下载文档原格式
1ELISA kit for quantitative detection of aflatoxin B1一、概要黄曲霉毒素主要是两种霉菌黄曲霉及 A.paraticus的二级代谢物。
这些霉菌在湿热的环境和耕作土地上污染的植物产生。
黄曲霉毒素B1（AFB1）属于自然最强烈的致癌物质，它一般产生于花生、玉米、巴西坚果和棉花种子中。
本试剂盒利用酶联免疫吸附测定法（ELISA）对各种谷物、饲料及其他食品中的AFB1含量进行快速、定量检测。
二、原理本试剂盒是利用直接竞争酶联免疫吸附微孔模式进行检测，灵敏度可达0.1 µg/kg（ppb）。
样品或标准品中游离的黄曲霉毒素B1与酶标抗原竞争结合包被在微孔中的抗体上的结合位点，经洗板洗去多余的酶标抗原与黄曲霉毒素B1后加入显色剂与反应底物，其与酶标物作用而成蓝色，加入反应停止液后颜色由蓝色转变为黄色，黄色越深则表明黄曲霉毒素B1越少，用酶标仪在450 nm处测定光吸收值可准确定量检测样品中的黄曲霉毒素B1的污染水平。
三、试剂盒构成1、反应板支架……………………………………………………………………………1块2 黄曲霉毒素B1抗体包被反应板……………………………………………………96孔3、黄曲霉毒素B1标准品溶液（0 ppb，0.1 ppb，0.25 ppb，0.5 ppb，1 ppb，2 ppb）…1套4、酶标记物…………………………………………………………………4瓶5、酶稀释液……………………………………………………………………1瓶6、样品稀释液………………………………………………………………1瓶7、显色剂溶液………………………………………………………………………1瓶8、反应底物溶液………………………………………………………………1瓶9、终止液………………………………………………………………………………1瓶10、浓缩洗涤液（20 X）………………………………………………………1瓶四、注意事项1、试剂盒请置放于2-8℃条件下保存，使用过程中不要让微孔干燥，使用后立即将试剂放回至2-8℃条件下冷藏。
植物油中黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2测定方法1.适用范围本方法适用于出口粮食、植物油中黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2的定量测定。
2.原理将提取、浓缩后的样液与标准黄曲霉毒素同时经连续薄层层析分离后，对标准点和样液点进行荧光强度的扫描测定。
3.主要试剂和仪器3.1.主要试剂三氯甲烷；甲醇；正已烷或石油醚：沸程30～60℃；苯；乙腈；无水乙醚或乙醚：经无水硫酸钠脱水；丙酮；异丙醇；以上试剂均为分析纯，除乙腈外均需重蒸；苯-乙腈混合液：98+2；甲醇-水：55+45。
展开剂：丙酮-三氯甲烷混合液：1+9；丙酮-三氯甲烷混合液：7+93；异丙酮-丙酮-三氯甲烷：5+10+85；苯-乙醇-水：46+35+19；硅胶G：薄层色谱用；三氟乙酸；无水硫酸钠；黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2标准溶液：10 μg／ml黄曲霉毒素单一标准溶液：精密称取黄曲霉毒素B1、G1 1～1.2mg，黄曲霉毒素B2、G2 0.5～0.6mg，先加入2ml乙腈溶解后，再用苯定容至100ml，避光保存于低温冰箱内；标准溶液浓度及纯度的测定参照GB 5009.22－85《食品中黄曲霉毒素B1的测定方法》中2.14条；黄曲霉毒素混合标准使用液：用标定过的黄曲霉毒素标准溶液，配制成B1、G1浓度为0.2μg／ml，B2、G2浓度为0.1μg／ml的混合标准溶液或单一标准溶液。
去毒液：次氯酸钠溶液：取100g漂白粉，加入500ml水，搅拌均匀，另将80g工业用碳酸钠（Na2CO3·10H2O）溶于500ml温水中，再将两液混合、搅拌，澄清后过滤。
此滤液含次氯酸钠浓度为2.5％。
若用漂粉精制备，则碳酸钠的量可以加倍，所得溶液的浓度约为5％。
污染的玻璃仪器用1％次氯酸钠浸泡半天或用5％次氯酸钠溶液浸泡片刻后，即可达到去毒效果；10％重铬酸钾-硫酸洗液：浸泡被污染玻璃仪器片刻即可去毒。
3.2.仪器薄层扫描仪：备有荧光检测器；薄层凝涂布器；连续薄层层析展开仪；展开槽；展开缸；紫外光灯：100～125W，带有波长365nm滤光片；玻璃板5 cm×20cm、10cm×20cm、20cm×20cm；全玻璃浓缩器；电动振荡器；小型粉碎机；微量注射器。
黄曲霉毒素B1快速检测卡(胶体金法)说明书【产品名称】产品名称：黄曲霉毒素B1快速检测卡(胶体金法)英文名称：Aflatoxin B1 Rapid Test Card (Colloidal Gold)【产品简介】黄曲霉毒素是一类丝状真菌（如黄曲霉和寄生曲霉）产生的有毒代谢产物，黄曲霉毒素B1是已知的化学物质中致癌性最强的一种，其毒性作用主要是对肝脏的损害。
黄曲霉毒素B1污染的食物主要是玉米、稻谷、小麦、花生、花生油等粮油食品，且以南方高温、高湿地区污染最为严重。
本产品用于快速检测玉米油、花生油、葵花籽油等食用油中黄曲霉毒素B1残留，检测过程只需要20分钟，适用于家庭、超市、食堂、食品企业及检测机构的快速筛查。
【包装规格】5次/盒。
【产品组成】黄曲霉毒素B1快速检测卡（5条）；1mL刻度吸管（10支）；提取瓶（内含黄曲霉毒素B1提取液2mL，5瓶）。
【检测原理】本产品采用了竞争抑制免疫层析的原理。
【检出限】本产品检测方法对玉米油、花生油黄曲霉毒素B1检出限量为20μg/kg，对其他食用油黄曲霉毒素B1检出限量为10μg/kg。
根据《食品真菌毒素限量GB2761-2011》规定，玉米油、花生油黄曲霉毒素B1检出限量为20μg/kg，其他食用油黄曲霉毒素B1检出限量为10μg/kg。
【使用方法】1、玉米油或花生油检测：用1mL刻度吸管向提取瓶中加入油样2mL（用吸管移加2次）；其他食用油检测：用1mL刻度吸管向提取瓶中加入油样4mL（用吸管移加4次）。
2、盖紧提取瓶盖，用手上下振荡30-60秒，静置10分钟，待样品分成上下两层。
3、从包装袋中取出检测卡，平放在桌面，用另一只新吸管从提取瓶中吸取少量下层液体，垂直滴加3滴（约100μL）于检测卡加样孔（S孔）中。
4、室温环境计时约10分钟，根据示意图判定结果。
【结果判定】阴性（-）：T线显色比C线深或一样深，均表示样品中黄曲霉毒素B1浓度低于检出限。
阳性（+）：T线显色比C线明显变浅或T线不显色，表示样品中黄曲霉毒素B1浓度等于或高于检出限。
中药材中黄曲霉毒素的污染及快速定量检测方案--8min准确定量一、黄曲霉毒素概述黄曲霉毒素是一类真菌(黄曲霉和寄生曲霉)的有毒的代谢产物，具有很强的致癌性，它们主要存在于药材、谷物、坚果、棉籽以及动物饲料相关的产品中。
毒性远远高于氰化物、砷化物和有机农药的毒性，且以B1毒性最大。
当人摄入量大时，会发生急性中毒，急性肝炎、出血性坏死、肝细胞脂肪变性和胆管增生。
当微量持续摄入时，会造成慢性中毒，生长障碍，引起纤维性病变，致使纤维组织增生。
二、黄曲霉毒素检测的中药材品种及其国家限量标准2010版《中国药典》规定黄曲霉素检查的5种药材：酸枣仁、僵蚕、胖大海、陈皮、桃仁。
现行的2015版《中国药典》规定黄曲霉毒素检查的19种中药材，相对2010版《中国药典》增加了14个品种：(1)根及根茎类：远志；(2)果实种子类：大枣、肉豆蔻、决明子、麦芽、陈皮、使君子、柏子仁、胖大海、莲子、桃仁、槟榔、酸枣仁、薏苡仁；(3)动物类：水蛭、地龙、全蝎、蜈蚣、僵蚕。
黄曲霉毒素类别限量标准（μg/kg）黄曲霉毒素B1 ≤5黄曲霉毒素B1、黄曲霉毒素B2、黄曲霉毒素G1及≤10黄曲霉毒素G2总量引自：现行的2015版《中国药典》《中国药典》对黄曲霉毒素检测的要求，既突出了中药整体质量控制的特点，又增加和完善了安全性控制方面的要求。
三、上海飞测生物中药材中黄曲霉毒素B1快速定量检测方案--8min准确定量检测原理：4.1.黄曲霉毒素B1荧光定量快速检测系统性能◆检测灵敏度：0.5μg/kg；◆定量线性范围：1.0μg/kg - 75.0μg/kg；◆样品前处理时间：7min；◆检测时间：8min；◆准确度：回收率为80%-125%；◆特异性：在1000μg/kg浓度水平下与其它真菌毒素无交叉反应；4.2.样品前处理过程1、粉碎（中药材样品粉碎处理、称量）；2、振荡提取（5min）；3、离心（2min）；4.3.检测操作过程1、稀释；2、加样反应（8min）；3、读数，打印检测报告；4.4.结果判读和输出采用便携式黄曲霉毒素B1检测仪进行读数，使得检测结果更加准确、客观，避免人为的误判。
中国果菜质量控制黄曲霉毒素B1（AFB1）是二氢呋喃氧杂萘邻酮衍生物，含有一个双呋喃环和一个氧杂萘邻酮，是已知的化学物质中致癌性最强的一种。
AFB1污染的物质包括食品中的花生、玉米、稻谷、小麦、花生油等农产品及其加工产品；且以南方高温、高湿地区受污染最为严重。
黄曲霉毒素无臭、无味、无色，在饲料中及其稳定，对家禽、家畜的健康威胁极大，作为饲料强制性卫生监控指标，目前有半定量薄层色谱法[1]、免疫亲和柱净化———高效液相色谱法[2]、免疫亲和荧光光度法[3]、酶联免疫吸附法[4]。
高效液相色谱法虽然灵敏度高，但是样品前处理繁琐，操作复杂；薄层色谱法虽然简便，但是灵敏度差，因此研究能够准确、快速检测饲料中AFB1的检测方法是十分必要且具有现实意义的。
1实验部分1.1材料与试剂甲酸，优级纯；乙腈，色谱纯；超纯水；饲料中黄曲霉毒素B1的检测刘超景赞（乐山市食品药品检验检测中心，四川乐山614000）摘要:采用高效液相色谱串联质谱法对饲料中黄曲霉毒素B1进行检测。
建立了以Inertsil ODS-3为液相色谱柱，以0.1%甲酸水、乙腈（0.1%甲酸）为流动相，质谱使用电喷雾离子源，正离子扫描，以313.0/285.0为定量离子对的LC-MS/MS 检测方法。
结果表明：该方法所测得的黄曲霉毒素B1在0~100.0ng/mL 内具有良好线性，检出限为2.8μg/kg ，加标回收率在93.3%~98.3%。
该方法适合饲料中黄曲霉毒素B1的分析检测。
与传统的薄层色谱、高效液相色谱法相比较，该方法具有分析速度快、操作方便、重现性好、灵敏度高等特点。
关键词:饲料；黄曲霉毒素B1；液质联用中图分类号:TS207文献标志码:A文章编号:1008-1038(2015)12-0025-03Detection of AFB1in FeedLIU ChaoJING Zan(Leshan Food and Drug Inspection and Testing Center,LeShan 614000,China)Abstract:We tested aflatoxin B1in feed with LC -MS/MS method.A method was developed with novel HPLC columnInertsil ODS -3,Mobile phase was 0.1%methanoic acid water,0.1%methanoic acid acetonitrile,combined with MS,which used positive ion scanning,and quantification ion pair was 313.0/285.0.A good linear in 0~100.0ng/mL.detection limit was 2.8μg/kg.Adding standard recovery was 93.3%~98.3%.This method has advantages of being fast,easy,reproducible and relatively sensitive compared with TLC and HPLC.Key words:Feed;AFB1;LC-MS/MS收稿日期:2015-06-26作者简介:刘超（1984—），男，助理工程师，研究方向为食品安全25. All Rights Reserved.中国果菜质量控制AFB1标准品（2μg/mL，农业部环境保护科研所）。
附件2食用油中黄曲霉毒素B1的快速检测胶体金免疫层析法（KJ201708）1范围本方法规定了食用油中黄曲霉毒素B1的胶体金免疫层析快速检测方法。
本方法适用于花生油、玉米油、大豆油及其他植物油脂等食用油中黄曲霉毒素B1的快速测定。
2原理本方法采用竞争抑制免疫层析原理。
样品中的黄曲霉毒素B1经提取后与胶体金标记的特异性抗体结合，抑制抗体和试纸条或检测卡中检测线（T线）上抗原的结合，从而导致检测线颜色深浅的变化。
通过检测线与控制线（C线）颜色深浅比较，对样品中黄曲霉毒素B1进行定性判定。
3试剂和材料除另有规定外，本方法所用试剂均为分析纯，水为GB/T 6682规定的二级水。
3.1试剂3.1.1甲醇。
3.1.2十二水磷酸氢二钠。
3.1.3二水磷酸二氢钠。
3.1.4氯化钠。
3.1.5吐温-20。
3.1.6提取液：30%甲醇水或胶体金免疫层析检测试剂盒专用提取液或根据产品使用说明书配置。
—1—3.1.7稀释液：称取2.90 g十二水磷酸氢二钠（3.1.2），0.296 g二水磷酸二氢钠（3.1.3），4.50g 氯化钠（3.1.4），溶解于400 mL水中，加入0.5 mL吐温-20（3.1.5），用水稀释至500mL，混匀即成稀释液；或使用胶体金免疫层析检测试剂盒专用稀释液。
3.2参考物质黄曲霉毒素B1参考物质的中文名称、英文名称、CAS登录号、分子式、相对分子质量见表1，纯度均≥90%。
表1 黄曲霉毒素B1参考物质中文名称、英文名称、CAS登录号、分子式、相对分子质量注：或等同可溯源物质。
3.3标准溶液的配制3.3.1 黄曲霉毒素B1标准储备液（0.1 mg/mL）：精密称取适量黄曲霉毒素B1标准品（3.2），置于10 mL容量瓶中，用甲醇（3.1.1）溶解并稀释至刻度，摇匀，制成浓度为0.1 mg/mL的黄曲霉毒素B1标准储备液；或可直接购买黄曲霉毒素B1标准储备液。
-20℃避光保存备用，有效期3个月。
黄曲霉毒素B 检测卡说明书1. 产品介绍该检测卡是一种用于检测食品中黄曲霉毒素B（简称“黄曲霉素B”）含量的便捷、快速的测试工具。
黄曲霉素B是一种常见的食品毒素，长期摄入可能对人体健康造成危害。
使用该检测卡能够准确、迅速地检测食品中的黄曲霉素B含量，从而保障消费者的食品安全。
2. 产品特点（1）便捷快速：该检测卡采用便携式设计，操作简单，不需要专业设备，30分钟内即可得到检测结果。
（2）高灵敏度：该检测卡具有高灵敏度，能够准确检测低至10ppb（微克/升）的黄曲霉素B含量。
（3）适用广泛：该检测卡适用于各类食品，如谷物、坚果、肉制品等。
（4）可靠准确：该检测卡经过严格的质量控制，具有较高的准确性和可靠性。
3. 使用说明（1）样品处理：将待测试的样品按照说明书的要求进行处理，提取出样品中的黄曲霉素B。
（2）装置准备：在平整的工作台上，将黄曲霉素B检测卡取出，待温度适应后，打开包装袋。
（3）取样：使用专用吸样管吸取待测试样品提取物，滴入检测卡指定位置。
（4）加液：使用专用注射器，向指示位置加入3滴洗涤缓冲液。
（5）等待反应：将检测卡平放，避免震动，等待约5分钟，让反应发生。
（6）解读结果：观察测试线上是否出现红色或粉色条纹。
如果出现了测试线，表示样品中含有黄曲霉素B，颜色深浅与含量成正比。
若没有出现测试线，表示样品中黄曲霉素B含量低于检测限。
4. 注意事项（1）请勿使用已经过期的检测卡，以免影响测试结果。
（2）使用前请仔细阅读产品说明书，并严格按照要求进行操作。
（3）使用过程中注意个人卫生，避免污染样品。
（4）请将检测卡妥善保管，避免受潮、受热等情况。
（5）本检测卡仅用于食品中黄曲霉素B的初步筛查，如需精确测量，请使用专业仪器。
5. 注意事项（1）本产品仅适用于黄曲霉素B的检测，不适用于其他毒素的检测。
（2）本产品仅供科研和食品安全监测使用，不得用于其他非法用途。
（3）本产品的开发商、制造商对于由于使用不当、操作失误等原因造成的检测结果不准确或任何直接或间接损失概不负责。
黄曲霉毒素B1 ELISA快速检测试剂盒【产品概述】黄曲霉毒素是一类真菌（如黄曲霉和寄生曲霉）的有毒的代谢产物，它们具有很强的致癌性。
主要存在于谷物、坚果、棉籽以及一些和人类血液、动物饲料相关的产品中。
天然污染的黄曲霉毒素以AFB1为主。
1993年黄曲霉毒素被世界卫生组织的癌症研究机构划定为类致癌物，是一类毒性极强的剧毒物质。
它被证明对人和动物的肝脏、肾脏等组织和器官具有很大的危害。
产生黄曲霉毒素的霉菌（如黄曲霉、寄生曲霉等）遍及世界各地，黄曲霉的污染可以发生在植物的生长、收获和加工、储藏、运输等过程中、及时发现污染源是最好的预防黄曲霉毒素污染的方法。
【产品原理】本产品是利用免疫竞争法检测原理建立的一种定量检测试剂盒。
具有简单、快速，无需特殊的仪器设备，既可以在实验室进行，也可在农场、饲料混合车间等实地进行测定。
结果准确，灵敏度度为0.05ppb，准确率大于95% 。
适用于谷物、饲料等样板中的黄曲霉毒素的检测。
【产品特性】1）试剂盒灵敏度: 0.05ppb2）试剂盒变异系数：小于20%。
3）试剂盒准确度：回收率范围在80％-110％之间。
【试剂盒组成】1）包被有抗原的96微孔板：1块（96 孔，12 条×8 孔）2）黄曲霉标准品：0 ppb 、0.05 ppb、0.12 ppb、0.25 ppb、0.5ppb、1 .0 ppb、2.0ppb1 瓶× 1.0ml3）200×黄曲霉抗体浓缩液： 1 瓶× 0.25ml4）60×酶标二抗浓缩液： 1 瓶× 0.25ml5）10×浓缩洗涤液： 1 瓶× 50ml6）稀释缓冲液： 2 瓶×40ml7）显色底物液 1 瓶×7ml8）反应终止液： 1 瓶× 7ml9) 试剂盒说明书【仪器试剂】仪器—酶标仪450nm—过滤漏斗—微量移液器20μl～200μl，100μl～1000μl—刻度移液管—天平：感量0.01g—50ml离心管或25ml锥形瓶—定性滤纸试剂—甲醇—蒸馏水【样本的前期处理】1. 玉米、花生等谷物----称取10g样品，加入20ml样品提取液（每100ml中含60ml甲醇，40ml蒸馏水），剧烈振荡3分钟（用手或振荡器）----将提取液用普通滤纸过滤，用稀释缓冲液按1：9的比例稀释过滤液（吸取100u过滤液，加入900ul稀释液缓冲液）样本稀释倍数为20倍2. 饲料（1）普通饲料----称取5g样品，加入25ml样品提取液（每100ml中含60ml甲醇，40ml蒸馏水），剧烈振荡3分钟（用手或振荡器）----将提取液用普通滤纸过滤，用稀释缓冲液按1：9的比例稀释过滤液（吸取100u过滤液，加入900ul稀释液缓冲液）样本稀释倍数为50倍（2）浓缩饲料----称取5g样品，加入25ml样品提取液（每100ml中含60ml甲醇，40ml蒸馏水），剧烈振荡3分钟（用手或振荡器）----将提取液用普通滤纸过滤，取2ml滤液，加入3ml三氯甲烷，振荡1分钟，静置1分钟，3500rpm离心5分钟。
黄曲霉毒素B1荧光定量快速检测卡性能评估测试摘要：对上海飞测生物科技有限公司研发生产的黄曲霉毒素B1荧光定量快速检测卡在粮食谷物饲料中的检测性能进行了评估。
该产品的最低检出限（LOD）为0.29μg/kg，最低定量限(LOQ)为0.91μg/kg，线性范围为1.00-50.00μg/kg，线性范围内的添加回收率为92.89%~121.07%，3次重复的变异系数在14.56%以内。
与其他真菌毒素的交叉反应率均小于5%。
该产品具有操作简便、灵敏准确、快速定量、重现性好等优点，非常适合用于对粮食谷物饲料中黄曲霉毒素B1的进行快速定量测定。
关键词：黄曲霉毒素B1快速检测卡；荧光定量免疫层析；黄曲霉毒素B1；粮食谷物饲料黄曲霉毒素B1（Aflatoxin B1简写为AFB1）是二氢呋喃氧杂萘邻酮的衍生物，含有一个双呋喃环和一个氧杂萘邻酮（香豆素），具有强致癌性以及剧毒性，是迄今发现的各种真菌毒素中最稳定的一种。
从1993年开始黄曲霉毒素被认定为世界卫生组织（WHO）的癌症研究机构划定的一类致癌物，是世界公认的三大强致癌物质之一，而黄曲霉毒素B1由于毒性最大，污染最重，是危害最大的一种黄曲霉毒素。
黄曲霉毒素B1污染的食物主要是花生、玉米、稻谷、小麦、花生油等粮油食品，且以南方高温、高湿地区受污染最为严重。
目前，GB 2761-2011《食品安全国家标准食品中真菌毒素限量》中对粮食谷物及其制品中黄曲霉毒素B1的最高限量为20μg/kg。
GB13078-2001《饲料卫生标准》中对不同种类的饲料中黄曲霉毒素B1的最高限量标准从10-50μg/kg。
目前，国标法测定黄曲霉毒素B1采用HPLC法，需要大型的仪器设备，价格昂贵，操作过程复杂、时间较长，且无法在现场和基础小型实验室使用。
除此之外，也有采用黄曲霉毒素酶联免疫试剂盒或胶体金快速检测卡用于大量样品的筛查，操作简便，检测快速，成本也较低，但准确性和重复性较差，容易造成假阳性或者假阴性。
因此，急需一种既简便快速，又能准确定量的检测方法，荧光定量免疫层析正好可以满足这种需求。
本文通过对多种粮食谷物饲料样品的实测，验证了上海飞测生物开发的黄曲霉毒素B1荧光定量快速检测卡的技术性能。
1实验材料和方法1.1试剂和材料除注明外，均为分析纯，试验用水均为UP水。
黄曲霉毒素B1荧光定量快速检测卡（由包被有荧光微球标记黄曲霉毒素B1抗体的乳胶垫、喷涂有黄曲霉毒素B1抗原的检测线和喷涂有羊抗鸡二抗的控制线的NC膜、样品垫及吸收垫组成）、样品提取液、样品稀释液、标准曲线ID卡及标准曲线条形码均由上海飞测生物科技有限公司提供。
黄曲霉毒素B1及其他真菌毒素的标准品：购自Sigma公司；大米、玉米、小麦、面粉等样品从超市购得或从企业取样。
麸皮，小麦、面粉等饲料样品从饲料厂和企业取样。
1.2仪器与设备FD-100型荧光免疫定量分析仪和FD-500型试纸条恒温孵育器，上海飞测生物科技有限公司提供；低速离心机，上海卢湘仪离心机仪器有限公司；漩涡振荡器，海门市其林贝尔仪器制造有限公司；电子天平：Sartorius；1.3试验方法1.3.1样品的前处理取具有代表性的待测样品500g，用小型粉碎机粉碎1min后过20目筛，收集过筛的细小样品。
称取1.0±0.02g过筛的样品于10mL离心管中，加入5mL提取液，用漩涡混匀仪震荡5min(或者摇床振荡10min）后，4000RPM离心1min，取上清。
1.3.2检测过程取50μL离心上清液加入500μL样品稀释液中，用漩涡混匀器混匀3-5s，然后取100μL加入到黄曲霉毒素B1荧光定量快速检测卡的加样孔中，置于37℃恒温孵育器中温育10min后，将试纸条插入荧光免疫定量分析仪中读数，即为样品的实际检测浓度。
当检测值大于5000μg/kg时，可用提取液将离心上清液稀释5倍后再进行检测，所得读数值乘以对应的稀释倍数即为最终的检验结果。
2检测结果分析2.1线性范围与检出限在样品提取液中，分别添加1.00μg/kg、2.50μg/kg、5.00μg/kg、10.00μg/kg、25.00μg/kg、50.00μg/kg 的黄曲霉毒素B1标准品，用上海飞测生物黄曲霉毒素B1荧光定量快速检测卡每个样品检测3次，以添加浓度为为纵坐标，以黄曲霉毒素B1荧光定量快速检测卡的检测结果为横坐标，拟合曲线并计算线性相关系数，结果如下：图1 黄曲霉毒素B1标准品添加与荧光定量试纸条检测值的线性关系 计算得出小麦的线性范围：1.00～50.00μg/kg（6点），回归方程:y = 1.042x + 0.540,相关系数R² = 0.998；（见图1）。
取10个无污染（阴性）小麦样品、10个无污染（阴性）玉米样品和10个无污染（阴性）大米样品，用上海飞测生物黄曲霉毒素B1荧光定量快速检测卡每个样品检测3次，检测限（LOD）为测定平均值加3倍标准偏差，定量限(LOQ)为测定平均值加10倍标准偏差。
测试结果表明，黄曲霉毒素B1荧光定量快速检测卡的LOD为0.29μg/kg，LOQ为0.91μg/kg。
2.2准确性和重复性分析在用国标法测定为0的不同种类空白样品中分别添加黄曲霉毒素B1浓度为1.00，2.50，5.00，10.00，25.00，50.00μg/kg的标准品，然后按照黄曲霉毒素B1荧光定量快速检测卡的检测方法进行检测。
检测结果见表1。
表1 不同样本检测的准确性和重复性样品黄曲霉毒素B1添加量（μg/kg）平行实验 1.00 2.50 5.00 10.00 25.00 50.00大米1 1.23 2.21 5.04 11.91 22.86 48.892 1.17 2.67 4.96 9.78 25.12 49.993 0.99 2.86 4.72 9.89 24.37 46.72平均值（μg/kg） 1.13 2.58 4.9110.5324.1248.53平均回收率112.83%103.20%98.14%105.27%96.47%97.07%变异系数CV 10.96%12.95% 3.34%11.37% 4.77% 3.42%玉米 1 0.987 2.38 4.383 9.876 25.098 54.9872 1.09 2.89 4.98 11.287 26.341 57.013 0.931 2.87 4.57 10.659 28.497 55.698 平均值（μg/kg） 1.00 2.71 4.6410.6126.6555.90平均回收率100.27%108.53%92.89%106.07%106.58%111.80%变异系数CV 8.04%10.65% 6.57% 6.66% 6.45% 1.84%小麦1 1.345 2.84 5.004 9.884 23.78 47.1232 1.276 2.65 5.418 11.583 22.461 49.0453 1.011 2.31 4.88 10.72 24.189 49.276平均值（μg/kg） 1.21 2.60 5.1010.7323.4848.48平均回收率121.07%104.00%102.01%107.29%93.91%96.96%变异系数CV 14.56%10.33% 5.52%7.92% 3.85% 2.44%从表1可以看出，上海飞测生物科技有限公司所生产的黄曲霉毒素B1荧光定量快速检测卡测试不同粮食谷物中黄曲霉毒素B1的添加回收率在92.89%~121.07%，3次重复的变异系数在14.56%以内。
2.3与色谱方法的对比试验结果取大米、小麦、玉米、高粱、花生、麸皮、喷浆玉米、DDGS、豆粕受污染样品各1份，先采用国标液相色谱法进行测定，再使用上海飞测生物科技有限公司所生产的黄曲霉毒素B1荧光定量快速检测卡进行测定，各测试3个平行样。
检测结果如下：表3 黄曲霉毒素B1荧光定量检测卡与高效液相色谱法检测值对比样本大米小麦玉米高粱花生麸皮喷浆玉米DDGS 豆粕色谱值9.87 3.98 16.38 7.73 45.87 27.21 34.62 14.87 2.75飞测生物值1 10.73 4.52 17.83 6.76 44.54 30.13 32.87 12.73 2.322 9.54 4.66 18.54 6.9 47.81 28.76 31.96 13.39 2.813 9.42 4.27 15.99 7.51 49.82 26.52 33.63 13.98 2.42平均值9.90 4.48 17.45 7.06 47.39 28.47 32.82 13.37 2.52 符合度100.27% 112.65% 106.55% 91.29% 103.31% 104.63% 94.80% 89.89% 91.52 CV 7.32% 4.41%7.54% 5.65% 5.62% 6.40% 2.55% 4.68%10.29%表2表明，在不同的粮食谷物饲料中，上海飞测生物科技有限公司所生产的黄曲霉毒素B1荧光定量快速检测卡与液相色谱法的符合率为89.89%~112.65%，3次重复测定的的CV值在10.29%以内。
2.4方法特异性选择其他5种常见的真菌毒素的标准品在阴性玉米中进行添加，添加的浓度为100 μg/kg，然后用飞测生物黄曲霉毒素B1荧光定量快速检测卡进行测试，每个样品测3次取平均值；结果显示与赭曲霉毒素A，伏马菌素B1，呕吐毒素、T-2毒素、玉米赤霉烯酮交叉反应率均＜5%。
实验结果表明，黄曲霉毒素B1胶体金试剂条对伏马毒素、赭曲霉毒素、黄曲霉毒素、玉米赤霉毒素几乎无交叉反应，其方法特异性可以能满足检测要求。
表3 交叉反应率表序号名称测定值交叉反应率1 黄曲霉毒素B1（DON）105 100.00%2 赭曲霉毒素A (OTA) 2.32 2.32%3 伏马菌素B1（FB1） 3.76 3.76%4 黄曲霉毒素B1(AFB1) 2.68 2.68%5 玉米赤霉烯酮(ZEN) 2.71 2.71%6 T-2毒素(T-2) 1.33 1.33%3结论本实验采用上海飞测生物科技有限公司所生产的黄曲霉毒素B1荧光定量快速检测卡对不同的粮食谷物饲料样本进行测试，该产品的最低检出限（LOD）为0.29μg/kg，最低定量限(LOQ)为0.91μg/kg，线性范围为1.00-50.00μg/kg，线性范围内的添加回收率为92.89%~121.07%，3次重复的变异系数在14.56%以内。
与其他真菌毒素的交叉反应率均小于5%。
其准确性和可靠性均可以满足欧盟和我国对黄曲霉毒素B1的分析标准的技术要求。
该方法具有简便快速、准确可靠、重复性好等特点，可用于不同粮食谷物饲料中黄曲霉毒素B1的快速定量检测分析。
