一、实验目的1. 了解厌氧菌的生长特性及其检验方法。
2. 掌握厌氧菌分离纯化的基本操作。
3. 学会运用生化反应和显微镜观察等方法对厌氧菌进行鉴定。
二、实验原理厌氧菌是一类在无氧或低氧环境下生长繁殖的微生物。
在实验室条件下，通过厌氧技术模拟厌氧环境，可以使厌氧菌生长繁殖，从而进行分离、纯化和鉴定。
三、实验材料1. 厌氧菌培养箱2. 厌氧菌培养基：庖肉培养基、疱肉消化汤、疱肉琼脂平板等3. 实验器材：无菌接种环、无菌试管、无菌吸管、显微镜、酒精灯、培养皿等4. 实验试剂：5%氢氧化钠、95%乙醇、1%结晶紫溶液、革兰氏染色液等四、实验步骤1. 培养基制备a. 将庖肉培养基、疱肉消化汤和疱肉琼脂平板按照说明书进行制备。
b. 将制备好的培养基在厌氧条件下进行高压灭菌。
2. 样品接种a. 将待检样品接种于疱肉消化汤中，进行初步培养。
b. 将培养后的疱肉消化汤接种于庖肉琼脂平板上，进行分离纯化。
3. 厌氧培养a. 将接种好的庖肉琼脂平板放入厌氧培养箱中，在37℃条件下培养48小时。
b. 观察菌落生长情况，记录菌落特征。
4. 菌落形态观察a. 取少量菌落涂片，进行革兰氏染色。
b. 在显微镜下观察菌落形态、革兰氏染色结果，初步判断菌属。
5. 生化反应鉴定a. 对分离纯化的厌氧菌进行糖发酵试验、氧化酶试验、过氧化氢酶试验等生化反应。
b. 根据生化反应结果，进一步鉴定菌属。
6. 显微镜观察a. 对分离纯化的厌氧菌进行涂片、染色和显微镜观察。
b. 观察菌体形态、排列方式等特征，辅助鉴定菌属。
五、实验结果1. 厌氧菌在庖肉琼脂平板上生长良好，形成灰白色、湿润、边缘不整齐的菌落。
2. 革兰氏染色结果显示，部分菌落为革兰氏阳性，部分菌落为革兰氏阴性。
3. 生化反应结果显示，部分菌落发酵葡萄糖，部分菌落不发酵葡萄糖；氧化酶试验和过氧化氢酶试验结果均为阳性。
4. 显微镜观察结果显示，部分菌落为革兰氏阳性球菌，部分菌落为革兰氏阴性杆菌。
