石蜡切片的制作过程(精)

石蜡切片制作流程以石蜡切片制作流程为标题，写一篇文章。

石蜡切片制作是一项常见的实验技术，在生物学、医学和材料科学等领域广泛应用。

石蜡切片可以用于显微镜下的观察和分析，能够提供关于细胞和组织结构的详细信息。

下面将介绍一下石蜡切片的制作流程。

1. 组织固定：首先，需要从感兴趣的样本中取得组织样本，并将其进行固定。

固定是为了保持组织的形态结构和化学成分，常用的固定剂有福尔马林、乙醛等。

固定过程中，需要确保样本完全浸泡在固定液中，通常需要数小时至数天的时间，以确保组织被充分固定。

2. 脱水：固定后的组织样本需要进行脱水处理，以去除其中的水分。

脱水是将样本中的水分逐渐替代为有机溶剂，常用的有乙醇、丙酮等。

通常采用递增浓度的有机溶剂，从低浓度逐渐提高到高浓度。

每个浓度的脱水液中，样本需要浸泡一定的时间，以确保脱水彻底。

3. 渗透：脱水后的组织样本需要进行渗透处理，以使其与石蜡更好地结合。

渗透剂通常为石蜡溶液，可以将样本浸泡在石蜡溶液中，以使其逐渐渗透进入组织内部。

渗透过程中，需要注意控制温度和时间，以确保渗透均匀。

4. 包埋：渗透后的组织样本需要进行包埋处理，即将其嵌入到石蜡中。

首先，将组织样本放置在石蜡模具中，并加入适量的石蜡。

然后，将模具放入石蜡包埋机中，利用加热和真空等处理，使石蜡与组织样本充分结合。

包埋过程中需要严格控制温度和时间，以确保石蜡固化完全。

5. 切片：包埋后的组织样本需要进行切片处理，以获取薄片供观察。

首先，使用切片机将石蜡块切割成薄片。

然后，将薄片置于载玻片上，并加热使其与载玻片结合。

最后，使用刮片等工具将石蜡薄片修整成所需的形状和大小。

6. 然后，对切片进行染色处理，以增强对组织结构的观察。

常用的染色方法有血液学染色、免疫组化染色等。

染色后，可以使用显微镜观察和分析切片中的细胞和组织结构。

总结起来，石蜡切片制作流程包括组织固定、脱水、渗透、包埋、切片和染色等步骤。

每个步骤都需要严格控制条件和时间，以确保制作出高质量的石蜡切片。

石蜡切片的主要步骤石蜡切片是一种常用的制备薄片的技术，广泛应用于生物学、医学和材料科学等领域。

本文将介绍石蜡切片的主要步骤，并详细说明每个步骤的操作方法和注意事项。

1. 样品固定和处理在进行石蜡切片之前，首先需要对待切样品进行固定和处理。

固定样品的方法可以根据实验的需要选择，常用的有乙醛固定、冰醋酸固定和福尔马林固定等。

处理样品的方法也根据实验目的而定，可以包括染色、脱水、透明化等步骤，以便更好地观察和研究样品。

2. 包埋将处理好的样品包埋在石蜡中，以便进行切片。

首先，将样品放入石蜡溶液中，使其充分浸泡。

然后，将石蜡溶液转移到恒温水浴中，使其逐渐固化。

在固化过程中，要确保样品均匀分布在石蜡中，避免出现气泡和空洞。

3. 切片切片是石蜡切片过程中最关键的一步。

首先，将固化的石蜡块从模具中取出，并放置在切片机的夹持装置上。

然后，调整切片机的切片厚度和速度，根据需要选择合适的参数。

接下来，使用切片刀将石蜡块切割成薄片。

在切割过程中，要保持手稳定，避免切片厚度不均匀或出现断层。

4. 切片取片切片切割完成后，需要将切片从切片刀上取下。

首先，使用镊子将切片从切片刀上小心取下，避免损坏或弯曲切片。

然后，将切片放置在预先准备好的载玻片上。

在放置切片时，要注意避免气泡的产生，可以使用专门的工具如细管吸气来帮助排除气泡。

5. 去除石蜡和染色切片取片后，需要将切片上的石蜡去除，并进行染色处理。

首先，将切片放入去石蜡剂中，使其充分浸泡。

然后，将切片转移到浸泡染色剂中，进行染色处理。

在去石蜡和染色过程中，要注意时间控制和温度控制，以确保染色效果和切片质量。

6. 封片和封边染色完成后，需要将切片做成封片，以保护切片并便于保存。

首先，将切片用透明胶片或玻璃片覆盖。

然后，使用封片胶或封片胶带将切片和覆盖物固定在一起。

接下来，将切片的边缘进行封边处理，以避免切片脱落或污染。

7. 干燥和贴标封片完成后，需要将切片进行干燥处理，并进行贴标。

石蜡切片的制作石蜡切片法即用石蜡作为支持剂进行切片的方法。

石蜡切片法是一般组织学、病理学等常规制片方法，它有很多优点，例如，比较省时间，容易操作，可切成极薄的切片，能制作连续切片，组织块可包埋在石蜡中永久保存等。

缺点是只能用于较小的组织块，较大的组织块不易切好容易破碎，组织在脱水透明过程中产生收缩并易变脆，制片时间太长。

一、石蜡切片的制作过程石蜡切片的制作过程主要是：取材→水洗→固定→水洗→脱水→透明→浸蜡→包埋→切片→贴片→染色。

（一）取材及水洗根据实验要求选取材料来源及部位，取要求部位的小块组织成为组织块，组织块的大小以不超过0.5立方厘米为宜。

切去组织块时动作要轻，切忌用力牵引或挟持，以免组织内部发生变化。

由动物身上切取的组织必须是新鲜的，材料越新鲜越好，一般不应超过死后24小时，因此一般情况下，将动物处死后立即取需要的材料。

组织块取下后，先用相应的生理盐水漂洗以洗去血液、污渍以及粘液等。

如果是管状组织则必须把管腔中污物洗净，可用注射器自一端向管腔中注射生理盐水数次，使其管腔冲洗干净，切忌不可用刀或其他器具刮之。

（二）固定材料由动物体取下后应当迅速固定，固定的目的是尽快使固定液渗入组织内部，将组织固定以保持其原有的结构。

不同的组织应选用适当的固定液。

固定液的用量与组织块体积之比一般在20:1，不应使组织块贴于容器壁上。

材料固定完毕后，保存于严密紧塞或加盖的容器里，同时在容器外上标签，应记录固定液的名称，材料的种类，动物品种及开始固定的时间。

固定的时间长短依据材料大小而定。

固定液有许多种，在固定的过程中应该根据需要选取合适的固定液，一般固定液都以新配为好，配好后应贮存在阴凉处，不宜放在日光下，以免引起化学变化而失去固定作用。

有些混合固定液的成份之间会发生氧化还原作用，一定要在使用前才混合，如果混合太早固定时就没有作用了。

（三）水洗固定后的组织块在进行脱水前必须用流水洗去固定液。

，主要目的是洗去固定液的颜色以便后续的染色。

石蜡切片的步骤2021.7.21(1)取材：选取生长良好、有代表性的目标材料，洗净。

用锋利的双面刀片截取材料，动作要迅速。

材料的大小不超过0.5~lcm。

(2)固定：将选取的材料放人固定液中，固定液的体积大约是材料的20倍。

固定剂有faa固定液。

faa既是良好的固定剂，也是保存剂，材料可以在其中长久保存。

而卡诺固定液和纳瓦兴固定液则不能长久保留材料，固定后，使用70%的乙醇尽快清洗2~3次，转人70%乙醇中保存。

若材料含有空气，固定时需要抽气。

(3)水解：紧固不好的材料经各级乙醇水解至氢铵乙醇。

各级乙醇的浓度为：30%、50%、70%、85%、95%和l0o%、l0o%，每次水解40min，材料可以煮沸二甲苯留存在4℃冰箱(4)透明化：。

由于石蜡溶二甲苯而不溶乙醇，因此透明化的促进作用除了并使材料显得透明化外，另一方面就是将材料中的乙醇除去。

使用3/4乙醇+1/4二甲苯,2/4乙醇+2/4二甲苯,1/4乙醇+3/4二甲苯,氢铵二甲苯两次，每次透明化时间为40min，透明化顺利完成后材料可以煮沸氢铵乙醇留存在4℃冰箱。

(5)浸蜡：使石蜡慢慢溶于透明剂中，然后完全取代透明剂进人植物组织中。

一般将透明好的材料换入新的二甲苯中，然后加入等体积的碎蜡，置于65℃左右的温箱中。

随着碎蜡的溶解，不断加入碎蜡使石蜡饱和为止，时间大约l~2天。

(6)上皮组织：泡蜡后，在60℃的温箱中泡蜡后，在60℃的温箱中，换两次已熔化的纯蜡，每次约2h，崭新石蜡然后将材料和石蜡一起倒应先融一次减少密度，凝结后再聚润就可以采用，大纸盒中，用冷却的镊子快速把材料按须要的螺旋和一定的间隔排序整齐，再将大纸盒折叠于冷水中，并使其很快凝结。

(7)修块：将包埋好的材料切割成小块，每个小块包含一个材料。

然后按需要的切面将蜡块切成梯形，切面在梯形的上部，注意上部矩形的对边平行。

梯形的底部用烧热的蜡铲将其固定在木块上。

(8)切片：用手摇切片机将蜡块切开已连续的蜡带。

石蜡切片制备基本步骤一、准备工作（一）洗涤实验所需器皿：（玻璃器皿的清洗）1、用洗衣粉将玻璃器皿表里擦洗干净反复洗刷2、将器皿在自来水下冲洗干净3、将器皿倒扣在铺有吸水纸或纱布的桌子上控干注：一般情况下，经以上步骤后，用蒸馏水洗过1~3次即可烘干备用，如果做特殊染色还需浸泡在酸性清洁液内12~24小时，再经自来水彻底冲洗，再用蒸馏水过洗1~3次烘干备用。

（二）配制：硫酸洗液的配制清洁液（洗液）的配制：成分强酸液次强酸液弱酸液浓硫酸（ml）1000 200 100重铬酸钾（mg）63 120 100蒸馏水（ml）200 200 1000重铬酸钾1200g蒸馏水2000ml将2000ml浓硫酸缓缓倒入上述溶液中，边倒边用木棒轻轻搅拌（三）载玻片与盖玻片的处理1. 将所需载玻片与盖玻片清洗后，放入硫酸重铬酸钾溶液中浸泡24小时2. 流水冲洗，再用蒸馏水冲洗3遍3. 95%~100%酒精浸泡24小时，用绸布擦干备用注：在将载玻片与盖玻片放入清洁液中时，要一片片地投入，使其不致重叠。

二、常用液体的配制（一）缓冲溶液：1．磷酸盐缓冲液A液：0.1mol/L磷酸二氢钠B液：0.1mol/L磷酸氢二钠A液与B液按比例混合调整到所需的PH值（3：7≈PH7.0）2．枸椽酸缓冲溶液A液：0.1mol/L枸椽酸B液：0.1mol/L枸椽酸钠A液与B液按比例混合调整到所需的PH值（6.2：42.8≈PH6.2）（二）固定剂：1．甲醛：10%甲醛福尔马林100ml蒸馏水900ml注：实际甲醛含量只有3.6~4.0%但习惯上都将其视为10%。

2．10％中性福尔马林钙固定液甲醛液10ml蒸馏水90ml加碳酸钙至过饱和(以容器底部碳酸钙沉淀1~2cm厚为适度)充分振荡混合后，放置24小时取上清液使用。

3．4%多聚甲醛：8%多聚甲醛多聚甲醛8g蒸馏水100ml加温至60℃左右，不时搅拌，成为乳白色溶液。

滴加1N NaOH，并不停搅动至液体清明。

石蜡切片的主要制备程序
石蜡切片的主要制备程序可以概括为以下几个步骤：
1. 准备样品：选择需要切片的样品，如组织样本、细胞样品等，并采取相应的固定、处理和染色等预处理步骤，以保证样品的稳定性、可观察性和对比度。

2. 材料准备：准备好所需的石蜡、切片盒、切片刀、载玻片等材料，并进行清洁和消毒处理，以避免污染和交叉感染。

3. 石蜡浸透：将处理好的样品转移到石蜡中进行浸透。

首先将样品置于温度逐渐升高的浸透剂（如正己烷）中，以去除组织内水分和其他溶质，然后置于石蜡中进行浸透。

4. 切片制备：将石蜡浸透的样品固定于切片盒中，将石蜡块剪碎成适当大小，并放置在切片刀的刀脊上。

调整切片机参数（如温度、角度、速度等），并逐个切割出薄片。

5. 切片贴片：将切好的薄片浮于温水中或使用其他方法，如电离子器、热平台等，以使切片展平并附着于载玻片上。

6. 干燥固定：将切片连同载玻片一起进行干燥固定处理，以去除水分并保持切片的形态稳定。

7. 切片染色：根据实验需求，对切片进行适当的染色处理（如组织学染色、免疫组化染色等），以增强样品的可视化效果和区分感兴趣的结构。

8. 封片封装：将切片封装至封片盖玻片上，使用透明化导电胶或其他封片剂固定切片，并尽量排除气泡、保证封片质量。

9. 切片质控：对制备好的切片进行质量控制，使用显微镜观察和评估切片的清晰度、结构完整性、染色效果等。

最后，制备完成的石蜡切片可以用于显微镜观察、组织形态分析、病理学研究等应用。

需要注意的是，在整个制备过程中，应遵循标准实验操作规程、注意安全，以及依据实验要求进行相应的优化和调整。

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1. 组织固定，使用福尔马林或派氏液将组织固定，确保组织结构和成分得到保存。

石蜡切片的具体步骤与做法？石蜡切片法即用石蜡作为支持剂进行切片的方法。

石蜡切片法是一般组织学、病理学等常规制片方法，因此用得最多，它有很多优点：比较省时间，容易操作，可切成极薄的切片（4um以下），能制作连续切片，组织块可包埋在石蜡中永久保存。

缺点是只能用于较小的组织块，较大的组织块不易切好，容易破碎，组织在脱水透明过程中产生收缩并易变脆。

制片时间太长。

石蜡切片的制作过程（一）材料与用具1．材料：鱼皮肤、性腺、肠、肝胰脏等。

2．用具：溶蜡箱、蜡杯、不同熔点的石蜡、酒精灯等。

（二）实验内容与步骤1．取材及固定取动物体上的小块组织成为组织块。

组织块的大小以不超过0.5立方厘米为宜。

切去组织块时动作要轻，切忌用力牵引或挟持，以免组织内部发生变化。

组织块取下后，先用先用0.85％的生理盐水漂洗以戏曲血液与污渍，如果是管状组织则必须把管腔中污物洗净，可用注射器自一端向管腔中注射生理盐水数次，使其管腔冲洗干净，切忌不可用刀或其他器具刮之。

由动物身上切取的组织必须是新鲜的，材料越新鲜越好，一般不应超过死后24小时。

如果是管状器官或是其中有分泌之消化液，则死后应迅速采取，以免组织自溶或上皮剥落。

材料由动物体取下后应当迅速固定，固定的目的是尽快使固定液渗入组织内部，将组织固定，以保持其原有的结构。

不同的组织应选用适当的固定液。

固定液的用量与组织块体积之比一般在20：1。

不应使组织块贴于容器壁上，应记录固定液的名称，材料的种类，动物品种及开始固定的时间。

2．冲洗固定后的组织块在进行脱水前必须用流水洗去固定液。

组织块应用纱布包好，注名，放金属水洗网中用流水冲洗，甲醛固定液固定的组织一般水洗24小时，Bouins固定液固定的组织水洗24小时。

AFA固定液则不需要水洗。

3．脱水和硬化经过固定后的组织在水洗后要进行脱水，脱水的目的将组织内的水分用酒精或其他溶剂置换出来，使组织逐渐变硬，便于油类或其他透明及浸入，为熔化的石蜡浸渗到组织中创造条件。

石蜡切片流程范文石蜡切片是一种常见的组织学技术，用于制备生物组织薄片，使其可以在显微镜下观察和分析。

下面是石蜡切片制备的详细流程。

1.组织固定：首先，需要选择适当的方法将生物组织进行固定，以保持其形状和结构。

最常用的方法是使用福尔马林溶液进行组织固定。

将组织样品置于福尔马林溶液中，通常需要固定24至48小时。

2.去水：固定完毕后，需要将组织中的水分除去，以便进行后续的处理。

通过逐渐提高样品中酒精浓度（例如70％、80％、95％和100％构成的酒精梯度）来逐步去除水分，通常每次浸泡20至30分钟。

3.清洁：去水后，通常需要对样品进行清洁，以去除可能存在的污物和其他杂质。

可以用清洁的醇溶液（例如100％酒精）浸泡样品数分钟，然后用去福尔马林等溶液洗涤样品。

4.浸渍：在石蜡切片制备过程中，需要将组织样品浸泡在石蜡中，以使其渗透并得到支撑。

选择适当的石蜡类型和温度很重要。

通常使用低熔点石蜡（例如58℃石蜡），在60至65℃的恒温水浴中加热并溶解石蜡。

5.渗透：将组织样品从酒精中转移到融化的石蜡中，通常需要经历多个步骤的渗透过程。

首先将样品浸泡在75％酒精中，然后再依次转移到浓缩的酒精溶液中（例如85％、95％和100％）和石蜡中，每次浸泡时间约为1小时。

6.包埋：当样品完成渗透后，需要进行包埋，即将渗透后的组织样品放置在切片模型中，并用石蜡封住。

将切片模型倒置，将溶解的石蜡缓慢倒入模型直到完全覆盖组织样品。

然后将切片模型固定在冷却装置中，等待石蜡冷却和固化。

7.切片：当石蜡块完全固化后，可以将其切割成所需的薄片。

通常使用旋转切片机或手动切片机进行切片。

将切片机的刀片调整到所需厚度（通常为3至5微米），将石蜡块放置在切片机上，并逐渐将刀片与石蜡块接触，以制备薄片。

8.制片：将切好的石蜡薄片静置在温水中，让其自然展开，并将其转移到预涂有胶水的载玻片上。

轻轻将玻片压在石蜡薄片上，以确保两者之间有良好的接触。

然后将载片放置在恒温台上，以便胶水干燥。

石蜡切片步骤及注意事项时间:2009-08-20 08:22来源:生物吧 作者:刘浩 点击: 394次● 取材和固定： 处死动物后立即切取组织块，并快速投入固定液中。

●脱水和透明： ８０％酒精（min ） ９５％酒精 Ⅰ （min ） ９５％酒精 Ⅱ （min ） 无水酒精 Ⅰ （min ） 无水酒精 Ⅱ●取材和固定： 处死动物后立即切取组织块，并快速投入固定液中。

●脱水和透明：８０％酒精（min ）９５％酒精Ⅰ（min ） ９５％酒精Ⅱ（min ） 无水酒精Ⅰ（min ） 无水酒精Ⅱ（min ） 二甲苯Ⅰ、Ⅱ（min ） <2mm45-6045-60 45-60 15-30 2-4mm60-12060-12060-120 30 4-5mm120-240120-240120-24060注意事项：1.脱水应彻底，否则材料不能透明，影响石蜡的浸入，致使难以切片。

2.在低浓度或纯酒精中，每级停留不宜太长，否则易使组织变软，助长材料的解体。

3.在高浓度或纯酒精中，每级停留的时间也不宜太长，否则会使组织变脆，影响切片。

4.如需过夜，应停留在70%酒精中。

5.使用透明剂时，要随时盖紧盖子，以免空气中的水分进入。

●浸蜡和包埋：浸蜡：将透明的组织放入蜡杯（Ⅰ）→蜡杯（Ⅱ）→蜡杯（Ⅲ）。

浸蜡时间视材料大小而定，一般总的浸蜡时间为２－４小时左右。

包埋：1. 组织浸入石蜡后，包埋前将组织移入包埋用石蜡杯内。

从恒温箱取出置于三角架上，其下点燃酒精灯，以保持石蜡的溶解状态。

2.准备好包埋框，将包埋用的镊子在酒精灯上加温（防止镊子粘蜡）后，左手持蜡杯，右手把加温的镊子放在蜡口（直立状）倒蜡时让石蜡沿镊子注入包埋框内。

3.迅速镊取组织块放入包埋框石蜡内，切面朝下放正置入框底并轻轻压平，以保证不再有气泡。

4.待石蜡表面凝固前将标签贴于其上，需注意勿使标签与标本混淆，当蜡块冷至蜡面有透明蜡膜时，浸入冷水中迅速使其冷却，否则蜡内常形成结晶。

山西中学组织学石蜡切片制作过程一、前期准备工作1.2保存组织标本：取得组织标本后，应及时将其放入含有固定剂（如福尔马林）的容器中。

目的是阻止组织中的生物活动，保持组织的完整性，并且避免其腐烂。

1.3固定组织标本：将标本浸泡在福尔马林等固定剂中，时间根据组织的大小和性质而定，一般为24-48小时。

固定后，将固定剂倒掉，并用80%乙醇代替，以除去固定剂残留。

二、石蜡包埋2.1脱水处理：为了去除组织中的水分，使其逐渐转变为可以被石蜡所取代的有机物质，需要使用一系列递增浓度的酒精溶液浸泡标本。

一般步骤为70%酒精浸泡2小时，85%酒精浸泡2小时，95%酒精浸泡1小时，绝对酒精浸泡1小时，每次浸泡30分钟。

2.2渗透处理：将标本放入石蜡浸泡器中，利用负压吸取空气，将石蜡通过负压使其渗透到组织内部。

首先使用浓度为70%的石蜡浸泡1小时，然后逐渐转移到90%、100%的石蜡浸泡器中，每次浸泡时间为30分钟。

2.3包埋处理：取出石蜡浸泡器中的标本，将其放入石蜡中央的切底模具中。

使用石蜡将标本完全覆盖，并且与切底模具紧密贴合。

然后将模具放入冷却器中，待石蜡冷却凝固。

三、切片制作3.1准备切片机：将切片机的刀刃和刀脊擦拭干净，然后固定标本架在切片机上。

调整刀刃角度和切片厚度，一般切片厚度为3-5微米。

3.2开始切片：启动切片机，使刀刃快速向下移动，与固定的石蜡标本接触。

切割完毕后，将得到的石蜡切片放入温水中，使其浮起来。

3.3过片处理：使用刷子将切片从水中捞出，并悬挂在热面层上。

用热力将切片展平，然后放入烘箱中进行烘干。

四、切片染色4.1染料溶液准备：准备需要的染色溶液，常用的染色剂有伊红、苏木精、淡甲酸溶液等。

根据实验需求和组织特性选择合适的染料。

4.2开始染色：将石蜡切片依次放入每种染料溶液中，染色时间根据组织特性和染料浓度来确定。

一般染色时间不宜过长，以免影响染色质量。

4.3染色过程控制：对于希望获得不同颜色的组织结构，可以通过控制染色时间来实现。

石蜡切片流程一、引言石蜡切片是生物学、医学和材料科学等领域中常用的一种实验技术，用于制备样品的薄片，以便进行显微观察和分析。

本文将介绍石蜡切片的流程及其关键步骤。

二、材料准备1. 石蜡：选择适合的石蜡材料，常见的有硬质石蜡和软质石蜡。

2. 样品：根据需要选择合适的样品，可以是生物组织、细胞、材料等。

3. 切片刀：选择切割尖锐且锋利的切片刀，常见的有玻璃刀片和钢刀片。

4. 切片机：使用专业的切片机设备，保证切片的精准度。

三、石蜡切片流程1. 固定样品：将样品进行固定处理，常用的方法有福尔马林固定、乙醛固定、冷冻固定等。

固定的目的是保持样品的形态结构和生物活性。

2. 除去水分：将固定后的样品通过醇溶液逐渐去除水分，一般采用浓度逐渐降低的醇溶液，如75%乙醇、50%乙醇、30%乙醇等。

3. 渗透石蜡：将去水后的样品用石蜡进行渗透处理。

首先将样品置于较低融点的石蜡中，然后逐渐转移到较高融点的石蜡中，这样可以保证样品逐渐与石蜡融合。

4. 包埋：将渗透后的样品放入石蜡模具中，待石蜡凝固后，取出石蜡块。

5. 切片：使用切片机将石蜡块切割成薄片，切片的厚度根据需要进行调整，一般为4-10微米。

6. 切片处理：将切好的薄片浸泡在温水中，使其展平，并将薄片转移到载玻片上。

7. 固定薄片：将载玻片放入烘箱中，以适当的温度和时间使薄片与载玻片充分固定。

四、注意事项1. 操作环境：保持实验室的清洁和安静，避免灰尘和噪音对实验结果的影响。

2. 刀片处理：在使用切片刀前，先将其清洗干净并消毒，以防止样品污染。

3. 温度控制：石蜡切片的各个步骤中，温度的控制非常重要，可以根据不同的样品选择适当的温度。

4. 切片厚度：不同的样品需要不同的切片厚度，要根据实验需要进行调整。

5. 质量控制：在每个步骤结束后，要对样品的质量进行严格检查，确保切片的质量。

6. 保存条件：切好的石蜡切片应妥善保存，防止受潮或受到外界环境的污染。

五、总结石蜡切片是一种常用的实验技术，通过固定、去水、渗透石蜡、切片等步骤，可以制备出精细的样品薄片，用于显微观察和分析。

石蜡切片的制作过程（一）花药切片制片法1．取材2．固定：FAA液中固定24h，并保存在其中。

3．脱水：经70％乙醇、85%乙醇，每级3~4h，含1%伊红的95％乙醇中3~4h（可以过夜），无水乙醇2次，每次1~2h。

4．透明、加蜡：5级氯仿透明，每级3~4h，纯氯仿2次，每次2h，加碎蜡，然后置36℃温箱中1~2d5．浸渗、包埋：50%、70%蜡各3h，再经纯蜡A、纯蜡B、纯蜡C三杯，每杯1h，包埋。

6．修蜡块、切片：粘蜡块时组织块直立于台木上，并用单面刀片切除先端石蜡，浸水软化后放在切片机上坐横切片，切片厚12μm。

7．展片、粘片、烘片：蜡片先镜检，每张载玻片上放2个蜡片，展片后将材料平放在摊片盘上，放置36℃温箱中烘干。

8．脱蜡、透明：二甲苯脱蜡、透明各1次。

9．染色（番红-固绿双重染色）：在已脱蜡的材料上滴注无水乙醇、95%乙醇、85%乙醇、70%乙醇、50%乙醇、30%乙醇、蒸馏水各4~5s，苯胺番红染色5~10min，用蒸馏水洗去浮色。

10．脱水、透明：各级乙醇脱水（30%乙醇、50%乙醇、70%乙醇、85%乙醇、95%乙醇），苯胺固绿复染30~40s，再经95%乙醇，无水乙醇，1/2无水乙醇+1/2二甲苯、二甲苯2次，各约4~5s，最后置二甲苯缸中。

11．封片、烘片：加拿大树胶封片。

封片后将材料平放在摊片盘上，放置36℃左右的温箱内烤数天即可烤干。

最后，将干燥好的切片上的浮色擦净，并在玻片的左端粘上标签，注明组织切片的名称、染色方法、固定方法、年月日。

制片日程（二）花芽纵切片制片法1．取材2．固定：FAA液中固定24h，并保存在其中。

3．整染：经70％乙醇、50%乙醇各2~4h，转入爱氏苏木精稀释液（爱氏苏木精原液1份，加入50%乙醇及乙醇各半的混合液1份）中整染2~3d。

4．水洗、反蓝：蒸馏水浸洗，勤换水至无浮色渗出，再转入自来水中，换1~2次水，至样品由紫色变深蓝色为止，共需时约1d。

山西中学组织学石蜡切片制作过程山西中学组织学石蜡切片制作过程石蜡切片制作是生物学实验中常用的技术手段之一，它可以将生物样品制作成薄片，以便进行显微镜观察和研究。

下面将详细介绍山西中学组织学石蜡切片的制作过程。

一、收集和处理样品1. 样品的选择：在进行石蜡切片制作之前，首先需要选择合适的组织样品。

山西中学通常会选择动植物的组织器官，如根、茎、叶、肌肉等。

2. 样品的固定：在采集到样品后，需要对其进行固定处理，以保持其原有的形态结构和细胞组织。

常用的固定剂有福尔马林、乙醛等。

3. 样品的脱水：固定后的样品需要将其中的水分逐渐去除，以便后续的浸渍和包埋。

脱水过程通常采用乙醇梯度浓度法，逐渐提高乙醇浓度，如70%、80%、90%和100%。

4. 样品的浸渍：脱水后的样品需要进行浸渍处理，以使其充分吸收石蜡。

浸渍一般采用二氯甲烷和石蜡的混合物，常用比例为1:1。

二、制作石蜡块1. 准备模具：将石蜡切片制作时需要的模具准备好，一般为方形或圆形的塑料模具。

2. 熔化石蜡：将石蜡块放入石蜡熔化器中，加热至石蜡完全熔化。

3. 倒入模具：将熔化的石蜡倒入模具中，待石蜡凝固成块后取出。

三、制作切片1. 切片机的准备：将石蜡块固定在切片机的切片台上，并调整切片机的切片厚度。

2. 切片：将切片刀沿着石蜡块的平面切割，得到薄片。

3. 转移切片：用切片刀将切下的薄片转移到水中，静置片刻，使其展开。

四、薄片处理1. 涂片：将展开的切片用刷子轻轻涂上一层胶水，以固定切片。

2. 干燥：将涂上胶水的切片放置在通风处自然晾干，使胶水完全干燥。

3. 上浆：将干燥的切片放入浆液中，使其充分吸收浆液。

4. 固化：将上浆后的切片放置在烘箱中加热，使浆液固化。

五、染色和封片1. 染色：将固化后的切片放入染色液中浸泡，使其染色。

2. 清洗：将染色后的切片用水冲洗，去除多余染色剂。

3. 脱水：将清洗后的切片依次放入乙醇梯度浓度的溶液中，使其脱水。

4. 封片：将脱水后的切片放入透明胶片中，再用热源加热胶片，使其封住切片。

石蜡切片的详细制作过程石蜡切片的制作过程石蜡切片的制作过程主要包括：取材，固定，脱水，透明，透蜡，包埋，切片，贴片，染色，透明，封藏等步骤。

1．取材材料的好坏直接影响到切片的质量，无论取哪一种动植物材料，以下几点是必须注意的。

（1）植物材料选择时须尽可能不损伤植物体或所需要的部分；动物材料取用时常对动物施以麻醉，常用的麻醉剂有氯仿和乙醚，或将动物杀死后迅速取出所需要的组织。

（2）取材必须新鲜，这一点对于从事细胞生物学研究尤为重要，应该尽可能割取生活着的组织块，并随即投入固定液。

（3）切取材料时刀要锐利，避免因挤压细胞使其受到损伤。

（4）切取的材料应该小而薄，便于固定剂迅速渗入内部。

一般厚度不超过2mm，大小不超过5×5mm2。

2．固定组织和细胞离开机体后，在一定时间内仍然延续着生命活动，会引起病理变化直至归于死亡。

为了使标本能反映它生前的正常状态，必须尽早地用某些化学药品迅速地杀死组织和细胞，阻抑上述变化，并将结构成分转化为不溶性物质，防止某些结构的溶化和消失。

这种处理就是固定。

除了上述作用外，固定剂会使组织适当硬化以便于随后的处理，还会改变细胞内部的折射系数并使某些部分易于染色。

固定剂的作用对象主要是蛋白质，至于其他成分如脂肪和糖，在一般制作时不加考虑，如要观察这些物质，可用特殊的方法将其固定下来。

固定剂的作用表现在对材料体积的改变、硬化的程度、穿透的速度以及对染色的影响等方面。

这些作用的好坏、大小，都依所固定的材料性质而定，同样一种固定液对某一材料来说是良好的，但对另外一些组织可能就不很适用。

良好的固定剂必须具备的特征是：穿透组织的速度快。

，能将细胞中的内含物凝固成不溶解物质，不使组织膨胀或收缩以保持原形，硬化组织的程度适中，增加细胞内含物的折光度，增加媒染和染色能力，具有保存剂作用。

固定剂有简单固定剂和混合固定剂的划分。

简单固定剂即单一的固定剂，常用的有乙醇、甲醛、冰醋酸、升汞、苦味酸、铬酸、重铬酸钾和锇酸。

石蜡切片的制作步骤（1）修块：剖检时摘取的睾丸和附睾组织样品在2.5%戊二醛-多聚甲醛混合固定液中固定24~48h后，用清水或低浓度的酒精将组织上的固定液清洗掉，用刀片将其修成3~5mm 厚，置于包埋框中。

（2）脱水、透明：将含有组织块的包埋框经梯度浓度逐升的酒精溶液（50%酒精→70%酒精→80%酒精→90%酒精→95%酒精）中进行脱水1h，然后顺次转入无水乙醇I、无水乙醇II和酒精二甲苯混合液中放置30min，再次分别置入二甲苯I和二甲苯II中进行透明5-10min左右。

（3）浸蜡、包埋：组织块充分透明后，将包埋框依次经过3中不同熔点的石蜡液（56~58℃石蜡I→56~58℃石蜡II→58~60℃石蜡III）中浸蜡1h，然后将组织块从包埋框中取出，放入自制的长方形纸盒中，灌入58~60℃石蜡，待其自然冷却后，修成适当大小的蜡块后准备切片。

（4）切片、展片：将涂有粘片剂的载玻片摆放在展片台上，磨面朝上，滴上适量清水；将蜡块置于切片机上切成4um厚的连续切片，将其放在清水上，高温将蜡膜展平，常温保存，以备染色。

HE染色步骤（1）石蜡切片依次入二甲苯I和二甲苯II中脱蜡10min；再经酒精二甲苯混合液及梯度浓度递减的酒精溶液（无水乙醇→95%酒精→90%酒精→80%酒精→70%酒精→50%酒精）至蒸馏水中；（2）Ehrlich苏木精染色10～15 min，蒸馏水洗；（3）0.5%盐酸酒精分色（5～10 s），以镜检为准；（4）自来水冲洗蓝化后，依次转入70%和80%酒精中；（5）伊红染色10~15s；（6）依次经95%酒精、无水乙醇I、无水乙醇II、酒精二甲苯混合液、二甲苯I、二甲苯II进行脱水；（7）中性树胶封片。

染色结果：胞核呈蓝紫色，胞质呈粉红色。

在六月期间我们学习了石蜡切片的制作，以下是制作的过程：一、切片前的准备：1、恒温水浴锅首先预热至35℃—40℃。

2、蜡块整修，将蜡块组织面的石蜡用刀修去，使组织全部暴露出切面并修平，以减少切片刀的磨损。

将组织块左右两侧的石蜡在不损伤组织及影响诊断的原则上，全部切除；否则切片容易皱褶。

组织块上下边缘的石蜡视组织情况修齐修平；石蜡不须留得过多，应尽量少留，以保持组织间距的最小限度。

这样切下的切片既呈带状，也不弯曲。

片距小，在贴片时就可相应多贴片，有利于检查诊断。

修切蜡块时只能一点一点地切掉蜡边，要是大片修切易使蜡块断裂露出组织；遇此情况应返入新蜡再次包埋。

3．载玻片应事先洗涤干净，无油腻和不透明现象，应将载玻片浸入酸缸内12小时后流水冲洗，再烤干备用。

根据切片需要张数，每片涂上一层极薄的蛋白甘油，插于载片板（或载片架）上备用。

蛋白甘油的配制：取新鲜鸡蛋1份加甘油1份再加适量麝香草酚搅匀。

此法主要是防止脱片，实际上一张很清洁的载玻片不涂蛋白甘油也不会脱片。

4、将锋利的刀片装入切片刀夹钳内，调整角度和位置后随即紧固，检查切片刀的倾斜度是否正确，倾角过大、则切片上卷；倾角过小则切片皱起，以20°-30°为佳。

5、备用小型毛笔、小型无钩镊子、铅笔。

二、切片的步骤：1、将蜡块固定于切片机头上的夹座内，调整到稍离开切片能够切到的位置上，注意蜡块组织切面与切片刀口要垂直平行。

2、再调整蜡块组织切面恰好与刀口接触，旋紧刀架，固定好机头。

3、根据需要调整切片厚度。

4、摇动切片机手轮先进行修整切片，直到切出完整的最大组织切面后，再进行切制。

5、实践中可用右手转动切片机手轮，左手用毛笔托起蜡片，协调地进行切片操作。

6、切下的切片带，一端用镊子轻轻拉起，应尽可能将切片带拉直展开，用毛笔将切片带从刀口向上挑起，拉下切片带，然后轻拖铺于恒温水面上。

三、贴片：1、将单张或数张切片，用镊子夹住蜡片的一边并提起，铺于恒温水中，（光亮的一面朝下）立即用毛笔轻轻拉展以切片无皱褶为最好。

石蜡切片和HE染色详细步骤
一、石蜡切片制备
1、收集样品：根据样品的性质和形状，选择适当的采样工具和采样
容器，将样品采集到容品中并制冷处理，以防止样品发生腐败。

2、石蜡制备：在制作石蜡切片之前应先量出所需的石蜡，并将其放
入容器中，然后加入酒精等助剂加热溶解，当石蜡完全溶解熔融后，用桶
或温度控制的水浴加热，随着温度的升高，搅拌均匀，使石蜡液完全熔化，熔化后即可用于制作石蜡切片。

3、制备切片：将样品置于熔融石蜡中，用切片机将样品切成指定的
厚度，以便用于染色；将薄片分类清洗，用干净的棉棒涂上几滴石蜡，使
其连接牢固，然后放在凉爽的干燥地方。

二、HE染色
1、润湿：将样品片放入石蜡解决液，轻轻摩擦，使其充分润湿。

2、酒精消切：将石蜡解决液滴入被润湿的样品片，轻轻摇晃，完成
样品的酒精消切。

3、甲醛处理：将样品片放入含醛的苯乙酮溶液中，经摇晃后再放入95%乙醇中搅拌，使样品片可以完全吸收醛，促使样品受醛处理，使样品
片充分脱脂，加快染色效果和特殊部位的显示。

4、HE染色：将脱脂的样品片放入无菌玻璃容器内。

石蜡切片操作步骤植物组织石蜡切片的制作方法：（1）固定：用50%或70% FAA固定液（50%或70%酒精：甲醛：冰乙酸=16:1:1; 幼嫩材料用50 % FAA；老的材料用70%的FAA），置于4℃固定24 h。

（2）脱水：将固定液倒去，加入50%乙醇，室温静置30 min ；重复一次，室温静置20 min。

换成1%番红溶液(用70%酒精配制)，室温脱水染色过夜。

次日继续脱水，酒精浓度梯度和时间依次为：80% 乙醇1h、95% 乙醇1h、无水乙醇1h、40min（2次）。

（3）透明：1/2无水乙醇+二甲苯混合液1h，纯二甲苯1h、40 min（2次）。

最后加入少量二甲苯（浸没材料即可）和碎蜡，放入38℃温箱中过夜。

（4）浸蜡：将温箱温度调至56℃，计时1h；换成二级蜡1h；三级蜡（3次）各1h、1h、40min（从温度上升到56℃开始计时）。

（5）包埋：将带有材料的液体蜡倒入叠好的纸槽中，迅速放入冰水中使蜡凝固，防止气泡产生，以及凝蜡不匀。

（6）切片：修整蜡块，用Lica RM2126切片机切片，厚度5-10 μm。

（7）贴片: 在载玻片上涂少许粘片剂，将切好的蜡带放入温水中，捞至载玻片上，最后置于37℃恒温箱过夜烤片。

（8）脱蜡及染色：①番红-固绿对染ⅰ脱蜡：二甲苯60min，二甲苯5 min、1/2无水乙醇+1/2二甲苯混合液5 min、无水乙醇5 min、无水乙醇5 min、95%乙醇5 min、80%乙醇5 min、1%番红室温过夜。

ⅱ染色：80%乙醇5 min，1%固绿（用95%酒精配制）迅速蘸一下，大约10s，直接放到95%乙醇5min 、无水乙醇5min、无水乙醇5min、1/2无水乙醇+1/2二甲苯混合液5min、二甲苯5 min（2次）。

②甲苯胺蓝染色ⅰ脱蜡：二甲苯60 min、二甲苯5 min、1/2无水乙醇+1/2二甲苯混合液5 min、无水乙醇5 min、无水乙醇5 min、95%乙醇5 min、80%乙醇5 min、70%乙醇5 min、50%乙醇5 min 、30%乙醇5 min、蒸馏水5 min。