植物组织石蜡切片的制作26页PPT

载玻 片
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九 、烤 片 40℃需烤1天或1昼夜；60℃烤0.5至1小时，放在酒精
灯上烤片（必须来回晃动），或70℃左右的温度烤片， 只需3至5分钟即可。
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十、 染 色 1 苏木精（素）－伊红染色方法
具体步骤：
（1）二甲苯 I
（10 min）
（2）二甲苯II
（5 min）
1 切片前的准备 （1）切片前必须了解切片机的基本结构和性能。装刀架、刀片。检验刀片是否锋利。 （2）载玻片、盖玻片的处理：洗液浸泡24小时后用自来水充分洗涤，95％酒精中浸泡，
再用软绸布或纱布擦干待用 。 （3）为了使切出的薄片能粘贴在载玻片上，可用蛋清与甘油（1:1）混合物均匀抹在载玻
片上，再使切片附贴在玻片上。 （4）另外，准备水浴锅、蓬松的中号毛笔，眼科镊，水槽等物。
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2 切片制作过程
（1）冷冻组织蜡块，固定刀架、刀片 和蜡块。 （2）切片 ：切片厚度：5μm；转速： 40至50次/分钟。 （3） 展片 （4）捞片 、烫片（45o ）、捞片
（5）切片过程中，固定好蜡块、刀片，注意刀与蜡块的角度（5o ）。出现蜡片上卷、裂隙、 刀痕等立即移动刀片或切片刀，换至刀刃锋利处。毛笔必须由下向上拔动，烫片时水温不宜 过高等等。
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二、固 定
固定就是将采取的新鲜组织，放入固定液内，借助化学药品的作用使细胞内 的蛋白质、脂肪、糖、酶等各种成份沉淀保存下来。同时，使组织硬化不变形， 有利于固定以后的处理。
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1
固定液的用量
应充足，一般为组织块体积的10倍左右。
2
固定时间
应根据组织的种类、性质、大小，固定液的种类、性质、渗透力的强弱而定。

• 透蜡温度要恒定，不第可21忽页/共高26忽页 低；操作要迅速，在
石蜡切片机
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横向调整旋钮
蜡块竖向调整旋钮 蜡块固定器锁紧扳手 蜡块钳 旋转手轮 刀片固定旋钮
手轮停止旋转手柄 滑动刀座
离合器
切片接收托盘
切片厚薄粗调器 切片厚薄微调器
切片刀倾斜角度调整扳手
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17、脱水Ⅱ
• 放入95%乙醇中洗去多余的红色，然后放入无水乙醇中3～5min。最后用吸水纸吸干多余的乙醇。 第18页/共26页
18、透明
• 切片放入二甲苯-乙醇等量混合液中约5min，然后放入纯二甲苯Ⅰ、Ⅱ中各3～5min。二甲苯应尽量保持 无水，应经常更换，或用纱布包无水硫酸铜放入染色缸内吸收水分。切片如在二甲苯中出现白雾现象，说 明脱水未尽，应退回乙醇中重新脱水，否则切片难以镜检。
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14、漂洗
• 切片再放入自来水流水中使其恢复蓝色。低倍镜检查见细胞核呈蓝色、结构清楚；细胞质或结缔组织纤维 成分无色为标准。然后放入蒸馏水中漂洗一次。
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15、脱水Ⅰ
• 切片入50%乙醇→70%乙醇→80%乙醇中各3～5min。
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16、复染
• 用0.5%伊红乙醇液对比染色2~5min。伊红主要染细胞质，着色浓淡应与苏木精染细胞核的浓淡相配合， 如果细胞核染色较浓，细胞质也应浓染，以获得鲜明的对比。反之，如果细胞核染色较浅，细胞质也应淡 染。可在伊红乙醇液中滴加数滴冰醋酸助染，促使细胞质容易着色，并且经乙醇脱水时不易褪色。
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【实验过程】
石蜡切片Ⅰ
• 取材 • 固定 • 洗涤 • 脱水 • 透明 • 透蜡 • 包埋 • 切片 • 贴片

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二、固定的目的和效果 固定组织的目的是设法得到接近正常生命
状态的细胞结构，有人说“形态学的美是 良好固定产物”，这说明固定的特殊重要 作用。
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1、抑制自溶和腐败： 组织的固定能保持细胞与生活时的形态 相似。因为当机体生命活动停止、或局部器官、组织割离机体 之后，组织细胞的代谢功能即行丧失，新鲜组织如果不经固定 ，任意放置，由于细胞内酶对蛋白质的分解，以及细胞的孳生 等各种因素的作用，则易因细菌繁殖而致组织腐烂。细胞内的 蛋白质分解酶将蛋白质分解为氨基酸后脱离细胞而引起组织的 自溶。
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1. 了使组织切片的结构清楚，取材要及时，组织块必须争取时间
及时固定，组织的固定以愈新鲜愈好。
2. 取材时对大体标本（肉眼标本）绘制图象，进行仔细描述 。包括形状、大小，硬度，颜色，病灶（或可疑病变）部位等 。对所取的组织应定位编号。
3. 切取各组织块时，切勿挤压损伤，对典型或具有教学和 科研价值的肉眼标本，不能因取材而对标本造成人为的“ 病变”。
任何固定液对人体都有损害作用，因此固定液的容器必须密闭，以防挥发损伤 器官和眼睛，忌用手与固定剂直接接触，以免损伤皮肤。
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四、固定剂的选择 理想的固定剂应该具备下列几种性能： 1、渗透性强：固定剂必须能迅速渗入组织，这样组织内各种成分才能
尽快地被固定在原位置，而不致弥散。 2、组织在固定液的作用下，不应发生显著的收缩和膨胀现象
福尔马林主要是由甲醛的聚合形式构成，然而聚合形式的固定效
果低于单体形式构成的10%福尔马林，为阻止在放置一定时间 的重聚作用，一般将溶液的PH值调节至中性或偏碱性。
10. 切取镜检组织块后，可将剩余的组织放入70%洒精 中保存，这样有利于日后再取材切片时的细胞染色 。

❖ 4%多聚甲醛-磷酸盐缓冲液：4g多聚甲醛+100ml磷酸盐缓冲 液（适用于免疫组化学技术）。
不同浓度梯度酒精配制
梯度酒精的作用： 将组织中的水分经过梯度酒精的作用，置换出 来，以达到组织脱水的目的。
配制：例如70%的酒精配制，70ml（100%纯 酒精）+30ml蒸馏水混匀即可。
石蜡切片所需的实验器材
过滤。混合即可使用。
❖ 2.伊红水溶液的配制： ❖ 伊红Y（0.5-1.0g）+100ml蒸馏水，溶解至溶
液中无伊红沉淀，过滤即可使用。
0.5%~1%盐酸酒精溶液的配制
❖ 浓盐酸（0.5~1ml）+70%~90%酒精溶液 100ml，混合均匀即可。
❖ 注意事项：因为浓盐酸对皮肤具有强烈的腐 蚀作用及对呼吸道具有刺激作用，因此在配 置的过程中一定要注意自身的安全。
❖ 注意：熔蜡及浸蜡温度保持在65℃左右。 ❖ 经过浸蜡之后的组织，必须包埋好才能
切片。
第六步：切片
❖ 切片之前必须修整好蜡块，并且固定在木块 之上，再将四周多余的残蜡用刀片削去，否 则不易于切片和展片。
❖ 切片使用旋转切片机时，应固定好木块；调 整好切片刀与蜡块的距离与角度，一般刀的 倾斜度为4-6度；根据切片的厚度不同调节厚
也能被及时的固定。 4：固定后的组织应软硬适宜，便于切片。 5:固定后的组织应容易被染料着色。 ！注意:不同固定剂固定时间不一样。具体问题具体分
析。
第三步：冲洗、脱水、透明。
❖ 冲洗的目的在于弃去组织中过剩的固定剂，以免固 定剂沉淀于组织之中影响切片的质量。
❖ 脱水的过程就是用梯度酒精逐步取代水的过程，组 织脱水一般由70%——80%——90%—— 95%——100%梯度酒精完成。在95%的时间可

植物石蜡切片技术
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46、寓形宇内复几时，曷不委心任去 留。
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47、采菊东篱下，悠然见南山。
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48、啸傲东轩下，聊复得此生。
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49、勤学如春起之苗，不见其增，日 有所长 。
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50、环堵萧然，不蔽风日；短褐穿结 ，箪瓢 屡空， 晏如也 。
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26、要使整个人生都过得舒适、愉快，这是不可能的，因为人类必须具备一种能应付逆境的态度。——卢梭
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只有把抱怨环境的心情，化为上进的力量，才是成功的保证。——罗曼·罗兰
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28、知之者不如好之者，好之者不如乐之者。——孔子
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29、勇猛、大胆和坚定的决心能够抵得上武器的精良。——达·芬奇
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30、意志是一个强壮的盲人，倚靠在明眼的跛子肩上。——叔本华
谢谢！
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