厌氧型细菌及检验

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第十七章厌氧性细菌及检验本章内容一、概述厌氧菌的分类厌氧菌的临床意义厌氧菌感染厌氧菌标本的采集与送检厌氧菌的分离与鉴定厌氧环境的指示二、常见厌氧菌破伤风杆菌产气荚膜梭菌肉毒梭菌艰难梭菌厌氧球菌无芽胞厌氧菌厌氧菌概述一大群专性厌氧，必须在无氧环境中才能生长的细菌。

G+有芽胞的梭菌：有芽胞，抵抗力强，广泛存在，可出芽繁殖，产生多种外毒素，引起严重疾病。

G+/G-无芽胞的球菌与杆菌：人体正常菌群，可存在于口腔、肠道、上呼吸道、泌尿生殖道等。

致病性属条件致病性的内源性感染。

厌氧菌概述——分类《伯杰系统细菌学手册》分类标准：无芽胞厌氧菌有40多个菌属，300多个菌种和亚种；而有芽胞的厌氧菌只有梭菌属，包括130个种。

据耐氧性分类（1）专性厌氧菌：是指在降低氧分压的条件下才能生长的细菌。

又分为极度厌氧菌（氧分压＜0.5%，空气中暴露10min致死，如丁酸弧菌）和中度厌氧菌（氧分压为2%～8%，空气中暴露60～90min能生存，如大多数人类致病厌氧菌）。

（2）微需氧菌：能在含5%～10%CO2空气中的固体培养基表面生长的细菌，如弯曲菌属。

（3）耐氧菌：其耐氧程度刚好能在新鲜配制的固体培养基表面生长。

一旦生长，暴露数小时仍不死亡，如第三梭菌、溶组织梭菌。

厌氧菌概述——临床意义及感染感染类型外源性感染：梭状芽胞杆菌属引起的感染。

内源性感染：无芽胞厌氧菌大多数是人体正常菌群，属于条件致病菌，在一定条件下可引起感染，一般不在人群中传播。

感染的危险因素：组织缺氧缺血；机体免疫功能下降；某些手术及创伤易发生厌氧菌感染；长期应用某些抗菌药物；深部需氧菌感染。

感染的临床指征：感染局部产生大量气体；多发生在黏膜附近；深部外伤后继发感染；分泌物有恶臭或为暗红色；常见于长期应用氨基糖苷类抗生素治疗无效的病例；镜检有细菌，常规培养阴性。

厌氧菌概述——标本的采集与送检重要原则：标本绝对不能被正常菌群所污染；应尽量避免接触空气。

适宜标本血液、骨髓、脑脊液、关节液、心包液、胸腔积液、腹腔液、胆汁、由活检或尸体解剖获得的组织标本、深部脓肿抽取物、经环甲膜以下或肺穿刺抽取的肺渗出物、后穹窿穿刺抽取的盆腔渗出液及无菌套管抽取的宫腔内容物、膀胱穿刺液及其它组织穿刺液等不宜标本鼻咽拭子、齿龈拭子、直肠拭子、喀出的痰液、自然排出的尿液和导出的尿液、流出的脓液、接近皮肤或黏膜的分泌物、阴道分泌物、胃和小肠内容物、粪便（艰难梭菌除外）等厌氧菌概述——标本的采集与送检采集多采用针筒抽取、穿刺等，应严格无菌操作，严禁接触空气。

厌氧性细菌--第一节厌氧芽胞杆菌（2）为革兰氏阳性粗大梭菌，3～4×1～1.5um。

单独或成双排列，有时也可成短链排列。

芽胞呈卵圆形，芽胞宽度不比菌体大，位于中央或末次端。

培养时芽胞少见，须在无糖培养基中才能生成芽胞。

在脓汁、坏死组织或感染动物脏器的涂片上，可见有明显的荚膜，无鞭毛，不能运动。

厌氧程度不如破伤风梭菌要求高。

在血液琼脂平板上菌落较大、灰白色、不透明，边缘呈锯齿状，多数菌株有双层溶血环，内环是θ毒素的作用，而外环不完全溶血是a毒素所致。

在疱肉培养基中肉渣不被消化，有时呈肉红色。

在牛乳培养基中能分解乳糖产酸，使酪蛋白凝固，同时生成大量气体，将凝固的酪蛋白冲成海棉状碎块。

管内气体常将覆盖在液体上的凡士林层向上推挤，这种现象称为“汹涌发酵”，是本菌的特点之一。

能分解多种糖类，如葡萄糖、麦芽糖、蔗糖和乳糖，产酸产气，不发酵甘露糖或水杨苷，能液化明胶，产生硫化氢，不能消化已凝固的蛋白质和血清。

（二）致病物质和所致疾病致病条件与破全国各地风梭菌相似。

产气荚膜梭菌既能产生强烈的外毒素，又有多种侵袭性酶，并有荚膜，构成其强大的侵袭力，引起感染致病。

毒素的毒性虽不如肉毒毒素和破伤风毒素强，但种类多，外毒素有α、β、γ、δ、ε、η、θ、ι、κ、λ、μ、ν等12种，和具有毒性作用的多种酶，如卵磷脂酶、纤维蛋白酶、透明质酸酶、胶原酶和DNA酶等，构成强大的侵袭力。

根据细菌产生外毒素的种类差别，可将产气荚膜梭菌分成A、B、C、D、E5个型。

对人致病的主要是A 型，引起气性坏疽和食物中毒。

C型则引起坏死性肠炎。

在各种毒素和酶中，以α毒素最为重要，α毒素是一种卵磷脂酶，能分解卵磷脂，人和动物的细胞膜是磷脂和蛋白质的复合物，可被卵磷脂酶所破坏，故α毒素能损伤多种细胞的细胞膜，引起溶血、组织坏死，血管内皮细胞损伤，使血管通透性增高，造成水肿。

此外，θ毒素有溶血和破坏白血球的作用，胶原酶能分解肌肉和皮下的胶原组织，使组织崩解，透明质酸酶能分解细胞间质透明质酸，有利于病变扩散。

谈厌氧菌检验的重要性及注意事项目的：研究厌氧菌检验的重要性及注意事项。

方法：结合临床经验，回顾性阐述厌氧菌检验的注意事项。

结果：厌氧菌在感染性疾病中的致病作用日益受到临床重视。

临床感染的很多实例证明开展厌氧菌检验极为必要。

结论：不同地区和不同医院厌氧菌的耐药谱不同，经验用药时要根据本地区和本实验室的药敏谱选药。

因此，为提高疗效，减少抗生素的毒副作用，最好根据药敏试验选择药物治疗。

标签：厌氧菌；无氧；培养；检验厌氧菌是一类在无氧条件下比在有氧环境中生长好的细菌，这类细菌缺乏完整的代谢酶体系，其能量代谢以无氧发酵的方式进行。

它能引起人体不同部位的感染，包括阑尾炎、胆囊炎、中耳炎、口腔感染、心内膜炎、子宫内膜炎、脑脓肿、心肌坏死、骨髓炎、腹膜炎、脓胸、输卵管炎、脓毒性关节炎、肝脓肿、鼻窦炎、肠道手术或创伤后伤口感染、盆腔炎以及菌血症等。

厌氧菌在感染性疾病中的致病作用日益受到临床重视，临床感染的很多实例证明开展厌氧菌检验极为必要。

1 厌氧菌检验概况过去我国厌氧菌培养在实验室检验中开展的并不理想，临床医生重视程度不够，大多数实验室没有将厌氧菌培养作为常规检验开展，加上厌氧菌培养方法学落后，且受培养基的配制和保存的限制，制约了厌氧菌培养在实验室中的正常开展，造成厌氧菌的漏检率很高。

据报道[1]，我国从未开展过厌氧菌培养的实验室占77%之多，有90%的实验室没有鉴定厌氧菌的设备，几乎所有临床细菌室均不开展厌氧菌药敏试验。

近年来，国内从临床感染病例中分离出厌氧菌的报道日益增多，临床医生已认识到厌氧菌在感染性疾病中的重要性，并能识别厌氧菌的重要特征，能认真、正确地采样、送检，且随着厌氧菌培养技术的不断进步，厌氧菌检验已成为临床细菌学检验的重要组成部分。

为提高感染性疾病的病原学诊断水平，开展厌氧菌培养是非常必要的。

据资料显示，如仅做需氧菌培养，在23份漏检标本中检出9株厌氧菌，这说明在做细菌需氧菌培养的同时应做厌氧菌培养[2]，否则将会造成大量病原菌漏检，它不仅关系到疾病诊断的正确性，且影响治疗效果或导致治疗不彻底。

实验六、厌氧菌检验一、厌氧培养1、刨肉基法方法：将破伤风梭菌、产气荚膜梭菌分别接种在庖肉培养基中，35℃48h，观察结果。

2、厌氧罐法方法：将破伤风梭菌接种在高渗芽孢培养基中并放置于厌氧罐中；将破伤风梭菌、产气荚膜梭菌分别接种在血平板中并置于厌氧罐中，放厌氧袋，密闭，置35℃48h观察结果。

二、观察厌氧菌培养结果：1、庖肉基1）破伤风梭菌：肉汤混浊，部分消化，微变黑，有少量气体，有腐败性恶臭味。

2）产气荚膜梭菌：产生气体，肉渣呈粉红色，不被消化。

2、血平板1）破伤风梭菌：呈薄膜状生长，菌落半透明、灰白色、边缘疏松呈羽毛状，伴β溶血。

2）产气荚膜梭菌：多数菌株有双层溶血环，内环完全溶血，外环不完全溶血。

3、梭菌平板破伤风梭菌：形成直径1mm 以上不规则的菌落，中心紧密，周边疏松，似羽毛状。

三、涂片、革兰染色镜检：破伤风梭菌产气荚膜梭菌G-，细长，芽胞圆形，比菌体大，G+，粗短大杆菌，两端钝圆，单个或成双排列。

位于菌体顶端，使细菌呈鼓槌状芽胞椭圆形，位于菌体中央或次极端，芽胞直径不大于菌体四、芽孢染色：制片①5%孔雀绿加热3~5min，水洗甩干；②0.5%沙黄水溶液染色0.5~1.0min，水洗甩干干后镜检，如图所示：菌体呈红色，芽孢呈淡绿色。

破伤风梭菌产气荚膜梭菌五、汹涌发酵试验（试教）产气荚膜梭菌：分解乳糖产酸，使酪蛋白变性，同时产生大量气体，将凝固的酪蛋白冲成蜂窝状，并将液面上的凡土林层向上推挤，甚至冲开管口棉塞，气势凶猛，为“汹涌发酵”。

六、讨论：1、做生化试验时，有些细菌为致病菌，故实验时要保护好自己，且实验废弃物要妥善处理，以免发生有害菌的感染。

2、所有接种的菌株暴露于有氧环境中不得超过20min3、厌氧菌检验：可据厌氧菌的菌体形态、染色反应、菌落性状以及对某些抗生素的敏感性等作出初步鉴定。

最后鉴定则要进行生化反应及终末代谢产物等项检查。

4、破伤风梭菌微生物检验：根据破伤风的典型临床表现即可作出诊断，故一般不作细菌学检查。

厌氧性细菌及检验● 考点概念及分类分布与临床意义厌氧菌标本的采集与送检分离与鉴定常见厌氧性细菌【内容讲解】一、厌氧菌概述概念：一大群专性厌氧，必须在无氧环境中才能生长的细菌。

分类：二、厌氧菌感染（一）厌氧菌在正常人体的分布及感染类型1.厌氧菌在正常人体的分布正常人的肠道、口腔、阴道等处均有大量的厌氧菌寄居。

厌氧菌与需氧菌和兼性厌氧菌共同组成人体的正常菌群，其中绝大多数为无芽胞厌氧菌。

其中肠道中的厌氧菌数量是大肠埃希菌的1000～10000倍。

表5-22-2 重要的厌氧菌种类及其在正常人体内的分布--------------------------------------------------------------------------厌氧菌皮肤上呼吸道口腔肠道尿道阴道--------------------------------------------------------------------------一、芽胞菌革兰阳性杆菌梭状芽胞杆菌属0 0 ±＋＋±±二、无芽胞菌（一）革兰阳性杆菌乳杆菌属0 0 ＋＋＋±＋＋双歧杆菌属0 0 ＋＋＋0 ±优杆菌属±±＋＋＋0 ±丙酸杆菌属＋＋＋＋＋＋？±放线菌属0 ±＋＋＋ 0 0（二）革兰阴性杆菌类杆菌属0 ＋＋＋＋＋梭杆菌属0 ＋＋＋＋＋±普雷沃菌属0 ＋＋＋＋＋＋＋紫单胞菌属0 ＋＋＋＋＋＋＋（三）革兰阳性球菌消化球菌属＋＋＋＋＋＋±＋＋消化链球菌属＋＋＋＋＋＋±＋＋（四）革兰阴性球菌韦荣菌属 0 ＋＋＋±＋--------------------------------------------------------------------------2.外源性感染梭状芽胞杆菌属引起的感染，其细菌及芽胞来源于土壤、粪便和其他外界环境。

实验十二厌氧性细菌（厌氧培养方法）厌氧性细菌（Anaerobicbacteria）是一大群必须在无氧或低氧环境中才能生长繁殖的细菌；一般情况下，这类细菌在无氧条件下比在有氧环境中生长好，不能在空气（氧气浓度大于18%）和（或）二氧化碳浓度小于10%以下的固体培养基表面生长。

这类细菌缺乏完整的代谢酶体系，其能量代谢多以无氧发酵的方式进行。

它能引起人体不同部位的感染，包括阑尾炎、胆囊炎、中耳炎、口腔感染、心内膜炎、子宫内膜炎、脑脓肿、心肌坏死、骨髓炎、腹膜炎、脓胸、输卵管炎、脓毒性关节炎、肝脓肿、鼻窦炎、肠道手术或创伤后伤口感染、盆腔炎以及菌血症等。

（一）无芽胞厌氧菌主要种类及生物学性状无芽胞厌氧菌共有23个属，与人类疾病相关的主要有10个属。

1.革兰阴性厌氧杆菌有8个属，类杆菌属中的脆弱类杆菌最为重要。

形态呈多形性，有荚膜。

除类杆菌在培养基上生长迅速外，其余均生长缓慢。

2.革兰阴性厌氧菌有3个属，其中以韦荣菌属最重要。

为咽喉部主要厌氧菌，但在临床厌氧菌分离标本中，分离率小于1%，且为混合感染菌之一。

其他革兰阴性球菌极少分离到。

3.革兰阳性厌氧菌有5个属，其中有临床意义的是消化链球菌属，主要寄居在阴道。

本菌属细菌生长缓慢，培养需5～7天。

4.革兰阳性厌氧杆菌有7个属，其中以下列3个属为主：（1）丙酸杆菌属：小杆菌，无鞭毛，能在普通培养基上生长，需要2～5天，与人类有关的有3个种，以痤疮丙酸杆菌最为常见。

（2）双歧杆菌：呈多形性，有分枝，无动力，严格厌氧，耐酸。

29个种中有10个种与人类有关，其中只有齿双歧杆菌与龋齿和牙周炎有关。

其他种极少从临床标本中分离到。

（3）优杆菌属：单一形态或多形态，动力不定，严格厌氧，生化反应活泼，生长缓慢，常需培养7天，最常见的是迟钝优杆菌。

（二）微生物学检查要从感染灶深部采取标本。

最好是切取感染灶组织或活检标本，立即送检医.学教育网搜集整理。

1.直接涂片镜检：将采集的标本直接涂片染色镜检，观察细菌形态、染色及菌量，为进一步培养以及初步诊断提供依据。

厌氧菌在有氧的情况下不能生长。

要培养厌氧菌，必须创造一个环境中的游离氧，以降低氧化还原电势。

如疱肉培养基、硫基乙酸钠培养基，牛心脑浸液培养基等。

常用的厌氧培养方法有许多，可根据实际情况选用。

1.厌氧缸法：接种好标本的平板或液体培养基试管，可放入厌氧缸内培养，厌氧缸是普通的干燥缸，用物理化学的方法使缸内造成厌氧环境，从而将厌氧菌培养出来。

2.厌氧袋：即在塑料袋内造成厌氧环境来培养厌氧菌。

塑料袋透明而不透气，内装气体发生管、美兰指示剂管、钯催化剂管、干燥剂。

放入已接种好的平板后，尽量挤出袋内空气，然后密封袋口。

先折断气体发生管，后折断美兰指示剂管，命名袋内在半小时内造成无气环境。

如不突变表示袋内已达厌氧状态，可以孵育（较为推荐）。

3.厌氧手套箱：是迄今为止国际上公认的培养厌氧菌最佳仪器之一。

它是一个密闭的大型金属箱，箱的前面有一个有机玻璃做的透明面板，板上装有两个手套，可通过手套在箱内进行操作，故名。

箱侧有一交换室，具有内外二门，内门通箱内先关着。

欲放物入箱，先打开外门，放入交换室，关上外门进行抽气和换气达到厌氧状态，然后手伸入手套把交换室内门打开，将物品移入箱内，关上内门。

箱内保持厌氧状态，也是利用充气中的氢在钯的催化下和箱中钱残余氧化合成水的原理。

该箱可调节温度，本身是孵箱或孵箱即附在其内，还可放入解剖显微镜便于观察厌氧菌菌落，这种厌氧箱适于作厌氧细菌的大量培养研究，大量培养基可放入作预还原和厌氧性无菌试验。

金属硬壁型厌氧箱的抽气、充气、厌氧环境和温度等均系自动调节。

4.厌氧盒：原理同厌氧袋，有成品销售。

5.生物耗氧法：在一密闭的容器内放以生物，消耗氧气，同时产生二氧化碳，供细菌生长用。

我没见过。

6.焦性末食子酸法：在一洁净的玻片上铺上纱布或滤纸，均匀撒上焦性末食子酸，然后再混入NaHCO3粉末或NaOH溶液，迅速将已接种细菌的平板倒扣在上面，用融化的白蜡封边，造成一个封闭空间。

焦性末食子酸与碱反应后耗氧。

第十七章厌氧性细菌及检验一、A11、厌氧菌感染的危险因素不包括（）。

A、组织缺氧或氧化还原电势降低B、机体免疫功能下降C、长期应用抗菌药物D、紫外线下照射E、深部需氧菌感染2、能引起毒血症的厌氧菌是（）。

A、α-溶血链球菌B、腐生葡萄球菌C、产气荚膜梭菌D、鼠伤寒沙门菌E、金黄色葡萄球菌3、细菌毒素中，毒性最强的是（）。

A、破伤风痉挛毒素B、金黄色葡萄球菌肠毒素C、白喉外毒素D、霍乱肠毒素E、肉毒毒素4、抗生素相关性伪膜性肠炎一般由下述哪种细菌所致（）。

A、破伤风梭菌B、产气荚膜梭菌C、艰难梭菌D、肉毒梭菌E、诺威梭菌5、引起假膜性肠炎的病原体是（）。

A、双歧杆菌B、消化链球菌C、艰难梭菌D、大肠埃希菌E、白色念珠菌6、下列属于专性厌氧的细菌是（）。

A、军团菌B、布鲁菌C、破伤风杆菌D、肠球菌E、幽门螺杆菌7、假设1位施工工人不慎脚踩在包装箱木板的铁钉上，医生给患者清创包扎时，还应给患者注射（）。

A、胎盘球蛋白B、破伤风抗毒素C、磺胺嘧啶D、干扰素E、人血白蛋白8、下列描述哪项是错误的（）。

A、病原菌致病力的强弱度称为毒力B、毒力主要由侵袭力和毒素所决定C、破伤风毒素属于内毒素D、侵袭力是指病原菌突破宿主机体的防御功能，并能在体内定居、繁殖和扩散的能力E、霍乱肠毒素属于外毒素二、A21、患者，女性，36岁，下腹部疼痛4天，左下腹部有中度痉挛性疼痛，阴道有大量黄色、无气味的分泌物。

一周前曾做过经阴道的结扎手术，患者阴道后穹隆穿刺术，得20ml带血、恶臭的脓性液体，厌氧菌培养得G-杆菌。

可能是下列哪种菌感染（）。

A、变形杆菌B、大肠杆菌C、铜绿假单胞菌D、肺炎杆菌E、脆弱类杆菌2、脓胸患者，怀疑厌氧菌感染，抽取脓汁应如何运送（）。

A、注入无菌试管内B、针筒运送C、注入血培养瓶内D、注入无菌小瓶内E、用无菌拭子蘸取后放到增菌管内3、王某，48岁，建筑工人，因牙关紧闭，四肢痉挛而入院，8天前，右脚被铁钉扎伤，伤口深，但几日后自愈。