam ate A nalysis System,配有474荧光检测器、600E泵(四元梯度)、717P lu s自动进样器、M illenn ium2010数据处理系统、W aters PCR S蠕动泵、RXN T M柱后反应装置,M ili2Q超纯水器,旋转蒸发器,谷物磨碎机,振荡器。

试剂　丙酮、二氯甲烷、乙腈、正己烷、氯化钠、四硼酸钠、邻苯二甲醛(O PA)为分析纯,氢氧化钠、盐酸为优级纯,巯基乙醇(M E)为化学纯,甲醇、乙腈为色谱纯,水为超纯水。

高效液相色谱柱后衍生法测定蔬菜中氨基杀虫剂农药残留【摘要】目的研究探讨一种快速分离、检测氨基甲酸酯类农药含量的方法。

方法本文采用高效液相色谱－柱后衍生法对蔬菜中10种氨基甲酸酯类农药的含量进行了测定。

结果该方法的回收率在96．46%～98．32%之间，相对标准偏差在1．54%～3．84%之间，分离效果好，干扰少。

结论高效液相色谱柱后衍生法准确度和精密度都要好于气相色谱法，非常适用于蔬菜中氨基甲酸酯类农药的分析和监测。

【关键词】高效液相色谱；柱后衍生；氨基甲酸酯；蔬菜氨基甲酸酯类农药是一类广谱性农药，杀虫效果好，作用速度快，在农作物种植与中药材栽培中被广泛使用。

我国现有检测方法缺点主要是操作繁琐，较难实现多种氨基甲酸酯类农药同时准确、方便地测定，检测过程时间长，以及直接接触有毒农药，既繁琐，又不安全。

本文选用高效液相色谱柱后衍生法检测氨基甲酸酯类农药残留，旨在建立一种选择性强，灵敏度高，重现性好的检测方法。

1 材料与方法1．1 原理氨基甲酸酯类农药在碱性条件下水解产生甲胺，甲胺与衍生化试剂邻苯二甲醛（OPA）、巯基乙醇反应，生成强荧光物质，以荧光检测器检测。

1．2 试剂灭威亚砜、灭威砜、杀线威、灭多威、涕灭威、残杀威、克百威、西维因、甲硫威混合标准溶液：浓度均为10 μg/ml；甲醇，乙腈：色谱纯；去离子水；OPA稀释剂；OPA固体。

1．3 仪器Agilent1100HPLC,配荧光检测器，四元梯度泵，自动进样器，脱气机，恒温柱温箱；PCX5200型柱后衍生装置；纯水系统。

1．4 样品处理1．4．1 样品提取样品50 g，切碎，加入50 g氯化钠，200 ml丙酮，150 ml二氯甲烷，匀浆1 min, 静止片刻。

将上清液，加入30 g无水硫酸钠，静置30 min，移取28 ml，用少量二氯甲烷洗涤无水硫酸钠，合并滤液，用旋转蒸发器30℃～40℃下，减压浓缩近干，净化。

1．5 色谱条件1．5．1 液相色谱条件色谱柱：C18柱（4．0×250 nm,5 μm）;柱温25℃；流动相：甲醇/水=15/85；流速：0．8 ml/min;荧光激发波长330 nm；发射波长465 nm。

摘要使用高效液相色谱法测定葡萄中8种氨基甲酸酯农药（涕灭威亚砜、涕灭威砜、涕灭威、灭多威、克百威、3-羟基克百威、速灭威和仲丁威）的残留量。

样品前处理采用乙腈提取、氨基柱净化，c18色谱柱分离、高效液相色谱仪-柱后衍生-fld检测器分析检测，结果表明：8种氨基甲酸酯农药在30 min内得到良好的分离，线性相关系数r2为0.999 75～0.999 93，检测限达2.5～7.1 μg/kg，当添加水平为0.5 mg/kg时，回收率范围为82.0% ～101.2%。

该方法快速灵敏，操作简单且效果显著。

关键词葡萄；高效液相色谱法；氨基甲酸酯农药；残留量中图分类号 s481+.8 文献标识码 a 文章编号 1007-5739（2016）08-0117-02葡萄，俗名草龙珠、赐紫樱桃、菩提子、蒲陶、山葫芦，是世界上分布最广的果树作物，作为著名水果，可生食或制葡萄干，或酿酒，酿酒后的酒脚还可提取酒食酸等。

我国葡萄生产发展十分迅速，截至2013年，我国葡萄栽培面积已达71.464万hm2，葡萄产量达到1 155万t，产量稳居世界首位[1]。

然而，葡萄的农药残留一直是制约产业链发展的重要因素，虽然国内专家指出多年来鲜食葡萄及其产品葡萄酒均未发生过农药残留超标问题，但葡萄市场却依然遭遇着消费者的信任危机。

究其原因，是当前国内葡萄的种植多为散户种植，对葡萄的田间管理不规范，导致杀虫剂、杀菌剂等农药过量使用，尤其是在葡萄4个月的生长周期内，农户大致会喷7～8种农药，从而导致葡萄果实中农药残留过高，并牵连到葡萄酒等多种行业的农药残留问题，给我国葡萄产业链的质量安全带来重重隐患[2]。

当前，已有不少著作提出了关于葡萄中农药多残留检测的方法[3-4]，归纳起来，农药残留的检测方法主要集中在气相色谱法（gc）、液相色谱法（lc）、气相色谱-质谱联用法（gc-ms）、气相色谱-串联质谱法（gc-ms/ms）、液相色谱-串联质谱法（hplc-ms/ms）等[5]。

美瑞泰克有限公司中国代表处 服务热线：86-22-87890415 86-22-87890416 传真：86-22-87890417高效液相色谱柱后衍生技术应用在农药残留氨基甲酸盐杀虫剂(Carbamate Pesticide)方面的分析分析1． 氨基甲酸盐杀虫剂分析柱Pickering Labs 氨基甲酸盐分析柱利用EPA 和AOAC 的指定方法，保证了氨基甲酸盐残余物的良好分离。

对于C18柱，两种水/甲醇梯度模式可以用来分别对甲醇中和水中的样品进行分析。

扩展的分析法采用C8柱结合水/甲醇或水/氰甲烷梯度洗脱可以将23种氨基甲酸盐进行分离。

甲醇与氰甲烷之间选择性的不同可以分别被用来对各自的出峰进行鉴定。

杀虫剂分析的柱后条件：衍生试剂1：加水分解衍生试剂CB130衍生试剂2：100mg of OPA, 2g Thiofluor ™ in 950 mL of CB910 反应器1：100℃，0.5mL 反应器2：环境温度，0.1mL 衍生试剂流速：0.3mL/min 检测：荧光检测器：λex 330nm, λem 465nm氨基甲酸盐柱1846250 （4.6×250mm ）, C18, 5um美瑞泰克有限公司中国代表处 服务热线：86-22-87890415 86-22-87890416 传真：86-22-878904171. 涕灭威亚砜（Aldicarb sulfoxide ）2. 涕灭威砜（Aldicarb sulfone ）3. 杀线威（Oxamyl ）4. 灭多威（Methomyl ）5. 3-Hydroxycarbofuran6. 涕灭威（Aldicarb ）7. 残杀威（Propoxur ）8. 克百威（Carbofuran ）9. 西维因（Carbaryl ） 10. 1-萘酚（1-Naphthol ） 11. 甲硫威（Methiocarb ） 12. BDMC (内部标准) 氨基甲酸盐柱1846150 （4.6×150mm ）, C18, 5um1. 涕灭威亚砜（Aldicarb sulfoxide ）2. 涕灭威砜（Aldicarb sulfone ）3. 杀线威（Oxamyl ）4. 灭多威（Methomyl ）5. 3-Hydroxycarbofuran6. 涕灭威（Aldicarb ）7. 残杀威（Propoxur ）美瑞泰克有限公司中国代表处 服务热线：86-22-87890415 86-22-87890416 传真：86-22-878904178. 克百威（Carbofuran ） 9. 西维因（Carbaryl ） 10. 1-萘酚（1-Naphthol ） 11. 甲硫威（Methiocarb ） 12. BDMC (内部标准)氨基甲酸盐柱0840250 （4.0×250mm ）, C18, 5um ─用于23+种复合物的扩展分析法1. 涕灭威亚砜（Aldicarb sulfoxide ）2. 涕灭威砜（Aldicarb sulfone ）美瑞泰克有限公司中国代表处 服务热线：86-22-87890415 86-22-87890416 传真：86-22-878904173. 杀线威（Oxamyl ）4. 灭多威（Methomyl ）5. 3-Hydroxycarbofuran6. 涕灭威（Aldicarb ）7. 残杀威（Propoxur ）8. 克百威（Carbofuran ）9. 西维因（Carbaryl ） 10. 1-萘酚（1-Naphthol ） 11. 甲硫威（Methiocarb ） 12. BDMC (内部标准)用0846250柱对23种氨基甲酸盐进行分离 （4.6×250mm ）1. 涕灭威亚砜（Aldicarb sulfoxide ） 13. 丁酮威砜（Butocarboxim sulfone ）2. 涕灭威砜（Aldicarb sulfone ） 14. 乙硫甲威亚砜（Ethiofencarb sulfoxide ）3. 杀线威（Oxamyl ） 15. 乙硫甲威砜（Ethiofencarb sulfone ）4. 灭多威（Methomyl） 16. 丁酮威（Butocarboxim）5. 3-Hydroxycarbofuran 17. 乙硫甲威（Ethiofencarb）6. 涕灭威（Aldicarb） 18. 硫伐隆亚砜（Thiofanox sulfoxide）7. 残杀威（Propoxur） 19. 硫伐隆砜（Thiofanox sulfone）8. 克百威（Carbofuran） 20. 甲硫威亚砜（Methiocarb sulfoxide）9. 西维因（Carbaryl） 21. 甲硫威砜（Methiocarb sulfone）10. 甲硫威（Methiocarb） 22. 3-Ketocarbofuran11. BDMC (内部标准) 23. 硫伐隆（Thiofanox）12. 丁酮威亚砜（Butocarboxim sulfoxide） N 1-萘酚（1-Naphthol）2. 2.1mm内径微型氨基甲酸盐杀虫剂分析柱─用于液质连用分析的理想品为了节省溶剂与衍生试剂，提高灵敏度，并且配合液质连用分析，我们开发了用于氨基甲酸盐杀虫剂分析的微型柱（2.1×100，150mm）。

文章编号：1673-2383（2011）03-0059-05基质固相分散萃取-液相色谱法测定小麦中多种氨基甲酸酯农药残留的研究吴丽华，田忙雀，杨勤元（西安市粮油质量检验中心，陕西西安710003）摘要：研究了C 18基质固相分散萃取（MSPDE ），高效液相色谱-柱后衍生-荧光检测器测定小麦中6种氨基甲酸酯农药的方法.通过对色谱条件、基质固相分散材料的选择及其与样品的比例、洗脱条件以及加标回收率进行试验，建立和优化了小麦中6种氨基甲酸酯农药的MSPDE-HPLC-FLD 多残留分析方法.结果显示，该方法对小麦样品中6种氨基甲酸酯农药的回收率为82.1%～94.0%，变异系数≤3.54%，方法的最低检出限为0.0092～0.038mg/kg.研究证明，基质固相分散萃取-液相色谱-柱后衍生方法简便、快速、准确、灵敏、节省样品和有机溶剂，可满足小麦中多种氨基甲酸酯农药残留同时检测的需要.关键词：小麦；基质固相分散萃取；液相色谱；柱后衍生；氨基甲酸酯农药中图分类号：TS207.5+3文献标志码：B0前言随着农业科学技术的发展，农药已成为防治病、虫害的主要手段，广泛用于粮食、蔬菜、水果及经济作物上的害虫防治[1].自1983年我国停止生产六六六和滴滴涕以来，有机氯农药已基本处于安全水平，但作为取代有机氯农药的有机磷和氨基甲酸酯类农药其急性毒性及污染事件却呈急剧上升趋势[2-3].氨基甲酸酯类农药是应用较广泛的一类杀虫剂，可用于杀虫、杀螨、杀菌、除草等方面，由于氨基甲酸酯类农药毒性大，在粮食、蔬菜中的残留对公众健康危害极大[4].因此，开展氨基甲酸酯类农药残留量检测技术的研究至关重要.MSPDE 方法最初是1989年由美国Louisiana 州立大学的Staren Barker 教授提出，用于动物组织样品中抗生素等药物的提取和净化[5].近年来，MSPDE 在应用范围和使用技术上都有了很大的发展，尤其是在农药残留分析方面[6-7].MSPDE 作为一种萃取技术，其基本操作是将试样直接与适量填料研磨、混匀得到半干状态的混合物并将其作为填料装柱，然后用不同的溶剂淋洗柱子，将各种待测物洗脱下来.目前，MSPDE 应用于水果蔬菜中农药残留检测的报道较多[8-9]，针对于小麦中农药残留采用MSPDE 方法的研究很少，多残留分析的研究就更少.因此，作者采用基质固相分散萃取的前处理方法、液相色谱-柱后衍生-荧光检测器的检测手段研究了小麦中多种氨基甲酸酯农药的检测方法.一是确定同时测定6种氨基甲酸酯农药的仪器条件，二是实现对多种农药MSPDE 高效洗提，通过检测体系和条件优化，达到高效、灵敏，为该方法在粮油产品检测中的推广应用提供参考依据.1材料与方法1.1材料与试剂C 18键合材料：德国POLYGOPRE100-50C18CHARGE 10212042.无水硫酸钠：分析纯，650℃灼烧4h ，贮于密封瓶内备用；衍生试剂、水解试剂、洗涤液等均由PICKERING LABORATORIES.INC 提供；正己烷、丙酮、二氯甲烷均为分析纯，使用前经过重蒸；甲醇为色谱纯.农药标准品：甲萘威、异丙威、残杀威、抗蚜威、涕灭威、灭多威，规格：100.0μg/mL 、1.0mL/支，标收稿日期：2011-03-05作者简介：吴丽华（1978-），女，陕西西安人，工程师，硕士，从事粮油检验工作.河南工业大学学报（自然科学版）Journal of Henan University of Technology （Natural Science Edition ）第32卷第3期2011年6月Vol.32，No.3Jun.2011河南工业大学学报（自然科学版）第32卷注：1-灭多威（12.802min ），2-涕灭威（26.756min ），3-残杀威（31.882min ），4-甲萘威（34.168min ），5-抗蚜威（36.806min ），6-异丙威（37.793min ）.图1氨基甲酸酯农药混合标准溶液色谱图（2.0μg/mL ）准物质均购于北京陆桥公司，由农业部环境保护监测研究所研制.1.2仪器与设备Agilent Technologies 1200Series 高效液相色谱仪：美国安捷伦公司；PINNCLE PCX 柱后衍生仪：PICKERING LABORATORIES.INC ；液相色谱柱：CARBAMATE ANALYSIS C18Sum ，4.6mm ×250mm ，PICKERING LABORATORIES.INC ；HVF —1000型基质固相分散萃取压力装置：陕西奥联科技发展有限公司；RE —52AA 型旋转蒸发仪：上海跃进医疗器械厂；SHB —Ⅲ型循环水式多用真空泵：郑州长城科工贸有限公司.1.3方法1.3.1色谱分析1.3.1.1混标的配制分别取100μg/mL 的涕灭威、残杀威、甲萘威、异丙威、抗蚜威和灭多威农药标准品1.0mL 于25mL 容量瓶中，用甲醇定容至刻度，配制成质量浓度为4.0μg/mL 的标准储备液.然后再配成0.08、0.2、0.4、1.0、1.5、2.0μg/mL 的混合标准工作液.1.3.1.2高效液相色谱-荧光检测器测定（1）色谱条件：色谱柱：CARBAMATE ANALYSIA C18sum ，4.6mm ×250mm ；检测器：荧光检测器；激发波长：330nm ，发射波长：465nm ；流动相：梯度见表1；进样量：10μL.柱后衍生仪条件：反应器1：0.5mL ，100℃；反应器2：0.1mL ，室温；衍生试剂1：0.05mol/L 氢氧化钠；泵1流速：0.3mL/min ；衍生试剂2：邻苯二甲醛（OPA ）；泵2流速：0.3mL/min.（2）色谱分析：准确吸取10μL 单标进样，确定各种农药的出峰时间.准确吸取10μL 样品经萃取后的浓缩液进样，记录色谱峰保留时间和峰高.再吸取10μL 混合标准溶液进样，记录保留时间和峰高，根据各组分在色谱图上的出峰时间进行定性，根据峰高用外标法定量.1.3.1.3最小检出限以仪器噪音3倍的色谱峰高作为最低检出衡量指标，根据一定浓度标样的峰高、样品称样量、定容体积，确定方法的最低检出限.1.3.2C 18基质固相分散萃取方法C 18材料使用前先进行活化和去杂.称取20g C 18，装入层析柱中，分别用20mL 正己烷、20mL 二氯甲烷和20mL 甲醇依次淋洗.取粉碎均匀的小麦样品2.0g ，加水2.0mL ，在研钵中混合均匀，然后再加6.0g C 18键合材料，充分研磨使待测样品均匀分布在键合材料中；在25mL 的针管下端铺上一层玻璃棉，加3cm 厚的无水硫酸钠，然后加上与吸附材料充分研磨的样品，上面再铺一层1cm 厚的无水硫酸钠，针管架在基质固相分散萃取压力装置上；用10mL 正己烷淋洗，弃去淋洗液，用丙酮∶二氯甲烷（体积比为3∶7）溶液15mL 洗脱，收集洗脱液.于旋转蒸发仪上38℃蒸发近干，氮气吹干，用2.0mL 甲醇定容，0.45μm 有机滤头过滤，待测.分别对样品与C 18填料比例（1∶1、1∶2、1∶3）[10-11]、洗脱剂（V （二氯甲烷）、V （丙酮）∶V （二氯甲烷）=2∶8、V （丙酮）∶V （二氯甲烷）=3∶7）、洗脱体积（10、15、20mL ）进行优化试验.1.3.3准确度和精密度试验小麦样品中分别添加0.08、0.4、1.0μg /mL 3个水平的农药混合标准溶液，按照上述MSPDE 方法处理，按1.3.1.2的色谱条件测定.每个添加水平重复3次，计算回收率和变异系数.2结果与分析2.1氨基甲酸酯农药混合标准溶液的色谱图在1.3.1.2的检测条件下6种氨基甲酸酯农药混合标样的色谱图见图1.从图1可以看出，该色谱条件可以实现6种氨基甲酸酯农药的较好分离.表1流动相梯度时间/min 0.001.0044.0044.1045.00流路A(甲醇)/%151********流路D （水）/%85852508560第3期表5线性方程和最低检出限灭多威涕灭威残杀威甲奈威抗蚜威异丙威Y =220.65x +5.4005Y =71.426x +1.0373Y =101.15x +1.1863Y =161.45x +5.508Y =65.865x +3.8534Y =123.13x +0.5690.99970.99780.99860.99800.99840.9996最小检出限LOD /（mg ·kg -1）0.00920.0280.0180.0120.0380.016最高残留限量MRL/（mg ·kg -1）0.20.050.053.00.050.4农药线性回归方程相关系数r 2灭多威涕灭威残杀威甲奈威抗蚜威异丙威回收率91.588.683.786.784.987.2变异系数2.212.722.382.893.542.64回收率92.390.386.587.582.186.8变异系数2.192.452.562.953.182.59回收率94.089.983.588.683.488.7变异系数2.312.673.012.673.153.060.08μg/mL 0.4μg/mL 1.0μg/mL 农药表4方法的回收率和变异系数%图4小麦样品加标色谱图2∶167.3～79.63∶183.1～97.44∶174.1～83.5填料∶样品回收率/%表2C 18材料与样品用量比例的选择图3小麦样品的HPLC 色谱图灭多威涕灭威残杀威甲奈威抗蚜威异丙威二氯甲烷41.942.246.539.342.345.1V 丙酮∶V 二氯甲烷=2∶878.982.473.876.071.975.6V 丙酮∶V 二氯甲烷=3∶792.686.286.289.481.383.53种洗脱液的加标回收率/%农药名称表3不同洗脱液对提取效果的影响%2.2MSPDE 前处理方法的优化2.2.1样品与填料比例试验样品与填料比例试验结果见表2.从表2可以看出，当C 18材料与样品用量比例为3∶1时，回收率较好.当C 18材料与样品用量比例为2∶1时，填料的量不足以使样品基质完全分散，从而不利于待测农药从基质中分离；当填料为4∶1时，农药的回收率偏低，因为填料量大，对农药的吸附较强，需要更多的溶剂才能被洗脱；所以选用C 18材料与样品用量比例为3∶1.2.2.2洗脱液的选择试验3种洗脱液的提取效果见表3，由表3可以看出3号洗脱液的洗脱效果最好，各种农药的加标回收率在81.3%～92.6%；1号洗脱液试验，各种农药的回收率均较低；2号洗脱液，抗蚜威、残杀威的回收率偏低.因此选用V （丙酮）∶V （二氯甲烷）=3∶7作为洗脱液.2.2.3洗脱体积的选择洗脱用量的试验结果见图2.该方法处理的小麦样品及样品加标色谱图分别见图3、图4.从图2可以看出，选用15mL 的V （丙酮）∶V （二氯甲烷）=3∶7洗脱效果最好.图2洗脱体积对加标回收率的影响2.2.4准确度和精密度试验准确度与精密度试验结果见表4.本方法对小麦样品中6种氨基甲酸酯农药的加标回收率为82.1%～94.0%，变异系数≤3.54%，表明该方法的准确性好、精密度高，适合于小麦中氨基甲酸酯农药的测定.2.2.5线性关系和最低检出限各种氨基甲酸酯农药的线性回归方程及方法的最低检出限见表5.由表5可以看出：该方法线性好，灵敏度高，对6种农药的最低检出限范围为0.0092～0.038mg/kg ，均低于国际/国内的MRL 值.吴丽华，等：基质固相分散萃取—液相色谱法测定小麦中多种氨基甲酸酯农药残留的研究61河南工业大学学报（自然科学版）第32卷3讨论3.1农药残留前处理方法的选择在农药残留分析中，样品前处理是一个十分重要的步骤.目前，在农药残留分析中常用的前处理方法有液液萃取法和固相萃取法[12-13].液液萃取法一般还需进行层析柱净化，前处理方法比较复杂；固相萃取法操作较简单而且净化效果好，但是固相萃取柱比较昂贵，成本较高.MSPDE是近年来兴起的一种新的前处理方法，MSPDE浓缩了传统样品前处理中所需的样品均化、组织细胞裂解、提取、净化等过程，是简单高效的提取净化方法.作者在考虑到传统的萃取方法和MSPDE优缺点的基础上，尝试一种更加方便效果又好的前处理方法，该方法比较适合于含少量水分样品的分析，但是存储小麦样品水分含量太低，不利于C18键合材料的吸附，所以要先添加适量的水润湿，然后再与C18键合材料进行研磨，对于其他粮食样品，根据其水分含量，对加水量进行适当调整也可采用该方法.本试验与李建科等[11]采用florisil MSPDE前处理16种有机磷、14种有机氯和5种拟除虫菊酯农药，以及杨容[14]采用C18前处理小麦中的呋喃丹同样取得较好结果.3.2检测手段的选择目前，关于氨基甲酸酯农药的检测方法很多，GB/T5009.104-2003中采用气相色谱火焰热离子检测器测定植物性食品中速灭威、异丙威、残杀威、克百威、抗蚜威和甲萘威的残留量[15]；出入境检验检疫局行业标准SN/T1017.7-2002采用气相色谱法配氮磷检测器检测出口粮谷中涕灭威、西维因、杀线威、恶虫威、抗蚜威的残留量[16]，但是由于气相色谱法只适用于易挥发物质的检测，所以这些方法检测的农药种类仍较少.张帆等[17]采用高效液相色谱柱串联质谱技术实现了20种氨基甲酸酯农药的同时检测，但是液相色谱-质谱联用仪器比较昂贵，较难普及.高效液相色谱柱后衍生法是利用氨基甲酸酯农药与衍生试剂发生反应后产生具有荧光的物质这一性质，采用荧光检测器进行定性定量测定，由于荧光反应的选择性强，该方法对于样品前处理的要求较低，毛秀红等[18]采用这种方法完成了中草药中13种氨基甲酸酯农药的检测，效果较好，本试验采用高效液相色谱柱后衍生技术检测了小麦中常见的6种氨基甲酸酯农药，也取得较好的效果，与目前的标准方法相比检出限低、分离度好，前处理方法简单，检测结果准确度高.参考文献：华小梅，江希流.我国农药的生产使用现状及其对环境的影响［J］.环境保护，1999（9）：23-25.林玉琐，龚瑞忠，朱忠林.农药与生态环境保护［M］.北京：化学工业出版社，2001：16-21.陈克毅，任素萍.关于发展绿色农产品的思考［J］.农业质量标准，2003（6）：28-30.陈燕.氨基甲酸酯类农药残留分析研究进展［J］.安徽农学通报，2007，13（18）：176-178.Barker S A.Matrix solid-phase dispersion［J］.Journal of Chromatography A，2000，885（1-2）：115-127.Maria Kristenson E，Lourdes Ramos，Udo ATh.Brinkman.Recent advances in matrix sol-id-phase dispersion［J］.Trends in 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Inspection Center ，Xi'an 710003，China ）Abstract ：We studied a method for determining 6kinds of carbamate pesticides in wheat using C 18matrix solid-phase dispersion extraction (MSPDE)，high performance liquid chromatography ，post-column derivation technique and fluorescence detector.Through the tests of the chromatographic conditions ，the selection of matrix solid-phase dispersion material and the ratio of matrix solid-phase dispersion to the sample ，the elution conditions and the standard recovery ，we established and optimized the MSPDE-HPLC-FLD multi-residue analysis method for determining 6kinds of carbamate pesticides in wheat.The results showed that the yield of the 6kinds of carbamate pesticides in wheat reached 82.1%to 94.0%，the coefficient of variation was equal to or less than 3.54%，and the lowest detection limit was 0.0092to 0.0380mg/kg.It is testified that the method is simple ，rapid ，accurate ，sensitive ，and saving of samples and organic solvent ，and can meet the requirement for simultaneously determining multiple kinds of carbamate pesticides in wheat.Key words ：wheat ；matrix solid-phase dispersion extraction ；high performance liquid chromatography ；post-column derivation technique ；carbamate pesticideJournal of biochemical and biophysical meth -ods ，2007，70（2）：117-131.吴丽华，李建科.固相萃取-气相色谱法在农药残留分析中的应用［J ］.粮油食品科技，2004，14（4）：57-58.杨容.基质固相分散-高效液相色谱法测定小麦中的痕量呋喃丹［J ］.河北大学学报：自然科学版，2003，23（9）：269-271.GB/T 5009.104-2003，植物性食品中氨基甲酸酯类农药残留量的测定［S ］.SN/T 1017.7-2002，出口粮谷中涕灭威、西维因、杀线威、恶虫威、抗蚜威残留量检验方法［S ］.张帆，贾志强，张莹，等.高效液相色谱-串联质谱测定食品中20种氨基甲酸酯类农药残留［J ］.色谱，2010，28（4）：348-355.毛秀红，苗水，陆继伟，等.高效液相色谱-柱后衍生-荧光检测器测定中药材中13种氨基甲酸酯类农药残留［J ］.中成药，2010，22（3）：454-459.［13］［14］［15］吴丽华，等：基质固相分散萃取—液相色谱法测定小麦中多种氨基甲酸酯农药残留的研究［16］［17］［18］63。

农业资讯NONGYEZIXUN　农业信息高效液相色谱法测定蔬菜中氨基甲酸酯类农药残留的　方法与应用张亚萍（玉溪市江川区农产品质量安全检测站，云南玉溪 652600）摘 要 为探讨如何利用高效液相色谱法来测定氨基甲酸酯类农药的残留，对市场上的蔬菜进行随机抽样，使用配荧光检测器及柱后衍生系统的高效液相色谱法来测定蔬菜中氨基甲酸酯类农药的残留，并对每一种农药进行3种不同浓度的回收率试验。

结果表明：蔬菜中农药残留回收率在74.6%～107.6%，其精密度控制在10%以内，可使用高效液相色谱法来测定蔬菜中氨基甲酸酯类农药残留，这种方法适用于大白菜、黄瓜、辣椒、芹菜等氨基甲酸酯类农药残留分析。

关键词 氨基甲酸酯；农药残留；高效液相色谱氨基甲酸酯类农药是一种良好的杀虫农药，这种农药在使用过程中，有高效、低毒、低残留的效果，经常被用在果蔬杀虫上，现已成为果蔬及粮食主要的杀虫剂。

但由于农户环保意识以及相关部门的管理意识不够，这类农药仍存在一些不合理使用情况，且这些不合理的使用也给当地的生态跟食品安全造成了一定影响，因此对蔬菜中的氨基甲酸酯类农药进行检测十分必要。

现如今可以完成氨基甲酸酯类农药残留检测的方法主要包括高效液相色谱法、质谱法以及液相柱后衍生法等，其中酶抑制法存在着局限性，但可以将其作为仪器分析法进行补充[1]。

高效液相色谱法在检测过程中，比较常用的检测器是紫外检测器，该检测器的灵敏度不够高，而荧光检测器的灵敏度较高，操作起来也较为简便，在众多分析方法中比较突出。

基于此，主要以我国农业行业标准——蔬菜和水果中有机磷、有机氮、拟除虫菊酯和氨基甲酸酯类农药多残留的测定作为参考，使用配荧光检测器以及柱后衍生系统的高效液相色谱仪测定随机抽取的蔬菜中的7种氨基甲酸酯类农药残留量，对蔬菜中氨基甲酸酯类农药残留测定技术进行探讨。

１　材料与方法１．１　材料与试剂　主要的材料为市面上销售的白菜、黄瓜以及芹菜；主要的试剂包括甲酯、色谱纯、二氯甲烷、醋酸氨、氨基甲酸酯类标准储备液。