厌氧型细菌及检验

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致病的原因
❖ 1 组织缺氧或氧化还原电势降低 穿刺伤等封闭性伤口，血管压迫，肿 瘤压迫等等
❖ 2 机体免疫力低下
临床的症状
❖ 1 感染部位产生大量气体，组织脓肿和坏 ❖ 死，皮下有捻发音，是产气夹膜梭菌感 ❖ 染的特征 ❖ 2分泌物有恶臭，或为暗红色，分泌物涂 ❖ 片经革兰氏染色，发现细菌，而培养阴 ❖ 性的 ❖ 3 其它等等
❖ 营养要求不高，在普通琼脂平板上培养 24～48小时后，可形成直径1mm 以上不 规则的菌落，中心紧密，周边疏松，似 羽毛状菌落，易在培养基表面迁徒扩散。 在血液琼脂平板上有明显溶血环，在疱 肉培养基中培养，肉汤浑浊，肉渣部分 被消化，微变黑，产生气体，生成甲基 硫醇（有腐败臭味）及硫化氢。
❖ 一般不发酵糖类，能液化明胶，产生硫化 氢，形成吲哚，不能还原硝酸盐为亚硝酸 盐。对蛋白质有微弱消化作用。本菌繁殖 体抵抗力与其他细菌相似，但芽胞抵抗力 强大。在土壤中可存活数十年，能耐煮沸 40～50分钟。对青霉素敏感，磺胺类有抑 菌作用。
厌氧菌标本的采集和送检
❖ 标本的采集和送检-----------1 标本决不能被正常菌群污染； 2 应尽量避免空气
标本的采集
标本来源
收集的方法
封闭性脓肿
针管抽取
妇女生殖道
后穹隆穿刺抽取
下呼吸道分泌物
肺穿刺术
胸腔
胸腔穿刺术
窦道，子宫腔，深部创伤 静脉注射的塑料导管穿入
组织
无菌外科切开
尿道
上阴部膀胱穿刺
三 感染
❖ 分布 ❖ 原因 ❖ 临床症状
厌氧菌在正常人体内的分布
厌氧菌
皮肤 上呼吸道 口腔 肠道 尿道 阴 道
一芽孢菌
G+杆菌
梭状芽孢杆菌属
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二无Biblioteka Baidu孢菌
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（一）G+的杆菌 双歧杆菌
（二） G-的杆菌 类杆菌属
（三）G+的球菌 消化球菌属
（四）G-的球菌 韦荣氏菌属
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❖ 3）荧光
❖ 3 抗生素敏感实验 ❖ 4一些特殊的敏感实验—— ❖ 聚茴香脑磺酸 钠敏感实验 ❖ 5生化特性 ❖ 6气液相色扑 ❖ 7 PCR等等
有芽孢的厌氧菌
❖ 简介 梭菌属 G+ 陈旧性培养基G-
四 破伤风梭菌
❖ 大量存在于人和动物的肠道 ❖ 粪便污染
❖ 伤口被污染导致----------注意消毒清洁 ❖ 芽孢为于顶部，呈鼓槌壮，直径比菌体粗，
需氧培养
厌氧培养
有生长 无生长
有生长 无生长
兼性厌氧菌 专性厌氧菌 需氧菌 药物敏感实验 分类鉴定 菌种保存 形态和染色 菌落 生化反应 药敏性实验 气液相色谱 其它，PCR等等
检验的方法
❖ 1 直接镜检 一些特殊的特点，临床工作中的总结 可对初步判断及临床应用做早一步的 指 导作用
2 分离培养
❖ 时间
❖ 破伤风梭菌革兰氏染色改变 ❖ 拉丝实验 加KOH30g/l一滴，能拉丝为阴性
不能为阳性
❖ PH ❖ 痤疮丙酸杆菌7.0时阴性及多型性 ❖ 6.0及以下革兰氏阳性杆菌
❖ 2 菌落性状
❖ 1）色素 产黑色素类杆菌2~10天可产生黑 色素；溶齿放线菌培养3~4天产生粉红色色素
❖ 2）溶血 产气夹膜梭菌在新鲜的血琼脂平板 上可产生双溶血环
二）致病性与免疫性
❖ 破伤风梭菌芽胞广泛分布于自然界中可由伤口侵 入人体，发芽繁殖而致病，但破伤风梭菌是厌氧 菌，在一般伤口中不能生长，伤口的厌氧环境是 破伤风梭菌感染的重要条件。窄而深的伤口（如 剌伤），有泥土或异物污染，或大面积创伤、烧 伤、坏死组织多，局部组织缺血或同时有需氧菌 或兼性厌氧菌混合感染，均易造成厌氧环境，局 部氧化还原电势降低。有利于破伤风杆菌生长
厌氧性细菌及检验
一定义
❖ 有氧条件下不能生长，无氧条件(不是绝对） 下才可以生长的一类细菌
❖ 1836年Pasteur提出 ❖ 临床上日益受到重视，60%临床标本存在厌氧
菌感染---------------------需要重视
二 分类
1 有芽孢厌氧性细菌 一个梭菌属包括83个种
2 无芽孢厌氧性细菌 40多个菌属，300多个菌 种和亚种
❖ 1 初步培养 ❖ 1 ）培养基的选择 ❖ 强化血琼脂平板 ❖ 卡那万古霉素冻溶血琼脂平板 ❖ 七叶苷胆汁平板等等
❖ 2 ）标本的接种
❖ 每份标本应接种3个培养平板，分别放置 于有氧，无氧和含5%~10%的CO2的容器中， 有时需要专用的培养基
❖ 3） 厌氧培养法 ❖ a 厌氧罐培养法 ❖ b 气袋法 ❖ c 气体喷射法 ❖ d 厌氧手套箱法 ❖ e 其它等等
❖ 破伤风梭菌能产生强烈的外毒素，即破 伤风痉挛毒素（Tetanospasmin）或称神 经毒素(Neurotoxin)。破伤风毒痉挛毒素 是一种神经毒素，为蛋白质，由十余种 氨基酸组成不耐热，可被肠道蛋白酶破 坏，故口服毒素不起作用。在菌体内的 痉挛毒素是单一和一条多肽链，分子量 15万。破伤风毒素的毒性非常强烈，仅 次于肉毒毒素。破伤风梭菌没有侵袭力
标本的送运与处理
❖ 针筒送运法 ❖ 无菌小瓶送运法 ❖ 棉拭送运法 ❖ 大量标本送运法 ❖ 组织块送运法 ❖ 厌氧袋送运法
分离和鉴定
临床标本
1 肉眼观察及有无气味 2 涂片观察与直接镜检
分离培养 （接种血平板及选择性培养基）
增菌培养 （接种液体培养基）
2~7天
厌氧培养
确定厌氧菌
每个平板挑5个以上的菌落 每个菌落接种2个平板48h培养
❖ 2 次代培养和厌氧菌的确定
❖ 3 分离培养中可能失败的原因 1）培养前为做标本的直接涂片和染色镜
检
2）标本在空气中放置太久或接种时时间 过长
3）未用新鲜配制的培养基
❖ 4）未用选择性培养基 ❖ 5）无合适的厌氧罐或装备出现问题 ❖ 6）培养时间不足 ❖ 7）…………………..
鉴定实验
❖ 1 形态和染色 ❖ 重要的是为下一步的鉴定提供参考，
呈梭状 ❖ 可以被用来生物技术， ❖ 外毒素致毒
一）生物学性状
染色，培养 生化 对我们实验诊断来说最重要
❖ 破伤风梭菌菌体细长，长4～8um ，宽 0.3～ 0.5um ，周身鞭毛，芽胞呈圆形， 位于菌体顶端，直径比菌体宽大，似鼓 槌状，是本菌形态上的特征。繁殖体为 革兰氏阳性，带上芽胞的菌体易转为革 兰氏阴性。破伤风梭菌为专性厌氧菌， 最适生长温度为37℃pH7.0～7.5，