HE染色技术

普通染色又称常规染色或HE（Haematoxylin and eosin）染色。

它是病理技术中最常用的一种方法，通过它可以做出病理诊断和发现寻求别的辅助方法，以达到准确，完整的病理诊断。

一、染色目的病理学的所有切片，都必须通过一种以上的染料，通过各种不同的方法，将切片中各种不同的物质，在不同染液的作用下，将其显示出来，使之在光学显微镜下，能够完全的观看各种结构。

例如，HE染色，好质量的切片可以清晰地显示出许多不同的结构，细胞核着蓝黑色，细胞浆着粉红色，软骨着蓝色等。

清晰的结构为诊断提供可靠的依据，因此，染色技术也是病理技术中的重要组成部分，必须不断地总结，方能提高。

如果染色不好，切片染色一团糟，红蓝不分，结构不清，层次不明，影响了镜下的观察，直接影响了临床诊断，染色结果的好坏直接关系到诊断的准确性。

二、染色的作用1．化学作用：所有的染色液中，可把它们分为两种类型，一种为酸性，另一种为碱性。

酸性染料中有染色作用的为阴离子，碱性染料中有染色作用的为阳离子，每个细胞也存在着两种物质，细胞核含的是酸性物质，细胞浆含的是碱性物质。

在染色时，细胞核中的酸性物质与苏木素染液中的阳离子发生作用，细胞浆中的碱性物质与伊红染液中的阴离子发生作用，由于反应的部位不同，结果着色有异。

2．物理作用：在染色过程中，染液中的色素微粒子浸入到被染组织的粒子间隙内，此时，因受分子的引力作用，色素微粒子被吸附而着色。

由于各种组织有不同的吸附能力和不同的吸附程度，因此就可显出来不同的颜色来。

一般来说，染色的学说还有许多，但说服力强的仅有上述两种。

但不管怎么样解释，实际上完成的每一种染色，都与上述两种学说分不开，它们的作用是相辅相成，同时存在的。

三、染色方法及步骤1．人工苏木素-伊红染色法（HE法）(1)切片浸入二甲苯中5-10min；(2)切片浸入二甲苯中5-10min；(3)100%酒精1min。

(4)100%酒精1min。

(5)95%酒精1min。

HE染⾊HE染⾊实验步骤及常见问题解析⼀、HE染⾊HE染⾊全名为苏⽊精(hematoxylin)和伊红(eosin)染⾊⽅法，是最基本的也是最重要的病理学染⾊技术。

⼀张质上乘的HE切⽚是病理医⽣得以做出正确诊断的关键。

HE染⾊是⽬前国内外病理诊断上⼴泛采⽤的常规染⾊⽅法。

切⽚质量的好坏，可直接影响疾病诊断的及时与准确性。

因此，能制作出⼀张⾼质量的HE染⾊切⽚，是必须掌握的技术之⼀。

⼆、染⾊原理1.细胞核染⾊原理：苏⽊精为碱性天然染料，可使细胞核着⾊。

细胞核内染⾊质的成分主要是DNA，在DNA的双螺旋结构中，两条核苷酸链上的磷酸基向外，使DNA双螺旋的外侧带负电荷，呈酸性，很容易与带正电荷的苏⽊精碱性燃料以离⼦键或氢键结合⽽被染⾊。

苏⽊精在碱性溶液中呈蓝⾊，所以细胞核被染成蓝⾊。

2.细胞浆染⾊原理：细胞浆内主要成分是蛋⽩质，为两性化合物、细胞浆的染⾊与pH值有密切关系，当pH调到蛋⽩质等电点4.7-5.0时，胞浆对外不显电性，此时酸或碱性染料不易染⾊。

当pH调到6.7-6.8时，⼤于蛋⽩质的等电点pH值，表现酸性电离，⽽带负电荷的阴离⼦，可被带正电荷的染料染⾊，现时胞核也被染⾊，核和胞浆难以区分。

因此必须把pH调⾄胞浆等电点以下，在染液中加⼊醋酸使胞浆带正电荷（阳离⼦），就可被带负电荷（阴离⼦）的染料染⾊。

伊红Y是⼀种化学合成的酸性染料，在⽔中离解成带负电荷的阴离⼦，与蛋⽩质的氨基正电荷（阳离⼦）结合⽽使细胞浆染⾊，细胞浆、红细胞、肌⾁、结缔组织，嗜伊红颗料等被感染成不同程度的红⾊或粉红⾊，与蓝⾊的细胞核形成鲜明的对⽐。

3.分化作⽤：染⾊后，⽤某些特定的溶液将组织过多结合的染⾊剂脱去，这个过程称为分化作⽤，所⽤的溶液称为分化液。

在HE染⾊中⽤0.5%盐酸⼄醇作为分化液，因酸能破坏苏⽊精的醌型结构，使组织与⾊素分离⽽褪⾊。

经苏⽊精染⾊后，必须⽤0.5%盐酸⼄醇分化，使细胞核过多结合的苏⽊精染料和细胞浆吸附的苏⽊精染料脱去，在进⾏伊红染⾊，才能保证细胞核与细胞浆染⾊的分明。

HE染色技术（以脑组织为例）
1、取材：取脑组织，用4%甲醛溶液浸泡固定（溶液事先在4度预
冷），6h后换溶液并将组织切成小块，然后再固定18h。

2、冲洗：固定后用流水冲洗组织1天左右。

3、脱水透明：70%酒精30min—80%酒精30min—90%酒精30min
—95%酒精30min（2次）—无水乙醇30min—无水乙醇50min —无水乙醇二甲苯（1:1）30min—二甲苯Ⅰ30min—二甲苯Ⅱ30min—蜡Ⅰ30min—蜡Ⅱ30min—蜡Ⅲ30min—在小碗里包埋。

4、进行修切蜡块—切片（5um），切成蜡带—将蜡带分成一些片段
然后铺如50度左右的水中，待其平展，用载玻片（事先在载玻片上涂贴片剂）捞起铺片—37度烤片过夜（65度烤两小时）。

5、脱蜡: 二甲苯Ⅰ10min—二甲苯Ⅱ10min—无水乙醇二甲苯
（1:1）5min—无水乙醇（2次）5min—95%酒精5min（2次）—80%酒精5min—70%酒精5min—蒸馏水5min—PBS5min—PBS洗5min（3次）
6、 Harris苏木素染色 10分钟---自来水稍洗---1%盐酸水溶液分
化5~10秒（切片由蓝变红）---自来水洗返蓝1分钟---伊红染色5分---自来水稍洗---70%酒精1分钟，80 %酒精1分钟，95%酒精脱水5分钟×2次，用吸水纸吸干液体。

7无水乙醇5分钟×2次，用吸水纸吸干液体---无水乙醇二甲苯5分钟---入二甲苯中透明5分钟×2次，用吸水纸吸干液体钟---中性树胶封片---镜下观察结果：细胞核深蓝色，胞浆及纤维组织呈
深浅不等的红色。

HE染色实验步骤及常见问题解析一、HE染色HE染色全名为苏木精(hematoxylin)和伊红(eosin)染色方法，是最基本的也是最重要的病理学染色技术。

一张质上乘的HE切片是病理医生得以做出正确诊断的关键。

HE染色是目前国内外病理诊断上广泛采用的常规染色方法。

切片质量的好坏，可直接影响疾病诊断的及时与准确性。

因此，能制作出一张高质量的HE染色切片，是必须掌握的技术之一。

二、染色原理1.细胞核染色原理：苏木精为碱性天然染料，可使细胞核着色。

细胞核内染色质的成分主要是DNA，在DNA的双螺旋结构中，两条核苷酸链上的磷酸基向外，使DNA双螺旋的外侧带负电荷，呈酸性，很容易与带正电荷的苏木精碱性燃料以离子键或氢键结合而被染色。

苏木精在碱性溶液中呈蓝色，所以细胞核被染成蓝色。

2.细胞浆染色原理：细胞浆内主要成分是蛋白质，为两性化合物、细胞浆的染色与pH值有密切关系，当pH调到蛋白质等电点4.7-5.0时，胞浆对外不显电性，此时酸或碱性染料不易染色。

当pH调到6.7-6.8时，大于蛋白质的等电点pH值，表现酸性电离，而带负电荷的阴离子，可被带正电荷的染料染色，现时胞核也被染色，核和胞浆难以区分。

因此必须把pH调至胞浆等电点以下，在染液中加入醋酸使胞浆带正电荷（阳离子），就可被带负电荷（阴离子）的染料染色。

伊红Y是一种化学合成的酸性染料，在水中离解成带负电荷的阴离子，与蛋白质的氨基正电荷（阳离子）结合而使细胞浆染色，细胞浆、红细胞、肌肉、结缔组织，嗜伊红颗料等被感染成不同程度的红色或粉红色，与蓝色的细胞核形成鲜明的对比。

3.分化作用：染色后，用某些特定的溶液将组织过多结合的染色剂脱去，这个过程称为分化作用，所用的溶液称为分化液。

在HE染色中用0.5%盐酸乙醇作为分化液，因酸能破坏苏木精的醌型结构，使组织与色素分离而褪色。

经苏木精染色后，必须用0.5%盐酸乙醇分化，使细胞核过多结合的苏木精染料和细胞浆吸附的苏木精染料脱去，在进行伊红染色，才能保证细胞核与细胞浆染色的分明。

HE染色实验步骤染色实验是生物学中常用的染色技术，用于观察细胞结构、细胞器和染色体等生物学特征。

在这个实验中，我们将使用HE染色法来染色细胞和组织切片。

HE染色法是最常用的组织染色方法之一，用于观察组织结构和组织细胞的形态。

以下是HE染色实验的步骤：1.准备组织标本在进行染色实验之前，首先需要准备好需要染色的组织标本。

组织标本可以是新鲜的组织样本，也可以是已固定和包埋的组织切片。

在准备组织标本时，需要确保组织标本的质量和完整性，以保证染色结果的准确性。

2.制备切片将组织标本切割成薄片，通常厚度在5-10微米之间。

为了获得更好的染色效果，切片应该尽可能薄且均匀。

切片可以使用切片刀或者切片机进行切割。

切片完成后，将切片放在载玻片上，待干燥。

3.脱脂和脱水将切片放入甲醇中脱脂，去除切片中的脂肪物质。

脱脂时间一般为1-2分钟。

脱脂完成后，将切片依次浸入95%乙醇、70%乙醇和蒸馏水中进行脱水处理，时间每次均为1-2分钟。

脱水处理的目的是去除切片中的水分，以便后续染色。

4.染色处理将脱水后的切片依次浸入hematoxylin染料、蒸馏水、酸性洗涤剂和eosin染料中进行染色处理。

hematoxylin染料用于染色细胞核，eosin染料用于染色胞质。

染色时间根据实验需要，通常为1-10分钟。

染色完成后，将切片洗净并进行脱水处理。

5.脱水和封片将染色后的切片依次浸入70%乙醇、95%乙醇和透明剂中进行脱水处理。

脱水完成后，将切片放入透明剂中进行透明化处理，以使组织切片更加透明。

最后，将切片放入显微镜载玻片上，加入透明胶封片，并静置干燥。

6.观察和记录将封片好的切片放入显微镜中，用适当的倍数镜头观察组织结构和细胞形态。

观察时，可以记录下细胞核的形态、胞质的颜色和组织结构等信息。

通过观察和记录，可以得到关于组织和细胞的详细信息，为后续研究和分析提供参考。

7.结果分析根据观察和记录的结果，对染色切片进行分析和比较。

HE染色一．HE染色简介：苏木精— 伊红染色法( hematoxylin-eosin staining ) ，简称HE染色法，石蜡切片技术里常用的染色法之一。

苏木精染液为碱性，主要使细胞核内的染色质与胞质内的核糖体着紫蓝色；伊红为酸性染料，主要使细胞质和细胞外基质中的成分着红色。

由于组织或细胞的不同成分对苏木精的亲和力不同及染色性质不一样。

经苏木精染色后，细胞核及钙盐粘液等呈蓝色，可用盐酸酒精分化和弱碱性溶液显蓝，如处理适宜，可使细胞核着清楚的深蓝色，胞浆等其它成分脱色。

再利用胞浆染料伊红染胞浆，使胞浆的各种不同成分又呈现出深浅不同的粉红色。

故各种组织或细胞成分与病变的一般形态结构特点均可显示出来。

二．实验步骤：1.脱蜡：将石蜡切片在65℃烘箱中烘烤40-60分钟，后用二甲苯（Ⅰ）、（Ⅱ）浸泡，各15min；2.水化：无水酒精（100%乙醇）2min，下行至90%、80%、70%酒精各2min，蒸馏水（Ⅰ）、（Ⅱ）各2min；3．染色：石蜡画圈，用滴管滴加苏木素在脑片上，放湿盒40s；（苏木素需要回收）4.流水浸洗：把玻片装入玻片铁架子里，在1L烧杯里用自来水对玻片进行流水浸洗；（脑片不要对着水流直接冲）5.1%盐酸酒精分化：快速提拉2-3下，用时3-5s左右；6.流水浸洗：自来水洗3次，每次20min；7.伊红染色：时间15min；8.流水浸洗；9.脱水：先在通风橱外的70%酒精浸没，时长2-3s，以颜色适宜为准，再放入通风橱中脱水，70%、80%、90% 2-3s，100%酒精Ⅰ、Ⅱ1min，二甲苯Ⅰ、Ⅱ2min；10．封片：上述处理好的玻片，取中性树胶滴入载玻片的组织上，取盖玻片从一端逐步盖下去，避免发生气泡三．结果的判断：3.1实验结果：细胞核被苏木精染成鲜明的蓝色，软骨基质、钙盐颗粒呈深蓝色，粘液呈灰蓝色。

细胞浆被伊红染成深浅不同的粉红色至桃红色，胞浆内嗜酸性颗粒呈反光强的鲜红色。

胶原纤维呈淡粉红色，弹力纤维呈亮粉红色，红血球呈橘红色，蛋白性液体呈粉红色。

HE染色方法与步骤吐血整理染色是一种常见的实验技术，用于观察和分析生物样品中的细胞或组织结构。

HE染色是一种常用的组织和细胞染色方法，它能够同时染色细胞核和细胞质，因此得名HE（hematoxylin and eosin）染色。

下面是HE染色的步骤：1.染色前的准备工作：-选择合适的组织样品，通常是已固定和包埋的组织切片。

-准备好需要使用的试剂和设备，包括显微镜玻片、切片刀、染色盘、醇和蜡解剂、染色液和显微镜。

-将切片从包埋蜡中去蜡，并通过浸泡在蜡解剂中来溶解蜡质。

2.组织切片的处理：-将组织切片通过水洗涤，去除蜡解剂和剩余的蜡质。

-将切片通过不同浓度的醇溶液进行脱水处理，使得切片逐渐转移到无水状态。

-将脱水处理后的切片通过透明质量更好的试剂（如亚硫酸氢钠或甘油）进行透明处理，以利于细胞的观察。

3.组织切片的染色：-首先进行碱性染色，即将切片浸泡在染色盘中的伊洛酮溶液中，伊洛酮是一种天然的染色物质，能够与细胞核结构中的DNA结合，使细胞核染色为暗蓝色。

-然后进行酸性染色，即将切片浸泡在染色盘中的苏木精溶液中，苏木精是一种带正电荷的染色物质，能够与细胞质结构中的负电荷部分结合，使细胞质染色为粉红色。

4.组织切片的脱水和封片：-将染色后的切片通过不同浓度的醇溶液进行脱水处理，使得切片从水状态逐渐转移到无水状态。

-将切片在醇溶液中固定一段时间，然后转移到透明的试剂（如苏木精和二甲苯混合溶液）中进行浸泡。

- 最后将切片取出，放在显微镜玻片上，滴入固定剂（如Canada Balsam）并加盖玻片，使切片固定在玻片上。

5.显微镜观察和分析：-使用显微镜观察染色后的组织切片，并通过不同增大倍数的镜头进行详细观察。

-根据观察到的细胞和组织结构，进行分析和研究，并将观察结果记录下来。

需要注意的是，HE染色是一种简单、快速且广泛应用的染色方法，但在不同类型的组织和细胞中可能会有不同的染色效果。

因此，在进行HE染色时，需要根据具体实验要求和样品的特点，进行相应的优化和调整。

he染色是什么意思He染色，又称嗜热染色，是一种常用的实验技术，用来检测细胞状态和表型变化，以及反映染色体结构和形态组成。

它由日本生物学家藤原正武教授在20世纪50年代创立，目前已经在全球拥有广泛而深入的影响，在遗传学、肿瘤学、遗传工程等研究领域都备受重视，成为重要的分析方法。

He染色的原理是利用DNA分子不同于基因表达蛋白质的不同物质结构，在合适的温度和条件下，使DNA分子受到某种特定的化学环境的影响而发生变化，对外来物质的反应不同。

由此，通过体内和体外实验，可以根据染色颜色来测定DNA分子的碱基组成情况，从而推断细胞表型或遗传特征。

He染色法包括多种染色技术，其中最常用的有稀释后染色、挥发性染色、沉淀氧化物染色、荧光染色和亚硝酸盐染色。

稀释后染色是使用热变性染色剂，将染色剂以特定温度和pH稀释后置于欲测定的样本内，观察染色剂的改变，从而得出细胞的遗传特征，具有比较高的精度。

挥发性染色和沉淀氧化物染色则是通过改变反应环境和染色剂的组合，使得染色物发生变化，从而分析细胞表型。

而荧光染色是以各种荧光组分结合染色剂，根据特定条件下染色物的荧光变化分析细胞表型。

亚硝酸盐染色是根据染色物在亚硝酸盐解离过程中形成亚硝酸盐沉淀，来观察细胞表型的变化。

He染色的优点是，可以获取高质量的细胞染色图像，以便检查细胞状态和细胞的表型变化，也可以得到清晰的遗传结构，从而更好地实现基因组改造或克隆等遗传技术。

此外，它还有助于解析细胞的进化，可以提供有关物种演化史、起源和分化的宝贵信息。

He染色在现代生物学研究中发挥着重要作用，不仅可用于检查细胞状态和表型变化，而且有助于解析细胞的进化，为下一步基因表达调控、生物技术研发和遗传学研究提供了依据。

未来，He染色技术的发展将更加深入地影响着各种生物学研究领域，使研究人员能够更加精准地探寻生命科学真谛。

病理技术HE染色在病理诊断中的应用效果分析
病理技术HE染色是一种常用的病理学研究技术，在病理学研究中具有不可替代的作用。

HE染色可以在组织切片中突出不同组织结构和细胞核、细胞浆等重要成分，从而帮助病理学家了解病变组织的形态、结构和组织学特征，有助于诊断和治疗疾病。

HE染色的应用效果可以从以下几个方面来分析：
1. 显示不同细胞和组织结构
HE染色可以特异性地染色细胞核、细胞浆和胞质等组织结构，使得不同细胞和组织结构在切片中显示清晰明了。

这对于诊断各种疾病、评估其严重程度和性质等方面具有重要
意义。

2. 帮助病理医生诊断疾病
HE染色在病理诊断中扮演着至关重要的角色。

病理医生可以通过HE染色的显示来确
定诊断，将疾病分为可逆和不可逆的病变，进而为患者制定个体化的治疗方案。

3. 有助于疾病治疗
许多治疗方法是针对病变组织的。

HE染色可以使医生了解疾病的特点和性质，为选择适当的治疗方案提供重要参考。

4. 提高疾病预测的准确性
由于HE染色可以显示细胞和组织结构的细微变化，因此可以帮助病理学家预测疾病的进程和其预后情况。

根据HE染色结果，病理学家可以识别和分析疾病的不同类型和严重程度，以便向患者提供更准确的预测。

总之，病理技术HE染色在病理诊断中具有重要的应用效果。

通过HE染色技术，病理
学家可以更好地了解疾病的形态、结构和组织学特征，从而提高疾病的诊断准确性和治疗
效果。

同时，它也有助于疾病预测，为患者提供更准确的预测和更好的治疗方案。